目的研究小窝蛋白1(CAV1)在缺氧相关肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖调控中的作用。方法将体外培养的人PAFs分为:对照组(C:21%O_2);10%氧浓度组(10%O_2);5%氧浓度组(5%O_2)及2%氧浓度组(2%O_2)进行细胞增殖实验,选取细胞增殖最明显组为缺氧...目的研究小窝蛋白1(CAV1)在缺氧相关肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖调控中的作用。方法将体外培养的人PAFs分为:对照组(C:21%O_2);10%氧浓度组(10%O_2);5%氧浓度组(5%O_2)及2%氧浓度组(2%O_2)进行细胞增殖实验,选取细胞增殖最明显组为缺氧组(H)进行后续实验。并构建CAV1高表达质粒(pCAV1),然后再将PAFs分为对照组(C:21%O_2),缺氧组(H),空白对照组(NC:缺氧+空质粒转染组)和CAV1高表达组(pCAV1:缺氧+pCAV1转染组),采用Western-blot法检测各组细胞中CAV1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法检测细胞增殖情况。结果缺氧能刺激PAFs增殖,并呈浓度依赖性,于2%氧浓度刺激48小时PAFs增殖达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(1.20+0.02 vs 0.54+0.04,P<0.01);缺氧组PAFs中CAV1表达下调(1.23±0.04 vs 0.90±0.02,P<0.01),cyclin D1(0.19±0.03 vs 1.15±0.06,P<0.01)和c-IAP2(0.63±0.04 vs 0.78±0.09,P<0.01)表达上调,细胞增殖增加(MTT:0.78±0.04 vs 1.20±0.02,P<0.01;PCNA:0.29±0.03 vs 0.54±0.03,P<0.01);CAV1在PAFs中高表达后(0.55±0.03 vs 0.90±0.03,P<0.01),cyclin D1(0.88±0.02 vs 0.52±0.02,P<0.01)和c-IAP2(0.87±0.02 vs 0.72±0.02,P<0.01)表达下调,PAFs增殖减少(MTT:1.20±0.02 vs 1.00±0.06,P<0.01;PCNA:0.52±0.03 vs 0.38±0.03,P<0.01)。结论缺氧能通过下调CAV-1在PAFs中的表达,促进PAFs的增殖、抑制其凋亡。cyclinD1和cIAP2可能是CAV1调控PAFs增殖和凋亡的下游靶点。展开更多
文摘目的研究小窝蛋白1(CAV1)在缺氧相关肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖调控中的作用。方法将体外培养的人PAFs分为:对照组(C:21%O_2);10%氧浓度组(10%O_2);5%氧浓度组(5%O_2)及2%氧浓度组(2%O_2)进行细胞增殖实验,选取细胞增殖最明显组为缺氧组(H)进行后续实验。并构建CAV1高表达质粒(pCAV1),然后再将PAFs分为对照组(C:21%O_2),缺氧组(H),空白对照组(NC:缺氧+空质粒转染组)和CAV1高表达组(pCAV1:缺氧+pCAV1转染组),采用Western-blot法检测各组细胞中CAV1、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)和细胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)及增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化法检测细胞增殖情况。结果缺氧能刺激PAFs增殖,并呈浓度依赖性,于2%氧浓度刺激48小时PAFs增殖达峰值,与对照组相比差异有统计学意义(1.20+0.02 vs 0.54+0.04,P<0.01);缺氧组PAFs中CAV1表达下调(1.23±0.04 vs 0.90±0.02,P<0.01),cyclin D1(0.19±0.03 vs 1.15±0.06,P<0.01)和c-IAP2(0.63±0.04 vs 0.78±0.09,P<0.01)表达上调,细胞增殖增加(MTT:0.78±0.04 vs 1.20±0.02,P<0.01;PCNA:0.29±0.03 vs 0.54±0.03,P<0.01);CAV1在PAFs中高表达后(0.55±0.03 vs 0.90±0.03,P<0.01),cyclin D1(0.88±0.02 vs 0.52±0.02,P<0.01)和c-IAP2(0.87±0.02 vs 0.72±0.02,P<0.01)表达下调,PAFs增殖减少(MTT:1.20±0.02 vs 1.00±0.06,P<0.01;PCNA:0.52±0.03 vs 0.38±0.03,P<0.01)。结论缺氧能通过下调CAV-1在PAFs中的表达,促进PAFs的增殖、抑制其凋亡。cyclinD1和cIAP2可能是CAV1调控PAFs增殖和凋亡的下游靶点。
