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siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究 被引量:1
1
作者 邢小康 何继亮 陈智 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期582-587,共6页
目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白... 目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达。将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平。结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达。40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58%、54%、29%、17%、17%、33%、22%、19%,明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活。 展开更多
关键词 肝炎病/遗传学 RNA 小分子干扰/遗传学 丙型肝炎 RNA干扰 小干扰RNA(siRNA) HCV复制 NS5B 感染细胞
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Huh7.5.1细胞感染HCV观察干扰素治疗后miRNA表达谱变化 被引量:1
2
作者 鲁兖 邢小康 +1 位作者 宋广忠 陈智 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期598-602,共5页
目的:探寻可能对丙型肝炎病毒(HCV)有作用的mi-RNA。方法:用体外转录得到的HCV感染正常的Huh-7.5.1细胞,然后加入干扰素作用,采用mi-RNA表达谱芯片技术,分别测定Huh-7.5.1细胞正常组和HCV感染组及干扰素作用组的mi-RNA的表达,采用2(-Δ... 目的:探寻可能对丙型肝炎病毒(HCV)有作用的mi-RNA。方法:用体外转录得到的HCV感染正常的Huh-7.5.1细胞,然后加入干扰素作用,采用mi-RNA表达谱芯片技术,分别测定Huh-7.5.1细胞正常组和HCV感染组及干扰素作用组的mi-RNA的表达,采用2(-ΔΔCT)法分析组间microRNA的表达情况。结果:以正常Huh-7.5.1细胞中表达的mi-RNA为基准,经过筛选发现13种mi-RNA在HCV感染后表达上调,而在干扰素治疗后则出现下调;另外还有7种mi-RNA则在HCV感染后出现表达下调,而在干扰素治疗后则发生上调。结论:mi-RNA10a、mi-RNA21、mi-RNA149和mi-RNA152及mi-RNA210可能与HCV的复制转录有关。 展开更多
关键词 干扰素α/治疗应用 微RNAs/遗传学 肝炎病/遗传学 基因表达 丙肝 mi-RNA
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丙型肝炎病毒基因型在中国大陆汉族慢性丙型肝炎患者中的分布特征 被引量:6
3
作者 毛小荣 张立婷 +3 位作者 蒋妮 肖萍 彭雪彬 张有成 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期417-422,共6页
目的:调查中国大陆汉族慢性丙型肝炎(CHC)患者的HCV基因型与地区分布、性别、HCV-RNA复制水平之间的关系。方法:选取来自中国大陆不同地区28家医院的1014例汉族CHC患者,对其性别、分布区域、HCV基因型、HCV-RNA复制水平等指标进行... 目的:调查中国大陆汉族慢性丙型肝炎(CHC)患者的HCV基因型与地区分布、性别、HCV-RNA复制水平之间的关系。方法:选取来自中国大陆不同地区28家医院的1014例汉族CHC患者,对其性别、分布区域、HCV基因型、HCV-RNA复制水平等指标进行调查,用SPSS 20.0软件进行数据处理,采用X^2检验分析各指标的相互关系。结果:①中国大陆HCV1型患者人数最多(56.80%);除西南、华南、华中地区外,其余地区HCV基因型分布频度均为HCV1型〉HCV2型〉HCV3型〉HCV6型。②HCV1型在华南地区男性患者多见(P〈0.05);HCV2型在华北地区女性多见(P〈0.05);HCV3型在华北、西北地区男性多见(P〈0.05);HCV6型在西北地区男性多见(P〈0.05),其余各地区不同性别间HCV基因型分布差异无统计学意义。⑧在HCV1、HCV2、HCV3、HCV6型中,均多见HCV-RNA高水平复制,低水平复制患者数最少。结论:中国大陆汉族CHC患者HCV基因型在各地区分布不同,并与性别、HCV-RNA复制水平有关。 展开更多
关键词 肝炎 丙型/ 肝炎病/遗传学 基因型 肝炎 慢性/ 序列分析 基因 /遗传学 中国 性别分布
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献血者抗-HCV及HCV RNA的检测分析 被引量:5
4
作者 王莉 温涛 赵君 《中国误诊学杂志》 CAS 2009年第6期1347-1348,共2页
关键词 供血者 肝炎病/遗传学 肝炎抗体 丙型/分析 人类
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丙型肝炎病毒(HCV)携带献血者及丙型肝炎(HC)患者HCV基因分型检测 被引量:3
5
作者 程四国 张伯伟 +4 位作者 赵磊 郭如华 徐亚琴 李伍生 方建华 《中国误诊学杂志》 CAS 2003年第9期1330-1331,共2页
关键词 供血者 肝炎 丙型/诊断 基因 肝炎病/遗传学 原状态
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不同基因型丙型肝炎患者自身免疫抗体的研究 被引量:3
6
作者 葛明广 陈洪才 +1 位作者 杨希菊 韩树华 《中国误诊学杂志》 CAS 2006年第16期3072-3074,共3页
目的:研究分析丙型肝炎病毒不同基因型所感染的丙型肝炎患者体内的自身免疫抗体和其他免疫指标。方法:72例丙肝患者为研究组,69例健康体检者为对照组。HCV感染用RT-PCR证实。HCV基因型的检测用型特异性探针核酸杂交法检测。抗核抗体和... 目的:研究分析丙型肝炎病毒不同基因型所感染的丙型肝炎患者体内的自身免疫抗体和其他免疫指标。方法:72例丙肝患者为研究组,69例健康体检者为对照组。HCV感染用RT-PCR证实。HCV基因型的检测用型特异性探针核酸杂交法检测。抗核抗体和抗平滑肌抗体用免疫荧光法检测,抗Sm抗体和抗RNP抗体用对流免疫电泳法检测,类风湿因子、抗双链DNA抗体、抗心磷脂抗体、抗甲状腺球蛋白抗体和抗甲状腺微粒体抗体用EL ISA检测。冷球蛋白用冷沉淀法检测。免疫球蛋白水平用速率散射比浊法测定。循环免疫复合物用抗补体法测定。结果:(1)72例丙肝患者中,39例(54.2%)为Ⅱ型HCV(O kam oto分型法)感染,21例(29.2%)为Ⅲ型,6例(8.3%)为混合型(Ⅱ型+Ⅲ型),6例(8.3%)难以确认;(2)自身抗体检测:患者组中有30例(41.7%)检出63项次自身抗体。Ⅱ型HCV感染的39例中有21例检出48项次,Ⅲ型HCV感染的21例中有3例检出3项次,Ⅱ型和Ⅲ型混合感染的6例中检出12项次自身抗体。检出自身抗体的患者中有21例检出类风湿因子,12例检出抗核抗体,12例检出抗心磷脂抗体,6例检出抗平滑肌抗体,6例检出抗甲状腺球蛋白抗体,3例检出抗甲状腺微粒体抗体,3例检出抗双链DNA抗体。结论:(1)在本地区的丙肝患者中,感染Ⅱ型HCV者占多数;(2)部分丙肝患者可检出自身抗体,感染Ⅱ型HCV和同时感染Ⅱ型、Ⅲ型HCV的患者的自身抗体检出率高于感染Ⅲ型HCV的患者。提示感染Ⅱ型HCV的患者体内自身免疫应答过程更为显著。 展开更多
关键词 基因型 肝炎 丙型/免疫 肝炎病/遗传学 自身抗体/分析
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标本因素对实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒RNA的影响 被引量:2
7
作者 高会广 王彩红 +1 位作者 王景胜 徐莉娟 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第15期3568-3569,共2页
目的:探讨血红蛋白、脂质和胆红素对实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的影响。方法:根据不同要求收集特定的临床标本,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定标本中HCV RNA的含量。结果:溶血组、高血脂组和高胆红素组的检测结果... 目的:探讨血红蛋白、脂质和胆红素对实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的影响。方法:根据不同要求收集特定的临床标本,采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定标本中HCV RNA的含量。结果:溶血组、高血脂组和高胆红素组的检测结果与对照组比较均差异无显著性(P>0.05)。结论:使用核酸提取柱法处理标本,可避免样本中血红蛋白、脂质和胆红素等干扰物质对实验结果的影响。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 肝炎病/遗传学 标本制备 聚合酶链反应
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抗-HCV、HCV-RNA及ALT检测138例结果分析 被引量:2
8
作者 高会广 王彩红 +2 位作者 王景胜 徐莉娟 徐志刚 《中国误诊学杂志》 CAS 2008年第10期2412-2413,共2页
目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)RNA与丙型肝炎抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)之间的关系。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定138例疑似HCV感染者血清HCV RNA,ELISA法检测抗-HCV,全自动生化分析仪测定ALT。结果:138例标本中H... 目的:探讨丙型肝炎病毒(HCV)RNA与丙型肝炎抗体(抗-HCV)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)之间的关系。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)测定138例疑似HCV感染者血清HCV RNA,ELISA法检测抗-HCV,全自动生化分析仪测定ALT。结果:138例标本中HCV RNA和抗-HCV均阳性者108例,HCV RNA阳性而抗-HCV阴性者3例,HCV RNA阴性而抗-HCV阳性者27例。ALT水平与HCV RNA含量无显著相关性。结论:同时检测HCVRNA和抗-HCV可提高丙型肝炎患者的检出率;HCV RNA含量不能反映肝脏损伤的程度。 展开更多
关键词 肝炎病/遗传学 肝炎抗体 丙型/分析 丙氨酸转氨酶/分析 人类
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丙型肝炎病毒3′非编码区终止密码子变异
9
作者 秦兆习 丛旭 +2 位作者 蒋栋 哈明昊 魏来 《中国医师杂志》 CAS 2006年第9期1172-1174,共3页
目的探讨中国大陆1b型丙型肝炎病毒(HCV)3'非编码区(3'UTR)一级结构的变异规律,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)限制性内切酶长度多态性分析(R... 目的探讨中国大陆1b型丙型肝炎病毒(HCV)3'非编码区(3'UTR)一级结构的变异规律,为进一步研究其在HCV复制、翻译中的调控机制、开发新的抗HCV药物奠定基础。方法利用逆转录套式聚合酶链反应(RT-PCR)限制性内切酶长度多态性分析(RFLP)初步筛选出1b型HCV感染者,采用半套式RT-PCR法扩增出约400 bp的cDNA片段,克隆测序。结果获得了全长1b型HCV 3'端序列,发现终止密码子存在两种突变,由TGA突变为TAA或TGG,从而丧失了终止密码子功能,可导致NS5B的翻译不能及时终止。结论中国大陆1b型丙型肝炎病毒终止密码子存在多种突变,其中TGG突变可导致NS5B区延长,3'UTR缩短;该发现对了解HCV的复制和翻译机制可能有一定的理论和实践意义。 展开更多
关键词 3’非翻译区/遗传学 变异(遗传学) 肝炎病/遗传学 密码子 终止
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慢性丙型肝炎患者血清自身免疫抗体测定及临床意义 被引量:1
10
作者 刘磊 《中国误诊学杂志》 CAS 2009年第4期817-818,共2页
目的:讨论慢性丙型肝炎患者血清自身抗体存在情况及临床意义。方法:应用美国英明道斑点金标法检测67例慢性丙型肝炎患者及30例健康正常人血清中的自身抗体抗核抗体(ANA),并比较其与HCV RNA的关系。结果:67例慢性丙型肝炎患者中有25例自... 目的:讨论慢性丙型肝炎患者血清自身抗体存在情况及临床意义。方法:应用美国英明道斑点金标法检测67例慢性丙型肝炎患者及30例健康正常人血清中的自身抗体抗核抗体(ANA),并比较其与HCV RNA的关系。结果:67例慢性丙型肝炎患者中有25例自身抗体ANA阳性,总阳性率37.3%,明显高于健康对照组的3.3%,差异有统计学意义(2χ=8.37,P<0.05)。HCVRNA阳性组的自身抗体检出率(45.69%)与HCVRNA阴性组自身抗体检出率(19.19%)相比较,差异有统计学意义(χ2=4.16,P<0.05)。结论:慢性丙型肝炎患者中普通存在自身免疫现象,自身抗体的检出率与HCVRNA阳性明显相关,检测自身抗体对慢性丙型肝炎患者的诊断与治疗有重要参考价值。 展开更多
关键词 肝炎 丙型/免疫 肝炎病/遗传学 自身抗体/分析
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两种核酸提取方法在丙肝病毒核酸定量检测中的应用比较
11
作者 高会广 王彩红 王景胜 《中国误诊学杂志》 CAS 2009年第10期2318-2319,共2页
目的:比较两种核酸提取方法对荧光定量PCR测定丙肝病毒RNA的影响。方法:分别采用氯仿-异丙醇方法和核酸提取柱方法提取临床血清标本中的丙肝病毒RNA,荧光定量PCR法测定样本中丙肝病毒RNA含量,比较两种方法的重复性和准确性。结果:两种... 目的:比较两种核酸提取方法对荧光定量PCR测定丙肝病毒RNA的影响。方法:分别采用氯仿-异丙醇方法和核酸提取柱方法提取临床血清标本中的丙肝病毒RNA,荧光定量PCR法测定样本中丙肝病毒RNA含量,比较两种方法的重复性和准确性。结果:两种方法的灵敏度接近,对临床标本的测定结果有着良好的相关性,但核酸提取柱方法所得结果的重复性明显优于氯仿-异丙醇方法的重复性。结论:采用核酸提取柱方法处理标本,可提高丙肝病毒RNA定量检测的准确性。 展开更多
关键词 核酸类/分离和提纯 肝炎病/遗传学
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探讨丙肝病毒核心抗原检测的临床应用价值
12
作者 沈培奇 《中国误诊学杂志》 CAS 2009年第18期4324-4325,共2页
目的:应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),HCVRNA定量检测,了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。方法:对来自住院及门诊的200例样本HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实。结果:160例... 目的:应用酶联免疫法分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),HCVRNA定量检测,了解丙肝病毒核心抗原检测的意义。方法:对来自住院及门诊的200例样本HCV-cAg和HCV-Ab检测,阳性者用反转录多聚酶链反应(RT-RNA)证实。结果:160例样本中HCV-cAg阳性52例(32.5%),HCVRNA阳性94例(58.7%);40例样本中HCV-Ab阳性5例(12.5%),HCVRNA阳性5例(12.5%)。结论:HCV核心抗原检出时间早于抗体,对术前HCV筛查的患者联合应用更具有临床价值。 展开更多
关键词 肝炎核心抗原 丙型/分析 肝炎病/遗传学 酶联免疫吸附测定
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广州地区吸毒人群感染丙型肝炎病毒基因分型研究
13
作者 钟秋林 刘展翅 《中国误诊学杂志》 CAS 2012年第15期3796-3798,共3页
目的了解广州市近年来吸毒人群丙型肝炎病毒(HCV)感染情况及其基因型分布情况,为制定有效的HCV防治措施提供依据。方法对广州市某戒毒所及某劳教所2010—01—2010—12新收入的586例吸毒人员抽静脉血,采用双抗夹心ELISA法检测抗HCV... 目的了解广州市近年来吸毒人群丙型肝炎病毒(HCV)感染情况及其基因型分布情况,为制定有效的HCV防治措施提供依据。方法对广州市某戒毒所及某劳教所2010—01—2010—12新收入的586例吸毒人员抽静脉血,采用双抗夹心ELISA法检测抗HCV抗体,采用套式PCR及DNA序列分析对阳性标本进行基因分型。结果本次调查研究的586例吸毒人员中HCV抗体阳性235例,阳性率检出率40.1%。235份HCV抗体阳性标本,218例PCR扩增得到特异性阳性条带,阳性扩增率92.8%。218例PCR扩增产物测序及序列分析,基因分型结果为:1b型138例(63.3%),6a型36例(16.5%),2a型25例(11.5%),3b型14例(6.4%),3a型5例(2.3%)。结论广州地区吸毒者感染HCV基因型以1b型为主,6a型也有较高的检出率。 展开更多
关键词 肝炎 丙型 吸大麻烟 肝炎病/遗传学
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HCV RNA检测在临床中的应用价值 被引量:1
14
作者 侯小霞 胡志清 卢超 《中国误诊学杂志》 CAS 2010年第28期6900-6900,共1页
关键词 肝炎病/遗传学 肝炎抗体 丙型/分析 丙氨酸转氨酶/分析 人类
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