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管式磁微粒非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法的建立
1
作者 向国庆 宋帅 +5 位作者 温肖会 吕殿红 贾春玲 牛瑞辉 顾有方 罗胜军 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5614-5624,共11页
【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为高致病性传染病,给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失,因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要。【目的】建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法。【方法】以重组pp62... 【背景】非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为高致病性传染病,给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失,因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要。【目的】建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法。【方法】以重组pp62蛋白作为包被抗原,羧基磁珠(carboxylic magnetic beads)作为固相载体,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)标记的兔抗猪IgG作为酶标二抗,通过对反应条件进行优化,采用非洲猪瘟国家参考品作为溯源血清绘制出标准曲线,建立基于ASFV pp62蛋白的化学发光抗体检测方法。【结果】用建立的化学发光方法检测277份临床样品血清,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析确定阴性、阳性临界值,并确定判定标准:浓度值>140.02 U时为抗体阳性,浓度值<140.02 U时为抗体阴性。此方法对6种不同的病原血清抗体进行检测均无交叉反应,且批内和批间变异系数均在10%以内,与商品化非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达96.7%。【结论】本研究建立的管式非洲猪瘟病毒化学发光抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为非洲猪瘟早期监测及试剂盒研发提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 重组pp62蛋白 羧基磁珠 化学发光检测方法
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基于羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体制备免疫磁珠
2
作者 刘胜男 王亚洲 +2 位作者 赵书君 穆小云 吴文娟 《中国科技期刊数据库 医药》 2021年第12期19-22,共4页
为提高免疫磁珠工艺的稳定性和工艺可控性,可通过优化羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体工艺中磁珠活化时间及抗体偶联pH条件。方法:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术检验HBV-PreS1单克隆抗体的等电点情况。活化... 为提高免疫磁珠工艺的稳定性和工艺可控性,可通过优化羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体工艺中磁珠活化时间及抗体偶联pH条件。方法:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术检验HBV-PreS1单克隆抗体的等电点情况。活化后磁珠偶联氨基化生物素,与HRP标记亲和素酶,反应信号值与活化效率呈正比,检验活化效率。采用双抗体两步夹心法检测前S1抗原阳性低中高样本,检测信号值与免疫磁珠偶联的抗体量呈正比,检验抗体偶联效率及偶联工艺重复性。结果:HBV-PreS1单克隆抗体等电点PI为7.4,EDC、sulfo-NHS在pH 6.0的MES缓冲液中,30min时,信号值最高。HBV-PreS1单克隆抗体偶联磁珠时,在pH 6.0的MES缓冲液中,检验信号值最高。羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体最佳活化时间为30min,最佳偶联缓冲液为pH 6.0的MES缓冲液,此时偶联效果最佳,工艺重复性最好。 展开更多
关键词 EDC/sulfo-NHS 羧基磁珠 HBV-PreS1单克隆抗体 偶联
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选择性磁珠纯化法结合高通量测序技术在无创产前筛查中的应用
3
作者 吴鑫 音海玲 +3 位作者 殷倩 卢守莲 王俊宏 王珏 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2023年第10期1398-1401,1426,共5页
目的:探讨基于DNA片段选择性磁珠纯化法(片段选择富集法)富集胎儿游离DNA结合高通量测序技术在无创产前筛查中的应用价值。方法:选取2019年8月—2021年8月在南京医科大学第一附属医院行胎儿染色体非整倍体无创产前筛查的孕妇共20868例... 目的:探讨基于DNA片段选择性磁珠纯化法(片段选择富集法)富集胎儿游离DNA结合高通量测序技术在无创产前筛查中的应用价值。方法:选取2019年8月—2021年8月在南京医科大学第一附属医院行胎儿染色体非整倍体无创产前筛查的孕妇共20868例进行回顾性分析,比较传统DNA提取纯化法(传统纯化法)和片段选择富集法在胎儿游离DNA提取纯化质量、无创产前筛查初次检测失败率及胎儿染色体异常筛查准确性方面的差异。结果:共有5914例孕妇采用传统纯化法结合高通量测序检测,其中33例(0.56%)判定为胎儿游离DNA浓度过低需重新抽血复检;而14954例孕妇采用片段选择富集法结合高通量测序进行检测,2例(0.01%)判定为胎儿游离DNA浓度过低需抽血复检,两组存在显著性差异(0.56%vs.0.01%,P<0.001)。与传统纯化法(23/5914,0.39%)相比,片段选择富集法结合高通量测序检出目标染色体异常率(21三体+18三体+13三体)(47/14954,0.31%)无明显差异(P>0.05),其中胎儿21三体(54.55%vs.66.67%)、18三体(83.33%vs.60.00%)和13三体(50.00%vs.25.00%)阳性预测值均无显著性差异(P>0.05)。经介入性产前诊断及产后随访复核,传统纯化法组和片段选择富集法组各有1例假阴性,两组间染色体异常漏诊率无显著性差异(0.02%vs.0.01%,P>0.05)。结论:基于DNA片段选择性磁珠纯化富集法,可以富集母体外周血浆中胎儿游离DNA的含量,减少因胎儿游离DNA浓度过低所致重复抽血的风险,同时不影响目标染色体疾病的阳性预测值。 展开更多
关键词 胎儿游离DNA 羧基化磁珠 高通量测序 无创产前筛查
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癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选 被引量：3
4
作者 曾家豫 万波 +4 位作者 马瑾 袁红霞 李星 赵运旺 廖世奇 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期782-786,共5页
目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过... 目的 :筛选癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)特异性单克隆抗体(Anti-CEA)的核酸适配体(aptamers),为肺癌血清肿瘤标志物核酸适配体的筛选奠定实验基础。方法:利用羧基化琼脂磁珠作为筛选介质,以Anti-CEA为筛选的目标靶分子,通过消减SELEX技术及实时定量PCR技术,从随机ss DNA文库中筛选出与Anti-CEA特异性结合的aptamers,并通过凝胶阻滞实验(EMSA)鉴定筛选到的Anti-CEA-aptamer复合物,然后将得到的第10轮富集文库扩增为双链DNA,通过切胶纯化后,连接PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,同时利用交错PCR技术鉴定阳性克隆,经测序,获得aptamers的序列。结果:经过10轮筛选得到了4条与Anti-CEA结合的aptamers,测序结果显示均为不同序列。结论:验证筛选出的与Anti-CEA结合的aptamer,特异性检测结果表明2号aptamer与靶分子结合的特异性很高,且与非特异蛋白无明显吸附,筛选出的aptamers用于识别Anti-CEA,将为肺癌的早期诊断和早期治疗提供新的突破口。 展开更多
关键词 消减SELEX技术 羧基琼脂磁珠 CEA特异性单克隆抗体 核酸适配体 肺癌
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基于DNA量子点复合荧光探针的沙门氏菌定量检测 被引量：3
5
作者 王旗 程小翠 夏娟 《赤峰学院学报（自然科学版）》 2020年第9期76-81,共6页
鼠伤寒沙门氏菌是我国最常被报道的食源性致病菌之一,已对食品安全和公众健康造成了严重的威胁。本研究将金纳米粒子和DNA量子点构建了一种新型的自组装核-壳结构荧光探针,并结合磁分离技术用于定量的检测鼠伤寒沙门氏菌DNA。聚乙烯亚... 鼠伤寒沙门氏菌是我国最常被报道的食源性致病菌之一,已对食品安全和公众健康造成了严重的威胁。本研究将金纳米粒子和DNA量子点构建了一种新型的自组装核-壳结构荧光探针,并结合磁分离技术用于定量的检测鼠伤寒沙门氏菌DNA。聚乙烯亚胺包覆的金纳米粒子能够通过静电吸附作用结合大量的DNA量子点来放大荧光信号,并可以简化核酸适配体修饰探针的繁琐过程。复合荧光探针在5fmol L-1到5.0×10^3fmol L^-1的范围内可以成功检测到伤寒沙门氏菌DNA,检测限为7.5fmol L^-1。此外,由于金纳米粒子和DNA量子点的合成方法简单,本研究设计合成的复合探针将适用于该领域的普通技术人员。因此,这种新型探针可以方便、有效地检测沙门氏菌。 展开更多
关键词 DNA量子点 金纳米粒子 羧基化磁珠 适配体 沙门氏菌
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