摘要
为提高免疫磁珠工艺的稳定性和工艺可控性,可通过优化羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体工艺中磁珠活化时间及抗体偶联pH条件。方法:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术检验HBV-PreS1单克隆抗体的等电点情况。活化后磁珠偶联氨基化生物素,与HRP标记亲和素酶,反应信号值与活化效率呈正比,检验活化效率。采用双抗体两步夹心法检测前S1抗原阳性低中高样本,检测信号值与免疫磁珠偶联的抗体量呈正比,检验抗体偶联效率及偶联工艺重复性。结果:HBV-PreS1单克隆抗体等电点PI为7.4,EDC、sulfo-NHS在pH 6.0的MES缓冲液中,30min时,信号值最高。HBV-PreS1单克隆抗体偶联磁珠时,在pH 6.0的MES缓冲液中,检验信号值最高。羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体最佳活化时间为30min,最佳偶联缓冲液为pH 6.0的MES缓冲液,此时偶联效果最佳,工艺重复性最好。
