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乙型肝炎病毒表面抗原一级结构多态性的初步研究 被引量：21
1
作者 董菁 刘妍 +7 位作者 皇甫竞坤 施双双 王刚 洪源 陈国凤 李莉 陈菊梅 成军 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2002年第2期130-135,共6页
目的　研究慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原一级结构的多态性。方法　设计特异性引物 ,自 7例慢性乙型肝炎患者血清中扩增S基因全长或全基因组片段 ,TA克隆法克隆到T载体中 ,随机选择克隆测序。结果　共 2 0个克隆被测... 目的　研究慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原一级结构的多态性。方法　设计特异性引物 ,自 7例慢性乙型肝炎患者血清中扩增S基因全长或全基因组片段 ,TA克隆法克隆到T载体中 ,随机选择克隆测序。结果　共 2 0个克隆被测序。 2 0个克隆全S蛋白的总一致率仅为 3 2 .0 % ,13株全长为 40 1氨基酸残基的克隆氨基酸一致率为 82 .5 %。患者血清中发现2株克隆编码截短型表面抗原中蛋白 ,在前S1或前S2的免疫决定区或可能的肝细胞结合部位均发现缺失突变。结论　慢性乙肝患者体内存有HBV准种群 ,病毒编码的截短型表面抗原中蛋白可为HBV诱导原发性肝癌提供一种途径 ,应加强对HBsAg一级结构多态性的研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表面抗原 准种 缺陷型病毒
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以结节性痒疹为首发表现的艾滋病3例及文献复习 被引量：8
2
作者 陈小玫 汪盛 +2 位作者 熊琳 李薇 杨翰君 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第4期225-227,共3页
结节性痒疹是艾滋病患者较为常见的皮肤表现,是多因素导致的疾病,其皮损与非艾滋病患者相似。本文3例均为男性,临床表现为全身散在丘疹、结节、表皮剥脱、结痂伴剧烈瘙痒,淋巴细胞分类计数示CD4、CD4/CD8比值降低。HIV血清抗体初筛实验... 结节性痒疹是艾滋病患者较为常见的皮肤表现,是多因素导致的疾病,其皮损与非艾滋病患者相似。本文3例均为男性,临床表现为全身散在丘疹、结节、表皮剥脱、结痂伴剧烈瘙痒,淋巴细胞分类计数示CD4、CD4/CD8比值降低。HIV血清抗体初筛实验及确证实验均(+)。皮损组织病理符合结节性痒疹。2例予抗组胺药物和外用糖皮质激素软膏后症状减轻,1例放弃治疗。沙利度胺是治疗艾滋病相关性结节性痒疹最有效的药物。 展开更多
关键词 痒疹 结节性 人免疫缺陷型病毒 沙利度胺
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针对人类免疫缺陷病毒结构蛋白Gag-Pol的抑制剂及其作用机制研究进展
3
作者 黄国锋 李聪宜 +1 位作者 王虹 张文艳 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1156-1163,共8页
Gag-Pol蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)重要结构蛋白之一,其组成成分包含了HIV的基本骨架蛋白和生命周期中所需要的功能酶,目前以Gag-Pol上不同的功能区为靶点开发的抑制剂包括衣壳(CA)抑制剂、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和整合酶抑制... Gag-Pol蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)重要结构蛋白之一,其组成成分包含了HIV的基本骨架蛋白和生命周期中所需要的功能酶,目前以Gag-Pol上不同的功能区为靶点开发的抑制剂包括衣壳(CA)抑制剂、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和整合酶抑制剂等。CA抑制剂通过抑制CA的成熟或者破坏CA的组装进而影响HIV复制。蛋白酶抑制剂主要的作用机制是抑制蛋白酶对切割位点CA-间隔多肽1(SP1)的切割,逆转录酶抑制剂通过模仿逆转录底物,阻断HIV的逆转录过程,整合酶抑制剂通过靶向整合酶活性中心—锌指结构影响整合酶活性。本文总结了针对HIV Gag-Pol蛋白的抑制剂及其作用机制,并对已批准上市成药的用法用量进行综述,为今后临床联合用药和针对HIV Gag-pol蛋白的新型抑制剂开发提供参考。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷型病毒 Gag-Pol蛋白 蛋白酶抑制剂 逆转录酶抑制剂 整合酶抑制剂 成熟抑制剂
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HIV相关性结节性痒疹 被引量：4
4
作者 陈小玫 杨翰君 汪盛 《中国麻风皮肤病杂志》 2009年第12期897-899,共3页
结节性痒疹是较常见的艾滋病皮肤表现,与艾滋病预后相关。HIV相关性结节性痒疹是多因素导致的疾病,病理生理学尚不明确,临床和皮肤病理表现及治疗与非艾滋病患者相似,表皮脱落和结痂是HIV相关性结节性痒疹最显著的特征。沙利度胺是系统... 结节性痒疹是较常见的艾滋病皮肤表现,与艾滋病预后相关。HIV相关性结节性痒疹是多因素导致的疾病,病理生理学尚不明确,临床和皮肤病理表现及治疗与非艾滋病患者相似,表皮脱落和结痂是HIV相关性结节性痒疹最显著的特征。沙利度胺是系统治疗最为有效的药物。 展开更多
关键词 痒疹 结节性 人免疫缺陷型病毒 沙利度胺
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逆转录病毒载体介导的转基因鸡研究进展 被引量：3
5
作者 王令 张涛 尹亚军 《中国家禽》 北大核心 2015年第14期44-48,共5页
转基因鸡作为重要的经济动物和理想的生物反应器,具有广阔的应用前景。鸡基因组测序的完成加快了转基因鸡的研究和发展。病毒载体法是转基因鸡制备的主导方法之一,具有效率高和遗传稳定性良好的优势。本文对逆转录病毒载体特征、复制缺... 转基因鸡作为重要的经济动物和理想的生物反应器,具有广阔的应用前景。鸡基因组测序的完成加快了转基因鸡的研究和发展。病毒载体法是转基因鸡制备的主导方法之一,具有效率高和遗传稳定性良好的优势。本文对逆转录病毒载体特征、复制缺陷型病毒载体和复制整合双缺陷型病毒载体的优缺点及其介导的转基因鸡研究进行综述,展望人工核酸酶技术结合复制整合双缺陷型逆转录病毒载体在转基因鸡研究领域的应用前景。 展开更多
关键词 转基因鸡 逆转录病毒载体 复制整合双缺陷型病毒载体 人工核酸酶技术
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表达绿色荧光蛋白的复制缺陷型西尼罗病毒的构建
6
作者 李伟 马乐 +3 位作者 郭立平 王晓磊 步志高 华荣虹 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期427-430,共4页
为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型西尼罗病毒(WNV),本研究参考NY99株WNV基因组序列,分段合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列,以及插入缺失的结构蛋白基因位置的gfp报告基因序列,并按WNV基因组顺序克隆于pCI-neo载体中,构建含... 为构建表达绿色荧光蛋白(GFP)的复制缺陷型西尼罗病毒(WNV),本研究参考NY99株WNV基因组序列,分段合成除结构蛋白基因外的其它基因组序列,以及插入缺失的结构蛋白基因位置的gfp报告基因序列,并按WNV基因组顺序克隆于pCI-neo载体中,构建含有GFP基因的WNV复制子重组质粒pWNVrep-GFP;同时构建表达WNVC蛋白的重组质粒pCAG-WNV-C。将pWNVrep-GFP和pCAG-WNV-C共转染稳定表达WNVprM-E蛋白的W-92细胞系进行WNV粒子包装及病毒粒子拯救。结果显示转染细胞能够表达GFP,将转染细胞培养液接种BHK-21细胞后,能感染细胞并且表达GFP,westernblot可以检测到分子质量为42ku的NS1蛋白条带。然而,感染BHK-21细胞的培养液不能再感染BHK-21细胞,表明拯救的病毒只具有一次感染能力,为复制缺陷型病毒。WNV阳性血清能中和拯救病毒对BHK-21细胞的感染,该复制缺陷型病毒为WNV中和抗体检测和疫苗评价提供了相关的技术平台。 展开更多
关键词 西尼罗病毒 复制子 细胞系 复制缺陷型病毒 中和抗体
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脑源性神经营养因子基因修饰的嗅鞘细胞移植对大鼠损伤脊髓的保护作用 被引量：9
7
作者 刘锦波 顾卫东 +2 位作者 贡爱华 张志坚 王永忠 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期637-638,共2页
我们以重组缺陷型腺病毒为载体，将脑源性神经营养因子（BDNF）基因转染的嗅鞘细胞移植入大鼠损伤的脊髓，观察脊髓修复和肢体功能恢复情况，为将来应用基因工程细胞移植治疗脊髓损伤提供依据。
关键词 脑源性神经营养因子 嗅鞘细胞移植 损伤脊髓 保护作用 基因修饰 大鼠 缺陷型腺病毒 细胞移植治疗 基因转染 恢复情况
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一种新型的低辅毒污染的重组AAV生产系统 被引量：3
8
作者 陈立 陈浩明 +3 位作者 李戈 姚纪花 卢大儒 薛京伦 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期52-54,共3页
将Cre-loxP系统引入重组AAV的生产过程之中,用缺陷型腺病毒AdLC作为生产重组AAV的辅助病毒.在大量生产带有目的基因(EGFP,hFIX)的重组腺相关病毒载体的同时,最大程度地限制了辅助病毒的产生,从而减轻了下游纯化工作的压力.活体动物实验... 将Cre-loxP系统引入重组AAV的生产过程之中,用缺陷型腺病毒AdLC作为生产重组AAV的辅助病毒.在大量生产带有目的基因(EGFP,hFIX)的重组腺相关病毒载体的同时,最大程度地限制了辅助病毒的产生,从而减轻了下游纯化工作的压力.活体动物实验的结果证实了这种方法的优越性.实验结果为重组AAV载体系统在基因治疗领域中的应用提供了一条新的途径. 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 AAV Cre-loxP系统 缺陷型腺病毒 辅助病毒 生产系统 基因治疗
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活体生物发光成像追踪大鼠跟腱内移植干细胞 被引量：4
9
作者 黄德清 Gary Balian 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2013年第23期4240-4247,共8页
背景:移植脂肪源干细胞在活体内的归巢、迁移、增殖和分化的机制仍未得到充分阐明。活体生物发光活体成像技术是近来发展起来的一种可以直接检测活细胞在动物体内生物学行为的新的技术方法。目的:探讨用活体生物发光成像技术检测大鼠跟... 背景:移植脂肪源干细胞在活体内的归巢、迁移、增殖和分化的机制仍未得到充分阐明。活体生物发光活体成像技术是近来发展起来的一种可以直接检测活细胞在动物体内生物学行为的新的技术方法。目的:探讨用活体生物发光成像技术检测大鼠跟腱内移植的经荧光基因修饰的脂肪源干细胞可行性。方法:分离培养大鼠腹腔来源的脂肪源干细胞,用浓度为3×1010L-1携带虫荧光素酶的腺病毒载体对其进行转染,观察转染对脂肪源干细胞的影响;将转染的脂肪源干细胞移植到大鼠跟腱缺损处,移植后1,4,7,14d用活体生物发光成像技术检测移植脂肪源干细胞荧光素酶的表达,移植后28d跟腱标本冰冻切片在荧光显微镜下观察。结果与结论:在体外,腺病毒转染对脂肪源干细胞的生长和增殖无明显影响(P>0.05)。细胞移植后1,4,7,14d,活体生物发光成像技术在实验侧修复段跟腱检测到的荧光表达强度分别为(1.22±0.43)×106、(1.81±0.76)×106、(1.88±0.69)×106和(0.89±0.26)×105光子/s(n=6)。而对照侧跟腱修复段未检测到荧光表达;移植后28d,实验侧跟腱冰冻切片在荧光显微镜下见到大量表达荧光的细胞。表明活体生物发光成像技术可成功追踪大鼠跟腱内移植的经荧光基因修饰的脂肪源干细胞。脂肪源干细胞有望成为肌腱组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 干细胞 干细胞移植 缺陷型腺病毒 脂肪源干细胞 腺病毒 细胞转染 荧光素酶 肌腱 生物发光 成像 荧光表达 组织工程 种子细胞 省级基金 干细胞图片文章
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摘要集萃
10
《中国健康月刊》 2007年第5期46-49,共4页
腺癌术前化疗临床疗效与病理反应的关系;周围型肺癌CT征象与病理对照研究;淋巴细胞减少状态下的肿瘤免疫格局改变及其意义;RNA干扰肺癌细胞H460FasL表达对T细胞磷亡的影响;携带p16基因增殖缺陷型腺病毒对胃癌细胞皮下移植瘤的治疗作用……
关键词 摘要 淋巴细胞减少 FASL表达 缺陷型腺病毒 周围型肺癌 RNA干扰 皮下移植瘤 病理反应
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表达非洲猪瘟病毒P72蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 被引量：11
11
作者 胡永新 赵永刚 +4 位作者 张永强 刘拂晓 樊晓旭 吴晓东 王志亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1635-1641,共7页
本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASF... 本研究旨在构建能够表达非洲猪瘟病毒(ASFV)P72蛋白的缺陷型重组腺病毒。参考ASFV China-SY18株的基因序列,合成B646L基因。先将合成的B646L基因通过TOPO连接克隆到过渡载体pENTR/D-TOPO中;再将插入B646L基因的过渡载体pENTR/D-TOPO-ASFV-P72与pAd/CMV/V5-DEST腺病毒骨架载体进行重组,得到pAd-ASFV-P72重组质粒;重组质粒经PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞,连续传代后获得重组腺病毒。结果表明,获得的Ad5-ASFV-P72重组腺病毒的滴度为2.53×10^9 IFU·m^L^-1;经免疫荧光方法及Western blot鉴定ASFV-P72蛋白在Vero细胞中成功表达,且能够与ASFV标准阳性血清发生特异性反应。本研究成功获得能够表达ASFV P72蛋白的重组腺病毒Ad5-ASFV-P72,不仅为ASFV多基因重组腺病毒载体疫苗的研制奠定了一定基础,还为ASFV相关血清学诊断方法的建立提供了安全有效的抗原。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 复制缺陷型腺病毒 P72蛋白
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腺病毒气溶胶的实时荧光定量PCR检测和绿色荧光蛋白活细胞检测 被引量：8
12
作者 李晓岩 刘启才 +2 位作者 彭燕 毕新慧 李冰 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期785-789,共5页
将带有绿色荧光蛋白的复制缺陷型重组腺病毒,作为模拟病毒建立一种检测病毒侵袭力的方法.在钢化玻璃箱中通过TK-3型微生物气溶胶发生器将腺病毒形成气溶胶,用FA-1型多级撞击式空气微生物采样器进行气溶胶采样,对采样样品分别进行实时荧... 将带有绿色荧光蛋白的复制缺陷型重组腺病毒,作为模拟病毒建立一种检测病毒侵袭力的方法.在钢化玻璃箱中通过TK-3型微生物气溶胶发生器将腺病毒形成气溶胶,用FA-1型多级撞击式空气微生物采样器进行气溶胶采样,对采样样品分别进行实时荧光定量PCR检测和表达了绿色荧光蛋白的PK15活细胞定时检测.实时荧光定量PCR检测可测定病毒在大气中存在的相对基因拷贝数,通过在荧光显微镜下计数带绿色荧光的PK15细胞数可直观检测病毒的感染力及活力.结果表明,重组腺病毒气溶胶主要分布在采样器第五级,腺病毒气溶胶与病毒粒子相比较大. 展开更多
关键词 复制缺陷型重组腺病毒 气溶胶 实时荧光定量PCR 绿色荧光
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重组复制缺陷型腺病毒基因治疗肝纤维化的研究与应用 被引量：7
13
作者 林勇 陈伟忠 +1 位作者 谢渭芬 张忠兵 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第3期321-325,共5页
肝纤维化的特征性变化是肝内细胞外基质的过多沉积.抑制肝星形细胞的激活和细胞外基质的合成,促进基质降解和肝细胞再生是肝纤维化治疗的重要方法.近年来,针对上述环节构建重组复制缺陷型腺病毒,表达不同外源基因产物基因治疗肝纤维化... 肝纤维化的特征性变化是肝内细胞外基质的过多沉积.抑制肝星形细胞的激活和细胞外基质的合成,促进基质降解和肝细胞再生是肝纤维化治疗的重要方法.近年来,针对上述环节构建重组复制缺陷型腺病毒,表达不同外源基因产物基因治疗肝纤维化研究取得了较大的进展.本文对重组腺病毒的结构、构建以及抗肝纤维化作用和安全性研究作一综述. 展开更多
关键词 重组复制缺陷型腺病毒基因 治疗 肝纤维化 研究 应用 基因治疗
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负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定 被引量：6
14
作者 熊晓峰 陈陵 +5 位作者 范亚川 邹利全 张方征 王洪斌 游斌 刘志鹏 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期896-898,共3页
目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染... 目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA指导的DNA聚合酶 微RNAS 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体
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CEA启动子启动双自杀基因CD/TK重组AdEasy XL腺病毒构建 被引量：5
15
作者 王天宝 汪建平 +2 位作者 董文广 钟女奇 周军 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1180-1182,共3页
目的构建含有CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因CD与TK的复制缺陷型腺病毒。方法设计带有限制性内切酶酶切序列的PCR引物。在2μlT4DNAligase作用下,Cp插入pAdTrack(pAT)的MCS,形成pAT.Cp;CD插入pAT.Cp的MCS,形成pAT.Cp.C;TK插... 目的构建含有CEA启动子(CEApromoter,Cp)启动的双自杀基因CD与TK的复制缺陷型腺病毒。方法设计带有限制性内切酶酶切序列的PCR引物。在2μlT4DNAligase作用下,Cp插入pAdTrack(pAT)的MCS,形成pAT.Cp;CD插入pAT.Cp的MCS,形成pAT.Cp.C;TK插入pAT.Cp.C的MCS,形成pAT.Cp.C.T。5μgpAT.Cp.C.T经4μlPmeI线化后,转化BJ5183AD1,1μlPacI酶切鉴定。重组AdEasy质粒转化XL10Gold细胞,大量扩增提取纯化,转染5×105AD293细胞,荧光显微镜观察,制备带有Cp.C.T重组腺病毒(recombinantadenoviruswithCp.C.T,RACp.C.T),测定病毒滴度。结果pAT.Cp,pAT.Cp.C,pAT.Cp.C.T双酶切以及PCR均见长约500bp的Cp,1300bp的CD,1100bp的TK。对照质粒DNA转化BJ5183AD1效率为7.36×106cfu/μg。线化pAT.Cp.C.T转化BJ5183AD1,形成重组AdEasy质粒DNA,PacI酶切见典型长约3.0或4.5kb与30.0kbDNA片断。重组质粒转染AD293出现绿色荧光。RACp.C.T滴度为5.67×107pfu/ml。结论RACp.C.T构建正确;AdEasyXL腺病毒载体系统转导Cp.C.T具有高效性,易于观察转染效果。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 癌胚抗原 胸苷激酶 腺病毒载体 复制缺陷型腺病毒 AdEasy CEA启动子 重组腺病毒 基因CD 自杀
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基于新一代测序技术精准确定复制缺陷型痘苗病毒天坛株全基因组序列及其开放阅读框组成
16
作者 张钟贤 吴长城 +9 位作者 李涵 霍恕婷 赵莉 邓瑶 孟昕 陆柔剑 田厚文 王文玲 黄保英 谭文杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期502-509,共8页
目的应用新一代长读长测序技术精准确定复制缺陷型痘苗病毒天坛株(non-replicating Tiantan strain of vaccinia virus,NTV)全基因组序列及其开放阅读框(ORFs)组成。方法基于本实验室储备的NTV,在鸡胚成纤维细胞上进行扩增并纯化,提取NT... 目的应用新一代长读长测序技术精准确定复制缺陷型痘苗病毒天坛株(non-replicating Tiantan strain of vaccinia virus,NTV)全基因组序列及其开放阅读框(ORFs)组成。方法基于本实验室储备的NTV,在鸡胚成纤维细胞上进行扩增并纯化,提取NTV全长基因组核酸。PacBio HiFi测序从头组装获取NTV全长基因组序列。以同源注释的策略确定其ORF组成,并分析其与已知复制缺陷型痘苗病毒毒株ORF异同。结果NTV全长共171729 bp,GC含量为33%,其独特的倒置末端重复(ITR)区域包含发夹结构、两个串联重复区域及3个非重复区域。NTV共有166个ORFs,与第三代天花病毒疫苗改良安卡拉株(MVA-BN)和复制缺陷型哥本哈根株(NYVAC)株相比,主要差异位于ITR及其周围区域,3个毒株共同享有138个ORFs,NTV特有6个编码与病毒逃避宿主抗病毒反应相关的ORFs。结论通过三代测序技术精准确定NTV全基因组序列及ORFs组成,并揭示其与其他复制缺陷型痘苗病毒毒株的异同,为新一代猴痘疫苗和痘苗病毒载体研发应用提供重要参考。 展开更多
关键词 复制缺陷型痘苗病毒天坛株 三代测序 全基因组测序 开放阅读框
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多基因联合重组腺病毒对喉癌细胞生长的影响 被引量：4
17
作者 陈晓红 韩德民 +9 位作者 马丽晶 邢虎 王琪 黄志刚 房居高 张伟 王鸿 范尔钟 邱兆华 吴祖泽 《中国耳鼻咽喉头颈外科》 北大核心 2005年第3期139-142,共4页
目的探讨携带多基因(抑癌蛋白:p53,免疫共刺激分子:B7–1,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子:Granulocyte-MacrophageColony-StimulatingFactor,GM-CSF)的复制缺陷型腺病毒(BB-102)对喉鳞癌原代细胞中的表达效率和对其生长的抑制作用。方法构... 目的探讨携带多基因(抑癌蛋白:p53,免疫共刺激分子:B7–1,粒细胞巨噬细胞集落刺激因子:Granulocyte-MacrophageColony-StimulatingFactor,GM-CSF)的复制缺陷型腺病毒(BB-102)对喉鳞癌原代细胞中的表达效率和对其生长的抑制作用。方法构建多基因联合(p53,GM-CSF,B7-1)重组的复制缺陷腺病毒BB–102,在体外感染两株喉鳞癌细胞系(LSC-1及L-17),采用免疫组化,流氏细胞术,ELISA等检测目的基因编码蛋白效率,用MTT法观察其对喉癌细胞生长抑制作用。结果三种目的基因在喉癌细胞中均有不同程度的表达:B7-1从平均1.34%提高到57%;GM-CSF在转染后24小时即开始升高,持续两天后低水平维持在一周时间;p53蛋白表达明显,但当50pfu/细胞的相同浓度转染时,其表达效率没有Ad-p53高。BB-102和Ad-p53分别对肿瘤细胞生长产生抑制作用,两者没有显著差异(P>0.05)。结论BB-102感染喉癌细胞,目的基因都能有效表达,喉癌原代细胞生长受到明显抑制;感染滴度相同时,单基因腺病毒Ad-p53感染的肿瘤细胞p53蛋白表达丰度比BB-102高。 展开更多
关键词 多基因 癌细胞生长 重组腺病毒 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 BB-102 复制缺陷型腺病毒 免疫共刺激分子 p53蛋白表达 Factor 基因编码蛋白 生长抑制作用 喉癌细胞 肿瘤细胞生长 AD-P53 表达效率 目的基因 鳞癌细胞系 流氏细胞术
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HIV-1整合酶及其抑制剂的研究进展 被引量：3
18
作者 李芳琼 丁倩 詹金彪 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期80-86,共7页
HIV-1整合酶是由HIV病毒pol基因编码的分子量为32kDa的蛋白质,是HIV病毒复制的必需酶之一,它催化病毒DNA整合入宿主染色体DNA。人类细胞中没有HIV整合酶的类似物,理论上抑制整合酶对人体副作用很小。因此HIV-1整合酶成为继HIV-1蛋白酶,... HIV-1整合酶是由HIV病毒pol基因编码的分子量为32kDa的蛋白质,是HIV病毒复制的必需酶之一,它催化病毒DNA整合入宿主染色体DNA。人类细胞中没有HIV整合酶的类似物,理论上抑制整合酶对人体副作用很小。因此HIV-1整合酶成为继HIV-1蛋白酶,逆转录酶后治疗艾滋病的富有吸引力和合理的靶标。综述了HIV整合酶结构,抑制剂的研究以及以HIV-1整和酶为靶点治疗AIDS方法的最新研究进展。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷I型病毒 整合酶 抑制剂 RNA干扰
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重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用 被引量：4
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作者 杨芳 孙茂盛 +3 位作者 易山 谢天宏 施锐 李鸿钧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第4期362-367,共6页
目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜... 目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果:Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例(8.55%)的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论:Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 重组复制缺陷型腺病毒 凋亡 非小细胞肺癌
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负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定 被引量：5
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作者 高军 范亚川 +5 位作者 王军 熊晓峰 吴友良 刘志鹏 陈陵 李学成 《西南国防医药》 CAS 2011年第10期1045-1048,共4页
目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-... 目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化。对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×109 pfu/ml。PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段。Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度。结论成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。 展开更多
关键词 微小RNAS hsa-miR-29a 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体
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