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绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用 被引量：25
1
作者 黄国存 朱生伟 +1 位作者 董越梅 孙敬三 《植物学通报》 CSCD 1998年第5期24-30,共7页
绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是海洋生物水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）体内的一种发光蛋白，分子量２７ｋＤ，由２３８个氨基酸组成。该蛋白６５～６７位ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ三种氨基酸环化加氧形成特殊的生色团结构。野生型... 绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是海洋生物水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）体内的一种发光蛋白，分子量２７ｋＤ，由２３８个氨基酸组成。该蛋白６５～６７位ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ三种氨基酸环化加氧形成特殊的生色团结构。野生型ＧＦＰ发光较弱，而且ｇｆｐｃＤＮＡ含有隐蔽型剪切位点，而加工改造的ＧＦＰ在植物中能够正常表达并且加强了荧光信号。ＧＦＰ作为新的报告基因和遗传标记被广泛应用于植物研究之中。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 GFP基因 植物
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绿色荧光蛋白及其应用 被引量：29
2
作者 张峰 任燕 陆长德 《生命科学》 CSCD 1999年第2期61-65,共5页
绿色荧光蛋白是在水母中发现的新型报告分子，能在多种生物体内表达并发出荧光。对GFP中一些特定氨基酸进行突变可以产生多种类型的突变体，有利于研究蛋白之间或细胞器之间的相互作用。目前，GFP已经用于基因表达的报告、细胞动态的研... 绿色荧光蛋白是在水母中发现的新型报告分子，能在多种生物体内表达并发出荧光。对GFP中一些特定氨基酸进行突变可以产生多种类型的突变体，有利于研究蛋白之间或细胞器之间的相互作用。目前，GFP已经用于基因表达的报告、细胞动态的研究、活细胞内蛋白的定位及westernbloting检测中。GFP美好的应用前景也促进了有关GFP的研究，特别是寻找新的突变体并将之运用到细胞生物学和分子生物学的各个领域。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 报告分子 突变体
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报告基因的选择及其研究趋向 被引量：29
3
作者 薛丽香 童坦君 张宗玉 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期364-366,共3页
报告基因是一种编码某种易于检测蛋白质或酶的基因,通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。由于具有灵敏度高、检测方便等特点,报告基因技术在转基因、启动子分析以及药物筛选等领域有了广泛的应用。近年来,随着荧光分析方法和技... 报告基因是一种编码某种易于检测蛋白质或酶的基因,通过它的表达产物来标定目的基因的表达调控。由于具有灵敏度高、检测方便等特点,报告基因技术在转基因、启动子分析以及药物筛选等领域有了广泛的应用。近年来,随着荧光分析方法和技术的进步,荧光素酶和绿色荧光蛋白成为众多报告基因中的后起之秀,本文以这两个报告基因为重点,综述了报告基因的特点、应用、近年来的进展以及未来发展方向。 展开更多
关键词 报告基因 选择 绿色荧光蛋白 荧光素酶 发展方向
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一种高效的重组腺伴随病毒载体生产系统 被引量：36
4
作者 伍志坚 吴小兵 +3 位作者 曹晖 董小岩 王宏 侯云德 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2001年第5期423-430,共8页
重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)载体是目前较理想的基因治疗载体之一, 但难以大规模制备一直是影响其广泛应用的主要因素. 曾组建了一种表达2型腺伴随病毒 (adeno-associated virus type 2, AAV-2) Rep和Ca... 重组腺伴随病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)载体是目前较理想的基因治疗载体之一, 但难以大规模制备一直是影响其广泛应用的主要因素. 曾组建了一种表达2型腺伴随病毒 (adeno-associated virus type 2, AAV-2) Rep和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/DUL2, 现在此基础上, 证实了该重组病毒支持rAAV的复制与包装, 包装出的rAAV具有感染性; 构建了携带新霉素抗性基因、适合多种外源基因插入的通用型rAAV载体质粒pSNAV-2 及表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)的rAAV载体质粒pSNAV-2-GFP, 建立了稳定携带GFP基因表达盒的rAAV载体细胞株; 确定了HSV1-rc/DUL2感染载体细胞株时的最佳感染复数(multiplicity of infection, MOI)为0.1; 采用"一种病毒感染一个载体细胞株"的策略, 用"感染"的方式代替传统的"转染"方式, 使每个细胞产生的rAAV比传统方式提高了2个数量级以上, 并实现了rAAV的规模化制备, 为rAAV用于基因治疗的临床试验打下了基础. 展开更多
关键词 重组腺伴随病毒 重组1型单纯疱疹病毒 载体 基因治疗 生产系统 绿色荧光蛋白 转染方式
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水稻内生优势成团泛菌GFP标记菌株的性质与标记丢失动力学 被引量：22
5
作者 冯永君 宋未 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期85-91,共7页
为研究内生细菌对宿主植物侵染定殖的机理和其共生生物学作用 ,对水稻内生优势成团泛菌 (Pantoeaagglomerans)YS19与绿色荧光蛋白 (GFP)标记的YS19B ::gfp菌株的生长动力学进行了比较研究 ,探讨了成团泛菌YS19B ::gfp的标记稳定性和荧... 为研究内生细菌对宿主植物侵染定殖的机理和其共生生物学作用 ,对水稻内生优势成团泛菌 (Pantoeaagglomerans)YS19与绿色荧光蛋白 (GFP)标记的YS19B ::gfp菌株的生长动力学进行了比较研究 ,探讨了成团泛菌YS19B ::gfp的标记稳定性和荧光性质 .标记菌株与野生型菌株相比 ,最大比生长速率和最大生物量仅减小 12 4 %和 6 % ,代时延长 14 0 % .成团泛菌YS19B ::gfp在指数期连续传代培养 10 0代后 ,GFP标记的保持率为 89 1% ,建立了标记菌株在有标记丢失存在时的生长动力学模型 :dX+ dt =μ+ (1-p)X+ ,解析出细胞分裂时标记丢失的概率p =9 75 6× 10 -7,确定了方程的模型参数 .标记菌株的荧光光谱在激发波长为 4 0 0nm时 ,最大发射波长为 5 0 8nm ,与供体菌株完全相同 .在LB培养基上生长时 ,成团泛菌YS19B ::gfp的GFP产生时间在指数期末期到稳定期较快 ,并于培养至 2 0h时达到最高 ,同时单位菌体生物量的荧光强度也达到最大 .结果说明 ,在GFP标记后成团泛菌YS19B ::gfp的生长仅受到较小影响 ,不致对成团泛菌的生理活动造成大的改变 ,同时由于该菌对宿主的侵染能力比其它内生细菌要强得多 ,因而该菌对植物的侵染活性影响也较小 ,该菌仍然可以保持其内生优势地位 .该标记的稳定性比较高 ,荧光产生正常 ,很适? 展开更多
关键词 植物内生细菌 成团泛菌 绿色荧光蛋白 标记丢失 动力学 GFP 水稻
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基于氨基化SiO_2纳米颗粒的新型基因载体 被引量：20
6
作者 何晓晓 王柯敏 +6 位作者 谭蔚泓 刘斌 林霞 黄杉生 李杜 何春梅 李军 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第18期1365-1369,T001,共6页
采用正硅酸乙酯与N（β-氨乙基）-γ-氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步水解的方法,制备了大小均匀的氨基化二氧化硅纳米颗粒.由于表面氨基化使纳米颗粒在一定的pH环境下的ξ（zeta）电位为正值,与带负电荷的质粒DNA通过静... 采用正硅酸乙酯与N（β-氨乙基）-γ-氨丙基三乙氧基硅烷在油包水形成的微胶囊中同步水解的方法,制备了大小均匀的氨基化二氧化硅纳米颗粒.由于表面氨基化使纳米颗粒在一定的pH环境下的ξ（zeta）电位为正值,与带负电荷的质粒DNA通过静电结合能快速形成纳米颗粒-质粒DNA复合物,并对结合的DNA有明显的保护作用.结合纳米技术、生物技术与基因工程技术,构建了基于氨基化SiO2纳米颗粒的新型非病毒型基因载体,应用这一新型基因载体成功地将绿色荧光蛋白（green fluorescenceprotein,GFP）表达载体pIRGFP导入COS-7细胞,并在细胞内产生高水平的绿色荧光蛋白表达. 展开更多
关键词 基因载体 纳米颗粒 氨基化二氧化硅 绿色荧光蛋白 基因工程 氨基化SiO2
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绿色荧光蛋白及其应用 被引量：18
7
作者 周盛梅 孟凡国 +1 位作者 黄大年 黄纯农 《生物工程进展》 CSCD 1999年第2期56-59,共4页
许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白，这种蛋白质结构很特殊，在受到激发时可以发射绿色或蓝色荧光。虽然对它的研究从本世纪六十年代才开始，但是它独特的性质逐渐引起了生物学界的广泛关注。本文将就绿色荧光蛋白的结构、性质... 许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白，这种蛋白质结构很特殊，在受到激发时可以发射绿色或蓝色荧光。虽然对它的研究从本世纪六十年代才开始，但是它独特的性质逐渐引起了生物学界的广泛关注。本文将就绿色荧光蛋白的结构、性质及其应用前景作一综述。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 荧光 生色基 GFP基因
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脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化 被引量：23
8
作者 李扬 吴凯峰 +2 位作者 郭旭东 郭继彤 旭日干 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期653-655,共3页
通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(... 通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。 展开更多
关键词 脂质体介导 外源基因体外转染 牛胎儿成纤维细胞 优化 绿色荧光蛋白 转染条件
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绿色荧光蛋白 被引量：27
9
作者 刘默芳 王恩多 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期238-243,共6页
来源于水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一 .其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时 (λmax=395nm ,小峰在 4 79nm )可高效发... 来源于水母Aequoreavictoria的绿色荧光蛋白 ( greenfluorescentprotein ,GFP)现已成为在生物化学和细胞生物学中研究和开发应用得最广泛的蛋白质之一 .其内源荧光基团在受到紫外光或蓝光激发时 (λmax=395nm ,小峰在 4 79nm )可高效发射清晰可见的绿光 .GFP的高分辨率晶体结构为了解和研究蛋白质结构和光谱学功能关系提供了一个极好的机会 .GFP已成为一个监测在完整细胞和组织内基因表达和蛋白质定位的理想标记 .通过突变和蛋白质工程构建的GFP嵌合蛋白在生理指示剂、生物传感器。 展开更多
关键词 水母 绿色荧光蛋白 生色团 变种 报告分子
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绿色荧光蛋白及其在植物分子生物学研究中的应用 被引量：24
10
作者 赵华 梁婉琪 +1 位作者 杨永华 张大兵 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2003年第2期171-178,共8页
绿色荧光蛋白 (GFP)是海洋生物水母 (Aequoriavictoria)体内的一种发光蛋白 ,近十年来成为在生物化学和细胞生物学研究和应用中用得最广泛的蛋白质之一。文章就绿色荧光蛋白的特性及其在植物分子生物学中应用的研究进展作了概述。
关键词 绿色荧光蛋白 植物分子生物学 水母 发光特性 生色团 应用 海洋无脊椎动物
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用曲细精管微注射法建立绿色荧光蛋白转基因小鼠 被引量：26
11
作者 沈新明 乔贵林 +3 位作者 张玲 江培洲 黄华 姚开泰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期250-253,共4页
目的研究曲细精管微注射法建立转基因小鼠的可行性。方法选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体,应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质粒DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内。在注射... 目的研究曲细精管微注射法建立转基因小鼠的可行性。方法选取人巨细胞病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白(pCMV-EGFP)表达载体,应用体视解剖镜和显微注射仪将不同剂量的被脂质体包裹的质粒DNA注射到不同年龄的KM小鼠曲细精管内。在注射后40d左右,雄鼠与雌鼠合笼交配;分娩后3周,剪取仔鼠尾,提取基因组DNA,应用PCR、Southernblotting技术进行整合检测。处死2只首建小鼠,荧光显微镜观察组织冰冻切片中EGFP的表达。结果共注射41只雄性小鼠,存活34只,其中32只具有交配、受精能力,获得仔鼠382只。仔鼠经检测,PCR阳性133只,Southernblotting阳性15只。小鼠的年龄、注射剂量与EGFP的整合率没有明显关系,荧光显微镜观察下没有观察到组织冰冻切片中EGFP明显表达。结论曲细精管微注射法是动物基因转移的一条简便可行的新途径。 展开更多
关键词 曲细精管微注射 绿色荧光蛋白 转基因小鼠
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用基因枪将外源DNA导入中国对虾 被引量：14
12
作者 刘志毅 相建海 +1 位作者 周国瑛 龚祖埙 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第23期2539-2544,T002,共7页
用基因枪的方法, 以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因作为报告基因, 和带有切割对虾白斑病病毒基因的核酶基因质粒pGDNA-RZ1导入中国对虾受精卵中, 利用荧光显微镜分别对各个不同发育时期对虾幼体的处理组和对照组做... 用基因枪的方法, 以绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因作为报告基因, 和带有切割对虾白斑病病毒基因的核酶基因质粒pGDNA-RZ1导入中国对虾受精卵中, 利用荧光显微镜分别对各个不同发育时期对虾幼体的处理组和对照组做了检测. 绿色荧光蛋白在无节幼体和蚤状幼体中的瞬间表达强烈. 对成体的RT-PCR和PCR检测表明, 外源的GFP基因已转移到中国对虾体内并有相应的基因产物表达. 初步建立了转基因虾的操作方法, 为今后虾类基因工程育种在生产实践中的应用奠定了实验基础. 展开更多
关键词 基因枪 绿色荧光蛋白 转基因虾 中国对虾 外源DNA导入
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以不同类型的转基因细胞为核供体生产牛的转基因克隆胚胎 被引量：26
13
作者 龚国春 戴蕴平 +8 位作者 樊宝良 朱化彬 王海平 王莉莉 方昌阁 万荣 刘颖 李荣 李宁 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2003年第6期532-538,共7页
利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株... 利用所构建的含新霉素抗性(Neo^r)基因和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双标记选择载体,通过电穿孔的方法,分别转染了牛胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、胎儿卵巢上皮细胞、颗粒细胞,经过800μg/mL的 G418筛选14 d后,均获得了阳性细胞株.分别以未转基因牛颗粒细胞和4种细胞系的转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.结果表明:(i)转基因与未转基因牛颗粒细胞的重组胚的囊胚发育率(44.6％vs 42.8％)、移植妊娠率(19％ vs 25％)差异不显著(P>0.05);(ii)比较4种类型转基因细胞的重组胚的囊胚发育率,发现胎儿输卵管上皮细胞(49.1％)和颗粒细胞(44.6％)最高,牛胎儿成纤维细胞(37.2％)次之,胎儿卵巢上皮细胞的重组胚囊胚发育率(22.5％)最低,三者之间差异显著(P<0.05).以上结果显示,供体细胞的转基因与否对牛克隆胚胎的体外和体内早期发育影响不明显;通过体细胞核移植技术,牛胎儿输卵管上皮细胞和颗粒细胞可以有效地生产牛转基因囊胚,并且绿色荧光蛋白作为一种无毒性作用的筛选标记,可用于转基因胚胎的筛选. 展开更多
关键词 转基因细胞 核供体 牛 体细胞 核移植 绿色荧光蛋白 囊胚 克隆胚胎
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斑马鱼Mylz2启动子的克隆与转绿色荧光蛋白基因鱼的构建 被引量：30
14
作者 简清 白俊杰 +3 位作者 叶星 夏仕玲 梁旭方 罗建仁 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期391-395,共5页
为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启... 为获得能在肌肉表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼(Brachydaniorerio),采用PCR方法,从斑马鱼基因组DNA中分离了肌球蛋白轻链2启动子,序列分析表明,该启动子与国外文献报道的斑马鱼肌球蛋白轻链2启动子序列的相似性为98.6%。将改造后的启动子插入绿色荧光蛋白基因载体,构建成肌肉特异性表达载体。通过显微注射,将线性化的表达载体注入斑马鱼的受精卵,获得了转绿色荧光蛋白基因的斑马鱼。绿色荧光蛋白在胚胎期开始表达,随着鱼体的生长表达量有增加的趋势,成鱼在紫外灯下用肉眼即可观察到绿色荧光。转基因鱼绿色荧光蛋白的表达具有明显的肌肉特异性。本研究为下一步特定基因的表达研究和获得有特色的转基因观赏鱼奠定了基础。 展开更多
关键词 斑马鱼 绿色荧光蛋白 转基因 肌球蛋白 启动子
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绿色荧光蛋白——现代细胞生物学与分子生物学研究领域的新标记物 被引量：19
15
作者 岳莉莉 齐义鹏 《生物工程进展》 CSCD 1997年第4期40-45,共6页
从多管水母属Ａｅｑｕｏｒｅｎｖｉｃｔｕｒｉａ分离出的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ），因其特有的生物化学性质及该基因在异源细胞内的表达产物亦能产生强烈的绿色荧光，使其在现代细胞生物学和分子生物学研究领域的应用具有广阔前景。
关键词 多管水母 绿色荧光蛋白 细胞生物学 分子生物学
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利用体细胞核移植技术生产转基因牛 被引量：22
16
作者 龚国春 戴蕴平 +9 位作者 樊宝良 朱化彬 王莉莉 王海平 汤波 刘颖 李荣 万荣 黄银花 李宁 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第24期2528-2533,共6页
通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚... 通过电穿孔的方法,将含有新霉素抗性(Neor)基因和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体导入胎牛输卵管上皮细胞,获得了转基因细胞株.以转基因细胞为核供体,进行了牛的体细胞核移植.重构胚胎424枚,其中208枚体外发育至囊胚,囊胚发育率为49.1％.选择第7天转基因囊胚17枚移入17头同期发情的受体牛子宫角内,共有5头受体牛妊娠,妊娠率为29.4％.经过正常的体内发育,有3头转基因克隆牛出生,产犊率为17.6％.PCR和Southern检测结果表明,3头转基因克隆牛的基因组中都整合有外源目标基因.并且,绿色荧光蛋白在转基因克隆牛的耳部皮肤组织以及从耳部皮肤组织分离出的成纤维细胞中均有表达.上述结果显示,通过体细胞核移植技术可以有效生产转基因牛;所构建的双标记选择载体可以有效筛选出转基因细胞和转基因克隆胚胎,应用于转基因克隆动物的生产,确保所培育的克隆动物均为转基因动物. 展开更多
关键词 体细胞 核移植 转基因 牛 绿色荧光蛋白 克隆
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用共聚焦激光扫描显微镜观测GFP标记的内生固氮菌Klebsiella oxytoca SA2侵染水稻根 被引量：23
17
作者 安千里 杨学健 +3 位作者 董越梅 冯丽洁 匡柏健 李久蒂 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第6期558-564,共7页
用高效绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)突变体EGFPmut2的基因标记内生固氮菌———产酸克雷伯氏菌 (Klebsiellaoxytoca (Fl櫣ｇｇｅ)Lautrop)SA2 ,用标记菌接种限菌培养条件下生长的水稻 (OryzasativaL .)幼苗 ,在接种后 1... 用高效绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)突变体EGFPmut2的基因标记内生固氮菌———产酸克雷伯氏菌 (Klebsiellaoxytoca (Fl櫣ｇｇｅ)Lautrop)SA2 ,用标记菌接种限菌培养条件下生长的水稻 (OryzasativaL .)幼苗 ,在接种后 1、2、4、8、12、16和 2 1d ,用共聚焦激光扫描显微镜对水稻鲜根进行光学切片 ,显示了标记菌从水稻根成熟区表面向根内入侵的过程。定殖在根表面的标记菌主要从侧根伸出的位置侵入侧根皮层 ,从邻近发生侧根的位置进入内皮层和维管柱。SA2还能从初生根成熟区无侧根伸出的位置侵入皮层向维管柱迁移。SA2入侵水稻根引发了水稻根局部的过敏反应以阻滞细菌进一步入侵 ,表现为侵入根内的细菌周围的根细胞细胞壁变厚 ,在蓝光下发出很强的黄绿荧光。 展开更多
关键词 内生固氨菌 侵染 绿色荧光蛋白 共聚焦激光扫描显微镜 水稻根 植物
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根癌农杆菌介导绿色荧光蛋白基因转化印度酸桔的研究 被引量：20
18
作者 石玮 李东栋 +1 位作者 邓秀新 伊华林 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期109-112,共4页
通过根癌农杆菌介导将绿色荧光蛋白基因转入印度酸桔的胚性愈伤组织中 ,经潮霉素筛选 ,获得抗性愈伤组织 ,并再生植株。对这些植株进行GUS染色、PCR分析、绿色荧光检测和Sourthern杂交验证 ,结果表明绿色荧光蛋白已经在转基因植株中表达。
关键词 愈伤组织 根癌农杆菌 介导 绿色荧光蛋白 基因转化 印度酸桔
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同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内定居能力初步研究 被引量：23
19
作者 向国安 张刚庆 +2 位作者 方驰华 高鹏 陈开运 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第8期994-997,共4页
目的探索绿色荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经不同途径移植到同种异体大鼠后其定居于肝脏的能力。方法从大鼠骨髓中分离培养获取MSCs,以绿色荧光蛋白进行标记,体外扩增后,分别从大鼠尾静脉和门静脉注入同种异体正常和肝脏损... 目的探索绿色荧光蛋白标记的大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经不同途径移植到同种异体大鼠后其定居于肝脏的能力。方法从大鼠骨髓中分离培养获取MSCs,以绿色荧光蛋白进行标记,体外扩增后,分别从大鼠尾静脉和门静脉注入同种异体正常和肝脏损伤大鼠体内,于移植后的第3、7天通过荧光定量PCR检测移植的MSCs在大鼠肝内的表达情况。结果所有大鼠移植同源异体MSCs后全部存活,无意外死亡。从门静脉、尾静脉注入MSCs,在大鼠肝脏受损时其定居量大于非肝脏受损大鼠(P<0.05)。在肝细胞受损大鼠,从门静脉注入MSCs与从尾静脉注入比较肝脏定居量差异不显著(P>0.05)。非肝脏受损大鼠,从门静脉注入MSCs与从尾静脉注入比较细胞定居于肝脏量差异显著(P<0.05),并与移植后时间有关。结论干细胞定居于肝脏的时间与细胞数量可能与肝脏是否受损伤关系密切,与移植途径关系不密切;在正常动物干细胞可定居于肝脏,定植的细胞量与移植途径和移植后时间有关。 展开更多
关键词 骨髓问质干细胞 绿色荧光蛋白 同种异体 干细胞移植 肝
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绿色荧光蛋白及其在植物分子生物学中的应用 被引量：20
20
作者 吴瑞 张树珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第2期240-244,共5页
绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)是源于海洋生物多管水母属(AequoriaVictoria)的一种发光蛋白,能够自身催化形成生色团并在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光,能在活细胞内稳定表达。GFP的荧光反应不需要任何底物及辅助因子,... 绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)是源于海洋生物多管水母属(AequoriaVictoria)的一种发光蛋白,能够自身催化形成生色团并在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光,能在活细胞内稳定表达。GFP的荧光反应不需要任何底物及辅助因子,使表达检测非常简单。同时,GFP在细胞中呈自主表达,没有细胞种类、位置和种属的特异性。GFP对受体细胞无毒性,对目的基因没有影响。因而可以很方便的对活体进行观察,来研究GFP基因的表达。由于GFP对光漂白、氧化剂、还原剂、酸、碱以及其它许多化学试剂具有极强的稳定性,因此,GFP作为报告基因可用来监测转基因的表达、信号转导、蛋白运输与定位等。本文对GFP基础理论研究及在植物分子生物学中的应用作了综述。 展开更多
关键词 稳定表达 白及 GFP基因 绿色荧光蛋白 细胞 活体 观察 植物分子生物学 水母 目的基因
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