大肠杆菌是常见致病菌,对多种抗生素已产生耐药性,因此,需要开发新型抗菌剂用于预防及治疗大肠杆菌感染.然而,大肠杆菌独特的细胞外膜结构可阻止多种抗菌剂进入菌体发挥作用.为提高抗菌剂的跨膜杀菌性能,选取T4噬菌体编码的T4溶菌酶,在...大肠杆菌是常见致病菌,对多种抗生素已产生耐药性,因此,需要开发新型抗菌剂用于预防及治疗大肠杆菌感染.然而,大肠杆菌独特的细胞外膜结构可阻止多种抗菌剂进入菌体发挥作用.为提高抗菌剂的跨膜杀菌性能,选取T4噬菌体编码的T4溶菌酶,在其N端融合不同种类的细胞穿透肽,并对融合蛋白进行重组表达.细胞壁降解实验及碘化丙啶染色实验表明,融合了细胞穿透肽的T4溶菌酶保留了其催化活性,同时具有穿膜特性.杀菌实验证明,阳离子型细胞穿透肽Pc及两亲型细胞穿透肽Pa与T4溶菌酶的融合可极大提高酶对大肠杆菌的跨膜杀菌活性,且低浓度EDTA的辅助可进一步提高融合酶的杀菌效果.其中,对于初始菌浓为10^(6) CFU/mL的Top10菌株,联合使用0.35μg/mL的Pa-T4L融合酶与0.3 mM EDTA,可在室温条件下于3 h内杀灭94%的菌体.研究结果可为针对革兰氏阴性菌的抗菌剂设计提供新思路.展开更多
为了评估华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)细胞外膜囊泡中虫源miRNAs跨物种调控宿主基因的风险,试验利用miRBase数据库对华支睾吸虫细胞外膜囊泡和感染阳性宿主细胞共有的虫源miRNAs成熟体序列进行筛选,通过miRanda软件对细胞外膜囊泡...为了评估华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)细胞外膜囊泡中虫源miRNAs跨物种调控宿主基因的风险,试验利用miRBase数据库对华支睾吸虫细胞外膜囊泡和感染阳性宿主细胞共有的虫源miRNAs成熟体序列进行筛选,通过miRanda软件对细胞外膜囊泡中表达量排在前10位的miRNAs进行靶基因预测,选取每个miRNAs评分排在前10位的靶基因作为候选靶基因,通过NCBI、Bing检索工具检索miRNAs候选靶基因的功能,利用GO功能注释及KEGG富集分析对靶基因进行生物信息学分析。结果表明:华支睾吸虫细胞外膜囊泡中的10种miRNAs共对应8128个与宿主相关的靶基因。有12个候选靶基因没有相关的功能报道,12个候选靶基因与肝功能有关,其余候选靶基因在癌症、信号转导、结构骨架、增殖和分化、迁移功能中发挥重要作用。候选靶基因Taf10和Onecut2与肝脏和肝胆管发育相关,候选靶基因Gng1和Hhip分别可参与致纤维化相关的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和Hedgehog信号通路。说明虫源miRNAs有靶向宿主细胞并参与致宿主肝纤维化和肝癌的风险。展开更多
文摘大肠杆菌是常见致病菌,对多种抗生素已产生耐药性,因此,需要开发新型抗菌剂用于预防及治疗大肠杆菌感染.然而,大肠杆菌独特的细胞外膜结构可阻止多种抗菌剂进入菌体发挥作用.为提高抗菌剂的跨膜杀菌性能,选取T4噬菌体编码的T4溶菌酶,在其N端融合不同种类的细胞穿透肽,并对融合蛋白进行重组表达.细胞壁降解实验及碘化丙啶染色实验表明,融合了细胞穿透肽的T4溶菌酶保留了其催化活性,同时具有穿膜特性.杀菌实验证明,阳离子型细胞穿透肽Pc及两亲型细胞穿透肽Pa与T4溶菌酶的融合可极大提高酶对大肠杆菌的跨膜杀菌活性,且低浓度EDTA的辅助可进一步提高融合酶的杀菌效果.其中,对于初始菌浓为10^(6) CFU/mL的Top10菌株,联合使用0.35μg/mL的Pa-T4L融合酶与0.3 mM EDTA,可在室温条件下于3 h内杀灭94%的菌体.研究结果可为针对革兰氏阴性菌的抗菌剂设计提供新思路.
基金the Medical Innovation Project of the Nanjing Military Region,No.14ZX01China Hepatitis Prevention and Treatment Foundation-Tian Qing Liver Research Fund Project,No.TQGB20150104~~
文摘为了评估华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)细胞外膜囊泡中虫源miRNAs跨物种调控宿主基因的风险,试验利用miRBase数据库对华支睾吸虫细胞外膜囊泡和感染阳性宿主细胞共有的虫源miRNAs成熟体序列进行筛选,通过miRanda软件对细胞外膜囊泡中表达量排在前10位的miRNAs进行靶基因预测,选取每个miRNAs评分排在前10位的靶基因作为候选靶基因,通过NCBI、Bing检索工具检索miRNAs候选靶基因的功能,利用GO功能注释及KEGG富集分析对靶基因进行生物信息学分析。结果表明:华支睾吸虫细胞外膜囊泡中的10种miRNAs共对应8128个与宿主相关的靶基因。有12个候选靶基因没有相关的功能报道,12个候选靶基因与肝功能有关,其余候选靶基因在癌症、信号转导、结构骨架、增殖和分化、迁移功能中发挥重要作用。候选靶基因Taf10和Onecut2与肝脏和肝胆管发育相关,候选靶基因Gng1和Hhip分别可参与致纤维化相关的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和Hedgehog信号通路。说明虫源miRNAs有靶向宿主细胞并参与致宿主肝纤维化和肝癌的风险。
