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腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的影响 被引量：5
1
作者 郝礼森 宋小杰 +5 位作者 章广玲 王静 刘博 张朋垒 张明婷 靳丽敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期557-561,566,共6页
目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)基因表达对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤丝状肌动蛋白(F-actin)的影响。方法:体外培养大鼠活化HSC(HSCT6),将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA(shR... 目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物(PTEN)基因表达对体外培养的活化肝星状细胞(HSC)纤丝状肌动蛋白(F-actin)的影响。方法:体外培养大鼠活化HSC(HSCT6),将携带靶向PTEN的RNA干扰序列[短发夹RNA(shRNA)]并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒AdshRNA/PTEN及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP转染HSC,实时荧光定量PCR及Western blotting实验检测HSC的PTEN mRNA及蛋白表达;利用激光扫描共聚焦显微镜检测HSC的形态、F-actin的分布及荧光强度、伪足以及应力纤维的变化,并采用钙荧光探针Rhod-2/AM负载检测HSC内Ca^(2+)浓度的变化。实验分为对照(control)组(在腺病毒转染步骤以DMEM代替腺病毒液)、Ad-GFP组(转染表达GFP的空病毒Ad-GFP)和Ad-shRNA/PTEN组(转染重组腺病毒Ad-shRNA/PTEN)。结果:靶向PTEN的shRNA成功转染体外活化HSC,显著下调HSC的PTEN mRNA及蛋白表达(P<0.05);PTEN表达下调使活化HSC呈星形向四周伸展,F-actin排列紧密规则,数量增多,伪足充分向外伸展,应力纤维丝增长增粗;Ad-shRNA/PTEN组F-actin的荧光强度较control组及Ad-GFP组显著增强(P<0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性;Ad-shRNA/PTEN组HSC内Ca^(2+)浓度较control组及Ad-GFP组明显升高(P<0.05),而control组与Ad-GFP组间差异无统计学显著性。结论:PTEN表达下调使体外活化肝星状细胞骨架蛋白F-actin的形成及细胞骨架的重构增强,并增加了HSC内的Ca^2浓度。 展开更多
关键词 PTEN RNA干扰 肝星状细胞 细胞骨架 纤丝状肌动蛋白
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清肠栓对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜纤丝状肌动蛋白的影响 被引量：3
2
作者 卢璐 谢建群 +1 位作者 袁建业 裘世轲 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2012年第11期485-488,共4页
[目的]探讨复方中药清肠栓对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜纤丝状肌动(F-actin)蛋白的修复作用。[方法]清洁级雄性SD大鼠36只,随机分为正常组,模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP)组,清肠栓高、中、低剂量组,每组6只。选用三硝基苯磺酸(TNBS)诱导... [目的]探讨复方中药清肠栓对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜纤丝状肌动(F-actin)蛋白的修复作用。[方法]清洁级雄性SD大鼠36只,随机分为正常组,模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP)组,清肠栓高、中、低剂量组,每组6只。选用三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的UC大鼠模型,采用免疫荧光的方法观察各组大鼠结肠黏膜F-actin蛋白的表达,并运用图像分析软件进行平均光密度测定,观察清肠栓对UC大鼠结肠屏障的修复作用。[结果]UC发病对结肠黏膜细胞骨架系统严重损害,模型组大鼠结肠黏膜F-actin蛋白几乎完全被破坏,荧光染色暗淡。图像分析测其平均光密度较正常组明显降低(P<0.01)。清肠栓能不同程度减轻UC黏膜的破坏,改善F-actin蛋白的分布,并使其表达升高(P<0.01)。[结论]清肠栓能有效地调节肠黏膜屏障功能,有效抑制UC大鼠结肠通透性的升高,改善肠黏膜屏障功能,促进溃疡愈合。 展开更多
关键词 清肠栓 结肠炎 溃疡性 纤丝状肌动蛋白
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晚期糖基化终产物通过调控F-actin/YAP抑制小鼠胚胎成骨细胞成骨分化
3
作者 吴培连 胡赟 +1 位作者 刘东蓉 郑雷蕾 《海军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期490-496,共7页
目的考察晚期糖基化终产物(AGE)对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法用不同质量浓度(100、200、300 mg/L)AGE作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用碱性... 目的考察晚期糖基化终产物(AGE)对小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及其作用机制。方法用不同质量浓度(100、200、300 mg/L)AGE作用于MC3T3-E1细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用碱性磷酸酶(ALP)染色检测细胞成骨能力,采用qPCR检测成骨相关基因(骨钙素、ALP和Runx2)及Yes相关蛋白(YAP)和β-联蛋白的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测YAP和β-联蛋白的蛋白质表达,采用免疫荧光法观察YAP和β-联蛋白的细胞核内含量及细胞骨架蛋白纤丝状肌动蛋白(F-actin)的表达。结果MC3T3-E1细胞在200、300 mg/L AGE处理后增殖活性降低、凋亡率增加(P均<0.05),100 mg/L AGE对细胞增殖和凋亡无明显影响,故选取100 mg/L AGE进行实验。在成骨诱导培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后ALP染色较浅,骨钙素、ALP和Runx2的mRNA表达均较低(P均<0.05)。在常规培养条件下,与对照组相比,MC3T3-E1细胞经100 mg/L AGE处理后F-actin形态和分布发生明显改变;YAP的mRNA和蛋白质表达均无明显变化,但其细胞核内含量减少;β-联蛋白的mRNA和蛋白质表达均降低(P均<0.05),但其细胞核内含量无明显变化。结论AGE能抑制MC3T3-E1细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,降低成骨分化能力,F-actin、YAP和β-联蛋白参与其调控过程。 展开更多
关键词 晚期糖基化终产物 MC3T3-E1细胞 成骨分化 纤丝状肌动蛋白 Yes相关蛋白 β-联蛋白
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合成红藻氨酸对星形胶质细胞微丝表达及缝隙连接的影响 被引量：1
4
作者 张洁 许华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期937-941,共5页
目的:研究合成红藻氨酸(synthetic kainic acid,SKA)对星形胶质细胞(astrocytes,AST)细胞骨架微丝表达及缝隙连接的影响。方法:取1日龄Wistar乳鼠大脑,差速贴壁法去除成纤维细胞,并利用振荡分离法去除少突胶质细胞,获得高纯度的AST细胞... 目的:研究合成红藻氨酸(synthetic kainic acid,SKA)对星形胶质细胞(astrocytes,AST)细胞骨架微丝表达及缝隙连接的影响。方法:取1日龄Wistar乳鼠大脑,差速贴壁法去除成纤维细胞,并利用振荡分离法去除少突胶质细胞,获得高纯度的AST细胞。将SKA和其它干涉剂与AST细胞共培养24 h后,用激光扫描共聚焦显微镜观察SKA对骨架蛋白中纤丝状肌动蛋白(F-actin)形态学及表达量的影响,并观察缝隙连接通道阻滞剂1-庚醇(1-heptanol,1-Hep)对SKA作用的影响。结果:和对照组相比,KCl组和KCl+SKA组的荧光强度均明显增强(P<0.01),后者更明显(P<0.01);镜下这2组的F-actin细丝状物较对照组明显增多、增粗、密集,KCl+SKA组更甚。1-Hep可明显降低KCl和SKA所致的F-actin表达,镜下所有1-Hep组可见细胞内部分丝状断裂,有些呈横切状。结论:SKA诱发癫痫的机制可能与其诱发AST细胞中F-actin的增多有关,细胞间缝隙连接可能参与了SKA诱发癫痫的过程。 展开更多
关键词 合成红藻氨酸 星形胶质细胞 纤丝状肌动蛋白 缝隙连接 1-庚醇
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黄芪多糖对食管鳞状细胞癌细胞肌动蛋白细胞骨架的影响
5
作者 林珏龙 沈志忠 +3 位作者 庄冰蓉 朴中贤 李伟秋 林丽吟 《汕头大学医学院学报》 2021年第4期235-238,共4页
目的:观察黄芪多糖对食管鳞状细胞癌细胞肌动蛋白细胞骨架的影响。方法:利用荧光素异硫氰酸酯标记的鬼笔环肽标记食管鳞状细胞癌KYSE-150的纤丝状肌动蛋白(F-actin),经激光共聚焦显微镜观测黄芪多糖诱导后KYSE-150细胞内F-actin骨架的... 目的:观察黄芪多糖对食管鳞状细胞癌细胞肌动蛋白细胞骨架的影响。方法:利用荧光素异硫氰酸酯标记的鬼笔环肽标记食管鳞状细胞癌KYSE-150的纤丝状肌动蛋白(F-actin),经激光共聚焦显微镜观测黄芪多糖诱导后KYSE-150细胞内F-actin骨架的变化。结果:KYSE-150的细胞膜F-actin骨架呈粗大束状。经黄芪多糖诱导后,细胞膜内层F-actin骨架变得纤细、丰富,大量的F-actin纤维支撑起细胞膜,促使细胞膜形成丰富的微绒毛状结构,增加了细胞膜间的接触面积,细胞间不易相互侵入。结论:黄芪多糖诱导食管鳞状细胞癌KYSE-150细胞F-actin骨架的重构,有可能促使癌细胞的良性转化。 展开更多
关键词 黄芪多糖 食管鳞状细胞癌 纤丝状肌动蛋白
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