合成酮内酯类3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B糖多孢红霉菌M的构建 被引量：24

1

作者 张部昌 赵志虎 +1 位作者 王以光 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期198-203,共6页

大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域 ,迄今已合成了 10 0多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A2 2 6基因组DNA为模板 ,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约 3 2kbDNA片段 ,克隆于pWHM3载体 ,构建了同源重组质粒pWHM... 大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域 ,迄今已合成了 10 0多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A2 2 6基因组DNA为模板 ,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约 3 2kbDNA片段 ,克隆于pWHM3载体 ,构建了同源重组质粒pWHM2 2 0 1。PEG介导原生质体转化法将pWHM2 2 0 1转入糖多孢红霉菌A2 2 6 ,并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在R3M斜面上生长两代后 ,制备原生质体涂R3M平皿。利用PCR鉴定筛选出 8株KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M(1 8)。ZabsPecFab质谱鉴定 ,证实糖多孢红霉菌M1合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B 。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B 酮内酯类 原生质体转化 同源重组

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糖多孢红霉菌A226的原生质体转化和染色体同源整合 被引量：20

2

作者 张部昌 赵志虎 +3 位作者 王以光 于秀琴 刘传暄 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2002年第2期107-111,共5页

糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PE... 糖多孢红霉菌的原生质体转化和染色体同源整合,是红霉素生物合成基因改造的重要途径。本研究对糖多孢红霉菌A226原生质体制备和转化条件进行了优化,结果表明以对数生长后期和稳定期菌丝体制备的原生质体转化效率较高;质粒、原生质体和PEG-T缓冲液体积比例为15:40:200(μl)时转化效果较好;比重小原生质体的转化效率虽高,但在转化子中有效整合的比例较低;PEG1000和PEG3350对转化效率没有显著差异;而Yamamoto转化系统优于Weber转化系统。PCR鉴定、抑菌活性鉴定和质谱分析均表明,转化质粒已整合到染色体红霉素合成基因位点。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 原生质体转化 染色体同源整合 红霉素

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糖多孢红霉菌表达载体pZMW的构建 被引量：10

3

作者 张部昌 李凌凌 +4 位作者 于秀琴 刘传暄 王以光 贺秉坤 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2003年第3期176-179,共4页

目的 :构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法 :用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子 ,并利用pSET1 5 2质粒上链霉菌染色体整合位点 (attP)和安普霉素抗性基因 ,构建了染... 目的 :构建能够在糖多孢红霉菌中稳定存在的表达性载体。方法 :用PCR方法从糖多孢红霉菌染色体上扩增红霉素抗性基因启动子PermE作为表达载体的启动子 ,并利用pSET1 5 2质粒上链霉菌染色体整合位点 (attP)和安普霉素抗性基因 ,构建了染色体整合型糖多孢红霉菌表达载体pZMW。结果 :pZMW表达载体能够整合到链霉菌和糖多孢红霉菌染色体上 ,并能够在链霉菌和糖多孢红霉菌体内表达硫链丝菌素抗性基因tsr。结论 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 表达载体 基因表达

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糖多孢红霉菌同源片段长度与染色体重组率关系的研究 被引量：7

4

作者 张部昌 赵志虎 +3 位作者 王以光 于秀琴 刘传暄 马清钧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期13-18,共6页

为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3... 为了探索同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组率的关系 ,化学合成或用重叠PCR合成带有突变位点、在突变位点两侧长度为 (2 6bp +2 7bp)、(5 0 0bp +5 76bp)和 (190 8bp +174 9bp)的同源序列 ,克隆于糖多孢红霉菌同源重组载体pWHM3后 ,分别构建了pWHM1113、pWHM1116和pWHM1119质粒。以PEG介导转化糖多孢红霉菌A2 2 6原生质体 ,3个质粒分别获得每皿 30个、6 9个和 170个转化子 ,但pWHM1113质粒不能与染色体有效整合 ,pWHM1116质粒与染色体整合率为转化子的 2 % ,而pWHM1119质粒与染色体整合率达到转化子的 19%。pWHM1116和pWHM1119质粒均可进行有效的染色体二次重组 ,将突变位位点引入染色体。因此 ,同源片段长度为(5 0 0bp +5 76bp)或更长时 ,可与糖多孢红霉菌染色体进行有效的单重组和双重组。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 同源片段长度 染色体重组率 关系

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糖多孢红霉菌λC3-SRR突变体的构建及其产物鉴定 被引量：6

5

作者 李凌凌 张部昌 +3 位作者 张华 任洌 刘传暄 马清钧 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第4期314-318,共5页

目的 :构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体 ,探讨SRR氨基酸相应 9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B的关系。方法 :以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板 ,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应 9核苷酸的KR... 目的 :构建糖多孢红霉菌KR6酶域基因失活突变体 ,探讨SRR氨基酸相应 9核苷酸去除突变体与合成酮内酯类化合物 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B的关系。方法 :以糖多孢红霉菌基因组DNA为模板 ,用重叠PCR技术扩增出缺少SRR氨基酸相应 9核苷酸的KR6酶域DNA片段 ,并克隆到载体pWHM3上 ,构建了同源重组质粒pWHM3 SRR。将pWHM3 SRR质粒转化糖多孢红霉菌λC3菌株 ,筛选出质粒整合到染色体上红霉素合成基因位点的整合体λC3 A、B和C。λC3 A在无硫链丝菌肽 (Thio)的R3M斜面上生长两代后 ,制备的原生质体涂R3M平皿 ,挑选出不能在含Thio的R3M斜面上生长、发酵液也无抑制枯草芽孢杆菌活性的突变菌株λC3 SRR。结果 :部分基因组DNA序列分析表明 ,糖多孢红霉菌λC3 SRR染色体上SRR氨基酸相应 9核苷酸已经敲除 ,ZabspecFab质谱分析证实λC3 SRR菌株合成了 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B。结论 :糖多孢红霉菌KR6酶域SRR氨基酸相应 9核苷酸敲除的λC3 SRR突变菌株可以合成 3 脱氧 3 羰基 红霉内酯B ,SRR为KR6酶域上NADPH 2′ 磷酸结合位点。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 聚酮合成酶 同源重组 酮内酯类 3-脱氧-3-羰基-红霉内酯B

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糖多孢红霉菌多拷贝表达载体pZM的构建 被引量：5

6

作者 张部昌 刘祚军 +4 位作者 曹孟婵 张华 刘传暄 王以光 马清钧 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第5期43-46,共4页

对糖多孢红霉菌染色体上红霉素生物合成基因进行改造 ,已经合成了多种红霉素类似物。在糖多孢红霉菌中对红霉素类似物进行结构修饰 ,以pWOR1 0 9质粒为基础构建糖多孢红霉菌多拷贝表达载体pZM。pZM载体带有PermE启动子、fd终止子、多克... 对糖多孢红霉菌染色体上红霉素生物合成基因进行改造 ,已经合成了多种红霉素类似物。在糖多孢红霉菌中对红霉素类似物进行结构修饰 ,以pWOR1 0 9质粒为基础构建糖多孢红霉菌多拷贝表达载体pZM。pZM载体带有PermE启动子、fd终止子、多克隆位点、硫链丝菌肽和氨苄青霉素抗性基因、以及在大肠杆菌和糖多孢红霉菌中复制的ColE1ori和pJV1ori复制子 ,系可在大肠杆菌和糖多孢红霉菌中扩增的穿梭质粒。在糖多孢红霉菌中 ,pZM可以表达氨普霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因 ,从糖多孢红霉菌中提取的表达质粒酶切图谱与转化前一致 ,表明pZM是糖多孢红霉菌中多拷贝。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 表达载体 染色体 结构修饰

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红霉素类药物基因工程 被引量：7

7

作者 张部昌 黄训端 《生物产业技术》 2009年第1期66-71,共6页

红霉素类药物在临床上应用广泛，已通过化学修饰发展到第三代红霉素。红霉素基因工程发展迅速．不仅合成了100多种红霉素结构类似物．而且在提高红霉素产量方面也取得了重要进展，下面重点介绍红霉素类药物基因工程研究概况，特别对合... 红霉素类药物在临床上应用广泛，已通过化学修饰发展到第三代红霉素。红霉素基因工程发展迅速．不仅合成了100多种红霉素结构类似物．而且在提高红霉素产量方面也取得了重要进展，下面重点介绍红霉素类药物基因工程研究概况，特别对合成新的红霉素类似物和提高红霉素产量进行了阐述。 展开更多

关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 基因工程

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红霉素发酵生产后期的调控研究 被引量：5

8

作者 李啸 陈长华 +1 位作者 李友元 涂志英 《三峡大学学报（自然科学版）》 CAS 2005年第6期555-558,共4页

采用FUS-50L(A)生物反应器对红霉素发酵生产过程进行调控,在后期按优化方案向发酵液中补入混合物X,可使最终发酵液的生物效价和红霉素A组分的相对百分含量分别由对照样品的6089 u/mL、81.16%提高至条件样品的8316 u/mL、89.78%.同时,通... 采用FUS-50L(A)生物反应器对红霉素发酵生产过程进行调控,在后期按优化方案向发酵液中补入混合物X,可使最终发酵液的生物效价和红霉素A组分的相对百分含量分别由对照样品的6089 u/mL、81.16%提高至条件样品的8316 u/mL、89.78%.同时,通过多尺度参数分析,阐明了红霉素发酵生产后期优化控制的重要性. 展开更多

关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 发酵 调控 多尺度参数

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糖多孢红霉菌酮还原酶域在羰基还原中的应用 被引量：4

9

作者 李凌凌 吕早生 +1 位作者 关海燕 贾伟伟 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第2期72-75,共4页

为研究糖多孢红霉菌聚酮合成酶模块1的酮还原酶域,催化羰基还原的底物特异性和立体选择性,PCR扩增了该酶域的编码基因(eryKR1),并将其克隆到表达载体pET-28a,得到重组质粒pET-eryKR1,转化到Escherichia coli BL21(DE3)后,获得了重组菌株... 为研究糖多孢红霉菌聚酮合成酶模块1的酮还原酶域,催化羰基还原的底物特异性和立体选择性,PCR扩增了该酶域的编码基因(eryKR1),并将其克隆到表达载体pET-28a,得到重组质粒pET-eryKR1,转化到Escherichia coli BL21(DE3)后,获得了重组菌株E.coli BL21(pET-eryKR1).将E.coli BL21(pET-eryKR1)和异源表达枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的重组大肠杆菌E.coli BL21(pET-gdh1)进行双重组菌耦合,对4-氯乙酰乙酸乙酯、苯乙酮、2-辛酮和环己酮4种底物进行转化还原,利用气相色谱分析转化液,结果显示E.coli BL21(pET-eryKR1)对环己酮的还原效果较好,产物环己醇的得率最高可达93.24%,而对其他3种底物几乎没有还原能力.利用E.coli BL21(pET-eryKR1)2催化2-甲基环己酮不对称还原,产物主要为顺式-2-甲基环己醇,产率可达41.87%,产物的对映体过量值为74.81%. 展开更多

关键词 2-甲基环己酮 酮还原酶域 聚酮合成酶 糖多孢红霉菌 生物催化

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糖多孢红霉菌红霉素高产菌种的诱变选育 被引量：3

10

作者 孟祥学 王凤山 《食品与药品》 CAS 2009年第4期35-37,共3页

目的诱变和筛选糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)红霉素的高产菌种。方法以糖多孢红霉菌L1为出发菌株,紫外线作为诱变剂,诱变和筛选生产所用菌种。结果获得了高产变株L2-26,其发酵水平较出发菌株提高了19.8%。结论此方法可有... 目的诱变和筛选糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)红霉素的高产菌种。方法以糖多孢红霉菌L1为出发菌株,紫外线作为诱变剂,诱变和筛选生产所用菌种。结果获得了高产变株L2-26,其发酵水平较出发菌株提高了19.8%。结论此方法可有效地获得高产变株,发酵水平明显提高。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 高产变株 紫外线诱变

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钼对红霉素生物合成的影响 被引量：4

11

作者 李啸 陈长华 +1 位作者 李友元 涂志英 《三峡大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第4期355-359,共5页

在利用糖多孢红色链霉菌HB发酵生产红霉素的过程中,于48 h向发酵液中加入钼酸钠,通过对代谢途径关键调控酶活力的测定以及运用高效液相色谱法对发酵液中相关有机酸含量的测定,结论显示:当发酵液中钼酸钠的加入量为0.056 g/100 mL时,部... 在利用糖多孢红色链霉菌HB发酵生产红霉素的过程中,于48 h向发酵液中加入钼酸钠,通过对代谢途径关键调控酶活力的测定以及运用高效液相色谱法对发酵液中相关有机酸含量的测定,结论显示:当发酵液中钼酸钠的加入量为0.056 g/100 mL时,部分代谢流向有利于红霉素生物合成的方向迁移,在一定程度上提高了红霉素的生产速率和产量. 展开更多

关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 酶活 有机酸 钼酸钠

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产红霉素C的糖多孢红霉菌A226G^-突变体的构建 被引量：3

12

作者 袁华 黄训端 +4 位作者 张部昌 刘道琴 赵皓 孔小卫 张书祥 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期653-658,共6页

糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除... 糖多孢红霉菌eryG基因编码产物为红霉素3"-O-甲基转移酶(EryG),失活eryG基因能阻断红霉素A的生物合成,积累其中间产物红霉素C。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模版,用重叠PCR方法扩增出eryG基因两侧约1600bp DNA片段(ΔG),其中去除了EryG上S-腺苷甲硫氨酸结合区域对应的290bp DNA片段。将该片段克隆于质粒pWHM3,构建了同源重组质粒pWHMΔG。PEG介导原生质体转化法将pWHMΔG转入糖多孢红霉菌A226中,通过染色体同源重组突变染色体上eryG基因。利用薄层层析、PCR和质谱方法筛选出一株eryG基因突变的糖多孢红霉菌A226G-突变体,此突变体主要积累中间产物红霉素C而不再合成红霉素A。通过eryG基因的功能补偿,糖多孢红霉菌基因工程菌A226G-G+可以恢复红霉素A的合成能力。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 3″-O-甲基转移酶 同源重组 功能补偿

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糖多孢红霉菌引入异源启动子表达透明颤菌血红蛋白 被引量：3

13

作者 王洪军 吴益民 +5 位作者 杨姝明 孙艳 王立强 张志强 冯立 杨青 《解放军药学学报》 CAS 2008年第2期98-102,共5页

目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),将变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)启动子基因整合于糖多孢红霉菌染色体中。方法以变铅青链霉菌基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆变铅青链... 目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),将变铅青链霉菌(Streptomyces lividans)启动子基因整合于糖多孢红霉菌染色体中。方法以变铅青链霉菌基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆变铅青链霉菌启动子基因,利用基因重组技术构建含有异源启动子与vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒,经电穿孔法与糖多孢红霉菌染色体整合,红霉素效价测定采用管碟法。结果克隆了含有异源启动子与vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒(pBlueV),相对分子量6.033kb,筛选了重组糖多孢红霉菌株,原始菌株与重组菌株的最终红霉素效价分别为3.98、5.15g·L-1,重组菌株提高红霉素体积产率约29%。结论vgb在重组糖多孢红霉菌株引入异源启动子的情况下获得了表达,有望解决传统发酵过程中由于氧传递而导致的产率低下和成本高的问题。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 异源启动子 透明颤菌红蛋白 基因重组

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辐照对糖多孢红霉菌M的诱变效应 被引量：1

14

作者 庄韬 刘超 +5 位作者 武杉杉 黄训端 张部昌 曹磊 张福生 汪晓鸣 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期773-777,共5页

采用不同剂量的60Co γ射线辐照糖多孢红霉菌M孢子,并采用不同的菌种保护剂,以研究60Co γ射线对糖多孢红霉菌M的诱变效应。结果表明,使用20%甘油吐温保护效果较好,可作为诱变保护剂;当辐照剂量为400Gy时,致死率为90%左右可作为适宜诱... 采用不同剂量的60Co γ射线辐照糖多孢红霉菌M孢子,并采用不同的菌种保护剂,以研究60Co γ射线对糖多孢红霉菌M的诱变效应。结果表明,使用20%甘油吐温保护效果较好,可作为诱变保护剂;当辐照剂量为400Gy时,致死率为90%左右可作为适宜诱变剂量。诱变处理后利用链霉素抗性突变选育得到1203株链霉素抗性突变株。其中5株形态发生较明显的变化,形态变异率为4.16‰;2株突变株的发酵液具有抑菌活性,正突变率为1.67‰。 展开更多

关键词 60Coγ射线 糖多孢红霉菌M 诱变效应 链霉素抗性

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^(60)Co γ射线对糖多孢红霉菌的重复诱变研究 被引量：2

15

作者 武杉杉 刘超 +2 位作者 张部昌 曹磊 汪晓鸣 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 2010年第2期103-106,共4页

糖多孢红霉菌963是60Co γ射线对糖多孢红霉菌M诱变筛选获得的具有抑菌活性的突变株。本实验采用60Co γ射线对糖多孢红霉菌963进行诱变,研究了重复诱变效应。结果表明,各个辐照剂量下,突变株963的致死率均低于出发菌株M。重复诱变后,... 糖多孢红霉菌963是60Co γ射线对糖多孢红霉菌M诱变筛选获得的具有抑菌活性的突变株。本实验采用60Co γ射线对糖多孢红霉菌963进行诱变,研究了重复诱变效应。结果表明,各个辐照剂量下,突变株963的致死率均低于出发菌株M。重复诱变后,菌株的形态变异率达24.1‰,比以M菌株作为出发菌株的单次诱变提高了4.8倍。实验获得了1株产物抑菌活性增强的突变株,其抑菌活性比菌株963提高了40%,正突变率为2.01‰,比单次诱变提高了20.36%。采用重复诱变的方法,总体变异丰富,菌株的形态变异率和正突变率显著提高,有利于提高诱变育种工作的筛选效率。 展开更多

关键词 60Co Γ射线 糖多孢红霉菌 诱变效应

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糖多孢红霉菌保藏过程中生理生化变化的研究 被引量：2

16

作者 孔小卫 黄训端 +1 位作者 张部昌 张宇 《安徽大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2008年第6期86-89,共4页

对糖多孢红霉菌菌种保藏过程中一些生理生化变化规律进行研究.采用氮蓝四唑还原法、愈创木酚法、紫外吸收法、硫代巴比妥酸(TBA)比色法和双组分分光光度计法,分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙... 对糖多孢红霉菌菌种保藏过程中一些生理生化变化规律进行研究.采用氮蓝四唑还原法、愈创木酚法、紫外吸收法、硫代巴比妥酸(TBA)比色法和双组分分光光度计法,分别测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)与可溶性糖的含量.结果表明:在糖多孢红霉菌保藏过程中,SOD、POD、CAT酶活性与可溶性糖的含量随着菌种保藏时间的延长呈现先上升后下降,MDA随着时间的延长先下降再上升趋势.上述3种酶活性与MDA和可溶性糖含量的变化呈现出一定的规律,可以用SOD和MDA作为判断该菌种是否老化的一种生理生化指标. 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 保藏 生理生化变化 酶活性

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金属离子对红霉素合成及组分转化的影响及机理分析 被引量：2

17

作者 赵腾 高淑红 +4 位作者 陈长华 叶蕊芳 张增辉 李强 孙玉洁 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期507-511,共5页

目的研究Co2+、Zn2+和Na2MoO43种金属离子对糖多孢红霉菌发酵生产红霉素及组分转化的影响,并对其影响机理进行相关分析。方法通过摇瓶实验确定金属离子最优配比,并在15L发酵罐上放大;通过菌体在合成培养基中的摇瓶发酵研究红霉素合成途... 目的研究Co2+、Zn2+和Na2MoO43种金属离子对糖多孢红霉菌发酵生产红霉素及组分转化的影响,并对其影响机理进行相关分析。方法通过摇瓶实验确定金属离子最优配比,并在15L发酵罐上放大;通过菌体在合成培养基中的摇瓶发酵研究红霉素合成途径中羟基化基因eryK、甲基化基因eryG的表达量与红霉素合成及组分转化的关系。结果 3种金属离子的添加使红霉素发酵单位由对照罐8433U/mL提高到11858U/mL,有效组分ErA由对照83.6%提高到89%;eryK和eryG两种基因的表达量显著提高,且eryK/eryG比值与有效组分ErA含量具有较好的相关性。结论 3种金属离子能通过调节菌种相关基因的表达,对红霉素的合成及组分转化产生促进作用。 展开更多

关键词 糖多孢红霉菌 红霉素 金属离子 组分转化 基因表达

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红霉素基因工程研究途径和相关技术

18

作者 张部昌 张华 贺秉坤 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期378-382,共5页

红霉素基因工程研究的快速发展依赖于相关的分子生物学技术 ,本文概括介绍了红霉素基因工程研究中常用的五种途径和相关技术 :染色体重组、链霉菌表达系统、大肠埃希氏菌表达系统、糖多孢红霉菌突变体表达系统和无细胞体系 ,并对各种途... 红霉素基因工程研究的快速发展依赖于相关的分子生物学技术 ,本文概括介绍了红霉素基因工程研究中常用的五种途径和相关技术 :染色体重组、链霉菌表达系统、大肠埃希氏菌表达系统、糖多孢红霉菌突变体表达系统和无细胞体系 ,并对各种途径进行了评述。 展开更多

关键词 红霉素 糖多孢红霉菌 染色体重组 链霉菌表达系统 大肠埃希氏菌表达系统

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Vgb在大肠埃希菌中表达及生物活性的研究 被引量：1

19

作者 邢安辉 王洪军 +4 位作者 尹旭辉 王立强 于宁 孙艳 张锐 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2010年第7期599-601,605,共4页

目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQ... 目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQE V,vgb基因在大肠埃希菌中获得表达,在A420 nm处达到典型吸收峰。结论 vgb在大肠埃希菌中表达产物加强了对氧的摄取能力,对解决细胞高密度发酵培养中氧需矛盾、促进代谢产物的产率具有非常重要的应用价值。 展开更多

关键词 血红蛋白基因 糖多孢红霉菌 CO示差光谱 高密度发酵

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一种新的链霉菌表达载体启动子(英文)

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作者 吴杭 张部昌 +2 位作者 查向东 孔小卫 马清钧 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期647-652,共6页

eryA基因直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B的合成,在红霉素生物合成过程中具有重要作用。本文克隆了eryA基因的启动子PeryA,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,构建了大肠埃希菌-糖多孢红霉菌穿梭型质粒。PEG介导原生质体转化法将穿梭... eryA基因直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B的合成,在红霉素生物合成过程中具有重要作用。本文克隆了eryA基因的启动子PeryA,以绿色荧光蛋白基因为报告基因,构建了大肠埃希菌-糖多孢红霉菌穿梭型质粒。PEG介导原生质体转化法将穿梭型质粒分别转入糖多孢红霉菌A226与变铅青链霉菌JT46,荧光显微镜检测发现,此启动子在两菌株中都具有功能。随后,以变铅青链霉菌JT46为宿主,对PeryA启动子区域进行了深入研究,结果发现该启动子的-35区并不是必需的,仅有-10区、长度为41bp的该启动子在链霉菌中仍具有功能。定点突变证明-10区对于该启动子是必不可少的。因此,41bp的该启动子片段可作为链霉菌的有效启动子,这是迄今为止所发现的最短的启动子之一,可用于构建新的链霉菌表达载体。 展开更多

关键词 ecyA基因 启动子 糖多孢红霉菌 变铅青链霉菌 增强型绿色荧光蛋白

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