人骨髓基质细胞中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶DcDNA的克隆 被引量：6

1

作者 顾善兰 唐建华 张晓杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期172-178,共7页

为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA... 为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA几乎百分之百同源 ,与人肝脏GPI PLDcDNA同源性为 95 %,氨基酸同源性为 94 %,3者对应的结构基因只有 1个 ,位于人类第 6号染色体上 ,基因组序列长约 80kb ,包括 2 5个外显子 .构建克隆的GPI PLDcDNA的真核表达载体 ,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶 (PLAP)而无GPI PLD活性的G9细胞 ,同时设立对照组检测GPI PLDcDNA的功能 .结果显示 ,对照组细胞几乎检测不到GPI PLD活性 ,其表达的PLAP主要位于细胞膜上 ;而转染GPI PLDcDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI PLD活性 ,而且大部分酶活性存在于培养液中 ,其表达的PLAP也主要被释放入培养液 .结果证实 ,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI PLDcDNA有生物学功能 ,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质 . 展开更多

关键词 人骨髓基质细胞 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D CDNA克隆

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白细胞介素2锚定的exosomes的制备及其对膀胱癌细胞的诱导杀伤效应 被引量：6

2

作者 张家模 吴小候 +2 位作者 张翾 张尧 罗春丽 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期564-569,共6页

目的制备白细胞介素2（IL-2）锚定的肿瘤细胞来源的exosomes疫苗，探讨其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的抗肿瘤效应。方法构建含糖基化磷脂酰肌醇（GPI）信号肽序列与人IL-2的融合基因的pEGFP-N1-IL2gpi质粒，建立稳定表达GPI-IL-2... 目的制备白细胞介素2（IL-2）锚定的肿瘤细胞来源的exosomes疫苗，探讨其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的抗肿瘤效应。方法构建含糖基化磷脂酰肌醇（GPI）信号肽序列与人IL-2的融合基因的pEGFP-N1-IL2gpi质粒，建立稳定表达GPI-IL-2的T24细胞系（T24／GPI-IL-2）。采用超速和蔗糖梯度密度离心法提取Ex／GPI—IL-2（即T24／GPI-IL-2细胞培养液中提取的exosomes），并对其进行形态学观察和分子标志检测。通过混合淋巴细胞实验和细胞毒实验，观察Ex／GPI-IL-2对T细胞的增殖和诱导杀伤效应。结果成功构建重组质粒pEGFP-N1-IL2gpi，建立了稳定表达GPI．IL-2蛋白的细胞系。Ex／GPI-IL-2为直径约30—90nm的类圆碟形小囊泡，表达细胞间黏附分子1（ICAM-1）、热休克蛋白70（HSP70）、MAGE-1和GPI-IL-2等免疫相关蛋白。Ex／GPI-IL-2经过树突状细胞负载后，能更有效地诱导T细胞的增殖和细胞毒效应（P〈0．05）。结论通过基因转染技术，可以将IL-2锚定到肿瘤细胞来源的exosomes上，获得的Ex／GPI—IL-2能够诱导CTL对肿瘤细胞产生更强的诱导杀伤效应，为以exosomes为基础的肿瘤免疫治疗提供了新的途径。 展开更多

关键词 膀胱肿瘤 EXOSOMES 白细胞介素2 糖基化磷脂酰肌醇 免疫治疗

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糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的研究进展 被引量：3

3

作者 顾善兰 唐建华 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 2002年第1期56-59,共4页

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白 ,称为 GPI锚定蛋白 ;此后不久又鉴定出一种 GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶 D(GPI- PL D)。 GPI- PL D能特异性地水解 GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等。本文概述了... 羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白 ,称为 GPI锚定蛋白 ;此后不久又鉴定出一种 GPI锚定蛋白专一性的磷脂酶 D(GPI- PL D)。 GPI- PL D能特异性地水解 GPI、释放出锚定蛋白并调节锚定蛋白的表达和生物功能等。本文概述了近年来有关 GPI- PL D的研究状况 ,包括它的组织和器官来源、生理功能、病理条件下的活性改变、分子结构以及 c 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 锚定蛋白 磷脂酶D 研究进展 GPI

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GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr^-细胞膜上的表达 被引量：3

4

作者 于继云 沈倍奋 +4 位作者 黎燕 陈兴 程绍辉 田蓉 曲梅花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期212-214,共3页

目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质... 目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI dhfr中 ,并用脂质体法转染CHO dhfr 细胞 ,用氨甲喋呤 (MTX)进行筛选。重组蛋白的表达用RT PCR、ELISA、细胞免疫荧光和Westernblot进行鉴定。最后采用ProteinA亲和层析纯化。结果 :构建了GPI CTLA4Ig嵌合分子 ,并在CHO dhfr 细胞膜上稳定表达。结论 :GPI修饰的CTLA4Ig分子有可能作为新型的免疫抑制剂用于器官移植中 。 展开更多

关键词 CTLA4IG 蛋白质表达 糖基化磷脂酰肌醇 CHO-dhfr^-细胞

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鼻咽癌患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D活性及其表达水平的初步研究 被引量：4

5

作者 向新颖 唐红梅 +2 位作者 胡正茂 夏昆 唐建华 《肿瘤药学》 CAS 2011年第5期450-456,共7页

目的①通过研究正常人和鼻咽癌患者的糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的酶活性和酶促反应的3-D图,探索鼻咽癌患者该酶活性的变化情况及该酶促反应的可能机制。②通过研究正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平,探寻鼻咽癌... 目的①通过研究正常人和鼻咽癌患者的糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)的酶活性和酶促反应的3-D图,探索鼻咽癌患者该酶活性的变化情况及该酶促反应的可能机制。②通过研究正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平,探寻鼻咽癌患者该酶活性变化的可能机制,为鼻咽癌的诊断、预后估计提供有效指标。方法①采用我室自制的具完整GPI结构的胎盘型碱性磷酸酶(PLAP)作底物进行酶促反应,测定正常人和鼻咽癌患者GPI-PLD的酶活性并应用韩国新科有限公司生产的Photodiode Array Uv-Vis Spectrophotometer仪器研究了该酶的催化机理,并且利用该机所带软件作出3-D图。②采用逆转录PCR(RT-PCR)检测正常人和鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平,以RT-PCR结果的琼脂糖电泳照片的积分光密度值(IA)比值代表GPI-PLD mRNA的表达水平。结果①正常人和鼻咽癌患者血清GPI-PLD的活性水平(均以转化底物百分比表示)分别为17.6%±2.7%和20.6%±2.4%,鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人血清GPI-PLD活性显著增高(P<0.05)。并且其酶促反应的3-D图显示有直观差异。2.RT-PCR检测GPI-PLD mRNA的表达,结果表明正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是2.6131±0.7653,鼻咽癌患者鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA琼脂糖电泳照片的平均积分光密度比值(IA比值)是9.3522±5.2879,鼻咽癌患者的GPI-PLD mRNA的表达水平比正常人鼻咽上皮细胞中GPI-PLD mRNA的表达水平显著性增高(P<0.05)。结论①鼻咽癌患者的血清GPI-PLD活性比正常人显著增高,其酶促反应的3-D图也与正常人有明显差异,提示测定GPI-PLD活性可作为临床诊断鼻咽癌的生化指标。②鼻咽癌患者GPI-PLD mRNA的表达水平高于正常人。GPI-PLD mRNA表达增强是导致鼻咽癌患者GPI-PLD酶活性增高的主要机制。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D RT-PCR

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糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D与白血病类型、CD24表达及细胞黏附功能的关系 被引量：2

6

作者 肖广芬 陈方平 +5 位作者 王光平 付斌 谢俊明 程英妮 李群 蹇在伏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期53-55,共3页

糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D（GPI-PLD）在特定的情况下能通过特异性水解糖基化磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白中的肌醇磷酸酯键来调节细胞膜上的锚定蛋白表达。在人的造血细胞上有一些GPI锚定蛋白（如CD24、CD87等）属于黏附分子，在... 糖基化磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶D（GPI-PLD）在特定的情况下能通过特异性水解糖基化磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白中的肌醇磷酸酯键来调节细胞膜上的锚定蛋白表达。在人的造血细胞上有一些GPI锚定蛋白（如CD24、CD87等）属于黏附分子，在肿瘤细胞的转移中发挥重要作用。我们检测了急性白血病患者骨髓细胞GPI-PLD基因表达水平及其活性，探讨其与白血病类型，肝、脾、淋巴结肿大，CD24表达及白血病细胞对纤维连接蛋白（Fn）黏附率的关系。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 特异性磷脂酶D 急性白血病患者 细胞黏附功能 病类 纤维连接蛋白(Fn) GPI锚定蛋白 GPI-PLD 基因表达水平 淋巴结肿大

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人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探 被引量：1

7

作者 唐建华 顾善兰 +1 位作者 张晓杰 李文凯 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期95-97,共3页

探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GP... 探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI PLDcDNA的碱基序列的同源性分别为 95 %和 99%。人GPI PLD基因组基因定位于 6p2 2 .1～ 2 2 .3区域 ,包含 2 5个外显子 ,其上游调控区具有启动子 (TATA盒与CAAT盒 )、增强子核心序列 (TGGAAG)及同源转换盒Pit 1/GHF 1结合序列 (TATGCATAA)等顺式作用元件。 展开更多

关键词 骨髓 糖基化磷脂酰肌醇 磷脂酶D GPI-PLD CDNA 骨髓基质细胞

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糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因表达与临床相关疾病 被引量：1

8

作者 卢岳 陈方平 《国外医学（生理病理科学与临床分册）》 2004年第2期138-141,共4页

羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白称为GPI锚定蛋白 ,具有广泛功能。糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)是人体内唯一能特异性水解GPI并能释放出锚定蛋白的磷脂酶 ,可调节锚定蛋白的表达和生理功能。GPI PLD可能成... 羧基端结合有糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的膜蛋白称为GPI锚定蛋白 ,具有广泛功能。糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)是人体内唯一能特异性水解GPI并能释放出锚定蛋白的磷脂酶 ,可调节锚定蛋白的表达和生理功能。GPI PLD可能成为评估预后的标记物。在某些肝脏疾病、恶性肿瘤、糖尿病等疾病中有GPI 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 锚定蛋白 磷脂酶D 相关疾病

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重组人vWF A3-GPI融合蛋白在CHO细胞膜上的表达及其生物学活性 被引量：1

9

作者 谭虎 黄岚 +1 位作者 晋军 赵晓辉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期296-299,共4页

目的在CHO中表达人vWFA3-GPI融合蛋白并测定其生物学活性,以期获得能够锚定至细胞表面,并引导其黏附于受损血管壁的分子。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-vWFA3-GPI,转染CHO细胞。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对... 目的在CHO中表达人vWFA3-GPI融合蛋白并测定其生物学活性,以期获得能够锚定至细胞表面,并引导其黏附于受损血管壁的分子。方法构建真核表达质粒pcDNA3.1(-)-vWFA3-GPI,转染CHO细胞。采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用。应用CCK8法测定其结合胶原的能力及经不同浓度PI-PLC处理后的变化情况。结果vWFA3-GPI融合蛋白能够锚定在CHO细胞膜上,并具有很好的胶原结合活性;PI-PLC处理后,其胶原结合活性降低,降低程度与PI-PLC浓度成正比。结论CHO中高效表达的人vWFA3-GPI融合蛋白具有良好的生物学功能,能有效地锚定至细胞表面,并保持良好的胶原结合效应,可作为引导细胞黏附于受损血管壁的分子。 展开更多

关键词 血管性假血友病因子 糖基化磷脂酰肌醇 胶原 融合蛋白

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葡萄球菌肠毒素A真核表达质粒的构建及其在喉癌Hep-2细胞来源exosomes中的表达 被引量：2

10

作者 田涵斋 吉晓滨 +1 位作者 谢景华 刘启才 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2017年第3期183-188,共6页

目的 构建葡萄球菌肠毒素A（SEA）与糖基化磷脂酰肌醇（GPI）的真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI并转染人喉癌细胞株Hep-2细胞,检测Hep-2细胞分泌的exosomes中SEA的表达.方法 利用NOT I酶切原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端,琼脂糖... 目的 构建葡萄球菌肠毒素A（SEA）与糖基化磷脂酰肌醇（GPI）的真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI并转染人喉癌细胞株Hep-2细胞,检测Hep-2细胞分泌的exosomes中SEA的表达.方法 利用NOT I酶切原核生物质粒pGSI-SEA-GPI粘性末端,琼脂糖凝胶电泳分离、提纯目的基因SEA-GPI,利用T4连接酶连接真核表达质粒pmiR-RB-REPORT与SEA-GPI构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.脂质体法转染pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI至Hep-2细胞,荧光定量实时PCR（qRT-PCR）检测Hep-2细胞SEA-GPI mRNA的表达.提取Hep-2细胞分泌的exosomes,免疫印迹测定SEA在exosomes中的表达.结果 琼脂糖凝胶电泳显示成功构建真核表达质粒pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI.qRT-PCR检测显示,pmiR-RB-REPORT-SEA-GPI转染的Hep-2细胞SEA-GPI mRNA显著表达.免疫印迹显示Hep-2细胞分泌的exosomes中存在SEA蛋白表达.结论 SEA可能通过GPI结构锚定于exosomes膜上,为制备含有SEA-GPI锚定蛋白的SEA-eoxsomes瘤苗提供了依据. 展开更多

关键词 葡萄球菌肠毒素A 糖基化磷脂酰肌醇 转染 EXOSOMES 荧光定量实时PCR

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靶向糖基化磷脂酰肌醇生物合成的抗真菌药物研究进展 被引量：1

11

作者 姜远英 《延安大学学报（医学科学版）》 2022年第3期1-6,共6页

抗真菌药物研究的两大策略,一是改造氮唑类或棘白菌素类抗真菌药物分子产生“Me Better”的新药分子,二是发现作用于新靶点的全新结构的“First in Class”的原创新药。后者已进入临床研究阶段的重要原创候选药物有靶向Sec14的Turbinmi... 抗真菌药物研究的两大策略,一是改造氮唑类或棘白菌素类抗真菌药物分子产生“Me Better”的新药分子,二是发现作用于新靶点的全新结构的“First in Class”的原创新药。后者已进入临床研究阶段的重要原创候选药物有靶向Sec14的Turbinmicin、靶向糖基化磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚定蛋白合成转运的氨基吡啶类化合物,靶向二氢乳清酸脱氢酶(dihydroorotate dehydrogenase,DHODH)的F901318等。其中GPI锚定蛋白合成转运途径药物的发现已有10多年历史,研究比较充分,且具有广谱高效抗真菌和增强宿主抗真菌免疫反应的双重作用,本文主要综述靶向GPI生物合成的抗真菌药物的研究进展。 展开更多

关键词 抗真菌药物 糖基化磷脂酰肌醇 侵袭性真菌感染

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糖基化磷脂酰肌醇修饰的小鼠IL-21瘤苗抗肿瘤效应及其机制初探 被引量：2

12

作者 赵枫姝 褚莉莉 +6 位作者 窦骏 唐权 王永仿 吴昀 曹明刚 潘猛 顾宁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期822-827,共6页

目的构建糖基化磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidylinositol，GPI）修饰的小鼠IL-21瘤苗，并对此瘤苗的抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法通过重叠PCR方法获得IL-21-GPI融合基因并将其插入空载体pcDNA3．1。将鉴定过的重组载体以脂质... 目的构建糖基化磷脂酰肌醇（glycosyl phosphatidylinositol，GPI）修饰的小鼠IL-21瘤苗，并对此瘤苗的抗肿瘤效应及其机制作初步探讨。方法通过重叠PCR方法获得IL-21-GPI融合基因并将其插入空载体pcDNA3．1。将鉴定过的重组载体以脂质体法转染B16F10细胞制成瘤苗，细胞间接免疫荧光法及流式细胞仪检测转染瘤细胞膜表面IL-21的表达，通过对小鼠脾细胞的增殖作用鉴定表达的IL-21的生物学活性。将瘤苗接种小鼠后，通过观察小鼠肿瘤体积和生存率分析瘤苗的抗瘤性，并检测了瘤苗免疫鼠的细胞免疫活性。结果正确构建了pcDNA3．1／IL-21-GPI重组载体，膜表达的IL-21有良好的生物学活性，制备的瘤苗能发挥抗肿瘤效应，其机制与免疫鼠细胞免疫活性增强有关。结论成功构建了具有抗肿瘤活性的GPI修饰的IL-21瘤苗，为其进一步抗肿瘤免疫治疗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠IL-21 糖基化磷脂酰肌醇 抗肿瘤免疫

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稳定表达GPI-CD80融合蛋白CHO细胞株的构建 被引量：1

13

作者 刘煜 张雪 +1 位作者 刘胜军 林敬明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期558-559,共2页

目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株。方法将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆。采用流... 目的将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定型人CD80重组基因的真核细胞表达质粒pRM10/GPI-CD80转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),构建CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株。方法将pRM10/GPI-CD80用脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选出阳性细胞克隆。采用流式细胞术和免疫荧光染色检测CHO/GPI-CD80稳定表达细胞株表达GPI-CD80蛋白的效率的变化。结果转染GPI-CD80基因的CHO细胞在G418筛选下出现阳性克隆,且经过传代后不同代数的克隆细胞表面表达GPI-CD80的阳性率差异无统计学意义。结论pRM10/GPI-CD80在CHO细胞中成功表达,表达稳定且效率较高。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 脂质体 真核表达

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人类精子糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白研究进展 被引量：1

14

作者 刘新 李建远 《检验医学与临床》 CAS 2012年第2期203-205,共3页

在大多数真核生物中,糖基化磷脂酰肌醇（GPI）锚作为一种翻译后修饰定位蛋白质的C端而定位于细胞膜的外叶。GPI锚的结构上主要由三部分组成：磷酸乙醇胺连接部分、聚糖部分和磷脂尾部分。

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 人类精子 预测软件

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细胞粘附分子P-selectin功能片段在CHO细胞表面的锚定表达 被引量：1

15

作者 娄晓芳 王双 +3 位作者 杜威世 于蕊 俞炜源 孙志伟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1162-1167,共6页

为了筛选出针对细胞粘附分子P-selectin的特异性抗体,克隆了P-selectin功能性基因片段,使其通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定表达于真核细胞的细胞膜上,以用作筛选的抗原。提取人血小板的总RNA,RT-PCR扩增出P-selectin目的基因片段,同时... 为了筛选出针对细胞粘附分子P-selectin的特异性抗体,克隆了P-selectin功能性基因片段,使其通过糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定表达于真核细胞的细胞膜上,以用作筛选的抗原。提取人血小板的总RNA,RT-PCR扩增出P-selectin目的基因片段,同时用重叠延伸PCR的方法合成细胞膜锚定信号肽GPI基因;将二者按上下游顺序插入含有弱化neo基因的真核表达载体pMCEw2中;并将构建的重组质粒pMCEw2-GPI-P-selectin转染CHOdhfr-细胞,G418筛选获得阳性细胞株,利用ELISA、免疫印迹和免疫荧光法检测P-selectin的表达。实验证实了P-selectin在细胞膜上获得稳定表达。为进一步进行抗P-selectin的特异性抗体的筛选提供了必要前提。 展开更多

关键词 P—selectin 糖基化磷脂酰肌醇 粘附分子

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糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D与2型糖尿病

16

作者 吴美芬 武革 《国际内分泌代谢杂志》 2006年第5期351-353,共3页

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)是目前在体内发现的唯一能水解糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白的磷脂酶,可调节锚定蛋白的表达和生理功能。近年研究发现胰岛β细胞可合成与分泌GPI-PLD,GPI-PLD不仅具有模拟胰岛素的作用,而且可... 糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI-PLD)是目前在体内发现的唯一能水解糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白的磷脂酶,可调节锚定蛋白的表达和生理功能。近年研究发现胰岛β细胞可合成与分泌GPI-PLD,GPI-PLD不仅具有模拟胰岛素的作用,而且可在体外抑制淀粉样蛋白原纤维的形成,改善糖尿病症状;此外,GPI-PLD分泌受胰岛素分泌的影响,在胰岛素抵抗状态下,GPI-PLD分泌也相应地会在增加后最终减少。这些研究结果均提示GPI-PLD与2型糖尿病的发病可能有着密切关联。 展开更多

关键词 糖基化磷脂酰肌醇 锚定蛋白 磷脂酶D 2型糖尿病

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小鼠GM-CSF的基因克隆和锚定修饰

17

作者 于继云 陈兴 +4 位作者 蔡欣 田蓉 程绍辉 许红莲 王嘉玺 《生物技术通讯》 CAS 2003年第3期178-179,共2页

将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的细胞因子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。克隆了小鼠GM-CSF基因,并通过将从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与mGM-CSF嵌合,获得了GPI修饰的mGM-CSF分子... 将糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚定修饰的细胞因子直接转移到肿瘤细胞膜上,是研究治疗性肿瘤疫苗的一种有潜力的新策略。克隆了小鼠GM-CSF基因,并通过将从衰变加速因子(DAF)来源的GPI修饰性信号序列与mGM-CSF嵌合,获得了GPI修饰的mGM-CSF分子,构建并鉴定了GPI锚定修饰的真核表达载体pCI/GPI-mGM-CSF,为进一步研究表面工程治疗性肿瘤疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠 GM-CSF基因 克隆 锚定修饰 肿瘤疫苗 糖基化磷脂酰肌醇 蛋白质修饰 细胞膜

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症发病机制的研究进展

18

作者 高维强 王兆钺 阮长耿 《国外医学（内科学分册）》 2001年第11期475-479,共5页

阵发性睡眠性血红蛋白尿症(ＰＮＨ)是一种由体细胞突变引起异常造血干细胞克隆性增殖的疾病,患者具有慢性血管内溶血、血细胞减少和血栓形成等临床表现。其病理缺陷主要是磷脂酰肌醇聚糖－Ａ(ＰＩＧ－Ａ)基因突变,导致ＰＮＨ病理细胞表... 阵发性睡眠性血红蛋白尿症(ＰＮＨ)是一种由体细胞突变引起异常造血干细胞克隆性增殖的疾病,患者具有慢性血管内溶血、血细胞减少和血栓形成等临床表现。其病理缺陷主要是磷脂酰肌醇聚糖－Ａ(ＰＩＧ－Ａ)基因突变,导致ＰＮＨ病理细胞表面缺乏所有需以糖基化磷脂酰肌醇(ＧＰＩ)锚定的蛋白。但仅有ＰＩＧ－Ａ基因突变并不发生ＰＮＨ。只有在其它因素影响下导致正常骨髓造血衰竭时,使异常的ＰＮＨ克隆大量增殖,部分地取代正常造血,才会引起发病。因此,ＰＮＨ发病机制的阐明对提高该病的诊断与治疗水平有重要意义。 展开更多

关键词 阵发性睡眠性血红蛋白尿症 PIG-A基因 糖基化磷脂酰肌醇 锚定蛋白 发病机制

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人vWF A3-Flag-GPI融合蛋白的设计和生物活性预测

19

作者 谭虎 黄岚 +1 位作者 晋军 赵晓辉 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第9期924-925,共2页

目的探讨hvWF A3-Flag-GPI融合蛋白设计的合理性,以期获得能够锚定至内皮祖细胞表面,引导细胞黏附于受损血管壁的分子。方法应用Gene Construction Kit2.5,www.expasy.com网站提供的分析方案,分析重组体的开放读框及融合蛋白的柔性,并... 目的探讨hvWF A3-Flag-GPI融合蛋白设计的合理性,以期获得能够锚定至内皮祖细胞表面,引导细胞黏附于受损血管壁的分子。方法应用Gene Construction Kit2.5,www.expasy.com网站提供的分析方案,分析重组体的开放读框及融合蛋白的柔性,并作了蛋白质二级结构模拟。结果重组体Flag linker所在部位柔性高,融合蛋白表达后,二级结构预测Flag lin-ker不改变蛋白结构,完全符合作者设计hvWF A3-Flag-GPI融合蛋白的初衷。结论重组蛋白设计合理,融合蛋白有很大可能保留了hvWF A3和GPI的理化特性,为获得引导EPCs特异归巢至受损血管壁的相关分子提供前期基础。 展开更多

关键词 血管性假血友病因子 糖基化磷脂酰肌醇 分子结构预测

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朊蛋白,“天使”还是“魔鬼”

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作者 刘博浩 张守峰 +1 位作者 宫婷 扈荣良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期73-75,259,共4页

朊蛋白（PrP）是一种具有糖基化磷脂酰肌醇（GPI）的典型的膜结合型蛋白质，通过GPI与细胞膜表面糖基化位点结合，从而锚定在细胞膜表面，主要在神经元、神经小胶质细胞和脾脏中表达，称为细胞型朊蛋白（PrPC），对促进神经元和胶质细... 朊蛋白（PrP）是一种具有糖基化磷脂酰肌醇（GPI）的典型的膜结合型蛋白质，通过GPI与细胞膜表面糖基化位点结合，从而锚定在细胞膜表面，主要在神经元、神经小胶质细胞和脾脏中表达，称为细胞型朊蛋白（PrPC），对促进神经元和胶质细胞的发育与成熟有重要意义。但是在哺乳动物体内，一些因素能够诱发导致这种正常的糖蛋白发生空间构象转变，形成能够引起神经退行性疾病的朊病毒（Prion），即致病性朊蛋白（PrPSc），这些蛋白质分子大量聚集形成B淀粉样沉淀，聚集在中枢神经系统可引起神经元和神经小胶质细胞代谢紊乱，大量沉淀可引起神经元死亡，最后导致人和动物死亡。 展开更多

关键词 朊蛋白 小胶质细胞 糖基化磷脂酰肌醇 神经退行性疾病 蛋白质分子 天使 中枢神经系统 动物体内

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