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人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究 被引量：12
1
作者 郑友生 廖联明 +2 位作者 江敏 寇世缨 李燕 《世界中西医结合杂志》 2011年第12期1021-1024,共4页
目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷R... 目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子(EGF)和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用。采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响。结果在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球。在2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖。2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成。缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为(4.09±0.49)分和(4.74±0.62)分,而模型对照组为(3.41±0.67)分,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用。结论人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。 展开更多
关键词 人参皂苷RG1 神经干细胞 神经球
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五味子木脂素诱导胶质瘤神经球细胞凋亡的机制研究 被引量：12
2
作者 齐玲 金宏 +3 位作者 赵东海 纪鹏艳 温娜 杨宁江 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期113-116,共4页
目的研究五味子木脂素诱导人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法分析检测五味子木脂素对SHG-44神经球细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;酶联免疫吸附法法检测培养上清中bax、bcl-2和caspase 3蛋白分... 目的研究五味子木脂素诱导人脑胶质瘤SHG-44神经球细胞凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法分析检测五味子木脂素对SHG-44神经球细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;酶联免疫吸附法法检测培养上清中bax、bcl-2和caspase 3蛋白分泌的变化,蛋白质印迹法检测神经球bcl-2蛋白表达变化。结果 50、100、200 mg·L-1五味子木脂素作用24、48和72 h时,均能明显抑制SHG-44神经球细胞的增殖,作用呈剂量依赖性。Annexin V/PI结果显示,五味子木脂素可诱导SHG-44神经球细胞明显凋亡,作用亦呈剂量依赖性。酶联免疫吸附法结果显示,不同浓度五味子木脂素作用后,bcl-2蛋白分泌明显下调使bax/bcl-2比例升高,caspase 3蛋白分泌增加。蛋白质印迹结果显示,SHG-44神经球表达bcl-2蛋白明显下降。结论五味子木脂素通过下调bcl-2的表达和分泌,使抑制凋亡因素减弱而促凋亡因素占优势,使caspase 3活化,进而引起SHG-44神经球细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 五味子木脂素 胶质瘤 神经球 凋亡 BAX BCL-2
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体外培养人类神经干细胞神经球中髓鞘的形成 被引量：9
3
作者 杨立业 惠国桢 +2 位作者 赵文娟 费俭 郭礼和 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2002年第1期47-50,共4页
目的 探索人类神经干细胞的体外培养条件和其形成的神经球的超微结构。方法从胎脑皮质中机械分离细胞,N2培养基培养和扩增人类神经干细胞,应用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定。对形成的神经球应用透射电镜进行超微结构研究。结果... 目的 探索人类神经干细胞的体外培养条件和其形成的神经球的超微结构。方法从胎脑皮质中机械分离细胞,N2培养基培养和扩增人类神经干细胞,应用免疫细胞化学方法对培养的细胞进行鉴定。对形成的神经球应用透射电镜进行超微结构研究。结果 从胎儿的脑皮质中成功分离培养出神经干细胞,形成典型的神经球,大部分细胞表达神经干细胞的标志物波形蛋白,细胞贴壁后可诱导分化为神经元和胶质。早期培养的神经球中有典型的髓鞘形成。结论 从胎儿的脑皮质中成功地分离、培养出人类的神经干细胞,细胞呈悬浮状态生长,形成神经球。这种早期培养的神经干细胞有形成髓鞘的能力,可作为治疗人类脱髓鞘病变的潜在细胞来源。 展开更多
关键词 干细胞 髓鞘 培养 神经球 超微结构
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新生小鼠海马、嗅球及皮质神经干细胞的分离培养及鉴定 被引量：10
4
作者 马浚宁 高俊玮 +4 位作者 侯博儒 任海军 陈四化 刘吉星 严贵忠 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第45期7266-7272,共7页
背景:从体外分离培养出高纯度、生物学性能均一的神经干细胞,建立起一套完整的神经干细胞培养体系,是进行神经干细胞研究的基础。目的:建立新生小鼠海马、嗅球、皮质组织神经干细胞的分离培养体系,并对其生物学特性进行分析。方法:分离... 背景:从体外分离培养出高纯度、生物学性能均一的神经干细胞,建立起一套完整的神经干细胞培养体系,是进行神经干细胞研究的基础。目的:建立新生小鼠海马、嗅球、皮质组织神经干细胞的分离培养体系,并对其生物学特性进行分析。方法:分离新生昆明小鼠海马、嗅球、皮质组织,采用机械分离和胰酶消化法提取原代神经干细胞。采用无血清培养技术、机械吹打和酶消化法进行传代培养神经干细胞。以体积分数为10%的胎牛血清诱导分化神经干细胞。对神经干细胞及其分化产物行CD133、巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。结果与结论:从新生小鼠海马、嗅球、皮质可提取出具有自我更新和多向分化能力的神经干细胞,经巢蛋白、CD133免疫荧光染色检测呈阳性;神经干细胞经胎牛血清诱导后可分化为β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性细胞,并证实染色阳性细胞为神经元和星形胶质细胞。该实验建立了一套神经干细胞体外分离培养、纯化、鉴定、诱导分化方案,为后续神经干细胞研究的顺利进行奠定了实验基础。 展开更多
关键词 干细胞 培养 神经干细胞 神经球 海马 嗅球 皮质 CD133 巢蛋白 神经干细胞库 甘肃省自然科学基金
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EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞定向分化的调控 被引量：8
5
作者 姬西团 章翔 +7 位作者 费舟 张剑宁 刘卫平 蒋晓帆 林绿标 王西玲 曹锐峰 潘灏 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第6期556-559,共4页
目的观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,随后分别加入EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果EGF培养的小鼠NSC... 目的观察EGF、bFGF、NGF、RA对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖及定向分化的影响。方法用无血清培养与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,随后分别加入EGF、bFGF、NGF、RA等因子观察其对NSCs定向分化的影响。结果EGF培养的小鼠NSCs,2d后见细胞集落形成(典型克隆球);克隆球中的细胞成圆形,形态规则,未见细胞突起,呈桑椹状聚集;经血清诱导分化后,则主要为星形胶质细胞,仅有个别的神经元。而bFGF培养的NSCs,生长良好,但克隆球数目较EGF组少,克隆球体积略小。3bFGF与EGF共同培养的NSCs,除诱导分化后,分化的细胞性质与EGF组的不同外,其余同EGF组。NGF对神经球的形成无明显的影响。RA组的克隆球数目量很少,形态以球形为主,部分细胞贴壁并出现突起。结论EGF,bFGF对NSCs的增殖及分化种类均有一定的影响。而NGF与RA则主要影响其细胞的分化,且两者的共同点都是促使其向神经元方向分化。 展开更多
关键词 BFGF EGF NGF 细胞定向分化 RA 小鼠 神经干 单细胞克隆技术 NSCs 调控 细胞集落形成 星形胶质细胞 诱导分化 胚胎脑组织 无血清培养 克隆球 增殖及分化 细胞突起 共同培养 细胞性质 细胞贴壁 神经元 桑椹状 神经球 形态
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成年小鼠脑室下区神经干细胞培养与鉴定体系的建立 被引量：9
6
作者 胡继良 姜晓丹 +3 位作者 邹雨汐 郭燕舞 周德祥 徐如祥 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1942-1946,共5页
目的建立系统的成年小鼠脑室下区神经干细胞分离、培养及鉴定体系。方法用无血清方法分离培养成年小鼠脑室下区来源的神经干细胞;用克隆培养、BrdU整合的方法检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学方法检测BrdU、神经干细胞标记... 目的建立系统的成年小鼠脑室下区神经干细胞分离、培养及鉴定体系。方法用无血清方法分离培养成年小鼠脑室下区来源的神经干细胞;用克隆培养、BrdU整合的方法检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学方法检测BrdU、神经干细胞标记物nestin和SOX2,分化的细胞标记物Tuj1、GFAP、NG2,用Western boltting和RT-PCR方法进一步检测神经干细胞标记物nestin和SOX2的表达。结果从成年小鼠脑室下区分离培养出具有自我更新、增殖的神经球,构成神经球的细胞nestin和SOX2呈阳性,它们分化后产生Tuj1阳性的神经元、GFAP阳性的星型胶质细胞、NG2阳性的少突胶质细胞。结论建立了简单、稳定的培养成年小鼠脑室下区神经干细胞方法。 展开更多
关键词 脑室下区 神经干细胞 神经球 成年
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神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化的表型特征 被引量：9
7
作者 刘吉星 侯博儒 +6 位作者 杨文桢 马浚宁 严贵忠 陈四化 尹立山 王刚 任海军 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第19期3054-3060,共7页
背景:神经干细胞促进受损中枢神经系统结构和功能再修复具有广阔的应用前景,而进行神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化表型的研究是实现这一应用的基础。目的:观察神经干细胞在体外培养条件下的生物学特性和分化表型特点。方法:从新生小... 背景:神经干细胞促进受损中枢神经系统结构和功能再修复具有广阔的应用前景,而进行神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化表型的研究是实现这一应用的基础。目的:观察神经干细胞在体外培养条件下的生物学特性和分化表型特点。方法:从新生小鼠海马、嗅球提取神经干细胞。选取3代后稳定的神经干细胞采用Brd U进行标记,并进行Brd U+巢蛋白+Hochest33258免疫荧光复合染色对神经干细胞进行鉴定。体外诱导促使神经干细胞贴壁分化,对分化产生的子代细胞进行Brd U、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白、Hochest33258复合免疫荧光染色确定分化表型。结果与结论:来源于新生鼠海马及嗅球的细胞连续传代培养后可形成稳定悬浮的类球状细胞团,且Brd U+巢蛋白免疫荧光双染阳性。神经干细胞体外诱导贴壁分化后可产生β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性的子代细胞。以上结果表明体外培养的神经干细胞具有很强的自我增殖更新的能力,在培养过程中趋向于形成稳定的神经球,经体外诱导通过不对称细胞增殖、分化产生神经元和星形胶质细胞等细胞表型。 展开更多
关键词 神经干细胞 神经元 微管蛋白 干细胞 星形胶质细胞 神经球 巢蛋白 β-微管蛋白Ⅲ 胶质纤维酸性蛋白 分化表型
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体外培养的神经干细胞球几种离散方法的探讨 被引量：5
8
作者 张琦 胡建石 +1 位作者 林玲 郑志竑 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期404-407,共4页
目的探讨一种新的有效离散体外培养的神经干细胞球的方法.方法采用单纯玻璃吸管机械分散,胰蛋白酶消化,不锈钢滤网研磨,单纯滤网吸管分散和滤网吸管结合短时间胰酶消化等五种方法离散神经干细胞球,比较其各自的离散效果和离散后细胞存... 目的探讨一种新的有效离散体外培养的神经干细胞球的方法.方法采用单纯玻璃吸管机械分散,胰蛋白酶消化,不锈钢滤网研磨,单纯滤网吸管分散和滤网吸管结合短时间胰酶消化等五种方法离散神经干细胞球,比较其各自的离散效果和离散后细胞存活情况.结果单纯玻璃吸管吹打不能完全离散神经球;胰蛋白酶消化在30min内不能完全离散神经球,延长酶消化时间虽可离散细胞,但细胞难以存活;不锈钢滤网研磨或单纯滤网吸管吹打离散对细胞损伤大,存活率低(分别为64.1%和71.9%);滤网吸管结合短时间(3～5min)胰酶消化离散细胞效果好,存活率(92.1%)显著高于上述其它方法(P＜0.05).结论滤网吸管结合短时间胰酶消化法离散神经干细胞球,离散效果好,细胞存活率高,是一种新的有效离散体外培养的神经干细胞球的好方法. 展开更多
关键词 神经干细胞 酶消化 体外培养 神经球 胰酶 效果 存活率 离散 胰蛋白酶 细胞存活
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人乳牙牙髓干细胞体外表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子的研究 被引量：8
9
作者 王劲松 汪璇 王松灵 《北京口腔医学》 CAS 2011年第5期245-248,共4页
目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的能力及规律,为进一步探讨SHED治疗帕金森病的作用机制提供依据。方法通过酶消化法体外分离培养人乳牙牙髓中的干细胞,当传代至第3代时,加入神经干细胞的特殊... 目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的能力及规律,为进一步探讨SHED治疗帕金森病的作用机制提供依据。方法通过酶消化法体外分离培养人乳牙牙髓中的干细胞,当传代至第3代时,加入神经干细胞的特殊培养基Neurobasal A和细胞因子进行神经球诱导培养,通过Real-Time PCR、免疫荧光和ELISA等方法,分别从mRNA和蛋白水平检测体外培养SHED和神经球中GDNF的表达。结果 Real-Time PCR检测结果显示,在mRNA水平,SHED和神经球中都有GDNF的表达。在蛋白水平,免疫荧光结果可见SHED和神经球中都有GDNF的表达;采用ELISA法在培养第3天的SHED培养液和神经球的培养上清中均可检测到GDNF,并随着时间的延长,培养液中GDNF浓度明显升高。结论 SHED具有表达和分泌GDNF的能力。 展开更多
关键词 人乳牙牙髓干细胞 神经球 胶质细胞源性神经营养因子
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神经干细胞分离培养方法的介绍 被引量：6
10
作者 顾恩妍 哈福 +3 位作者 李林凤 张艳艳 关伟军 马月辉 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第11期53-57,共5页
在成体的许多组织中发现了多能干细胞,这些干细胞可以进行自我复制,参与组织的正常修复。神经干细胞在体外能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并具有多向分化潜能。成体神经干细胞和胚胎干细胞都能分化成成体神经系统中的各... 在成体的许多组织中发现了多能干细胞,这些干细胞可以进行自我复制,参与组织的正常修复。神经干细胞在体外能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,并具有多向分化潜能。成体神经干细胞和胚胎干细胞都能分化成成体神经系统中的各种神经细胞。神经干细胞具有自我更新能力,因此神经干细胞可以应用于神经损伤或者神经疾病的修复。本文概述了神经干细胞体外分离培养的方法及其生长影响因子。 展开更多
关键词 神经干细胞 分离 培养 神经球
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成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞的培养及其代谢表型与成瘤能力鉴定 被引量：1
11
作者 仇佳星 刘宇涵 +4 位作者 郭泓江 张迪雅 王钰铖 鞠瑞 郭磊 《基础医学与临床》 2024年第1期16-22,共7页
目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁... 目的培养成胶质细胞瘤U87干细胞样细胞(U87 SLCs),检测其干性标志物的水平、线粒体呼吸能力和体内成瘤能力。方法DMEM/F-12中添加B-27以及生长因子EGF和bFGF作为无血清干细胞培养基培养U87 SLCs;悬浮培养U87 SLCs使用神经球培养法,贴壁培养U87 SLCs通过在培养表面包被Matrigel基质胶实现;通过RT-qPCR和Western blot检测培养物的干性标志物mRNA和蛋白质水平;通过流式细胞测量术检测培养物中CD133+细胞的比例;通过Seahorse实时细胞代谢分析检测细胞耗氧速率的变化;通过接种动物皮下移植瘤验证细胞成瘤能力的改变。结果干细胞培养基中的U87 SLCs在1周内即会成长为典型的细胞球形态,细胞球在培养过程中会不断增大;在贴壁剂合适的浓度下,U87 SLCs可以在干细胞培养基中完好地平铺贴壁增殖;CD133、nestin、OLIG2、CD44、CD15、整合素α6(ITGA6)等干性标志物的mRNA表达水平在两种方式培养后与U87相比均显著提升(P<0.05),CD133和nestin的蛋白水平在两种方式培养后也均升高(P<0.05);U87 SLCs展现出了更高的线粒体储备呼吸能力(P<0.05);U87 SLCs能够以更少的接种细胞数形成更大的皮下肿瘤(P<0.05),U87 SLCs体内增殖更加迅速,具有更强的成瘤能力。结论U87 SLCs具有典型的干性特征,是一个良好的干性更高的肿瘤细胞模型。 展开更多
关键词 成胶质细胞瘤 干细胞样细胞 神经球 干性
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神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究 被引量：3
12
作者 刘天庆 戴明舒 +3 位作者 葛丹 李香琴 马学虎 崔占峰 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第6期811-818,共8页
为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷... 为定量研究静态无血清悬浮培养的神经球内神经干/祖细胞的活性及代谢情况,取孕14 d的小鼠胚胎,从海马脑组织分离出神经干/祖细胞,培养过程中跟踪测定神经球直径的分布变化,利用CCK-8法测定活细胞数,同时对培养上清进行葡萄糖、乳酸、谷氨酰胺和氨的定量测定,并对相关细胞代谢动力学参数进行计算和分析.结果表明在培养过程中,神经球内细胞活性及细胞代谢均随着球直径的增加而减弱.在神经球平均直径为100μm左右,培养基中葡萄糖、谷氨酰胺浓度分别为36.38 mmol/L和1.33 mmol/L时,球心细胞生长开始受到抑制;而当神经球直径主体分布于100-150μm,培养基中葡萄糖浓度为31.11 mmol/L、谷氨酰胺浓度为1.15 mmol/L时,神经球内部细胞死亡数开始大于增殖数,同时细胞代谢降低到很低水平.表明随着神经球直径的增加而造成的传质困难对于其内部细胞的活性和代谢有重要影响. 展开更多
关键词 神经干细胞 神经球 代谢 传质
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脑肿瘤干细胞研究进展 被引量：4
13
作者 王存祖 赵鹏 +1 位作者 尤永平 傅震 《国外医学（神经病学．神经外科学分册）》 2005年第3期220-223,共4页
脑肿瘤干细胞(BTSC)是脑肿瘤,尤其是恶性肿瘤中一种与神经干细胞(NSC)相似的细胞。这类细胞的共同特征是:在NSC培养条件下,可以形成典型的神经球样(neurosphere)结构;表达NSC特异性标记,如nestin,CD133等;具有自我更新和增殖能力,可以... 脑肿瘤干细胞(BTSC)是脑肿瘤,尤其是恶性肿瘤中一种与神经干细胞(NSC)相似的细胞。这类细胞的共同特征是:在NSC培养条件下,可以形成典型的神经球样(neurosphere)结构;表达NSC特异性标记,如nestin,CD133等;具有自我更新和增殖能力,可以成为永生细胞;在离体和在体条件下能够分化为神经系统组成细胞,或者与来源肿瘤表型相同的细胞。BTSC的发现为脑肿瘤的起源提供了新的假说,即在特定的条件下,NSC发生基因突变,向BTSC或其前体细胞转化,BTSC再分化为各种肿瘤组成细胞,形成肿瘤。然而,上述假说的具体机理还不清楚,是目前该领域研究中共同关注的问题。 展开更多
关键词 脑肿瘤 干细胞研究 神经干细胞(NSC) NESTIN 肿瘤干细胞 CD133 恶性肿瘤 培养条件 增殖能力 自我更新 神经系统 基因突变 细胞转化 神经球 特异性 再分化 组成 假说
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人胎脑神经球及其构成细胞的成熟表型标志 被引量：5
14
作者 尹国才 栾佐 +1 位作者 屈素青 闫凤青 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期455-458,共4页
目的观察体外培养人胎脑神经干细胞球的形成,并鉴别球内是否有成熟的神经细胞存在,证实神经球的异质性。方法用添加表皮生长因子(EGF,20ng/mL)和成纤维细胞生长因子2(FGF2,10ng/mL)的无血清N2培养基,从人胎脑培养获得神经干细胞球,在倒... 目的观察体外培养人胎脑神经干细胞球的形成,并鉴别球内是否有成熟的神经细胞存在,证实神经球的异质性。方法用添加表皮生长因子(EGF,20ng/mL)和成纤维细胞生长因子2(FGF2,10ng/mL)的无血清N2培养基,从人胎脑培养获得神经干细胞球,在倒置显微镜下观察其形成过程,用间接免疫荧光技术检测神经球的细胞表型标志神经丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(GalC)和巢蛋白(nestin)的表达,并计算出阳性细胞球的百分比。结果前6d,培养中形成大量的细胞集落,检测的细胞标志中,只有nestin+,其余标志均为阴性。培养至12d左右,细胞球的数量减少约1/3,球体的形态和大小也不相同。培养30d的神经球中,69.2%神经球为NF+,81.8%为GFAP+,100%为nestin+,未观察到GalC+。结论神经球有个成熟过程,神经球之间具有异质性,球内的细胞构成也具有异质性。 展开更多
关键词 神经球 人胎脑 神经球构成细胞 细胞表型标志
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神经球方法体外无血清含生长因子培养的神经干细胞主要向神经胶质细胞分化 被引量：4
15
作者 黄斐 赵际童 沈强 《中国组织工程研究与临床康复》 CSCD 2012年第1期81-84,共4页
背景:体外分离培养出神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提。目的:采用神经球方法分离培养胎鼠皮质神经干细胞,并观察其生长和分化特性。方法:利用无血清悬浮方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,用免疫细胞化学的方... 背景:体外分离培养出神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提。目的:采用神经球方法分离培养胎鼠皮质神经干细胞,并观察其生长和分化特性。方法:利用无血清悬浮方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,用免疫细胞化学的方法检测神经干细胞及其分化细胞的标志物。结果与结论:体外无血清含生长因子的培养液培养胎鼠皮质神经干细胞,可得到悬浮生长的神经球,但悬浮生长的神经球可以发生融合,免疫细胞化学显示神经球呈巢蛋白表达阳性,神经干细胞可以分化为神经元,神经胶质细胞和少突胶质细胞,但主要向神经胶质细胞分化。说明在血清含有生长因子的而培养条件下,利用神经球方法可以分离培养出胎鼠皮质神经干细胞。 展开更多
关键词 神经球 神经干细胞 细胞培养 中枢神经系统 胚胎
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下调RNA去甲基化酶FTO的表达对胶质母细胞瘤干细胞功能的影响
16
作者 温翠侠 田聪 +1 位作者 王万洲 张旭 《临床神经外科杂志》 2024年第1期38-42,共5页
目的 分析下调N6-甲基酰胺(m6A)去甲基化酶脂肪组织和肥胖相关蛋白(FTO)的表达对人胶质母细胞瘤干细胞(GSC)增殖与干性维持的影响。方法 构建稳定下调FTO表达的干细胞株,运用CCK-8法检测下调FTO对GSC细胞增殖的影响;应用神经球形成实验... 目的 分析下调N6-甲基酰胺(m6A)去甲基化酶脂肪组织和肥胖相关蛋白(FTO)的表达对人胶质母细胞瘤干细胞(GSC)增殖与干性维持的影响。方法 构建稳定下调FTO表达的干细胞株,运用CCK-8法检测下调FTO对GSC细胞增殖的影响;应用神经球形成实验检测两组细胞神经球形成能力的变化;运用体外有限稀释实验检测两组细胞自我更新能力的影响;流式细胞术检测下调FTO对GSC细胞凋亡的调控作用。结果 CCK-8结果显示,与对照组相比,下调FTO表达后减慢了GSC细胞生长速度。成球实验结果表明实验组的GSC神经球大小和数量较对照组显著减少。体外有限稀释实验结果显示,下调FTO表达后神经球自我更新能力减弱;流式细胞术检测凋亡显示,下调FTO表达后增加了GSC细胞凋亡率。结论 下调FTO的表达可抑制GSC的生长与自我更新能力,靶向FTO可能是清除GSC的潜在策略之一。 展开更多
关键词 FTO 胶质母细胞瘤干细胞 神经球 凋亡
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昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离及培养 被引量：4
17
作者 宫晓洁 孙莉 +3 位作者 黎靖宇 袁路 刘琦 陈维平 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1477-1480,共4页
目的：在神经干细胞的分离培养过程中，国内外的报道多数是用胰蛋白酶对组织细胞进行消化，但是消化时间比较难把握。采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养和初步的免疫组织化学检测，为相... 目的：在神经干细胞的分离培养过程中，国内外的报道多数是用胰蛋白酶对组织细胞进行消化，但是消化时间比较难把握。采用胰酶消化与机械分离法相结合的方式对昆明种小鼠胚胎脑神经干细胞进行分离、培养和初步的免疫组织化学检测，为相关研究建立实验条件。方法：实验于2006—10／2007-09在广西医科大学基础医学实验室完成。实验室为广西重点实验室、基础医学博士后工作站。①实验材料：孕14-16d的昆明种小鼠由广西医科大学实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：分离昆明种小鼠胎鼠的脑组织，经胰酶消化加机械吹打后，在加入碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的B27无血清培养基中培养。③实验评估：用免疫细胞化学方法鉴定分离的神经干细胞。结果：在无血清DMEM／F12培养液中，加入碱性成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子及B27的条件下，培养24h后可见细胞以悬浮方式生长，三五聚集成团块，48h后形成由十数个至数十个细胞组成的，大小不等的细胞球，形态规则，细胞无突起，形成典型的神经球，可传代。免疫细胞化学法检测显示，细胞表达神经巢蛋白。结论：①来自昆明种小鼠胎脑的神经干细胞能在体外培养、增殖并具有增殖传代能力。②无血清B27培养基添加表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子有利于神经干细胞的体外培养和促进其增殖。 展开更多
关键词 神经干细胞 神经球 细胞培养 碱性成纤维细胞生长因子 表皮细胞生长因子
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成年小鼠神经干细胞体外培养、鉴定及分化 被引量：5
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作者 包金风 王虹 +3 位作者 吴凡 宋玫香 张晓文 王小琦 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期191-197,共7页
目的:建立一种简便易行的从成年小鼠脑组织分离、培养和鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法,为相关研究提供新的研究手段。方法:采用机械分离和酶消化结合方法分离成年昆明种小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置相差... 目的:建立一种简便易行的从成年小鼠脑组织分离、培养和鉴定神经干细胞(neural stem cells,NSCs)的方法,为相关研究提供新的研究手段。方法:采用机械分离和酶消化结合方法分离成年昆明种小鼠的脑组织,用无血清培养基悬浮培养;倒置相差显微镜观察细胞形态;MTT法(四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法)观察NSCs的自我增殖能力;免疫荧光细胞化学技术检测NSCs标志物巢蛋白(Nestin)的表达;多聚赖氨酸铺板和撤除培养基中FGF和EGF的条件下,给予5%血清和1μm维甲酸诱导NSCs分化,免疫荧光细胞化学技术检测GFAP(标记胶质细胞),β-tubulin Ⅲ(标记神经元)蛋白的表达来测定NSCs的分化能力。结果:从成年小鼠脑组织分离的细胞,在无血清培养液中可形成神经球,并可在体外扩增和连续传代,免疫荧光细胞化学表明神经球Nestin阳性表达,在给予血清和维甲酸条件下神经球可表达GFAP和β-tubulin Ⅲ。结论:本研究成功建立了体外培养成年小鼠脑组织分离和培养NSCs的方法,培养的NSCs具有自我更新、增殖及多向分化潜能。此方法是一个稳定、简便易行的方法,可广泛用于神经干细胞相关的基础和应用研究。 展开更多
关键词 成年 小鼠 神经干细胞 神经球 细胞培养 增殖 分化
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体外培养的神经球中表达神经巢蛋白细胞的流式细胞术检测 被引量：3
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作者 林玲 郑志竑 +2 位作者 胡建石 张琦 林建银 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期415-418,共4页
采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含ne... 采用体外培养不同时间的神经干细胞球 ,间接荧光法标记神经巢蛋白 (nestin) ,以流式细胞术检测神经干细胞球中表达nestin细胞的情况。结果显示 :在培养不同时间的细胞群体中均检出 nestin阳性细胞 ,培养 7d、1月、3月和 6月的细胞群含nestin阳性细胞数百分比分别为 (4 2 .2± 7.6) %、(4 1.7± 7.3 ) %、(3 3 .8± 12 .9) %和 (3 7.1± 5 .0 ) % ,几个时间点的细胞群体所含的 nestin阳性细胞数的百分比之间无显著性差异。提示 ,在体外培养条件下 ,神经干细胞群体可能通过自我更新和分化的调控 ,保持 nestin阳性细胞于一种较为恒定的比例。 展开更多
关键词 体外培养 神经球 神经巢蛋白 流式细胞术 神经干细胞
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成年大鼠骨骼肌肌源性干细胞向神经细胞的分化 被引量：3
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作者 李进 洪光祥 +3 位作者 康皓 陈振兵 陈燕花 李涛 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期443-444,448,557,共4页
目的研究成体骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向神经细胞分化的潜能。方法从成年SD大鼠骨骼肌组织中培养出肌源性干细胞,采用bFGF、EGF诱导出神经球样细胞团,并检测nestin表达。再在贴壁培养条件下,用RA、BDGF诱导分化,并检测NSE、GFAP的表... 目的研究成体骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向神经细胞分化的潜能。方法从成年SD大鼠骨骼肌组织中培养出肌源性干细胞,采用bFGF、EGF诱导出神经球样细胞团,并检测nestin表达。再在贴壁培养条件下,用RA、BDGF诱导分化,并检测NSE、GFAP的表达。结果MDSCs能被诱导出神经球样细胞团,并表达nestin。这些细胞进一步诱导,部分细胞表现出神经元样或胶质细胞样形态,并表达NSE或GFAP。结论MDSCs能向神经细胞样细胞分化,有望用于神经系统疾病的治疗。 展开更多
关键词 骨骼肌源性干细胞 转分化 神经球 神经细胞
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