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人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体制备及鉴定 被引量:2
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作者 江枫 肖明兵 +2 位作者 赵敏星 倪润洲 周嘉伟 《南通大学学报(医学版)》 2010年第1期21-23,共3页
目的:制备人磷酯酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的多克隆抗体。方法:在大肠埃希菌Rosetta中诱导表达磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白,从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用E... 目的:制备人磷酯酰蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白的多克隆抗体。方法:在大肠埃希菌Rosetta中诱导表达磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白,从SDS-PAGE中切胶纯化,免疫新西兰兔,制备多克隆抗体。用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用ELISA、Westen-blot检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗磷酯酰蛋白聚糖3N端的多克隆抗体,抗体滴度为1:64000,经Western blot检测特异性良好。结论:成功制备了抗人磷酯酰蛋白聚糖3N端融合蛋白多克隆抗体。 展开更多
关键词 蛋白聚糖3 融合蛋白 多克隆抗体 原发性肝细胞癌
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血清检测Glypican-3对原发性肝细胞癌诊断及疗效评估的临床意义 被引量:8
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作者 王媛媛 周陈杰 +3 位作者 李静 周玲 李明松 肖冰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1060-1065,共6页
目的探讨血清检测磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)对原发性肝细胞癌(PHC)诊断及疗效评估的临床意义。方法采用双抗夹心ELISA法,对60例PHC,60例转移性肝癌,50例肝硬化,50例慢性病毒性肝炎,20例肝囊肿,20例脂肪肝,20例肝血管瘤,20例药物性肝炎... 目的探讨血清检测磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)对原发性肝细胞癌(PHC)诊断及疗效评估的临床意义。方法采用双抗夹心ELISA法,对60例PHC,60例转移性肝癌,50例肝硬化,50例慢性病毒性肝炎,20例肝囊肿,20例脂肪肝,20例肝血管瘤,20例药物性肝炎及40例健康人血清中GPC3进行定量检测。同时采用化学发光法检测PHC患者血清中甲胎蛋白水平,并对治疗前后PHC患者血清中GPC3及甲胎蛋白水平进行比较分析。结果 PHC组血清GPC3水平显著高于其他肝病组及健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。转移性肝癌、肝硬化及病毒性肝炎组血清GPC3水平显著高于其他良性肝病组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHC组血清GPC3水平与甲胎蛋白水平及肝功能状况无关。GPC3与甲胎蛋白诊断PHC的阳性率分别为65%和56.7%,两者联合检测可将PHC的诊断率提高至85%。在23例治疗有效的PHC患者中,15例患者血清中GPC3水平较治疗前呈现稳定的下降趋势,而仅有10例患者血清中甲胎蛋白呈现与疗效相似的下降趋势。结论 GPC3与甲胎蛋白联合检测有望提高PHC的早期诊断率,同时血清GPC3的不同阈值或可在PHC及其他各类肝脏疾病的鉴别诊断过程中发挥作用。GPC3具有较甲胎蛋白更优的特异性及灵敏度,或可成为判断PHC治疗疗效的一种特异性血清学标志。 展开更多
关键词 原发性肝细胞肝癌 肿瘤标志物 肌醇蛋白聚糖-3 甲胎蛋白
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GST-Glypican 3 N端融合蛋白表达载体构建及表达纯化 被引量:3
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作者 肖明兵 赵敏星 +2 位作者 倪润洲 江枫 周嘉伟 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期212-214,共3页
目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大... 目的构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)N端蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)重组的融合蛋白原核表达载体并进行表达及纯化。方法以重组质粒pcDNA3.1-GPC3N为模板,扩增GPC3 N端基因,产物经纯化回收后与载体PGEX-4T-1连接并转化大肠埃希菌Rosetta,酶切鉴定序列完全正确者诱导表达GST-GPC3 N端融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖小珠亲和纯化。结果Glypican 3 N端基因片段成功插入载体PGEX-4T-1,插入位点及碱基序列完全正确,转化Rosetta后,经IPGT诱导成功表达分子质量为64 000的GST-GPC3 N端融合蛋白。结论成功建立了重组GST-GPC3 N端融合蛋白的原核表达载体、表达菌株及诱导表达和纯化的方法,为GPC3 N端融合蛋白的进一步应用打下基础。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 载体 克隆 表达
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肝癌患者血清中GPC3和GP73含量的变化及其与血管新生、上皮间质转化的相关性 被引量:3
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作者 周万富 郑艳梅 《海南医学院学报》 CAS 2018年第19期1766-1769,共4页
目的:研究肝癌患者血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和高尔基体糖蛋白-73(GP73)含量的变化及其与血管新生、上皮间质转化的相关性。方法:选择在我院接受手术切除的肝癌患者作为肝癌组、同期体检的健康者作为对照组,测定两组受试者血清... 目的:研究肝癌患者血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)和高尔基体糖蛋白-73(GP73)含量的变化及其与血管新生、上皮间质转化的相关性。方法:选择在我院接受手术切除的肝癌患者作为肝癌组、同期体检的健康者作为对照组,测定两组受试者血清中GPC3、GP73的含量以及肝癌病灶、癌旁病灶内GPC3及GP73的含量、血管新生基因及上皮间质转化基因的表达量。结果:肝癌组患者血清中GPC3、GP73的含量显著高于对照组,肝癌病灶中GPC3、GP73的含量显著高于癌旁病灶且肝癌组患者血清中GPC3、GP73的含量与肝癌病灶中GPC3、GP73的含量呈正相关;肝癌病灶中SULT2B1、VEGF、Ang-2、Shh、Twist、N-cadherin的mRNA表达量显著高于癌旁病灶且与血清中GPC3、GP73的含量呈正相关,TUM5、Foxg1、E-cadherin的mRNA表达量显著低于癌旁病灶且与血清中GPC3、GP73的含量呈负相关。结论:肝癌患者血清中GPC3和GP73含量的升高与病灶内血管新生、上皮间质转化的加剧密切相关。 展开更多
关键词 肝癌 肌醇蛋白聚糖-3 高尔基体糖蛋白-73 血管新生 上皮间质转化
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人GPC3基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
5
作者 腾桥 夏丽洁 张富春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期188-193,共6页
旨在构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)原核蛋白,制备小鼠GPC3抗血清。扩增人GPC3基因c DNA的完整的开放阅读框,克隆至p ET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21表达菌株中诱导表达磷酯酰肌醇蛋白聚糖融合蛋白,利用亲和层析的方法纯... 旨在构建人磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican3,GPC3)原核蛋白,制备小鼠GPC3抗血清。扩增人GPC3基因c DNA的完整的开放阅读框,克隆至p ET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21表达菌株中诱导表达磷酯酰肌醇蛋白聚糖融合蛋白,利用亲和层析的方法纯化his-融合蛋白,通过SDS-PAGE电泳检测蛋白的纯度,并测定蛋白含量;免疫Balb/c小鼠,制备抗血清。结果显示,成功制备了小鼠抗GPC3多克隆抗体,抗体滴度为1∶51 200,经Western blot检查特异性良好。原核表达的重组人GPC3蛋白具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 融合蛋白 多克隆抗体
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磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在不同原核表达载体及菌株中的表达分析 被引量:1
6
作者 腾桥 陈旗 夏丽洁 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期5131-5137,共7页
为揭示磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)在不同原核表达载体、菌株中的表达差异及重组蛋白的最佳表达条件。本研究参照GenBank中人GPC3基因序列(登录号:KR711270.1)设计引物,应用PCR技术扩增基因全长,并将其构建至pET30a-GPC3和pET3... 为揭示磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican3,GPC3)在不同原核表达载体、菌株中的表达差异及重组蛋白的最佳表达条件。本研究参照GenBank中人GPC3基因序列(登录号:KR711270.1)设计引物,应用PCR技术扩增基因全长,并将其构建至pET30a-GPC3和pET32a-GPC3两种不同的原核表达载体,而后分别转化于3种不同的表达菌株(大肠杆菌BL21,Rossetta,Transetta)中,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达磷酯酰肌醇蛋白聚糖重组融合蛋白,经SDS-PAGE电泳及Western Blot鉴定比较蛋白表达量。为进一步提高重组蛋白的表达量,通过设计不同的诱导剂IPTG浓度(0.3 mmol/L,0.5 mmol/L,0.8 mmol/L,1.0 mmol/L)及不同诱导时间(4 h,6 h,8 h,10 h)等优化诱导条件,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定比较蛋白表达量。实验显示,GPC3去除信号肽后,基因全长1749 bp,编码583个氨基酸。重组GPC3蛋白在不同表达载体和菌株中表达情况及表达量均有差异。pET32a-GPC3重组质粒在Transetta菌株中表达量最高。重组蛋白在诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导时间为4 h情况下表达量较高。本研究为进一步探究GPC3的生物学功能提供了理论依据。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 融合蛋白 表达载体 表达菌株
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GPC3、GP73在肝细胞癌临床诊断中的价值 被引量:1
7
作者 汪顺才 马洁 +5 位作者 朱梦琪 马久明 周华 虞腊青 杨永峰 经继生 《肝脏》 2016年第12期1042-1048,共7页
目的评价磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、高尔基体蛋白73(GP73)的高表达对肝细胞癌(HCC)诊断价值。方法对39例HCC、31例肝硬化患者,基线时收集外周血及肝组织,采用ELISA法检测血清GPC3、GP73的表达量,实时定量逆转录PCR法(qRT-PCR)检测外... 目的评价磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)、高尔基体蛋白73(GP73)的高表达对肝细胞癌(HCC)诊断价值。方法对39例HCC、31例肝硬化患者,基线时收集外周血及肝组织,采用ELISA法检测血清GPC3、GP73的表达量,实时定量逆转录PCR法(qRT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中GPC3 mRNA和GP73 mRNA的相对表达量;ROC曲线分析诊断的灵敏度、特异度等指标。结果 HCC组GPC3、GP73测量值显著高于肝硬化组(P<0.001);GPC3诊断HCC的截断值>9.3μg/L,ROC曲线下面积(AUC)=0.956,灵敏度为89.74%,特异度为96.77%,阳性预测值为97.2%,阴性预测值为88.2%,阳性似然比(+LR)27.82,阴性似然比(-LR)0.11;GP73诊断HCC的截断值>77.68 ng/mL,AUC=0.937,灵敏度为92.31%,特异度为83.87%,阳性预测值为87.8%,阴性预测值为89.7%,+LR:5.72,-LR:0.092。结论 GPC3、GP73在HCC患者中表达明显增高,且灵敏度显著优于常规AFP,GPC3、GP73的特异度与常规AFP相近,因此GPC3、GP73有望成为一种新的较好、可靠的HCC无创诊断指标。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 高尔基体蛋白73 肝细胞癌
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血清磷酯酰肌醇蛋白聚糖3与高尔基体蛋白73检测在肝细胞癌诊断中的意义
8
作者 经继生 汪顺才 +5 位作者 马洁 朱梦琪 马久明 周华 虞腊青 杨永峰 《肝脏》 2014年第11期844-846,共3页
目的评价血清磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)和高尔基体蛋白73(gp73)的检测对肝细胞癌(HCC)的筛查作用。方法采集70例HCC癌及肝硬化(肝脏再生结节)患者基线时外周血。应用ELISA法检测患者血清gpc3和gp73,并与其血清AFP水平做对照。结果 HCC... 目的评价血清磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)和高尔基体蛋白73(gp73)的检测对肝细胞癌(HCC)的筛查作用。方法采集70例HCC癌及肝硬化(肝脏再生结节)患者基线时外周血。应用ELISA法检测患者血清gpc3和gp73,并与其血清AFP水平做对照。结果 HCC组gpc3、gp73测量值显著高于肝硬化组(P<0.01);gpc3诊断HCC的截断值>9.3μg/L,AUC=0.956,灵敏度为89.74%,特异度为96.77%,阳性预测值为97.2%,阴性预测值为88.2%,约登指数为0.8652,阳性似然比27.82,阴性似然比0.11,gp73诊断HCC的截断值>77.68μg/L,AUC=0.937,灵敏度为92.31%,特异度为83.87%,阳性预测值为87.8%,阴性预测值为89.7%,约登指数0.7618,阳性似然比5.72,阴性似然比0.092。结论血清gpc3与gp73水平可用于HCC的筛查。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 高尔基体蛋白73 HCC 筛查
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gpc3、gp73与MR/CT在PHC诊断中的比较
9
作者 经继生 汪顺才 +5 位作者 马洁 朱梦琪 马久明 周华 虞腊青 杨永峰 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第23期2877-2879,共3页
目的评价磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)、高尔基体蛋白73(gp73)的检测水平与常规MR/CT对早期原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法对39例PHC、31例肝硬化患者,基线时收集外周血,采用ELISA法检测血清gpc3、gp73,并与MR/CT作对照。结果PHC组:gpc3... 目的评价磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)、高尔基体蛋白73(gp73)的检测水平与常规MR/CT对早期原发性肝癌(PHC)的诊断价值。方法对39例PHC、31例肝硬化患者,基线时收集外周血,采用ELISA法检测血清gpc3、gp73,并与MR/CT作对照。结果PHC组:gpc3(15.80±3.86)μg/L、gp73(107.46±29.50)ng/ml,肝硬化组:gpc3(7.51±1.38)μg/L、gp73(65.09±17.23)ng/ml;PHC组gpc3、gp73测量值高于肝硬化组(P<0.01);gpc3诊断PHC的截断值>9.3μg/L,受试者工作特征曲线下面积(AUC)=0.956,灵敏度为89.74%,特异度为96.77%,阳性预测值为97.20%,阴性预测值为88.20%,约登指数为0.8652,阳性似然比(+LR):27.82,阴性似然比(-LR):0.11;gp73诊断PHC的截断值>77.68ng/ml,AUC=0.937,灵敏度为92.31%,特异度为83.87%,阳性预测值为87.80%,阴性预测值为89.70%,约登指数0.7618,+LR:5.72,-LR:0.09。结论 gpc3、gp73的诊断灵敏度显著优于常规的MR/CT(70.00%),gpc3、gp73的特异度与常规的MR/CT(98.00%)相近,因此gpc3、gp73能够作为诊断早期PHC的指标。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖3 高尔基体蛋白73 原发性肝癌
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血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3及高尔基体蛋白-73异常表达对肝癌的诊断价值 被引量:3
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作者 曹风华 汪顺才 +6 位作者 马洁 朱梦琪 马久明 周华 虞腊青 陈明泉 经继生 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期393-397,共5页
目的 :探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3)及高尔基体糖蛋白-73(Golgi protein 73,GP73)高表达对肝癌的诊断价值。方法 :用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3... 目的 :探究肝组织及外周血磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3(phosphatidylinositol proteinglycan 3,GPC3)及高尔基体糖蛋白-73(Golgi protein 73,GP73)高表达对肝癌的诊断价值。方法 :用ELISA法检测39例肝癌患者及31例肝硬化患者外周血GPC3及GP73浓度,RT-PCR法检测两组患者肝组织中GPC3 m RNA及GP73 m RNA表达水平,比较研究肝癌及肝硬化患者外周血、肝组织中GPC3及GP73的表达差异,分层分析此两种蛋白表达与肝癌不同临床分期、病理分级的相关性。结果:肝癌组外周血GPC3、GP73浓度分别为(16.81±0.56)μg/L、(115.92±7.01)ng/ml,肝硬化组外周血GPC3、GP73浓度分别为(7.41±0.25)μg/L、(64.63±3.07)ng/ml,肝癌组外周血GPC3、GP73浓度均显著高于肝硬化组(P〈0.001)。GPC3值为9.3μg/L时诊断肝癌的灵敏度和特异度分别为89.74%和96.77%,阳性预测值97.20%,阴性预测值88.20%;GP73截断值为77.68 ng/ml时,其诊断肝癌的灵敏度92.31%,特异度83.87%,阳性预测值87.80%,阴性预测值89.70%。肝癌组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为8.91±3.70、68.41±32.86,肝硬化组GPC3 m RNA和GP73 m RNA相对表达量分别为3.04±0.58、2.32±0.25,肝癌组GPC3 m RNA、GP73 m RNA表达均高于肝硬化组(P均〈0.05)。上述结果可知肝癌患者癌组织GPC3、GP73 m RNA表达水平与外周血相应蛋白浓度一致。肝癌患者中外周血GP73、GPC3蛋白浓度及组织m RNA表达水平与年龄、性别、肿瘤大小及肝癌临床分期间无统计学意义;而肝癌患者GPC3表达与病理分级间存在统计学差异,病理分级为3级的肝癌患者GPC3表达水平低于1-2级患者。结论:GP73、GPC3在肝癌患者中表达明显增高,且灵敏度高于AFP,而特异度与其相当,有望成为一种新的、较好早期诊断HCC的血清标志物;另外,GPC3表达对肝癌细胞的分化程度有一定的指示作用。 展开更多
关键词 肌醇蛋白聚糖-3(GPC3) 高尔基体糖蛋白-73(GP73) 肿瘤标志物 肝癌
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联合检测HCC患者血清中GP73、GLYPICAN-3、MiR-335表达水平与患者诊断价值的关系 被引量:3
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作者 曹英 马许辉 +1 位作者 张卉 屠荫琼 《实验与检验医学》 CAS 2021年第3期706-709,共4页
目的探究并分析联合检测HCC(肝细胞肝癌)患者血清中GP73(高尔基体跨膜糖蛋白73)、GLYPICAN-3(磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3)、MiR-335表达水平与患者疗效评估的关系。方法选取2018年1月至2019年1月我院收治的HCC患者96例,作为HCC组;同时LC组选... 目的探究并分析联合检测HCC(肝细胞肝癌)患者血清中GP73(高尔基体跨膜糖蛋白73)、GLYPICAN-3(磷酯酰肌醇蛋白聚糖-3)、MiR-335表达水平与患者疗效评估的关系。方法选取2018年1月至2019年1月我院收治的HCC患者96例,作为HCC组;同时LC组选取68例肝硬化(LC)患者,另选对照组取我院进行体检的36健康志愿者例。观察并记录各组患者血清GP73、GLYPICAN-3与MIR-335水平,比较其在不同组患者之间的表达情况。分析并比较单纯血清GP73、GLYPICAN-3与MIR-335以及联合血清GP73、GLYPICAN-3与MIR-335评估对HCC的评估效果。采用ROC曲线分析各评估方法的评估效率。结果HCC组血清GP73、GLYPICAN-3水平显著高于LC组和健康人群(P<0.05),HCC组血清MIR-335水平显著低于LC组和健康人群(P<0.05),而LC组患者GP73、GLYPICAN-3水平显著高于健康人群(P<0.05),LC组患者MIR-335水平显著低于健康人群(P<0.05);单独的GP73、GLYPICAN-3、MIR-335进行评估,HCC病情评估特异度差异显著(P<0.05),其中,GLYPICAN-3评估的特异度显著高于GP73、MIR-335的评估特异度(P<0.05);对于平行联合检测,GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的敏感度阴性预测值均显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335(P<0.05);对于系列联合检测,GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的特异度显著高于GP73+MIR-335(P<0.05);采用GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估时,系列联合检测的敏感度显著低于平行联合检测(P<0.05),特异度显著高于平行联合检测(P<0.05);GP73+GLYPICAN-3+MIR-335评估的ROC曲线下面积显著高于GP73+MIR-335、GLYPICAN-3+MIR-335,具有统计学意义。结论GP73+GLYPICAN-3+MIR-335联合评估效率显著高于各单项检查,具有较高的准确率、特异性和敏感性,值得临床推广。 展开更多
关键词 肝细胞肝癌、肌醇蛋白聚糖-3 高尔基体跨膜糖蛋白73 联合诊断
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