原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞NF-κB DNA结合活性的抑制作用 被引量：4

1

作者 陈美珺 梁统 周克元 《广东医学院学报》 2005年第2期115-118,共4页

目的:观察原花青素对脂多糖(L PS)诱导的RAW2 6 4 .7细胞核转录因子- κB(nuclear factor Kappa B,NF- κB)结合活性的影响。方法:L PS诱导RAW2 6 4 .7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κ... 目的:观察原花青素对脂多糖(L PS)诱导的RAW2 6 4 .7细胞核转录因子- κB(nuclear factor Kappa B,NF- κB)结合活性的影响。方法:L PS诱导RAW2 6 4 .7细胞,加入不同质量体积浓度原花青素孵育1h,提取核蛋白,电泳迁移率变动分析检测NF-κB与DNA的结合活性。结果:L PS诱导小鼠巨噬细胞肿瘤细胞株RAW2 6 4 .7后,其NF-κB的核结合活性明显增高。0 .8、4和2 0 mg/L的原花青素可明显降低L PS诱导下RAW2 6 4 .7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素对NF-κB活化的抑制作用可能是其抗炎的作用机理之一。 展开更多

关键词 核转录因子-KB 原花青素 电泳迁移率变动分析

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抑制核因子-κB活性对糖尿病大鼠肾组织一氧化氮水平的影响 被引量：6

2

作者 吴文 丁鹤林 傅祖植 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第2期161-165,共5页

目的:研究抑制核因子κB(NFκB)活性对实验性糖尿病大鼠肾组织一氧化氮(NO)水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠分为3组,A组(11只)为正常对照组,B组(11只)为糖尿病未干预组,C组(9只)为糖尿病大鼠吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NFκB活性抑制剂)... 目的:研究抑制核因子κB(NFκB)活性对实验性糖尿病大鼠肾组织一氧化氮(NO)水平的影响。方法:雄性Wistar大鼠分为3组,A组(11只)为正常对照组,B组(11只)为糖尿病未干预组,C组(9只)为糖尿病大鼠吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC,NFκB活性抑制剂)干预组。以链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。大鼠饲养18周后取出肾脏以电泳迁移率变动分析技术检测NFκB活性,RT PCR技术检测诱导型NO合成酶(iNOS)mRNA表达并检测肾组织NO水平,同时电镜检测大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积)。采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒检测24h尿白蛋白排泄(UAE)。结果:肾组织iNOSmRNA表达在B组大鼠(0.30±0.12)显著高于A组(0.12±0.04,P<0.01)和C组(0.16±0.08,P<0.01)。肾组织NO水平在B组大鼠(0.56±0.20μmol/mg肾组织)显著低于A组(1.05±0.25μmol/mg肾组织,P<0.01)和C组(1.45±0.61μmol/mg肾组织,P<0.01)。基底膜厚度在B组大鼠(531.6±107.6nm)显著高于A组(312.4±25.4nm,P<0.05)和C组(315.8±21.4nm,P<0.05)。系膜基质密度在B组大鼠(56.41±6.78)显著高于A组(33.95±5.22,P<0.05)和C组(37.97±7.37,P<0.05)。结论:在实验糖尿病大鼠,肾组织iNOSmRNA表达明显增加,但NO水平明显降低;抑制NFκB活性不但能延? 展开更多

关键词 糖尿病 糖尿病肾病 核因子-κB(NF-κB) 吡咯烷二硫基甲酸酯 诱导型一氧化氮合成酶 一氧化氮 电泳迁移率变动分析 RT-PCR

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两种化学发光电泳迁移率变动分析技术的比较 被引量：5

3

作者 华东 李敏俐 王进科 《生物医学工程研究》 2007年第2期111-115,共5页

采用DIG及Biotin标记寡核苷酸,研究了两种非放射性标记电泳迁移率变动分析的实验方法,即化学发光电泳迁移率变动分析实验(chemi-EMSA)的可靠性,并对两种标记体系的化学发光电泳迁移率变动分析实验进行了比较,以确立一种最佳的化学发光... 采用DIG及Biotin标记寡核苷酸,研究了两种非放射性标记电泳迁移率变动分析的实验方法,即化学发光电泳迁移率变动分析实验(chemi-EMSA)的可靠性,并对两种标记体系的化学发光电泳迁移率变动分析实验进行了比较,以确立一种最佳的化学发光电泳迁移率变动分析实验技术。结果表明:通过对转录因子蛋白NF-κB的实验研究,两种标记体系均可以获得良好的电泳迁移率变动分析检测效果,其中“Biotin-streptavidin-HRP-ECL化学发光电泳迁移率变动分析”实验体系更好。 展开更多

关键词 电泳迁移率变动分析 转录因子蛋白 化学发光 HELA细胞 标记探针

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黑曲霉T21 glaA 5'上游调控区DNA与蛋白因子的相互作用分析 被引量：1

4

作者 仇润祥 朱兴国 +1 位作者 刘丽 唐国敏 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2002年第2期122-130,共9页

以糖化酶生产菌株黑曲霉T21（Aspergillus　niger T21）的糖化酶基因（glaa）5＇cis调控区片段为探针,采用电泳迁移率变动分析（EMSA）法,从黑曲霉蛋白粗提液中检测到与glaA 5＇调控区特异结合的蛋白因子,并把其结合DNA定位在T21 glaA ... 以糖化酶生产菌株黑曲霉T21（Aspergillus　niger T21）的糖化酶基因（glaa）5＇cis调控区片段为探针,采用电泳迁移率变动分析（EMSA）法,从黑曲霉蛋白粗提液中检测到与glaA 5＇调控区特异结合的蛋白因子,并把其结合DNA定位在T21 glaA 5＇调控区的-374～-344,-484～-414以及-580～-540 bp 3个区段,且此3个结合DNA的片段在EMSA实验中呈现交叉竞争,表明这3个DNA区段可与同一个蛋白因子相结合.以-374～344 bp序列为探针的紫外交联实验表明,该蛋白因子的分子量（或亚基分子量）约为10ku.利用DNase I足印分析确定了此蛋白因子在前两个区段的精细结合部位,并对其结合序列的特性进行了分析. 展开更多

关键词 黑曲霉T21 glaA5′上游调控区DNA 蛋白结合因子 相互作用分析 糖化酶基因 电泳迁移率变动分析 DNaseⅠ足印分析

原文传递

重组腺病毒IκBαM抑制高糖诱导的血管内皮细胞炎症因子的异常分泌 被引量：4

5

作者 肖彧君 李春霖 +2 位作者 刘冰熔 黄爱龙 邓华聪 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2004年第3期259-262,共4页

构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作... 构建携有核因子κB抑制物IκBα的突变体IκBαM的重组腺病毒(AdIκBαM),并感染ECV304血管内皮细胞,采用Westem blot、电泳迁移率变动分析和逆转录-聚合酶链反应等方法研究核因子κB在高浓度葡萄糖刺激的ECV304细胞分泌功能中所起的作用以及阻断其活性对内皮细胞分泌功能的影响。结果发现,高糖能诱导ECV304细胞IκBα的降解和核因子κB的激活,同时上调炎症因子细胞间粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和内皮素1 mRNA表达水平,而感染AdIκBαM的ECV304/IκBαM细胞则能拮抗高糖所致的IκBα降解与核因子κB激活,同时下调这些炎症因子的异常分泌水平。结果提示,核因子κB的激活在高糖所致的内皮细胞分泌功能改变中起中轴作用,抑制核因子κB的活化,有助于改善血管内皮细胞功能。 展开更多

关键词 内科学 重组腺病毒IκBαM抑制血管内皮细胞炎症因子 电泳迁移率变动分析 核因子κB IΚBΑ 血管内皮细胞 炎症因子

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抑制NF-κB活性对糖尿病大鼠肾脏TGF-β1 mRNA表达影响 被引量：2

6

作者 丁鹤林 王佑民 +4 位作者 徐明彤 陈黎红 张少玲 黎锋 傅祖植 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1020-1025,共6页

目的　研究抑制核因子 κB(NF κB)活性对糖尿病大鼠肾脏TGF β1mRNA表达影响。 方法　纯种♂Wistar大鼠分为 3组 :A组为正常对照组 (11只 ) ,B组为糖尿病大鼠未干预组 (11只 ) ,C组为糖尿病大鼠PDTC(NF κB活性抑制剂 )干预组 (9只 )... 目的　研究抑制核因子 κB(NF κB)活性对糖尿病大鼠肾脏TGF β1mRNA表达影响。 方法　纯种♂Wistar大鼠分为 3组 :A组为正常对照组 (11只 ) ,B组为糖尿病大鼠未干预组 (11只 ) ,C组为糖尿病大鼠PDTC(NF κB活性抑制剂 )干预组 (9只 )。饲养 18wk后取出肾脏 :以电泳迁移率变动分析技术检测肾组织NF κB活性 ,透射电镜检测肾小球基底膜厚度及系膜基质密度 (系膜基质面积 /系膜面积 ) ,RT PCR检测TGF β1mRNA表达。酶免疫分析法检测 2 4h尿白蛋白排泄 (UAE)。结果　肾组织NF κB活性在B组大鼠肾组织 (1 85± 0 5 4× 10 6)显著高于A组 (0 0 7± 0 11×10 6,P <0 0 1) ,C组 (0 2 5± 0 2 5× 10 6)显著低于B组 (P <0 0 1)。B组与A组比较 ,UAE (2 18± 1 98mgvs 0 4 1± 0 4 7mg,P <0 0 1)、肾小球基底膜厚度 (5 31 6± 10 7 6nmvs 312 4±2 5 4nm ,P <0 0 1)及系膜基质密度 (5 6 4 1± 6 78vs 33 95±5 2 2 ,P <0 0 1)均显著增高 ;C组大鼠UAE(0 5 6± 0 72 )mg、肾小球基底膜厚度 (315 8± 2 1 4 )nm及系膜基质密度 (37 97±7 37)均显著低于B组 (均P <0 0 1)。肾组织TGF β1mR NA表达在B组大鼠 (0 5 3± 0 2 0 )显著高于A组 (0 2 6±0 13,P <0 0 1) ,C组 (0 2 9± 0 10 )显? 展开更多

关键词 糖尿病肾病 核因子-ΚB TGF-Β1 吡咯烷二硫基甲酸酯 电泳迁移率变动分析

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核因子-κB电泳迁移率变动分析方法的改进 被引量：3

7

作者 蒲泽锦 吴灵飞 《汕头大学医学院学报》 2005年第3期169-171,174,共4页

目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测... 目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测NF-κB的活性。结论:改良的EMSA用于检测NF-κB更简便、实用、敏感性高,值得推广。 展开更多

关键词 电泳迁移率变动分析 核因子-KB 放射自显影术

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原花青素抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE_2生成的机制 被引量：3

8

作者 陈美珺 梁统 周克元 《海南医学院学报》 CAS 2009年第12期1488-1492,1497,共6页

目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫(RIA)法检测原... 目的:观察原花青素对脂多糖诱导RAW264.7细胞PGE2生成的影响及其作用机制。方法:放射免疫法(RIA)检测原花青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞PGE2生成的影响;LPS诱导RAW264.7细胞9h,再加不同浓度原花青素作用30min,放射免疫(RIA)法检测原花青素对COx-2酶活性的影响;半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)法检测原花青素对COx-2 mRNA表达的影响;提取核蛋白,蛋白免疫印迹(western blot)法检测原花青素对NF-κB/p65蛋白表达的影响;电泳迁移率变动分析(EMSA)法检测原花青素对NF-κB与DNA结合活性的影响。结果:0.8,4和20mg·L-1原花青素抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成;0.8,4和20mg·L-1原花青素不影响LPS诱导RAW264.7细胞COx-2酶活性;0.8,4和20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞COx-2 mRNA表达;4,20mg·L-1原花青素下调LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB/p65蛋白表达;0.8,4和20mg·L-1的原花青素可明显降低LPS诱导下RAW264.7细胞的NF-κB活化。结论:原花青素显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞PGE2生成的作用与原花青素抑制COx-2 mRNA表达有关,此作用可能是通过抑制NF-κB/p65蛋白表达和抑制NF-κB的DNA结合活性来实现。 展开更多

关键词 原花青素 环氧化酶-2 前列腺素E2 核转录因子-ΚB 电泳迁移率变动分析

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老年性痴呆相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性分析 被引量：2

9

作者 李中 丘东海 +1 位作者 刘红英 方莹莹 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期5-9,共5页

【目的】分析老年性痴呆(Alzheimer病)相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性(SNP),探讨其基因表达可能的分子调控机制。【方法】扩增nicastrin基因ATG上游约1.0kp启动子区DNA片段,与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组... 【目的】分析老年性痴呆(Alzheimer病)相关基因nicastrin启动子区单核苷酸多态性(SNP),探讨其基因表达可能的分子调控机制。【方法】扩增nicastrin基因ATG上游约1.0kp启动子区DNA片段,与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组质粒的克隆与鉴定,确立启动子区候选功能SNP及其相应位点结合的转录调节因子。应用Lipofectamine 2000对包含功能SNP的重组质粒进行CRL-2137细胞瞬时转染,双荧光素酶相对活性分析及电泳迁移率变动分析。【结果】Nicastrin基因启动子区960 bp DNA片段内存在功能SNP_rs10752637-922 G→T,与其相应位点结合的转录因子为hepatic leukemia factor(HLF),SNP_rs10752637-922 T的序列结构对启动萤火虫荧光素酶报告基因的表达功能较SNP_rs10752637 -922 G的序列结构强(P<0.05,n=3)。【结论】Nicastrin基因核心启动子应该在960 bp DNA片段内,SNP_rs10752637-922 G→T可能是启动子区有功能位点突变,包含rs10752637-922 G/T的核苷酸序列结构可能通过与HLF在内的转录调节因子的作用来实现对nicastrin基因表达差异的调控。 展开更多

关键词 ALZHEIMER病 NICASTRIN 启动子 单核苷酸多态性 电泳迁移率变动分析

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脂质体介导核因子-κB诱捕物寡聚脱氧核苷酸对重症急性胰腺炎大鼠胰腺炎症因子mRNA表达和胰腺损伤的影响 被引量：1

10

作者 钟荣德 周杰 +3 位作者 廖柳清 符方勇 李湘竑 林艺雄 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第8期813-819,共7页

目的:探讨脂质体(liposome)介导核因子-κB (nuclear factorκB,NF-κB)诱捕物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(ODN)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺NF-κB活性及受其调控炎症因子基因mRNA表达和胰腺损伤的影响．方法:除假手术组(n=10)外,其余SD大鼠以... 目的:探讨脂质体(liposome)介导核因子-κB (nuclear factorκB,NF-κB)诱捕物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(ODN)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺NF-κB活性及受其调控炎症因子基因mRNA表达和胰腺损伤的影响．方法:除假手术组(n=10)外,其余SD大鼠以牛磺胆酸钠(STC)诱导建立重症急性胰腺炎模型后,分别于建模后1 h静脉注射裸ODN(n =10)、脂质体／decoy ODN复合物(n=10)、脂质体／scrambled ODN复合物(n=10)和生理盐水(n=10),注射4h应用电泳迁移率变动分析(EMSA)NF-κB的活性,利用逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织ICAM－1,IL－1α,IL-2,TNF-α,VCAM-1 mRNA表达,同时检测血淀粉酶、胰腺组织湿／干重比率和胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)．结果:EMSA显示,脂质体／decoy ODN复合物组NF-κB活性明显低于生理盐水组、脂质体／scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(P<0．05)．RT-PCR结果显示,脂质体／decoy ODN复合物组ICAM-1,IL-1α．IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA表达低于生理盐水组、脂质体／scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(ICAM-1:0．75±0．13 vs 1．39±0．15,1.37±0．16,1.32±0．17, P<0．05;IL-1α:0．64±0．09 vs 1.34±0．20．1．30±0．14,1．25±0．20,P<0．05;IL-2:0．23±0．08 vs 0．74±0．13,0．71±0．12,0．69±0．14,P<0．05; TNF-α:0．41±0．13 vs 1．30±0．17,1．26±0．17, 1．23±0．20,P<0．05;VCAM-1:0．21±0．06vs 0．68±0．13,0．69±0．15,0．63±0．13,P<0．05)．与生理盐水组、脂质体／scrambled ODN复合物组和裸ODN组相比,脂质体／decoy ODN复合物组淀粉酶、胰腺组织湿／干重比率和胰腺组织MPO活性显著性降低(淀粉酶:5093 1．85±22432．15 nkat／L vs 188024．26±38659．56．188412．68±37988．26,183119．95±33636．23 nkat／L,all P<0．05;湿／干重比率:5．76±0．20 vs 6．77±0．18,6．72±0．18,6．35±0．12．P<0．05; MPO活性:46．68±3．00 nkat／g vs 99．02±2．50．98．1 9±2．83,98．52 展开更多

关键词 脂质体 核转录因子 重症急性胰腺炎 诱捕物 胰腺损伤 电泳迁移率变动分析 逆转录-聚合酶链反应

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人A4GNT基因5'调控区的结构和功能分析

11

作者 张牧霞 张瑶 +2 位作者 赵萌 郭晓华 谷玮玮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期955-961,共7页

为探索人α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶(α1,4-N-acetylglucosaminyltransferase,A4GNT)基因表达的调控机制,应用5'cDNA末端快速扩增法和引物延伸法确定了A4GNT基因的转录起始位点.在生物信息学分析的基础上,构建了系列5'缺失荧光... 为探索人α1,4-N-乙酰葡糖胺转移酶(α1,4-N-acetylglucosaminyltransferase,A4GNT)基因表达的调控机制,应用5'cDNA末端快速扩增法和引物延伸法确定了A4GNT基因的转录起始位点.在生物信息学分析的基础上,构建了系列5'缺失荧光素酶报告基因载体和定点突变载体.瞬时转染胃癌细胞MKN45和AGS.荧光素酶活性分析表明,A4GNT基因转录的核心启动子在-141bp～+116bp区域,该区域缺乏典型的TATA盒,但含有CCAAT盒、Sp1和ETS-1等转录因子潜在结合位点.突变分析显示,-136bp～-131bp的Sp1结合位点及-93bp～-89bp正向CCAAT序列对A4GNT启动子转录激活至关重要.电泳迁移率变动分析表明,这两个顺式作用元件能够与转录因子Sp1和NF-Y结合.另外,在-1464bp～-771bp区域可能含有与基因的特异性表达相关的调控元件. 展开更多

关键词 α1 4-N-乙酰葡糖胺转移酶 启动子 荧光素酶报告基因 电泳迁移率变动分析 转录因子

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NKX3.1基因上游一个30bp负调控区结合蛋白的初步鉴定 被引量：1

12

作者 姜安丽 张鹏举 +4 位作者 胡晓燕 贺美兰 陈蔚文 孔峰 张建业 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第5期375-378,共4页

目的:鉴定NKX3.1基因上游30bp负调控区的结合蛋白。方法:人工合成30bp负调控序列,用末端转移酶对其进行地高辛标记;提取细胞核蛋白,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)方法,检测细胞核提取液中与30bp负调控序列特异结合的核蛋白。结果:在LNCa... 目的:鉴定NKX3.1基因上游30bp负调控区的结合蛋白。方法:人工合成30bp负调控序列,用末端转移酶对其进行地高辛标记;提取细胞核蛋白,采用电泳迁移率变动分析(EMSA)方法,检测细胞核提取液中与30bp负调控序列特异结合的核蛋白。结果:在LNCaP细胞及其他不同肿瘤细胞系核提取液中,检测到与30bp负调控序列特异结合的核蛋白,但在不同的细胞系中有不同种类的结合蛋白。结论:NKX3.1基因上游的30bp负调控机制在不同的细胞中普遍存在,不同的细胞核中有不同的结合蛋白,可能涉及不同的调控机理。 展开更多

关键词 DNA结合蛋白 负调控 电泳迁移率变动分析 同源盒基因

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HeLa细胞ezrin基因基本启动子区转录调控元件的鉴定

13

作者 高书颖 李恩民 +3 位作者 崔磊 孟令英 杜则澎 许丽艳 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期721-725,共5页

目的鉴定HeLa细胞中调控ezrin基因基本启动子活性的顺式作用元件,探讨ezrin基因在HeLa细胞的表达调控机制。方法采用碱基定点突变实验和双荧光素酶报告基因分析系统,检测在HeLa细胞中Sp1结合位点(-75/-69,相对于转录起始位点)和AP-1结... 目的鉴定HeLa细胞中调控ezrin基因基本启动子活性的顺式作用元件,探讨ezrin基因在HeLa细胞的表达调控机制。方法采用碱基定点突变实验和双荧光素酶报告基因分析系统,检测在HeLa细胞中Sp1结合位点(-75/-69,相对于转录起始位点)和AP-1结合位点(-64/-58)对人ezrin基因基本启动子活性的影响;采用电泳迁移率变动分析法(EMSA)实验,检测ezrin基因基本启动子区序列与HeLa细胞核蛋白提取物的特异性结合活性。结果在HeLa细胞中,单独删除和置换Sp1结合位点或AP-1结合位点,ezrin基因基本启动子活性降低50%左右;同时置换Sp1结合位点和AP-1结合位点,启动子活性几乎完全丧失。ezrin基因基本启动子序列能够与HeLa细胞核蛋白提取物相结合。结论HeLa细胞中,Sp1结合位点和AP-1结合位点为ezrin基因基本启动子区的重要转录调控元件,有可能存在某种转录因子与之结合,激活ezrin基因转录。 展开更多

关键词 EZRIN基因 基本启动子 电泳迁移率变动分析 定点突变 荧光素酶活性检测

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染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因

14

作者 林艳丽 周艳荣 +6 位作者 阎新龙 熊福银 田利源 吴晓洁 卢建申 邓继先 陈红星 《生物技术通讯》 CAS 2009年第6期776-779,共4页

目的:利用染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因。方法:用甲醛固定胚胎干细胞,利用超声将其染色质随机断裂成0.5～1.0kb的染色质片段,通过免疫沉淀富集与Nanog结合的DNA片段,回复交联后分离纯化DNA片段,最终用凝胶迁移阻滞... 目的:利用染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因。方法:用甲醛固定胚胎干细胞,利用超声将其染色质随机断裂成0.5～1.0kb的染色质片段,通过免疫沉淀富集与Nanog结合的DNA片段,回复交联后分离纯化DNA片段,最终用凝胶迁移阻滞实验验证Nanog与DNA片段的结合。结果:我们发现fzr为Nanog调控的目的基因,并通过电泳迁移率变动分析证明了二者的结合。结论:Fzr在细胞周期调控中发挥重要作用,这为阐明Nanog的作用机理奠定基础。 展开更多

关键词 NANOG 染色质免疫沉淀 fzr基因 电泳迁移率变动分析

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禽类转录因子与DNA互作的研究方法

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作者 孙婴宁 王维禹 +3 位作者 贾炳豪 盛和宇 于志丹 王宁 《中国家禽》 北大核心 2017年第21期51-55,共5页

在禽类生长发育中,基因的适时适量表达起到至关重要的作用。研究转录因子与DNA的互作,对认识禽类生长发育过程具有重要意义。文章总结了禽类常用的转录因子与DNA互作研究方法,其中:生物信息学预测结合位点有助于针对性的开展后续研究;... 在禽类生长发育中,基因的适时适量表达起到至关重要的作用。研究转录因子与DNA的互作,对认识禽类生长发育过程具有重要意义。文章总结了禽类常用的转录因子与DNA互作研究方法,其中:生物信息学预测结合位点有助于针对性的开展后续研究;电泳迁移率变动分析(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)能够分别从体外和体内验证转录因子与DNA结合;双荧光素酶报告基因可以鉴定对转录活性的影响。综合运用上述方法可有效开展转录因子-DNA互作研究,有助于揭示禽类生长发育调控机制。 展开更多

关键词 转录因子 DNA 生物信息学预测 电泳迁移率变动分析 染色质免疫共沉淀

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核转录因子-κB在不同宫颈组织中的活性及意义

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作者 严兆华 张团英 陈旭 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第14期2511-2512,共2页

目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)在宫颈癌中的活性及意义。方法:应用电泳迁移率变动分析方法(EMSA)检测宫颈癌、慢性宫颈炎和正常宫颈组织中的NF-κB活性。结果:宫颈癌中NF-κB活性明显高于慢性宫颈炎和正常宫颈组织(P<0.01);肿瘤... 目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)在宫颈癌中的活性及意义。方法:应用电泳迁移率变动分析方法(EMSA)检测宫颈癌、慢性宫颈炎和正常宫颈组织中的NF-κB活性。结果:宫颈癌中NF-κB活性明显高于慢性宫颈炎和正常宫颈组织(P<0.01);肿瘤细胞分化程度越低,其NF-κB活性越高(P<0.05);伴淋巴结转移者亦比不伴转移者显著增高(P<0.01)。结论:NF-κB的活性与宫颈癌的发生、发展密切相关。其机制可能为NF-κB能调控肿瘤细胞的分化和转移。 展开更多

关键词 宫颈肿瘤 核转录因子-ΚB 电泳迁移率变动分析

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甲状腺转录因子-1融合表达载体的构建及体外活性鉴定

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作者 程烽 盛燕 +5 位作者 潘春明 陈漪 施静艺 刘智 白雪涛 宋怀东 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期1-4,共4页

目的:构建人甲状腺转录因子-1(TTF1)编码基因的真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)C-TTF1,并观察其蛋白质体外转录翻译情况。方法:据已知的TTF1基因序列,应用巢式PCR技术,从人肺腺癌细胞株SPC-A1中扩增出TTF1基因,通过TA连接将其克隆入pGE... 目的:构建人甲状腺转录因子-1(TTF1)编码基因的真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)C-TTF1,并观察其蛋白质体外转录翻译情况。方法:据已知的TTF1基因序列,应用巢式PCR技术,从人肺腺癌细胞株SPC-A1中扩增出TTF1基因,通过TA连接将其克隆入pGEM-T-easy载体,经测序鉴定后,双酶切插入真核表达质粒pcDNA3.1/myc-His(-)C中;重组质粒经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切鉴定后,进行蛋白质体外翻译观察TTF1体外表达情况,用电泳迁移率变动分析(EMSA)验证获得的体外翻译蛋白TTF1是否具有与下游靶基因UGRP1启动子结合的能力。结果:成功构建了含TTF1编码基因的真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)C-TTF1,并能在体外表达TTF1蛋白。结论:能方便地获得TTF1体外翻译蛋白,为进一步研究TTF1蛋白与相应的DNA反应元件及其他转录因子的相互作用奠定了基础。 展开更多

关键词 甲状腺转录因子-1 真核表达 转录翻译 电泳迁移率变动分析

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八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导大鼠肺组织NF-κB活性增高的抑制作用 被引量：26

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作者 丛斌 凌亦凌 +2 位作者 谷振勇 王俊霞 姚玉霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期615-618,I001,共5页

目的与方法 :为探讨八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)防治内毒素引起急性肺损伤的分子作用机理 ,用电泳迁移率变动分析技术 (EMSA) ,观察CCK - 8对脂多糖 (LPS)诱导核转录因子κB(NF -κB)活性变化的影响 ,用光密度扫描电泳谱带峰面积积分值表... 目的与方法 :为探讨八肽胆囊收缩素 (CCK - 8)防治内毒素引起急性肺损伤的分子作用机理 ,用电泳迁移率变动分析技术 (EMSA) ,观察CCK - 8对脂多糖 (LPS)诱导核转录因子κB(NF -κB)活性变化的影响 ,用光密度扫描电泳谱带峰面积积分值表示NF -κB活性 ,观察肺组织的病理学变化。结果 :LPS入血可以明显引起大鼠肺组织的NF -κB活性 16 39 92± 198 6 3(P <0 0 1) ,显著高于对照组 (5 93 5 6± 89 34) ,此作用为预先静脉注入CCK - 8部分逆转 ,NF -κB活性低至 82 3 91± 97 32 (P <0 0 1) ,CCK - 8可减轻LPS引起的肺组织病理学变化。结论 :CCK -8对LPS激活肺组织NF 展开更多

关键词 NF-KAPPAB 脂多糖类 急性肺损伤 电泳迁移率变动分析技术 八肽胆囊收缩

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人成纤维细胞转录因子Sp1Sp3对p16^(INK4a)基因的调控 被引量：4

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作者 吴军峰 童坦君 张宗玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期88-93,共6页

p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5... p16 INK4a是一种细胞周期蛋白依赖激酶 (cdk)的抑制因子 ,它通过抑制cdk4与cdk6的活性 ,使视网膜母细胞瘤抑制蛋白Rb处于低磷酸化状态 ,从而使细胞阻滞于G1期 .对p16 INK4aATG上游 6 2 2bp片段进行序列分析发现 ,该区域富含GC ,其中有 5个GC盒 (分别命名为GC Ⅰ～GC Ⅴ ) .将上述片段插入到荧光素酶报告载体pGL3 Basic ,分别对 5个GC盒进行点突变后转染人胚肺二倍体成纤维细胞 (2BS)发现 ,Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ位点的突变体显著下调p16 INK4a启动子的活性 ,而Ⅲ、Ⅴ位点突变体无明显作用 .电泳迁移率变动分析 (EMSA)证实 ,GC Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅳ能与转录因子Sp1和Sp3结合 ,而且结合条带可被转录因子Sp1和Sp3的抗体所拮抗 .共转染Sp1有助于增加启动子的活性 ,而共转染Sp3则有较弱的抑制作用 ,证明p16 INK4a的转录受到Sp1与Sp3的调控 . 展开更多

关键词 人成纤维细胞转录因子Sp1/Sp3 人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS) 电泳迁移率变动分析(EMSA) 细胞周期蛋白依赖激酶(cdk)

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抗人TNF单克隆抗体对TNF诱导的NF-κB核转位的抑制作用 被引量：6

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作者 朱参胜 欧阳为明 +3 位作者 刘雪松 梁晓聪 宋朝君 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期585-587,共3页

目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电... 目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测核提取液中NF κB的核转位。结果 :3株抗TNFmAb均可抑制TNF诱导的ECV30 4细胞中NF κB的核转位。其中mAbD2的抑制作用最强 ,其次为mAbF6和E6 ,无关对照抗体也有一定的非特异性反应。抑制作用与加入的mAb呈良好的剂量依赖关系 ,在 10mg/L和 0 .1mg/L条件下 ,mAbD2的抑制率分别为 94 .2 %和75 .1% ,mAbE6分别为 6 4 .9%和 2 8.6 % ,mAbF6分别为 70 .3%和 4 9.5 % ,无关对照抗体分别为 2 0 .0 %和 11.1%。结论 :mAbD2、E6和F6可特异性地抑制TNF诱导的NF κB核转位 。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 单克隆抗体 NF-ΚB 电泳迁移率变动分析(EMSA)

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