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辛温解表三方体内抗甲1(H1N1)亚型流感病毒的实验研究 被引量:6
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作者 盛丹 黎敬波 刘进 《现代中西医结合杂志》 CAS 2007年第1期25-27,共3页
目的探讨《伤寒论》治疗太阳病的辛温解表三方桂枝汤、麻黄汤、桂枝麻黄各半汤在体内抗甲1亚型流感病毒的作用。方法用甲1亚型流感病毒FM1株建立小鼠流感动物模型。实验小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、病毒唑组、桂枝汤组、麻黄... 目的探讨《伤寒论》治疗太阳病的辛温解表三方桂枝汤、麻黄汤、桂枝麻黄各半汤在体内抗甲1亚型流感病毒的作用。方法用甲1亚型流感病毒FM1株建立小鼠流感动物模型。实验小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、病毒唑组、桂枝汤组、麻黄汤组、桂枝麻黄各半汤组,分别观察上述三方对小鼠病毒性肺炎及其生存的影响。结果以肺指数为评价指标,桂枝汤组、麻黄汤组、桂枝麻黄各半汤组分别与模型对照组相比有显著性差异(P<0.01);三方各组之间比较以及三方各组和病毒唑组比较无显著性差异。不同处理组间死亡数和存活时间除麻黄汤组与病毒唑组比较有显著性差异外(P<0.05),其余各组间无显著性差异。结论三方在体内均有抗甲1亚型流感病毒小鼠肺炎的作用,但三方的疗效并无差异性。麻黄汤与病毒唑的疗效相比有显著性差异。三方对小鼠感染甲1亚型流感病毒FM1株的死亡保护作用和延长生命作用均不明显。 展开更多
关键词 桂枝汤 麻黄汤 桂枝麻黄各半汤 1(h1n1)亚型流感病毒 流感病毒性肺炎
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不同治法体内抗甲3(H_3N_2)亚型流感病毒作用的实验研究 被引量:6
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作者 盛丹 黎敬波 +1 位作者 杨子峰 朱宇同 《河南中医》 2007年第2期25-27,共3页
目的:探讨辛凉解表、辛温解表及祛湿解表等不同治法在体内抗甲3(H3N2)亚型流感病毒的作用。方法:三种治法的代表方分别选择银翘散、桂枝麻黄各半汤和新加香薷饮,设正常对照组、阳性药物(病毒唑)组和三种治法组,分别观察不同治法对甲3(H3... 目的:探讨辛凉解表、辛温解表及祛湿解表等不同治法在体内抗甲3(H3N2)亚型流感病毒的作用。方法:三种治法的代表方分别选择银翘散、桂枝麻黄各半汤和新加香薷饮,设正常对照组、阳性药物(病毒唑)组和三种治法组,分别观察不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎的影响,对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用。结果:以肺指数为评价指标,三种不同治法组与模型对照组相比(P<0.01),差异有统计学意义;三种不同治法组之间比较以及三种不同治法组和阳性药物组之间比较,差异无统计学意义。不同处理组间死亡率比较和不同处理组间存活时间的比较,差异无统计学意义。结论:三种不同治法对甲3(H3N2)亚型流感病毒小鼠肺炎均有抑制作用,但三种不同治法之间以及三种不同治法和阳性药物之间作用并无差异性。三种治法对小鼠感染甲3(H3N2)亚型流感病毒的死亡保护作用和延长生命作用均不明显。 展开更多
关键词 银翘散 桂枝麻黄各半汤 新加香薷饮 3(h3n2)亚型流感病毒 小鼠
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长沙A(H1N1)亚型季节性流感暴发疫情的实验室诊断及其HA基因特性分析 被引量:1
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作者 宋克云 张如胜 欧新华 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1865-1870,共6页
对2009年长沙麓山国际学校流感暴发疫情进行实验室诊断,并探索新分离的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素(HA)的基因特性。对流感暴发疫情的25份鼻/咽拭子标本进行RT—PCR检测和流感病毒分离,然后利用CEQ8000Genetic Analysis System对... 对2009年长沙麓山国际学校流感暴发疫情进行实验室诊断,并探索新分离的A(H1N1)亚型流感病毒血凝素(HA)的基因特性。对流感暴发疫情的25份鼻/咽拭子标本进行RT—PCR检测和流感病毒分离,然后利用CEQ8000Genetic Analysis System对病毒分离株(A/Yuelu/314/2009)进行测序,测序结果提交至GenBank(登录号:FJ912843)并用ClustalX和Mega4.1软件进行序列分析。结果显示,分离出A(H1N1)亚型流感毒株18株,检出21份A(H1N1)亚型流感病毒核酸阳性:A/Yuelu/314/2009(H1N1)HA基因序列与2008~2009年疫苗株(A/Brisbane/59/2007)比较显示:核苷酸和氨基酸同源性均为99%,有6个位点的氨基酸发生了变异(V148A、S158N、G202A、1203D、A206T、W435R),其中一个S158N氨基酸变异位于B抗原表位,HA基因序列上共有潜在糖基化位点9个(27、28、40、71、151、176、303、497、536),与A/Brisbane/59/2007相同且氨基酸序列保守。本实验诊断出此次流感暴发疫情的病原体为A(H1N1)型季节性流感病毒,研究还发现A/Yuelu/314/2009(H1N1)长沙分离株与A/Brisbane/59/2007疫苗株基因序列比较显示并未形成一个新的变种,推测是由于分离株与疫苗株之间基因特性的改变和人群对A(H1N1)亚型流感病毒免疫力降低导致了此次长沙麓山国际学校A(H1N1),亚型流感的暴发。 展开更多
关键词 A(h1n1)亚型流感病毒 实验室诊断 血凝素 基因特性
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逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)在H5N1禽流感病毒基因检测中的应用 被引量:47
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作者 李启明 马学军 +3 位作者 高寒春 周蕊 匡治州 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期178-184,共7页
建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测。该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应。对51份实验感染动物及病毒培养标本的... 建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测。该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应。对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT-LAMP检测,并以SYBR Green I为反应指示剂进行了逆转录环介导等温核酸扩增技术,对该反应进行实时监控,经对扩增产物做内切酶验证和测序分析,证明RT-LAMP技术的特异性;同时,用10倍系列稀释的RNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示:利用RT-LAMP技术成功检测到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因区,且RT-LAMP与Real-time PCR结果呈现很好的一致性。此方法的灵敏度可达到能检测10个拷贝RNA分子水平。因此,RT-LAMP技术应用于H5N1亚型禽流感病毒的快速检测是一种可行的方法。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 逆转录环介导等温核酸扩增技术 实时监控
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素基因的原核表达及间接ELISA方法的初步建立 被引量:21
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作者 郑其升 张晓勇 +2 位作者 刘华雷 李鹏 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期58-61,共4页
根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素 (HA)基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因 ,将该片段定向插入到原核表达载体pET_32a(+)中 ,构建原核表达载体pET_HA1。阳性质粒转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱... 根据GenBank公布的H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素 (HA)基因序列设计引物 ,用PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒HA1基因 ,将该片段定向插入到原核表达载体pET_32a(+)中 ,构建原核表达载体pET_HA1。阳性质粒转化宿主菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导 ,HA1基因获得表达 ,重组蛋白以包涵体的形式存在。通过改变IPTG的浓度和诱导时间 ,确定了表达HA1基因的最佳诱导条件 :IPTG终浓度为 0 8mmol L ,诱导时间为 3h。Westernblot分析表明表达产物具有良好的免疫学活性。以纯化的表达产物作为诊断抗原建立了检测H5亚型AIV抗体的iHA_ELISA方法。结果表明 ,抗原的最佳包被浓度为 4 μg mL ,血清的最佳稀释度为 1∶2 0 0 ,阳性标准初步定为 :OD待检血清>0 5 ,且OD待检血清 OD阴性血清 >2。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 血凝素基因 原核表达 ihA—ELISA
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神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对H5N1亚型禽流感病毒生物学特性的影响 被引量:14
6
作者 王曲直 龙进学 +2 位作者 胡顺林 吴艳涛 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期542-546,共5页
近年来H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道,突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术,拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1/PR8重组AIV。重组病毒的内... 近年来H5N1亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)茎部15—20个氨基酸的自发缺失时有报道,突变对于AIV生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术,拯救获得5株具有不同NA茎部长度的H5N1/PR8重组AIV。重组病毒的内部基因和血凝素(HA)基因来源相同,NA基因来源不同,并在NA茎部进行20个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现,5株重组病毒在SPF鸡胚中繁殖良好,其EID50、MDT和平均病毒滴度相似;NA茎部长短影响病毒的解凝能力,长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强;NA茎部15或20个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力,短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的10。100倍,释放时间提前6.10h,短茎病毒在MDCK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示了AIVNA茎部氨基酸缺失突变的生物学意义,NA茎部15或20个氨基酸删除突变增强了AIV的细胞适应性,可能与现阶段H5N1亚型AIV宿主范围进一步扩大有关。利用反向遗传技术成功拯救了5株H5N1/PR8重组流感病毒,为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIVNA茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在MDCK细胞上的繁殖产量,为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 神经氨酸酶茎部 氨基酸删除突变 反向遗传操作技术
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金丝桃素蛋白络合物体外抗H5N1亚型禽流感病毒的活性研究 被引量:18
7
作者 赵晓虹 梁剑平 +5 位作者 祝艳华 尚若锋 王雯慧 崔颖 罗永江 王学江 《中兽医医药杂志》 2006年第3期13-15,共3页
用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N... 用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒同时给药、给药后接种病毒、先感染病毒后给药三种方式,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡胚的保护率,观察金丝桃素蛋白络合物的抗H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明,①药物在体外与病毒作用一段时间后再将其混悬液接种鸡胚,药物浓度在0.5mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,同时给药组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;②在感染病毒前给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达100%,药物组的血凝效价显著降低,与对照组相比差异极显著;③先感染病毒后给药,药物浓度在2mg/ml以上时,对感染鸡胚的保护率达88.9%,血凝效价明显降低,与对照组相比差异显著。同时,在此种方式下,药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性,适当提高药物浓度,可以增强其抗病毒活性。 展开更多
关键词 金丝桃素蛋白络合物 h5n1亚型流感病毒 血凝效价 保护率
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H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株的全基因克隆及序列分析 被引量:13
8
作者 龙进学 王曲直 +2 位作者 卢建红 刘玉良 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期690-696,共7页
应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷... 应用流感病毒通用引物[4]和H5N1亚型禽流感(Avian influenza virus,AIV)的型特异性引物,成功的扩增出H5N1亚型禽流感病毒A/duck/Shandong/093/2004株(简称A/D/SD/04)的全基因序列(包括5′和3′端的非编码区序列).A/D/SD/04的基因组核苷酸全序列与18株网上公布的禽流感基因序列进行比较和分析,结果与4株鸭源H5N1的5~7个基因具99%以上的同源性;与14株H5N1有至少一个以上内部基因同源性在95%以上.与H9亚型AIV代表株A/Quail/Hongkong/G1/97(简称G1株)和A/Chicken/Beijing/1/94(简称BJ94)比较,除了非结构基因(Nonstructural gene,NS)与G1株的同源性为95.3%外,其余基因均在36.6%~92.1%之间.说明A/D/SD/04没有H9N2基因的直接整合,是H5N1毒株在自然界的重组株.推导的HA氨基酸序列分析,A/D/SD/04 的血凝素(Heamgglutinin,HA)裂解位点与比较的16株AIV的序列一致,是高致病性禽流感的分子特征(PQRERRRKKR/G),第226位氨基酸是对禽类和哺乳细胞均具有亲嗜性的蛋氨酸(Met).神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)在第48位氨基酸(颈部)后有20个氨基酸的缺失,但非结构蛋白(NS)没有在79~84氨基酸发生缺失.碱性聚合酶2(PB2)的627位氨基酸是亲禽类细胞的谷氨酸(Glu,E).结合生物学特性和分子特征,A/D/SD/04对小鼠的致病力是由多种因素决定,其可能是一株对鸡高度致病,并逐渐获得对哺乳动物致病能力的中间重组病毒. 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 通用引物 全基因组序列 序列分析
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H5N1亚型禽流感病毒NS第263~277位核苷酸缺失提高病毒对鸡的致病力 被引量:11
9
作者 龙进学 薛峰 +2 位作者 彭宜 顾敏 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期301-305,共5页
为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义,构建H5N1A/D/SD/04株HA、NA、NS的全基因表达/转录载体,以及NS的删除突变载体(m248),A/D/YZ/04株的NS基因表... 为研究2000年以来绝大多数H5N1亚型禽流感病毒分离株在非结构基因的第263—277位发生15个碱基缺失现象的生物学意义,构建H5N1A/D/SD/04株HA、NA、NS的全基因表达/转录载体,以及NS的删除突变载体(m248),A/D/YZ/04株的NS基因表达/转录载体(848)和其补加15个核苷酸的NS突变载体(m848)。构建的载体分别与编码WSN(H1N1)内部基因载体进行组合转染,拯救获得4个具不同NS的重组的H5N1亚型流感病毒:RWSN-848和RWSN—m248在263-277位缺失15个碱基。RWSN-m848和RWSN-248则在相同位置不发生缺失。4个重组病毒的平均鸡胚繁殖效价(HA)、鸡胚的平均死亡时间(MDT)和鸡胚半数感染量(EID50)均无显著差异;但RWSN-848和RWSN-m248对6周龄SPF鸡的致病力明显高于RWSN—m848和RWSN-248。结果说明H5N1的NS基因在263~277位核苷酸发生缺失后,不影响重组H5N1在鸡胚中的繁殖性能,但提高了病毒对鸡的致病力。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 病毒拯救 突变 非结构基因nS 病毒蚀斑形成单位
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H5N1亚型禽流感病毒拯救体系的建立 被引量:10
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作者 龙进学 吴艳涛 +2 位作者 张小荣 王曲直 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期55-59,共5页
选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒,在完成了全基因组序列测定基础上,设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接,构建A/SD/04的8个基因的拯救... 选择鸡胚高产的鸭源H5N1亚型禽流感病毒A/Duck/Shandong/093/2004株作为骨架病毒,在完成了全基因组序列测定基础上,设计合成的11对引物对病毒的8个基因分11段进行扩增。通过与转录载体PHW2000连接,构建A/SD/04的8个基因的拯救载体,经测序获得序列准确的拯救质粒:241、242、243、244、245、246、247和248。A/SD/04的8质粒与PR8(H1N1)进行不同组合的拯救,获得8个均含A/SD/04HA基因的H5重组流感病毒。鸡胚尿囊液中重组病毒的血凝效价在2^8-2^10,EID50在10^-8.5 - 10^-9之间,MDT在34~46h之间,均与野生A/SD/04(wt A/SD/04)相似。重组病毒对6周龄的SPF鸡的静脉接种指数(IVPI)与wt A/SD/04却有明显的差异,说明不同组合的内部基因影响病毒对鸡的致病力,但不影响病毒的鸡胚致死能力、对鸡胚的感染能力和病毒在鸡胚中的繁殖能力。构建的A/SD/04的8个质粒拯救系统,为H5NI的基因功能研究和新型疫苗开发奠定基础。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 8质粒拯救系统 病毒拯救 重组病毒
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H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究 被引量:10
11
作者 温景芸 张扣兴 +10 位作者 廖明 罗开健 任涛 辛朝安 黄韧 刘忠华 缪开源 金剑萍 刘香梅 郑巧花 张谱华 《热带医学杂志》 CAS 2006年第1期5-7,F0003,共4页
目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相... 目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 动物 致病性 小鼠
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H5N1亚型禽流感病毒的流行与致病性 被引量:10
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作者 孙洪磊 刘金华 《生命科学》 CSCD 2015年第5期525-530,共6页
H5N1禽流感病毒在禽类中广泛流行,对家禽养殖业造成严重经济损失。1997年香港地区首次出现人感染H5N1禽流感病例,2003年之后多个国家相继出现H5N1禽流感病毒感染人事件,目前已有16个国家650人感染发病,患者死亡率高达60%以上。随着H5N1... H5N1禽流感病毒在禽类中广泛流行,对家禽养殖业造成严重经济损失。1997年香港地区首次出现人感染H5N1禽流感病例,2003年之后多个国家相继出现H5N1禽流感病毒感染人事件,目前已有16个国家650人感染发病,患者死亡率高达60%以上。随着H5N1禽流感病毒的持续流行与进化,该病毒仍然对公共卫生具有严重威胁。综述了H5N1禽流感病毒的进化特点、流行情况以及致病性。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 流行性 传播性 致病性
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共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗的小鼠免疫评价(英文) 被引量:7
13
作者 郭建强 姚立红 +4 位作者 陈爱珺 刘晓宇 付金奇 徐鹏卫 张智清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期876-883,共8页
为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c... 为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14 d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组腺病毒载体疫苗,每次免疫前及末次免疫后14 d采集小鼠血清用于检测体液免疫应答,末次免疫后14 d采集小鼠脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝抑制(HI)实验和ELISA实验检测到免疫后小鼠血清中抗H5N1亚型流感病毒特异性IgG抗体。ELISPOT实验检测到免疫后小鼠针对M1和HA的特异性细胞免疫应答。共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗在小鼠体内的免疫学评价,为研究开发新型重组流感疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 基质蛋白1 血凝素(hA) 共表达 联合免疫
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H1N1亚型猪流感病毒HA基因的表达及单克隆抗体的制备 被引量:7
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作者 张祥斌 谢青梅 +4 位作者 马静云 曹永长 冀君 李少璃 毕英佐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期962-967,共6页
采用RT-PCR方法扩增了H1N1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的血凝素(HA)基因,测序后对HA基因进行了生物信息学分析。将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上,成功构建重组表达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进... 采用RT-PCR方法扩增了H1N1亚型猪流感病毒(SIV)广东株的血凝素(HA)基因,测序后对HA基因进行了生物信息学分析。将HA基因克隆到高效可溶表达载体pBCX上,成功构建重组表达质粒pBCX-HA。将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达。诱导表达的HA融合蛋白分子质量约为94.0 ku,表达产物占菌体总蛋白的29.5%。经Western-blot分析证实可溶表达的融合蛋白与H1N1亚型猪流感病毒阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的HA融合蛋白作包被抗原用于猪流感病毒单克隆抗体的筛选,成功筛选到2株针对HA蛋白抗原表位的单克隆抗体;ELISA结果表明,制备的SIV单克隆抗体ⅢF6A4C10与H1N1亚型SIV抗原具有特异的免疫反应性,为H1N1 SIV的鉴别诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 h1n1亚型流感病毒 血凝素 高效可溶表达 单克隆抗体
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H5N1亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备及其应用 被引量:4
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作者 龙进学 郝贵杰 +1 位作者 唐应华 刘秀梵 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第6期450-454,共5页
采用活病毒免疫,常规杂交瘤融合的方法,获得了4株针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Shandong/093/2004(A/D/SD/04)株血凝素(HA)的单克隆抗体A8E8、D2F8、A8C8和C3G4。其中A8E8可以与11株不同来源的H5N1AIV发生交叉免疫抑制性反应(HI)... 采用活病毒免疫,常规杂交瘤融合的方法,获得了4株针对H5N1亚型禽流感病毒(AIV)A/duck/Shandong/093/2004(A/D/SD/04)株血凝素(HA)的单克隆抗体A8E8、D2F8、A8C8和C3G4。其中A8E8可以与11株不同来源的H5N1AIV发生交叉免疫抑制性反应(HI),具有广谱性。采用间接免疫荧光试验(IFA),用A8E8单克隆抗体测定A/D/SD/04株对COS1和MDCK2种细胞的半数感染量(TCID50),结果显示,A/D/SD/04株在COS1上的TCID50为10-5.33/0.1mL,在MDCK上的为10-7.33/0.1mL。将编码A/D/SD/04株的HA基因质粒与PR8质粒共转染COS1细胞后,用A8E8进行IFA,能观察到特异性绿色荧光,这与鸡胚接种结果相符。表明,用此单克隆抗体能准确地检测到H5重组病毒。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 血凝素 单克隆抗体 制备 间接免疫荧光试验
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H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状及应用前景 被引量:7
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作者 冯书营 董仕桢 张树逍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期208-213,共6页
H5N1亚型禽流感病毒是目前发现的禽流感病毒中感染性最强、致死率最高、流行最广的一类病毒,该病毒已在世界上多个国家发生流行,给禽类养殖业带来了巨大的经济损失。当前针对该病尚无高效特异的治疗方法,进行疫苗的接种是目前最为有效... H5N1亚型禽流感病毒是目前发现的禽流感病毒中感染性最强、致死率最高、流行最广的一类病毒,该病毒已在世界上多个国家发生流行,给禽类养殖业带来了巨大的经济损失。当前针对该病尚无高效特异的治疗方法,进行疫苗的接种是目前最为有效的预防措施和关键环节。因此,研制安全、高效、廉价的新型疫苗成为当前禽流感防制工作的热点之一,且取得了大量的研究成果。作者从禽流感病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗和RNAi技术应用等方面对H5N1亚型禽流感病毒疫苗的研究现状作一综述,归纳出该领域中存在的问题和不足,并对禽流感疫苗的应用前景作一展望,以期为深入进行禽流感的防制研究提供参考。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 疫苗 研究现状 前景
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H5N1禽流感病毒感染雏鸡免疫器官细胞因子的变化 被引量:7
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作者 郑世民 高雪丽 +1 位作者 刘超男 刘明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期755-760,共6页
为探讨细胞因子在禽流感免疫发病机制中的作用,应用细胞培养技术和细胞因子活性检测方法,通过对胸腺和脾脏IL-2、IFN和TNF3种细胞因子的检测,研究不同日龄(7和21日龄)SPF雏鸡感染禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)后,上述被检指标... 为探讨细胞因子在禽流感免疫发病机制中的作用,应用细胞培养技术和细胞因子活性检测方法,通过对胸腺和脾脏IL-2、IFN和TNF3种细胞因子的检测,研究不同日龄(7和21日龄)SPF雏鸡感染禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)后,上述被检指标的动态变化,结果发现,无论是7日龄,还是21日龄SPF雏鸡感染AIV后,其免疫器官胸腺和脾脏的IL-2和IFN诱生活性均有不同程度的降低,而TNF活性升高;但不同日龄雏鸡之间被检细胞因子,其降低或升高程度不论持续时间还是量也不完全相同,该研究不但表明细胞因子在禽流感免疫、发病中具有十分重要的调节作用,而且也与雏鸡感染年龄存在一定相关性。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 雏鸡 免疫器官 细胞因子
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1株H5N1亚型高致病力禽流感病毒人工感染鸭的细胞凋亡观察 被引量:7
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作者 李玉谷 叶远兰 +4 位作者 崔聪颖 周泉鹤 张媛 马勇江 李楚宣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1069-1073,共5页
TUNEL染色法和透射电镜观察表明,鸭静脉接种或眼-鼻-口腔-泄殖腔混合接种高致病力禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004(H5N1)后,心、肝、脾、肺、肾、胰、肠、脑、胸腺和法氏囊均可发生细胞凋亡。其中,凋亡主要发生在胰腺泡上皮细胞、... TUNEL染色法和透射电镜观察表明,鸭静脉接种或眼-鼻-口腔-泄殖腔混合接种高致病力禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004(H5N1)后,心、肝、脾、肺、肾、胰、肠、脑、胸腺和法氏囊均可发生细胞凋亡。其中,凋亡主要发生在胰腺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞和肠黏膜上皮细胞;也有少量神经元、神经胶质细胞、心肌细胞、呼吸毛细管上皮细胞,胸腺、脾脏和法氏囊淋巴细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 细胞凋亡
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全球禽流感研究的发展态势:文献计量分析 被引量:5
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作者 陈大明 毛开云 江洪波 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期607-611,共5页
目的从文献计量的角度研究全球禽流感研究的发展态势。方法检索ISI Web of Science的SCI-E数据库,利用TDA分析工具和文献引用树的分析方法对检索结果进行分析。结果得益于美国、中国等国家研究者的努力,自2005年以来全球禽流感研究快速... 目的从文献计量的角度研究全球禽流感研究的发展态势。方法检索ISI Web of Science的SCI-E数据库,利用TDA分析工具和文献引用树的分析方法对检索结果进行分析。结果得益于美国、中国等国家研究者的努力,自2005年以来全球禽流感研究快速增长。从研究质量上看,日本和荷兰在国际研究项目的支持下,表现十分抢眼。美国、日本和荷兰完成的H5N1病毒突变研究是近年来该领域的典型研究成果,但也引发了不少争议。结论全球关于H7N9等亚型的禽流感病毒研究有待进一步加强。 展开更多
关键词 流感 h5n1亚型流感病毒A型 h7n9亚型流感病毒A型 文献计量学
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H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白在水稻胚乳中的表达及其纯化
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作者 屈小天 王雅楠 +4 位作者 许倩茹 李雪洋 张申立 张二芹 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2024年第3期125-132,共8页
为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将... 为制备H5N1亚型禽流感病毒HA蛋白并评估其免疫原性,利用水稻表达系统表达H5N1亚型禽流感病毒重组HA蛋白。首先构建了重组植物表达载体pCAMBIA1300-HA,该载体具有GT13特有启动子、信号肽SP和终止子,有利于外源基因在水稻中表达。之后将重组质粒pCAMBIA1300-HA通过电转化法导入根癌农杆菌EHA105中,筛选出阳性菌落并侵染水稻愈伤组织。经过暗培养、潮霉素筛选、分化、生根、成苗,采用CTAB法提取水稻叶片DNA,PCR鉴定结果显示,HA基因已插入到水稻基因组中,重组HA基因大小为4660 bp。将阳性植株移植到大田中,4个月后收获水稻种子,提取水稻胚乳蛋白,Western blot鉴定结果表明,HA蛋白在水稻胚乳中成功表达。重组HA蛋白通过Q阴离子层析、疏水层析和凝胶过滤层析三步分离纯化,其纯度达到90%以上。最后将纯化后的重组HA蛋白与ISA 50V佐剂混合并乳化制成疫苗,免疫小鼠,小鼠血清具有较高的特异性抗体水平,表明重组HA蛋白免疫原性较好。综上,成功构建了H5N1亚型禽流感病毒HA重组蛋白的水稻表达系统,并分离纯化获得了高纯度和免疫原性良好的重组HA蛋白。 展开更多
关键词 h5n1亚型流感病毒 hA蛋白 水稻胚乳表达 蛋白质纯化
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