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无刺激周期未成熟卵母细胞体外培养用于多囊卵巢综合征不孕患者治疗的临床观察 被引量：22
1
作者 李媛 姜晶晶 +4 位作者 马水英 李梅 胡京美 赵力新 陈子江 《中华妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期388-391,共4页
目的探讨无刺激周期未成熟卵母细胞体外培养在治疗多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者的应用价值。方法对70例PCOS患者,在人工周期或自然周期第10～12天行阴道B超监测,如双侧卵巢中无直径>8mm的卵泡,即肌内注射人绒毛膜促性腺激素10000IU,... 目的探讨无刺激周期未成熟卵母细胞体外培养在治疗多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者的应用价值。方法对70例PCOS患者,在人工周期或自然周期第10～12天行阴道B超监测,如双侧卵巢中无直径>8mm的卵泡,即肌内注射人绒毛膜促性腺激素10000IU,36h后经阴道穿刺取卵,将取出的未成熟卵母细胞进行体外成熟及体外受精胚胎移植。结果共进行体外成熟周期94个,移植周期75个。共获得卵母细胞1283个,获得成熟838个(65.3%,838/1283),其中受精553个(66.0%,553/838),获得胚胎402个(48.0%,402/838),获得优质胚胎199个(23.7%,199/838)。生发泡期卵母细胞的成熟率、受精率、获得胚胎率及优质胚胎率,分别为67.7%、66.4%、47.6%及24.1%;第1次减数分裂中期的卵母细胞,分别为69.7%、71.7%、52.2%及26.1%,生发泡期与第1次减数分裂中期比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。无法评价的卵母细胞的成熟率、受精率、获得胚胎率及优质胚胎率,分别为44.8%、53.8%、46.2%及16.9%,与生发泡期及第1次减数分裂中期比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。75个移植周期中,18例获得临床妊娠,妊娠率为24%(18/75)。结论无刺激周期未成熟卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎移植可用于PCOS不孕患者的治疗,并能取得一定的妊娠成功率。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 细胞体外培养 不孕患者 临床观察 治疗 体外受精-胚胎移植 未成熟卵母细胞体外成熟 绒毛膜促性腺激素 经阴道穿刺取卵 优质胚胎率 阴道B超监测 减数分裂 PCOS 移植周期 妊娠成功率 生发泡 应用价值 自然周期
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人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究 被引量：10
2
作者 邢琼 章志国 +2 位作者 周平 赵济华 曹云霞 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期593-597,共5页
目的:探讨玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的有效性。方法:根据有无颗粒细胞将实施玻璃化冷冻的GV期卵母细胞分为含颗粒细胞(非裸卵)组和不含颗粒细胞(裸卵)组;将部分GV期卵母细胞体外培养至MⅡ期卵母细胞实施玻璃化冷冻,比较非冷冻IVM组与M... 目的:探讨玻璃化冷冻未成熟卵母细胞的有效性。方法:根据有无颗粒细胞将实施玻璃化冷冻的GV期卵母细胞分为含颗粒细胞(非裸卵)组和不含颗粒细胞(裸卵)组;将部分GV期卵母细胞体外培养至MⅡ期卵母细胞实施玻璃化冷冻,比较非冷冻IVM组与MⅡ卵玻璃化冷冻组间、裸卵组与非裸卵组间的存活率、成熟率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果:非裸卵组的成熟率大于裸卵组(P<0.05),而存活率、受精率、2-细胞形成率、>2-细胞形成率之间均无统计学差异(P>0.05)。另外,非冷冻IVM组与GV玻化组间成熟率、受精率、卵裂率均存在显著性差异(P<0.05);非冷冻IVM组与MⅡ期卵玻化组间成熟率、受精率、卵裂率间均存在统计学差异(P<0.05);GV玻化组与MⅡ玻化组间存活率、成熟率、受精率、卵裂率间均无统计学差异(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻未成熟卵母细胞需要保留颗粒细胞,同时初步构建了人GV期卵的玻璃化冷冻联合IVM技术的雏形。 展开更多
关键词 未成熟卵母细胞 颗粒细胞 生发泡 玻璃化冷冻
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SGK3在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用及其机制
3
作者 郭文秀 庄妍 +2 位作者 张慧灵 何文宁 孟峻 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期891-899,共9页
目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制。方法:利用超排卵技术获取生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,利用显微注射技术将表达质粒体... 目的:探讨血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3(SGK3)在小鼠卵母细胞第一次减数分裂恢复中的作用,初步阐明SGK3在哺乳动物卵母细胞早期发育中的调控机制。方法:利用超排卵技术获取生发泡(GV)期小鼠卵母细胞,利用显微注射技术将表达质粒体外转录获得的SGK3 mRNA注射至GV期卵母细胞,分为对照组、Tris-EDTA缓冲液(TE)组和SGK3 mRNA组,采用Western blotting法检测各组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平,显微注射SGK3 mRNA后1、2、3和4 h观察并计算各组卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率,采用SGK3抗体稀释抑制实验观察各组卵母细胞形态表现,采用Western blotting法检测体外培养不同时间点卵母细胞中磷酸化SGK3(pSer48)(SGK3-pSer48)和磷酸化细胞分裂周期蛋白2(CDC2)(pTyr15)(CDC2-pTyr15)蛋白表达水平。结果:与对照组和TE组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中SGK3蛋白表达水平升高(P<0.01),显微注射后1和2 h时GVBD率升高(P<0.01)。SGK3抗体稀释抑制实验,随着SGK3抗体浓度增加,各组小鼠卵母细胞GVBD率呈浓度依赖性降低。过表达SGK3后,与对照组比较,SGK3 mRNA组小鼠卵母细胞中检测不到CDC2-pTyr15蛋白表达的时间至少提前1 h。不同稀释浓度SGK3抗体作用后,与对照组比较,随着SGK3抗体浓度升高和时间的延长,小鼠卵母细胞中CDC2-pTyr15蛋白表达水平逐渐降低(P<0.01),SGK3-pSer486蛋白表达水平逐渐升高(P<0.01)。结论:过表达SGK3可以增加小鼠卵母细胞GVBD率,加快CDC2-pTyr15的脱磷酸化,而CDC2-pTyr15的脱磷酸化晚于SGK3-Ser486的磷酸化。SGK3可能作为CDC2上游调节因子参与调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂的恢复。 展开更多
关键词 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3 小鼠卵母细胞 减数分裂 细胞分裂周期蛋白2 生发泡 生发泡破裂
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海水双壳类受精生物学研究进展 被引量：7
4
作者 李永仁 阙华勇 张国范 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期68-72,共5页
关键词 双壳类 受精生物学 海水 研究进展 减数分裂 生物学研究 研究概况 雌雄配子 精子入卵 排放 生发泡 受精卵 卵子 原核
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未成熟卵体外成熟技术在卵巢反应不良和卵泡发育迟缓周期中的应用 被引量：6
5
作者 钱云 刘嘉茵 +5 位作者 冯婷 陈娟 蔡令波 冒韵东 丁卫 张燕 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期217-219,共3页
目的探讨利用未成熟卵体外成熟技术治疗卵巢反应不良和卵泡发育迟缓周期的可能性.方法2000年10月至2002年7月间,在南京医科大学第一附属医院生殖中心取在常规体外受精(IVF)刺激周期中卵巢反应不良和卵泡发育迟缓患者的生发泡期卵母细胞... 目的探讨利用未成熟卵体外成熟技术治疗卵巢反应不良和卵泡发育迟缓周期的可能性.方法2000年10月至2002年7月间,在南京医科大学第一附属医院生殖中心取在常规体外受精(IVF)刺激周期中卵巢反应不良和卵泡发育迟缓患者的生发泡期卵母细胞,体外成熟培养24～48h后,对排出第一极体的卵母细胞采用单精子卵浆内注射法(ICSI)受精,受精3d后移入患者子宫,移植后通过检查血清HCG含量和B超判断妊娠结局.结果8个周期共取生发泡期卵母细胞41枚,成熟培养后有33枚卵母细胞排出第一极体,体外成熟率为80.5%(33/41).ICSI后,正常受精率为78.8%(26/33).平均每周期移植胚胎2.5(20/8)枚,获得3例妊娠.结论未成熟卵体外成熟技术可以用来挽救常规IVF治疗中卵巢反应不良和卵泡发育迟缓的周期. 展开更多
关键词 卵巢反应不良 发育迟缓 未成熟卵 周期 卵泡 2000年10月 2002年7月 血清HCG含量 卵母细胞 第一附属医院 南京医科大学 体外成熟培养 第一极体 体外受精 妊娠结局 ICSI 生发泡 可能性 注射法 卵浆内 单精子 移植后 成熟率 受精率 IVF 治疗 患者 排出
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14-3-3ε和Cdc25B在小鼠卵母细胞生发泡期阻滞中的作用 被引量：4
6
作者 孟峻 侯艳军 +2 位作者 张永梅 呼格吉乐 韩艳秋 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期215-220,共6页
目的:研究14-3-3ε和Cdc25B对小鼠卵母细胞生发泡(GV)期阻滞作用的影响,为阐明蛋白激酶A/Cdc25B/14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞GV期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法:在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、... 目的:研究14-3-3ε和Cdc25B对小鼠卵母细胞生发泡(GV)期阻滞作用的影响,为阐明蛋白激酶A/Cdc25B/14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞GV期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法:在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321A和pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321D转录成mRNA。超排卵方法获得小鼠GV期卵母细胞,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组,收集各组母卵细胞后采用Western blotting法检测外源性14-3-3ε和Cdc25B蛋白表达及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态;相差显微镜观察卵母细胞的形态学变化并计数生发泡破裂(GVBD)率。结果:未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组在显微注射后20h均未发生GVBD(P>0.05);14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组在显微注射后1、2和3h卵母细胞的GVBD率分别为(5.00±0.68)%、(62.00±3.56)%和(100.00±0.00)%,显微注射后20h到达第2次减数分裂中期(MII)的比例为(79.00±2.80)%,与未注射组和TE缓冲液注射组比较,GVBD率和到达MII的比例均显著升高(P<0.01)。结论:14-3-3ε通过Cdc25B的321位丝氨酸磷酸化和脱磷酸化调控卵母细胞由GV期向GVBD的过渡。 展开更多
关键词 14-3-3ε CDC25B 卵母细胞 生发泡 生发泡破裂 显微注射
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注射hCG后不同时间猪所排卵泡内COC的形态和卵母细胞减数分裂进程 被引量：3
7
作者 孙兴参 伊亚玲 +3 位作者 岳奎忠 马所峰 冯兴军 谭景和 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期327-329,共3页
研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、... 研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、2 2、2 4 h(71.2 %、76 .5 %、70 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 )注射 h CG后 18、2 2、2 4 h收集的 COC分别有98.9%、98.0 %、91.4 %的卵丘已经发生扩展 ,而注射 h CG后 4 h收集的 COC则无一发生卵丘扩展 ;(3)注射 h CG后 4h,有少量卵母细胞开始恢复减数分裂 ,至 18h左右开始发生生发泡破裂 (GVBD) ,到 2 2～ 2 4 h有 5 8.4 %～ 6 0 .0 %的卵母细胞发生 GVBD;(4)外层卵丘扩展、放射冠轻微扩展的卵母细胞处于 GV- 1期的比例 (6 9.6 % )明显高于卵丘完全扩展的卵母细胞 (47.8% )和放射冠部分扩展、卵丘已经脱落的卵母细胞 (2 9.3% ) ,而后 2者发生 GVBD的比例(40 %、4 4 % )则略高于前者 (2 7% )。 展开更多
关键词 HCG 形态 减数分裂进程 生发泡 卵母细胞 染色质构型 卵丘卵母细胞复合体 猪
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前培养对猪卵母细胞生发泡染色质构型和体外成熟的影响 被引量：3
8
作者 孙兴参 岳奎忠 +3 位作者 马所峰 李家琳 邹义 谭景和 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期86-90,共5页
在体外成熟培养时使卵母细胞过早接触高浓度激素可能影响体外成熟卵母细胞的质量。本实验研究了推迟卵母细胞与激素接触时间对卵母细胞GV染色质构型、卵母细胞核成熟质量及极体形态的影响。结果表明 :猪体外成熟卵母细胞的极体形态不同 ... 在体外成熟培养时使卵母细胞过早接触高浓度激素可能影响体外成熟卵母细胞的质量。本实验研究了推迟卵母细胞与激素接触时间对卵母细胞GV染色质构型、卵母细胞核成熟质量及极体形态的影响。结果表明 :猪体外成熟卵母细胞的极体形态不同 ,分为完整、退化、碎裂和无极体四种。在不含激素培养液中前培养 12h ,A类卵母细胞的GV 1比例 (48 2 % )明显高于在含激素培养液中前培养 12h卵母细胞 (2 7 1% ) ;而前者的GV 3比例 (19 6 % )却明显低于后者 (5 0 8% ) ;前者成熟卵母细胞的极体完整率 (5 9 6 % )也明显高于后者(2 7 5 % )。这说明推迟卵母细胞与激素接触时间可能提高体外成熟卵母细胞的质量和发育同步水平 [动物学报49(1) :86～ 90 ,2 0 0 3]。 展开更多
关键词 前培养 猪 卵母细胞 生发泡 染色质构型 体外成熟
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兔初级卵母细胞生发泡移植方法的研究
9
作者 廉莉 李光鹏 +3 位作者 廉颖 王敏康 宋祥芬 陈大元 《生殖医学杂志》 CAS 2001年第1期10-14,共5页
目的 :以家兔为实验动物模型 ,探索卵母细胞生发泡 (GV)互换的可行性。方法 :在注射第一针卵泡刺激素 (FSH) 72 h后 ,取大耳白兔卵巢内 GV期卵母细胞 ,用显微操作和电融合的方法 ,对兔初级卵母细胞进行异卵间 GV互换 ,将重构卵培养于 TC... 目的 :以家兔为实验动物模型 ,探索卵母细胞生发泡 (GV)互换的可行性。方法 :在注射第一针卵泡刺激素 (FSH) 72 h后 ,取大耳白兔卵巢内 GV期卵母细胞 ,用显微操作和电融合的方法 ,对兔初级卵母细胞进行异卵间 GV互换 ,将重构卵培养于 TCM-1 99加 1 0 % FCS中 ,对重构卵进行成熟培养 ,最后对成熟重构卵进行卵胞浆内精子注射(ICSI)和胚胎培养。结果 :对 987枚 GV期卵母细胞进行了异卵间 GV互换 ,成功互换 2 72枚 (2 7.6 % ) ,电融合后存活 2 30枚 (84.6 % ) ,在进行成熟培养后 ,2 30枚卵有 1 78枚(77.4% )发育到 MII期 (排出第一极体 ) ,将成熟卵进行 ICSI后 ,有 1 2 6枚 (70 .8% )受精。结论 :对兔初级卵母细胞进行 GV互换是可行的 ,若将此法应用于提高高龄妇女卵母细胞的质量 ,将有助于解决她们的不育问题。 展开更多
关键词 生发泡 生发泡移植 卵胞浆内精子注射 兔 卵母细胞 不育症
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银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术的建立 被引量：2
10
作者 李志 汪洋 +4 位作者 周莉 李熙银 张晓娟 周剑 桂建芳 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期984-991,共8页
研究以银鲫为材料,根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle,GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态,将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期;并进一步比较了分别处于这4个时... 研究以银鲫为材料,根据银鲫(Carassius auratus gibelio)卵母细胞生发泡(Germinal vesicle,GV)边移程度及剥离GV中减数分裂前期染色体的凝集状态,将银鲫Ⅳ时相的卵母细胞分为GV0、GV1、GV2和GV3四个时期;并进一步比较了分别处于这4个时期银鲫卵母细胞体外诱导培养的成熟率、卵裂率和孵化率。结果表明,GV1期之后的卵母细胞均可有效进行体外诱导成熟,可正常受精发育,由于GV1期卵母细胞有较长时间用于显微操作,因此GV1期卵母细胞被选为进行体外诱导的最早时期的卵母细胞。以GV1期卵母细胞为研究材料,摸索了银鲫卵母细胞体外诱导成熟的适宜条件:取GV1期的Ⅳ时相卵母细胞,放置于pH 8.5、加有1μg/m L孕酮激素(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)的格氏平衡盐溶液(Gey’s balanced salt solution,GBSS)中,在23℃培养箱中体外诱导12h后,将滤泡膜剥离后再进行人工体外授精,其所获胚胎的孵化率可达55.5%。此外,将体外转录合成的带GFP标签的h2af1o m RNA注射到GV1期卵母细胞,发现经显微操作和体外诱导后不仅可以通过GFP绿色荧光信号活体观察GVBD、受精、卵裂和早期胚胎发育的全过程,而且诱导成熟的卵子仍可正常受精和胚胎发育。研究建立的银鲫卵母细胞体外诱导成熟技术为银鲫和其他鱼类卵母细胞发育过程研究及其相关基因和细胞显微操作提供了技术平台。 展开更多
关键词 银鲫 卵母细胞成熟 体外诱导 生发泡 显微注射
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小鼠单个GV期卵母细胞中ATP8基因的表达分析 被引量：2
11
作者 洪灯 宋绪华 +1 位作者 符史干 景雅 《现代生物医学进展》 CAS 2007年第10期1488-1490,共3页
目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP8(ATP合酶亚基8)基因的表达情况。方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞;用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达:其中cDNA的合成分两种方法进行:一是将G... 目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP8(ATP合酶亚基8)基因的表达情况。方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞;用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达:其中cDNA的合成分两种方法进行:一是将GV期单个卵母细胞直接进行RT合成cDNA,二是先用DNA酶加EcoRⅠ酶祛除mtDNA和核DNA后再进行RT;回收产物构建克隆质粒并测序。结果:1.5%琼脂糖电泳显示、测序结果均表明ATP8基因在GV期卵母细胞中有表达。结论:小鼠GV期卵母细胞特异表达的ATP8基因可能与卵母细胞的正常发育成熟相关。 展开更多
关键词 小鼠 生发泡 卵母细胞 ATP合成酶亚基8
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小鼠Cdc25B核输出序列 被引量：2
12
作者 赵鸿梅 崔城 +1 位作者 徐小燕 于秉治 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第4期555-559,共5页
为探讨小鼠卵母细胞中Cdc25B(cell division cycle 25 homolog B)核输出序列在卵母细胞G2/M转换过程中的调控机制,应用显微注射方法将Cdc25B的野生型、N末端缺失1～51位氨基酸片段(Cdc25B-Δ51)、1～65位氨基酸片段(Cdc25B-Δ65)突变体... 为探讨小鼠卵母细胞中Cdc25B(cell division cycle 25 homolog B)核输出序列在卵母细胞G2/M转换过程中的调控机制,应用显微注射方法将Cdc25B的野生型、N末端缺失1～51位氨基酸片段(Cdc25B-Δ51)、1～65位氨基酸片段(Cdc25B-Δ65)突变体的mRNA和pEGFP-Cdc25B-WT、pEGFP-Cdc25B-Δ51、pEGFP-Cdc25B-Δ65的融合质粒显微注射到含有完整生发泡的小鼠卵母细胞中,观察不同注射组小鼠卵母细胞发生生发泡破裂的情况及蛋白质亚细胞定位。结果显示Cdc25B-Δ51及Cdc25B-Δ65都丧失了诱导小鼠卵母细胞减数分裂的能力;同时亚细胞定位研究表明在G2期野生型Cdc25B主要分布在细胞浆中,Cdc25B-Δ51在核浆均有分布,Cdc25B-Δ65则主要分布于细胞核中。研究结果表明Cdc25B在52～65位氨基酸之间存在核输出序列(nuclear export sequence,NES),NES参与的核转运机制作为一种重要的调控机制控制着细胞的生理进程;N末端的氨基酸对减数分裂的重启动起促进作用。 展开更多
关键词 CDC25B 减数分裂 核输出序列 生发泡
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钙离子信号对非细胞体系中小鼠卵母细胞游离生发泡减数分裂启动的影响
13
作者 戴谷 毕春明 +4 位作者 吴耀春 赵东红 陈彦 张锡然 李朝军 《实验生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期249-256,共8页
本文构建了包括HeLa裂解液和游离小鼠卵母细胞生发泡的实验体系,用于研究Ca^(2+)及其下游信号对小鼠卵母细胞减数分裂启动的影响。游离的卵母细胞生发泡可以在M期细胞裂解液中发生减数分裂启动,表现为染色质的凝集。进一步的研究表明,Ca... 本文构建了包括HeLa裂解液和游离小鼠卵母细胞生发泡的实验体系,用于研究Ca^(2+)及其下游信号对小鼠卵母细胞减数分裂启动的影响。游离的卵母细胞生发泡可以在M期细胞裂解液中发生减数分裂启动,表现为染色质的凝集。进一步的研究表明,Ca^(2+)信号的存在对G_2期细胞裂解液促进减数分裂启动是至关重要的,G_2期中期的细胞裂解液只有经Ca^(2+)诱导后才具有启动生发泡减数分裂的作用,而G_2期晚期无论Ca^(2+)存在与否均诱发减数分裂的启动,但是G_2期早期的裂解液无启动减数分裂的作用。卵母细胞的体外培养实验分析也表明,抑制CaM和CaMKⅡ的活性可以阻止GVBD和抑制第一极体的释放。免疫沉淀及Western Blotting结果显示,HeLa细胞裂解液中的MPF从G_2期中期到M期均存在,且Cdc2亚基的Tyr由磷酸化向去磷酸化转变。结果进一步证明,卵母细胞减数分裂的启动可能是通过一种Ca^(2+)/CaM依赖的途径来推动的。 展开更多
关键词 CA^2+ 生发泡 游离 中期 细胞裂解液 诱发 HELA细胞 减数分裂 小鼠卵母细胞 非细胞体系
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卵母细胞的生发泡移植
14
作者 征月良 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期473-475,共3页
生发泡(germinal vesicle,GV)移植到去核的GV期卵母细胞后,获得重构卵,重构卵在体外能成熟,受精和进行胚胎发育。GV移植到去核的第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ,MII)卵母细胞后,重构卵能发生GV破裂,但难以排出第一极体。GV移植后,通... 生发泡(germinal vesicle,GV)移植到去核的GV期卵母细胞后,获得重构卵,重构卵在体外能成熟,受精和进行胚胎发育。GV移植到去核的第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ,MII)卵母细胞后,重构卵能发生GV破裂,但难以排出第一极体。GV移植后,通过连续核移植,重构合子具有发育到终期的能力。GV移植为研究卵母细胞的发育提供了一种重要工具。 展开更多
关键词 卵母细胞 生发泡 移植
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ATP8基因在小鼠单个GV期卵母细胞中的表达和生物信息学分析
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作者 洪灯 齐亚灵 +3 位作者 张彦慧 钟南田 郑小桃 周雯 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2011年第17期2669-2671,共3页
目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP合酶亚基8(ATP8)基因的表达情况及其生物信息学的分析。方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞,用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达;将GV期单个卵母... 目的:探讨小鼠GV期卵母细胞线粒体中ATP合酶亚基8(ATP8)基因的表达情况及其生物信息学的分析。方法:应用挤压法从卵巢中分离获得生发泡期(germinal vesicle,GV)卵母细胞,用RT-PCR检测GV期单个卵母细胞中ATP8基因的表达;将GV期单个卵母细胞直接进行RT合成cDNA,然后再对回收产物构建克隆质粒并测序,最后用VECTOR NIT9.0、RNAdraw和Treeview等工具对测序结果进行生物信息学分析。结果:琼脂糖电泳结果表明ATP8基因在GV期卵母细胞中有表达;测序结果显示所测昆明小鼠ATP8序列与Genbank序列完全一致;mRNA二级结构图显示12种动物间的ATP8氨基酸序列和ATP8核酸序列有较大差异,其中不同品种小鼠间也有差异;不同物种ATP8核苷酸序列构建出的分子进化树中,小鼠与棕熊进化距离较远,与田鼠、家猫进化距离相对较近。结论:小鼠GV期卵母细胞特异表达的ATP8基因与卵母细胞的正常发育成熟相关。 展开更多
关键词 小鼠 生发泡 卵母细胞 ATP合酶亚基8 生物信息学
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《环球聚氨酯》 2011年第7期16-17,共2页
低压聚氨酯泡沫保温产品问世加拿大一加压包装供应商日前推出新型低压聚氨酯泡沫保温产品ArcticFoam。这种泡沫保温产品适用于固体建材中的缝隙里,能够起到绝缘的作用。ArcticFoam是由可再生发泡材料制成。
关键词 聚氨酯泡沫 产品 保温 供应商 加拿大 生发泡 低压
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不同年龄昆明白小鼠卵母细胞的生发泡互换
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作者 崔龙波 周雪莹 +2 位作者 王敏强 黄秀英 孙方臻 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期38-43,共6页
为探讨卵母细胞减数分裂异常及其与年龄相关变化之间的关系,对不同年龄段昆明白小鼠卵母细胞进行了生发泡(GV)移植研究.应用显微操作和电融合技术,将6～8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6月龄、9月龄和12月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换,所... 为探讨卵母细胞减数分裂异常及其与年龄相关变化之间的关系,对不同年龄段昆明白小鼠卵母细胞进行了生发泡(GV)移植研究.应用显微操作和电融合技术,将6～8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6月龄、9月龄和12月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换,所形成的6种GV-胞质体复合体的融合率(89.7%～95.6%)和6种重组卵母细胞的成熟率(83.5%～88.2%)并不因小鼠年龄的改变而有所变化.成熟的6种重组卵母细胞经体外受精后,形成原核期胚和2-细胞期胚的比率(分别为80.0%～87.3%和42.7%～50.9%)并不因不同年龄小鼠卵母细胞GV互换所带来的细胞质或细胞核的改变而受到影响. 展开更多
关键词 小鼠 年龄 卵母细胞 生发泡 核移植
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小鼠生发泡完整卵母细胞一个特异基因的克隆及其在胚胎的表达
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作者 王世鄂 黄威权 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期239-243,共5页
目的 :克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞 (GV卵 )特异基因 ,并检测其一在胚胎中的表达。方法 :应用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,建立GV卵特异的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选并对阳性克隆进行序列测定和同源性分析 ;采用RT PCR方... 目的 :克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞 (GV卵 )特异基因 ,并检测其一在胚胎中的表达。方法 :应用抑制性消减杂交技术 (SSH) ,建立GV卵特异的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选并对阳性克隆进行序列测定和同源性分析 ;采用RT PCR方法观察其一在着床前胚胎的表达。结果 :克隆发现 1 8个基因和 8个EST序列在GV卵中特异表达。RT PCR显示该阳性克隆的基因在GV卵、MII卵、1 细胞胚胎和 2 细胞胚胎有表达 ,其短片段是预期要扩增者 ,从MII卵开始表达下降 ;长片段在GV卵、MII卵、1 细胞胚胎和 2 细胞胚胎表达未见明显变化。长、短片段两端序列一致。结论 :该基因是GV卵特异cDNA文库中的一个基因 ,且是母源性基因 。 展开更多
关键词 小鼠 卵母细胞 特异基因 基因克隆 胚胎 RT-PCR 抑制性消减杂交 生发泡
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哺乳动物卵母细胞生发泡移植
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作者 崔龙波 孙方臻 《细胞生物学杂志》 CSCD 2005年第1期9-13,共5页
　生发泡(GV)移植是指将GV期卵母细胞的GV移入到去核的受体细胞(GV期卵母细胞、MII期卵母细胞或受精卵)透明带下,经融合形成一个重组卵的过程。GV移植对研究卵母细胞的细胞周期调控、成熟及受精时细胞核与细胞质之间的相互作用非常重要... 　生发泡(GV)移植是指将GV期卵母细胞的GV移入到去核的受体细胞(GV期卵母细胞、MII期卵母细胞或受精卵)透明带下,经融合形成一个重组卵的过程。GV移植对研究卵母细胞的细胞周期调控、成熟及受精时细胞核与细胞质之间的相互作用非常重要,可用于研究卵母细胞减数分裂异常和与年龄相关变化之间的关系及细胞质衰老与卵母细胞非整倍性之间的关系。现简要介绍了GV移植的基本程序,GV核体与胞质体的融合,重组卵的培养条件,重组卵成熟后的受精、人工激活和胚胎发育能力以及GV移植的意义。 展开更多
关键词 移植 GV 卵母细胞 生发泡 核体 胚胎发育能力 带下 细胞质 成熟 受精
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昆明白小鼠卵母细胞的生发泡移植
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作者 崔龙波 周雪莹 +2 位作者 王敏强 黄秀英 孙方臻 《烟台大学学报（自然科学与工程版）》 CAS 2005年第1期34-40,共7页
为探讨细胞核与细胞质调控减数分裂的机制,对昆明白小鼠GV期卵母细胞进行了GV移植研究.将6～8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6～8周龄和3月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换,所形成的3种GV-胞质体复合体的融合率(85.0%～89.8%)和3种重组卵母... 为探讨细胞核与细胞质调控减数分裂的机制,对昆明白小鼠GV期卵母细胞进行了GV移植研究.将6～8周龄小鼠GV期卵母细胞分别与6～8周龄和3月龄小鼠GV期卵母细胞进行GV互换,所形成的3种GV-胞质体复合体的融合率(85.0%～89.8%)和3种重组卵母细胞的成熟率(93.9%～96.2%)并不因小鼠年龄的改变而有所变化.经人工活化后,3种重组卵母细胞形成原核期胚和2-细胞期胚的比率(分别为80.5%～85.4%和51 2%～55 4%)也不因不同年龄小鼠卵母细胞所带来的细胞质或细胞核的改变而受到影响.细胞遗传学分析表明成熟的重组卵母细胞表现出正常的核型. 展开更多
关键词 卵母细胞 生发泡 核移植
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