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产琼脂糖酶海洋微生物的筛选鉴定及酶学性质研究 被引量:4
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作者 韩尧跃 林娟 +1 位作者 张建美 叶秀云 《福州大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第2期278-284,共7页
从红藻中筛选获得一株能产生明显液化现象并具有较高琼脂糖酶活力的菌株Ag-1,经生理生化实验和16S rDNA序列分析鉴定为弧菌属(Vibrio sp.).酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为50℃,40~50℃水浴保温1h可保持68%以上的酶活力;最... 从红藻中筛选获得一株能产生明显液化现象并具有较高琼脂糖酶活力的菌株Ag-1,经生理生化实验和16S rDNA序列分析鉴定为弧菌属(Vibrio sp.).酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为50℃,40~50℃水浴保温1h可保持68%以上的酶活力;最适反应pH值为8.0,在pH 7.0 ~8.0保温1h可保持90%以上的酶活力,在pH 8.0 ~9.0保温1h仍可保持70%以上的酶活力,具有较好的耐热性和耐碱性;且该酶对琼脂底物具有高度专一性;K+、Ca2+、Mg2+、Li+和Fe3+对琼脂糖酶活力具有激活作用,Mn2+、Zn2+和Cu2+对琼脂糖酶具有抑制作用.酶反应动力学实验结果表明,该酶的最适底物浓度为8 mg· mL-1,动力学参数Km为0.58mg· mL-1,vmax为3.29 U·mg-1. 展开更多
关键词 琼脂糖 海洋微生物 筛选鉴定 学性质 动力学参数
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琼脂糖酶的研究进展 被引量:2
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作者 王广慧 张明 《海洋通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期72-79,共8页
从海洋及其他环境中可以分离出能够降解琼脂的琼脂糖酶。按照作用方式的不同,可将琼脂糖酶分为α-琼脂糖酶和β-琼脂糖酶两种类型。不同的琼脂糖酶具有不同的生物学特性。琼脂糖酶在海藻单细胞的制备、海藻原生质体的制备、琼脂寡糖的... 从海洋及其他环境中可以分离出能够降解琼脂的琼脂糖酶。按照作用方式的不同,可将琼脂糖酶分为α-琼脂糖酶和β-琼脂糖酶两种类型。不同的琼脂糖酶具有不同的生物学特性。琼脂糖酶在海藻单细胞的制备、海藻原生质体的制备、琼脂寡糖的制备、海藻多糖结构的研究及分子生物学研究方面具有重要的应用价值。为了促进琼脂糖酶的开发和利用,依据国内外的研究资料,详细介绍了琼脂糖酶的研究进展,对琼脂糖酶的来源、种类、特性、作用机制及应用作一综述。 展开更多
关键词 海洋细菌 琼脂糖 研究进展
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1株高产琼脂糖酶海洋弧菌的分离与酶活性的测定 被引量:2
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作者 张静雅 刘宇鹏 +3 位作者 吴超 邓益琴 尹浩贤 赵哲 《热带生物学报》 2018年第2期142-146,共5页
琼脂糖酶是一类糖苷水解酶,能够催化琼脂多糖分解为低聚糖,在食品工业、化妆品及生物医学领域等具有重要的应用价值。笔者从华南沿海海水样品中分离出1株海洋弧菌HN897,选用以琼脂为唯一碳源的培养基并通过透明圈筛选法筛选,确定此海洋... 琼脂糖酶是一类糖苷水解酶,能够催化琼脂多糖分解为低聚糖,在食品工业、化妆品及生物医学领域等具有重要的应用价值。笔者从华南沿海海水样品中分离出1株海洋弧菌HN897,选用以琼脂为唯一碳源的培养基并通过透明圈筛选法筛选,确定此海洋弧菌为1株具有琼脂酶高产能力的细菌。16S r RNA基因序列分析结果显示,该菌株属于弧菌属Vibrio astriarenae。通过DNS-还原糖法对其在2种TSB和LB2培养液上清中的酶活性进行测定,测得粗酶液酶活力分别为0.366和0.413 U·m L-1,说明琼脂糖酶具有潜在开发利用价值。本研究结果可为后续开发研究及应用奠定基础。 展开更多
关键词 海洋弧菌 琼脂糖 活力
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琼脂糖酶产生菌Brevundimonas sp.发酵条件探讨 被引量:1
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作者 赵蓉蓉 陈雪婷 +1 位作者 桑卫国 章宗铭 《宁波大学学报(理工版)》 CAS 2014年第1期13-17,共5页
为研究微生物发酵法获取高产量、高活性的琼脂糖酶,以海洋细菌Brevundimonas sp.为实验菌株,首先采用单因子分析法对发酵条件进行初步研究,然后用部分析因试验设计方法选出2个显著因子热休克时间和发酵时间,用中心组合设计方法进行试验... 为研究微生物发酵法获取高产量、高活性的琼脂糖酶,以海洋细菌Brevundimonas sp.为实验菌株,首先采用单因子分析法对发酵条件进行初步研究,然后用部分析因试验设计方法选出2个显著因子热休克时间和发酵时间,用中心组合设计方法进行试验设计及其发酵条件优化,最后建立二次响应面回归模型.从该模型可获得适宜发酵条件:接种量1.5%,热休克时间31s,初始pH 7.5,摇床转速120r·min-1,发酵时间28.4 h,发酵温度23.5℃.发酵条件优化后可产最大酶活502.2U·mL-1,产酶活力较优化前提高了35%. 展开更多
关键词 琼脂糖 单因子 中心组合 响应面
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琼脂糖酶产生菌的筛选和培养基优化
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作者 李静 杨邵岚 +3 位作者 黄琳 管政兵 蔡宇杰 廖祥儒 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期100-105,共6页
从太岁中筛选得到一株初始产酶较高的琼脂糖酶产生菌,经形态和分子生物学分析方法鉴定之后,认定其属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus),命名为Paenibacillus sp.P1(简称为P1)。P1为革兰氏阴性菌,短杆状细胞,对明胶和纤维素都没有水解活性... 从太岁中筛选得到一株初始产酶较高的琼脂糖酶产生菌,经形态和分子生物学分析方法鉴定之后,认定其属于类芽孢杆菌属(Paenibacillus),命名为Paenibacillus sp.P1(简称为P1)。P1为革兰氏阴性菌,短杆状细胞,对明胶和纤维素都没有水解活性。研究该菌的生长及产酶过程发现,该菌株最适发酵产酶时长是40 h。利用单因素实验对发酵培养基进行优化,最终确定了最适合菌株P1产琼脂糖酶的发酵培养基配方为:Agar 3 g/L、蛋白胨2 g/L、K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O 1.0 g/L、NaCl 0.3 g/L、MgSO_(4)·7H_(2)O 0.05 g/L、FeSO_(4)·3H_(2)O 0.02 g/L、CaCl_(2)0.04g/L。菌株P1在优化后的培养基中发酵40 h,琼脂糖酶产量达到了3.47×10^(4) U/L,是优化前产酶水平的3.4倍。实验结果为非海洋来源的产琼脂糖酶菌株筛选和琼脂糖酶的放大发酵奠定了基础。 展开更多
关键词 琼脂糖 类芽孢杆菌 筛选 鉴定 发酵优化
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海洋弧菌HN897β-琼脂糖酶基因vas1-1339异源表达及活性分析
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作者 喻飞 金兴坤 +5 位作者 雷天影 曹海航 陈锵辉 阳耀帆 李佳航 赵哲 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期170-176,共7页
海洋弧菌HN897株是一株高产琼脂糖酶的Vibrio astriarenae菌,前期功能缺失实验证明其β-琼脂糖酶基因vas1-1339的缺失可显著降低弧菌HN897株的琼脂水解活性。文章在大肠杆菌中异源表达Vas1-1339基因编码蛋白,分析该基因的表达及蛋白功... 海洋弧菌HN897株是一株高产琼脂糖酶的Vibrio astriarenae菌,前期功能缺失实验证明其β-琼脂糖酶基因vas1-1339的缺失可显著降低弧菌HN897株的琼脂水解活性。文章在大肠杆菌中异源表达Vas1-1339基因编码蛋白,分析该基因的表达及蛋白功能活性。首先,构建含vas1-1339基因开放阅读框全长的表达载体pET28a-1339,利用原核表达技术在大肠杆菌中成功地异源表达了Vas1-1339琼脂糖酶;然后,利用卢戈氏碘液染色分析发现异源表达Vas1-1339琼脂糖酶的大肠杆菌能够高效水解琼脂,且异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)最优诱导浓度为10μmol·L^(-1);免疫印迹分析发现胞内基因表达产物羧基端可能存在切割现象,推测Vas1-1339琼脂糖酶存在复杂的成熟过程。对纯化的琼脂糖酶活性分析发现海洋弧菌HN897株β-琼脂糖酶Vas1-1339能够独立发挥琼脂糖降解功能。 展开更多
关键词 β-琼脂糖 海洋弧菌 琼脂糖 异源蛋白表达
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β-琼脂糖酶ⅠDagA大肠杆菌表达系统的筛选
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作者 周雁胜 王保莉 曲东 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期271-275,共5页
通过PCR技术扩增出了873 bp的dagA及813bp的去除信号肽的dagA(▽)编码序列,dagA与NCBI公布的Pseudoalteromonas atlanticaβ-琼脂糖酶ⅠdagA序列一致性达到99.8%,dagA(▽)一致性达到100%。构建pET21a-dagA和pET21a-dagA(▽)表达载体,分... 通过PCR技术扩增出了873 bp的dagA及813bp的去除信号肽的dagA(▽)编码序列,dagA与NCBI公布的Pseudoalteromonas atlanticaβ-琼脂糖酶ⅠdagA序列一致性达到99.8%,dagA(▽)一致性达到100%。构建pET21a-dagA和pET21a-dagA(▽)表达载体,分别转化BL21(DE3)、Origami B(DE3)、ER2566宿主菌,共表达分子伴侣DsbC和FkpA。采用SDS-PAGE分析了构建的多个大肠杆菌表达系统中β-琼脂糖酶ⅠDagA的表达量及表达方式,获得了重组DagA高分泌性表达菌株ER2566-pET21a-dagA(▽)-FkpA。 展开更多
关键词 β-琼脂糖ⅠDagA 信号肽 分子伴侣 分泌表达
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β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的克隆与表达
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作者 王广慧 张明 魏群 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期415-419,共5页
为研究重组β琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其生物活性,根据GeneBank中β琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体PQE30中,测序结果证明合成基因序列正确,未改变读码框.然后将此表达载体转入E.coliM15中进行... 为研究重组β琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其生物活性,根据GeneBank中β琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体PQE30中,测序结果证明合成基因序列正确,未改变读码框.然后将此表达载体转入E.coliM15中进行诱导表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并鉴定其生物活性.结果表明:其相对分子质量约为5.0×104,与预期相符,具有生物活性. 展开更多
关键词 β-琼脂糖(AgaA7) 基因重组 蛋白表达 生物活性
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β-琼脂糖酶(AgaA7)在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究
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作者 王广慧 《佳木斯大学学报(自然科学版)》 CAS 2008年第3期416-420,共5页
为研究重组β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其酶学性质,根据GeneBank中β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体pET-22b(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测... 为研究重组β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的表达产物及其酶学性质,根据GeneBank中β-琼脂糖酶(AgaA7)基因的编码序列合成此基因后,将其克隆到表达载体pET-22b(+)中,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.纯化后的表达产物经SDS-PAGE检测其相对分子质量并测定其酶学性质.结果表明:重组酶的相对分子质量为~5.0×10^4,与预期相符.此酶最适反应pH是7.0,在pH58的缓冲液中最稳定;最适反应温度为50℃,在低于50℃时比较稳定.Na^+,K^+,Ca^2+,Mg^2+对重组酶活性影响不大,而Zn^2+,Hg^2+,Pb^2+则对酶活性具有不可逆抑制作用. 展开更多
关键词 β-琼脂糖(AgaA7) 表达 纯化 学性质
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