UPLC-QTOF-MS结合主成分分析法用于龟甲胶、鹿角胶中添加牛皮源成分的检测研究 被引量：51

1

作者 程显隆 李文杰 +5 位作者 张小龙 石岩 魏锋 肖新月 周祥山 林瑞超 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期931-935,共5页

目的:建立龟甲胶、鹿角胶中非法掺入牛皮源成分的检测方法。方法:采用胰蛋白酶对龟甲胶、鹿角胶、牛皮源成分进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)进行测定,采用Markerlynx软件对3种胶类的液质数据进行主成分... 目的:建立龟甲胶、鹿角胶中非法掺入牛皮源成分的检测方法。方法:采用胰蛋白酶对龟甲胶、鹿角胶、牛皮源成分进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)进行测定,采用Markerlynx软件对3种胶类的液质数据进行主成分分析,找出鉴别牛皮源成分的专属性特征肽段,并对特征肽的序列进行确认。结果:对19批样品进行检测发现,其中8批龟甲胶及8批鹿角胶中可检出牛皮源成分的特征肽段。结论:所建立的方法经验证,专属性较强,可用于龟甲胶、鹿角胶中非法掺入牛皮源成分的检测。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱 鹿角胶 龟甲胶 胶类药材 胶原蛋白 特征肽段 主成分分析

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特征肽段检测技术用于胶类药材专属性鉴别方法研究 被引量：41

2

作者 程显隆 陈佳 +4 位作者 李明华 张倩倩 刘薇 魏锋 马双成 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期104-108,共5页

目的找出龟甲胶、鹿角胶、阿胶、黄明胶、新阿胶5种胶类药材的特征肽段,从而建立专属性的鉴别方法。方法用胰蛋白酶针对样品进行酶解,采用液质联用多肽识别技术和数据处理软件对蛋白质酶解后的胶类样品(主含多肽混合物)进行分析处理,进... 目的找出龟甲胶、鹿角胶、阿胶、黄明胶、新阿胶5种胶类药材的特征肽段,从而建立专属性的鉴别方法。方法用胰蛋白酶针对样品进行酶解,采用液质联用多肽识别技术和数据处理软件对蛋白质酶解后的胶类样品(主含多肽混合物)进行分析处理,进行特征肽段的寻找;采用串联四级杆质谱的多反应检测(multiple reaction monitor,MRM)建立专属性鉴别方法。结果找出了5种胶类药材的特征离子,确定阿胶的特征离子为m/z 539.8,鹿角胶的特征离子为m/z 765.4,龟甲胶的特征离子为m/z 631.3,黄明胶的特征离子为m/z 641.3,新阿胶的特征离子为m/z774.5,并建立了专属性强的鉴别方法。结论确定的各胶类的特征肽专属性强,建立各胶类的专属性鉴别方法可以有效地区分各胶类。 展开更多

关键词 胶类药材 特征肽段 液质联用技术 主成分分析 质量控制 质量标准

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基于液相色谱-串联质谱法的肉类特征肽段鉴别及掺假测定 被引量：27

3

作者 古淑青 詹丽娜 +3 位作者 赵超敏 郑江 蔡一村 邓晓军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1269-1278,共10页

建立了液相色谱-串联质谱技术鉴别肉类特征肽段及定量检测羊肉中常见外源肉掺假的方法。样品经蛋白质提取、胰蛋白酶水解和固相萃取小柱净化后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)和Proteinpilot... 建立了液相色谱-串联质谱技术鉴别肉类特征肽段及定量检测羊肉中常见外源肉掺假的方法。样品经蛋白质提取、胰蛋白酶水解和固相萃取小柱净化后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)和Proteinpilot软件,实现蛋白质和多肽的鉴定;再通过基本局部比对搜索工具(BLAST)与Uniprot数据库对比分析,筛选出羊肉、鸭肉、猪肉和鸡肉的20个物种特征性多肽标志物;最后利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)系统对羊肉、鸭肉、猪肉和鸡肉的特征性多肽进行了验证和多反应监测(MRM)定量研究。将鸭肉、猪肉和鸡肉分别按照质量分数为1%、5%、10%、20%、50%的比例掺加到羊肉中,得到鸭肉最低掺假检出限为0. 25%、猪肉最低掺假检出限为0. 17%、鸡肉最低掺假检出限为0. 10%。 展开更多

关键词 液相色谱-串联质谱 特征肽段 肉 鉴别 掺假测定

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基于特征肽段的阿胶中异源性物种鉴别 被引量：24

4

作者 房芳 张九凯 +2 位作者 马雪婷 苏敏 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第16期267-273,共7页

为鉴别阿胶中动物源性掺假物,结合鸟枪蛋白组学技术对不同物种的热稳定特征肽进行检测和鉴定。首先找到3种胶类药材(阿胶、新阿胶、黄明胶)的特征肽段,并发现3个物种中不含羟脯氨酸的热稳定特异性肽段在I型胶原蛋白α1序列中的相似位置... 为鉴别阿胶中动物源性掺假物,结合鸟枪蛋白组学技术对不同物种的热稳定特征肽进行检测和鉴定。首先找到3种胶类药材(阿胶、新阿胶、黄明胶)的特征肽段,并发现3个物种中不含羟脯氨酸的热稳定特异性肽段在I型胶原蛋白α1序列中的相似位置。通过对胶原蛋白源物种特异肽段的序列特征的研究,推测了制胶过程中胶原蛋白的裂解规律。其次,获得了2条马皮特征肽,分别来源于马源角蛋白和未命名的马源蛋白,可用于鉴定阿胶中马皮胶。本研究不仅能够实现阿胶和异源性动物皮胶的鉴别,同时还可以为阿胶的真伪鉴别及其他物种胶原蛋白源特异肽段的发现提供技术支持。 展开更多

关键词 阿胶 蛋白组学 特征肽段 多反应监测 质谱技术

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超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测阿胶补血颗粒中的阿胶 被引量：17

5

作者 龙国友 李明华 +4 位作者 刘薇 陆以云 程显隆 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期826-829,共4页

目的:建立阿胶补血颗粒中阿胶的专属性检测方法。方法:采用胰蛋白酶对阿胶补血颗粒中阿胶进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测。色谱柱为Agilent SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8... 目的:建立阿胶补血颗粒中阿胶的专属性检测方法。方法:采用胰蛋白酶对阿胶补血颗粒中阿胶进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测。色谱柱为Agilent SB-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～25 min,95%A→80%A;25～40 min,80%A→50%A),流速0.3 m L·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4,m/z 539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对。结果:3批市售样品中均可检出阿胶的特征肽段。结论:所建立的方法经方法学验证,专属性强,可用于阿胶补血颗粒中阿胶的检测。 展开更多

关键词 阿胶补血颗粒 胰蛋白酶 酶解 特征肽段 阿胶检测 专属性鉴别 UPLC-QQQ MS

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高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测暖宫孕子丸中阿胶特征肽成分 被引量：11

6

作者 李广华 龙萍 +3 位作者 尹雪 程显隆 魏锋 马双成 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期694-697,共4页

目的:建立暖宫孕子丸中阿胶特征肽成分的专属性检测方法。方法:采用胰蛋白酶对暖宫孕子丸样品进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测。采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μ... 目的:建立暖宫孕子丸中阿胶特征肽成分的专属性检测方法。方法:采用胰蛋白酶对暖宫孕子丸样品进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QQQ MS)对阿胶的专属性特征肽段进行检测。采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸乙腈溶液(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温40℃;离子化模式为ESI^+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4,m/z 539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对。结果:10批市售暖宫孕子丸样品中均可检出阿胶的特征肽段。结论:所建立的方法经方法学验证,专属性强,可用于暖宫孕子丸中阿胶的检测。 展开更多

关键词 暖宫孕子丸 阿胶 特征肽段 鉴别研究 标准提高 超高效液相色谱-三重四极杆质谱

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超高效液相色谱-串联质谱法检测食品中鸡蛋过敏原卵白蛋白 被引量：11

7

作者 宁亚维 刘茁 +3 位作者 范素芳 马俊美 李强 张岩 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第20期332-336,共5页

建立超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测食品中鸡蛋过敏原卵白蛋白的方法。蛋清经胰蛋白酶酶解、超滤净化,经Easy-nLC 1000纳升液相色谱-四极杆-静电场... 建立超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测食品中鸡蛋过敏原卵白蛋白的方法。蛋清经胰蛋白酶酶解、超滤净化,经Easy-nLC 1000纳升液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱以乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相进行分离,结合Uniprot数据库筛选出特异性好且灵敏度高的特征肽段GGLEPINFQTAADQAR(GR-16)作为外标,采用UPLC-MS/MS正离子源多反应监测模式对实际样品进行检测。结果表明,该方法在5～5 000 ng/mL范围内线性良好,定量限为0.1μg/g,平均回收率在77.22%～98.55%之间,相对标准偏差不大于9.97%。此方法特异性高、灵敏度好、分析速度快,可为食品中鸡蛋过敏原的检测提供技术支持。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱 过敏原 卵白蛋白 胰蛋白酶 特征肽段

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高效液相色谱-串联质谱法测定肉制品和调味料中7种水产品过敏原 被引量：9

8

作者 孟佳 古淑青 +5 位作者 方真 钮冰 邓晓军 郭德华 朱坚 韩芳 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期712-722,共11页

基于高效液相色谱-串联质谱系统建立了食品中水产品过敏原的快速筛查和定量检测方法。样品经蛋白质提取、纯化、胰蛋白酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)结合ProteinPilot软件,基于母离... 基于高效液相色谱-串联质谱系统建立了食品中水产品过敏原的快速筛查和定量检测方法。样品经蛋白质提取、纯化、胰蛋白酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)结合ProteinPilot软件,基于母离子和碎片离子谱分析,实现蛋白质和多肽的鉴定。再通过基本局部比对搜索工具(BLAST)与Uniprot数据库对比分析,筛选出南美白虾、大闸蟹、青蟹、金枪鱼、大西洋鲑鱼的7种过敏原蛋白的30个特征肽。利用高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)系统对特征肽进行验证和多反应监测(MRM)定量研究。结果表明,该方法在5~250 mg/kg 范围内线性关系良好,检出限为2~3.5 mg/kg ,平均回收率为88.7%~110.2%。该方法重现性好,通量高,可应用于肉制品和调味料中7种过敏原的快速筛查和定量分析。 展开更多

关键词 液相色谱-串联质谱 特征肽段 水产品过敏原 肉制品 调味料

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超高效液相色谱-串联质谱法测定乳与乳制品中牛乳铁蛋白 被引量：9

9

作者 陈柔含 古淑青 +3 位作者 赵超敏 霍忆慧 钮冰 邓晓军 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期663-671,共9页

建立了超高效液相色谱-串联质谱技术定量检测乳制品中牛乳铁蛋白含量的方法。样品经脱脂、酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)和Protein Pilot软件分析,实现了乳铁蛋白及其肽段的鉴定;通... 建立了超高效液相色谱-串联质谱技术定量检测乳制品中牛乳铁蛋白含量的方法。样品经脱脂、酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive-HRMS)和Protein Pilot软件分析,实现了乳铁蛋白及其肽段的鉴定;通过初级局部序列搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)与Uniprot数据库对比分析筛选出牛乳铁蛋白的8个特征肽段;选择其中3个响应强度高、稳定性好的特征肽段进一步通过超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)进行验证和多反应监测(MRM)定量研究,并考察了空白基质匹配的外标法和内标法对乳铁蛋白检测结果的差异。采用外标法定量时,3个肽段在各自范围内线性关系良好,检出限为0.023~0.041 mg/kg,定量限为0.077~0.137 mg/kg,平均回收率为93.8%~103.9%,日内精密度≤8.8%,日间精密度≤9.5%。该方法抗干扰能力强,灵敏度高,重复性好,适用于乳及乳制品中牛乳铁蛋白的含量测定。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱 特征肽段 牛乳铁蛋白 乳及乳制品

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基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白的物种来源 被引量：9

10

作者 阳洪波 王韦达 +4 位作者 李意 刘奕雄 朱宇薇 杜业刚 杨国武 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1279-1286,共8页

建立了一种基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白物种来源的方法。样品经蛋白提取,还原,烷基化,胰蛋白酶消化后,采用Eksigent C18色谱柱(75μm×150 mm,3μm)分离,用流动相0. 1%甲酸水-乙腈溶液(98∶2)和0. 1%甲酸乙腈-水溶... 建立了一种基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白物种来源的方法。样品经蛋白提取,还原,烷基化,胰蛋白酶消化后,采用Eksigent C18色谱柱(75μm×150 mm,3μm)分离,用流动相0. 1%甲酸水-乙腈溶液(98∶2)和0. 1%甲酸乙腈-水溶液(98∶2)梯度洗脱,在正离子模式下,通过纳升电喷雾四极杆飞行时间质谱进行检测,数据经Protein PilotTM软件及blast分析,筛选出潜在的特征肽段。消化后的样品再采用Eclipse Plus C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm)分离,用流动相乙腈和1%甲酸水溶液梯度洗脱,在正离子模式下,通过电喷雾四极杆/线性离子阱串联质谱的多反应监测触发增强子离子扫描模式进行检测,进一步确认肽段的特异性。最终筛选并确证了3种猪源性胶原蛋白特征肽段,4种牛源性胶原蛋白特征肽段,1种羊源性胶原蛋白特征肽段。所筛选的特征肽段具有良好的耐热性,可为动物源性胶原蛋白鉴定提供一种特异性强、准确可靠的检测方法。 展开更多

关键词 特征肽段 胶原蛋白 液相色谱-质谱 物种来源

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超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱分析沼虾过敏原蛋白 被引量：8

11

作者 潘晓东 黄百芬 +3 位作者 蔡增轩 王梦莉 韩见龙 陈苘 《预防医学》 2020年第10期1010-1012,1017,共4页

目的建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白。方法基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰蛋白酶40℃消化6 h,肽段经过色谱分离后采用四极杆静电场轨道离... 目的建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白。方法基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰蛋白酶40℃消化6 h,肽段经过色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱质谱(Full MS/dd-MS-2监测模式,TopN=10)测定,利用UniProt蛋白数据库和Proteome Discoverer软件鉴定过敏原蛋白。结果获得4种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌浆钙结合蛋白和血蓝蛋白,肽段覆盖率分别为53%、36%、12%和12%,翻译后修饰的位点有天冬氨酸(D)的甲基化,天冬酰氨(N)和谷氨酰氨(Q)的脱酰氨化以及蛋氨酸(M)的氧化。结论超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱能获得丰富的肽段及碎片信息,灵敏度和分辨率较高,可用于虾及虾制品的过敏原蛋白鉴定和分析。 展开更多

关键词 超高效液相色谱 四极杆静电场轨道离子阱质谱 过敏原蛋白 虾 特征肽段

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超高效液相色谱-串联质谱法测定肉制品中的虾过敏原 被引量：3

12

作者 刘彤彤 梁瑞强 +4 位作者 韩伟娜 罗娇依 曹进 孙姗姗 陈启 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第6期292-299,共8页

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法检测肉制品中虾过敏原的定量方法。方法:选取基质较为复杂的肉制品(西式火腿、香肠和肉丸)作为研究对象。样品经磷... 目的:建立超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)法检测肉制品中虾过敏原的定量方法。方法:选取基质较为复杂的肉制品(西式火腿、香肠和肉丸)作为研究对象。样品经磷酸盐缓冲液(Phosphate buffer solution,PBS)超声提取30 min,离心(10000 r/min,15℃,10 min)后加入乙腈去除脂肪,取样液加入内标肽段(2.5μmol/L,40μL)和胰蛋白酶(1 mg/mL,10μL)在37℃下酶解16 h后上液质进行分析,样品经T3柱进行分离,0.1%甲酸-水溶液和乙腈梯度洗脱,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)正离子模式采集数据,内标法定量。结果:采用该方法测定肉制品中虾过敏原蛋白含量,其中定量肽段在0.001~2.0μmol/L范围内,线性关系良好,决定系数R2为1.0000,检出限为0.67 mg/kg,定量限为2.00 mg/kg;在三个加标浓度水平下,回收率为83.2%~104.5%,精密度为2.63%~7.92%。结论:该方法具有特异性强、灵敏度高和回收率好等优势,适用于肉制品中虾过敏原的筛查定量。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 肉制品 虾过敏原 特征肽段 原肌球蛋白

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超高效液相色谱-串联质谱法检测大豆主要过敏原蛋白 被引量：7

13

作者 李丽芳 黄文胜 +4 位作者 张九凯 王彦波 傅玲琳 韩晓祥 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第24期316-324,共9页

为准确检测大豆过敏原,筛查验证表征5类主要大豆过敏原蛋白的特征肽段,建立基于超高效液相色谱-串联质谱技术的大豆主要过敏原检测方法。优化样品总蛋白提取方法,将大豆蛋白经测序级胰蛋白酶酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间... 为准确检测大豆过敏原,筛查验证表征5类主要大豆过敏原蛋白的特征肽段,建立基于超高效液相色谱-串联质谱技术的大豆主要过敏原检测方法。优化样品总蛋白提取方法,将大豆蛋白经测序级胰蛋白酶酶解后,利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱对酶解产物进行分析,结合Uniprot数据库完成计算机检索,针对性地鉴定24种大豆样品的11种主要过敏原(大豆球蛋白的G1、G2、G3、G4和G5亚基、β-伴大豆球蛋白的α’、α和β亚基、Gly m Bd 30K、Gly m Bd 28K及Kunitz型胰蛋白酶抑制剂)的多肽片段,并从中挖掘用以表征各过敏原的肽段,最终得到29条响应值高、重复性好的适于质谱检测的特征肽段;进一步利用高效液相色谱-三重四极杆质谱多反应监测模式对这些特征肽段进行验证,发现这些肽段的特异性、灵敏度和稳定性均符合质谱检测要求,可为食品中大豆过敏原的全面、准确检测提供一定的理论基础和技术支持。 展开更多

关键词 大豆 过敏原 特征肽段 超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱 高效液相色谱-三重四极杆质谱

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基于鸟枪蛋白组学与质谱多反应监测技术的三文鱼物种鉴别研究 被引量：5

14

作者 张九凯 马聪聪 +4 位作者 邢冉冉 于宁 康文瀚 邓婷婷 陈颖 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2022年第16期5271-5278,共8页

目的 对大西洋鲑(Salmo salar)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)中的多肽进行分离鉴定,筛选特征肽段,建立不同种类三文鱼的物种鉴别方法。方法 以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基... 目的 对大西洋鲑(Salmo salar)、大马哈鱼(Oncorhynchus keta)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)中的多肽进行分离鉴定,筛选特征肽段,建立不同种类三文鱼的物种鉴别方法。方法 以市场上常见的大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种为研究对象,基于鸟枪蛋白组学分析流程,样品经蛋白质提取、胰蛋白酶消化和超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-QTOF-MS)分离鉴定,得到的总离子流图谱(total ion chromatogram,TIC)与Uni Prot蛋白质数据库对比分析,筛选得到3个物种的特征肽段,利用Skyline软件构建特征肽的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)离子对,然后经三重四极杆质谱仪进行鉴定。结果 最终共筛选出7条特征肽段,包括大西洋鲑中的4条特征肽段,大马哈鱼中的1条特征肽段,虹鳟中的2条特征肽段。结论 基于鸟枪蛋白组学,结合多反应监测技术,筛选得到了大西洋鲑、大马哈鱼和虹鳟3个物种中的特征肽段,成功建立了不同种类三文鱼的物种精准定性鉴别方法。 展开更多

关键词 三文鱼 物种鉴别 鸟枪蛋白组学 多反应监测 特征肽段

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超高效液相色谱-串联质谱法测定牛源性酪蛋白方法中酶解条件的优化及酶解性能的评价 被引量：6

15

作者 孙姗姗 李婷婷 +3 位作者 陈启 罗娇依 李刚 曹进 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1157-1163,共7页

为提高质谱法测定蛋白质的准确性,对酶解条件的优化和选择并建立最佳条件,以期提高回收率。设计了7种酶解方法进行了比较,并引入豆浆作为阴性基质。其中直接酶解法被选为最佳方法,其操作操作过程如下:取1g豆浆粉溶于10mL的50mmol·L... 为提高质谱法测定蛋白质的准确性,对酶解条件的优化和选择并建立最佳条件,以期提高回收率。设计了7种酶解方法进行了比较,并引入豆浆作为阴性基质。其中直接酶解法被选为最佳方法,其操作操作过程如下:取1g豆浆粉溶于10mL的50mmol·L^-1三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲溶液中制成豆浆提取液,取200nmol·L^-1β-酪蛋白溶液200μL,加入豆浆提取液300μL,再加10μg质谱级胰蛋白酶,混匀后于37℃恒温酶解16h,加入10%(体积分数)甲酸溶液10μL,终止反应,加水定容至1.0mL,高速离心10min,取上清液进样,按仪器工作条件测定VLPVPQK特征肽段的峰面积。此方法的平均酶解效率为106%,相对标准偏差(n=5)为5.1%。方法中选择酶的加入量w酶与β-酪蛋白量wβ-酪蛋白量之比为1∶20。在方法的优化过程中不建议进行还原和烷基化步骤。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 酪蛋白 特征肽段 胰蛋白酶 酶解效率

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超高效液相色谱-三重四极杆质谱法用于含阿胶中成药中胶类皮源检测研究 被引量：2

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作者 李婷 程显隆 +6 位作者 王郡瑶 李明华 郭晓晗 李向日 马潇 魏锋 马双成 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期260-265,共6页

目的建立含阿胶中成药阿胶补血口服液、阿归养血颗粒中阿胶类皮源检测方法,包括阿胶的专属性检测方法,以及猪皮源、马皮源、牛皮源掺伪检查研究。方法采用胰蛋白酶对用0.01 g·mL^(-1)NH4HCO3溶解的阿归养血颗粒及阿胶补血口服液中... 目的建立含阿胶中成药阿胶补血口服液、阿归养血颗粒中阿胶类皮源检测方法,包括阿胶的专属性检测方法,以及猪皮源、马皮源、牛皮源掺伪检查研究。方法采用胰蛋白酶对用0.01 g·mL^(-1)NH4HCO3溶解的阿归养血颗粒及阿胶补血口服液中阿胶进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-QqQ-MS)对样品进行检测。色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3-C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为体积分数0.1%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0~25 min,95%A→80%A;25~40 min,80%A→50%A),流速0.3 mL·min^(-1),柱温30℃,进样量5μL;离子化模式为ESI+,进行多反应监测,选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8;马源寡肽A特征分子离子峰m/z 386.4(双电荷)→322.3和m/z 386.4(双电荷)→377.3;新阿胶特征分子离子峰m/z 774.5(双电荷)→799.8和m/z 774.5(双电荷)→1034.6;黄明胶特征分子离子峰m/z 641.3(双电荷)→726.2和m/z 641.3(双电荷)→783.3作为检测离子对。结果10批市售阿归养血颗粒和10批阿胶补血口服液样品中均可检出阿胶的特征肽段,其中的3批阿归养血颗粒样品和2批阿胶补血口服液样品中同时检出了马皮特征肽。结论所建立的方法经方法学验证,专属性强,可用于中成药中阿胶的检测及掺伪检查。 展开更多

关键词 阿归养血颗粒 阿胶补血口服液 特征肽段 专属性鉴别 超高效液相色谱-三重四极杆质谱

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基于特征肽段的鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别研究 被引量：5

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作者 郭晓晗 程显隆 +3 位作者 柳温曦 李明华 魏锋 马双成 《中国现代中药》 CAS 2021年第6期993-998,共6页

目的:基于特征肽段建立鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别方法。方法:针对鹿茸的主要成分蛋白质,采用胰蛋白酶对正品鹿茸(梅花鹿、马鹿)及伪品鹿茸(驯鹿)进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)进行测定,结合数据... 目的:基于特征肽段建立鹿茸及其混伪品种的专属性鉴别方法。方法:针对鹿茸的主要成分蛋白质,采用胰蛋白酶对正品鹿茸(梅花鹿、马鹿)及伪品鹿茸(驯鹿)进行酶解,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF-MS)进行测定,结合数据分析软件,以主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对3种鹿茸样品的液质数据进行分析,找出驯鹿的专属性特征肽。利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱法(UPLC-QQQ/MS)进一步验证驯鹿特征肽段的专属性,同时基于特征肽段建立正品鹿茸的特征图谱。结果:确定了伪品鹿茸的2个特征肽段并建立了正品鹿茸的特征图谱。结论:伪品鹿茸的2个特征肽段可用于正品鹿茸中混有伪品鹿茸的专属性鉴别,建立的正品鹿茸的特征图谱方法重复性好、操作简便,可用于鹿茸及其混伪品种的鉴别。 展开更多

关键词 鹿茸 胰蛋白酶 主成分分析 特征肽段 特征图谱 专属性

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基于蛋白质/肽组学的三文鱼物种溯源

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作者 蒋冰雪 张晓梅 +3 位作者 丁矛 王萍 张鸿伟 陈桂东 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2023年第10期273-283,共11页

不同三文鱼在外观和物种亲缘关系上都十分相近,本研究旨在建立一种大西洋鲑鱼、大马哈鱼和虹鳟鱼的物种溯源方法。基于质谱鸟枪法蛋白质组学,在95%置信水平上共鉴定得到912个蛋白质。经过对不同三文鱼特征蛋白质相应肽段的检测特异性和... 不同三文鱼在外观和物种亲缘关系上都十分相近,本研究旨在建立一种大西洋鲑鱼、大马哈鱼和虹鳟鱼的物种溯源方法。基于质谱鸟枪法蛋白质组学,在95%置信水平上共鉴定得到912个蛋白质。经过对不同三文鱼特征蛋白质相应肽段的检测特异性和物种特异性筛选分析,得到潜在的物种特征肽段生物标志物。通过多反应监测的靶向肽组学,进一步验证物种特征肽段生物标志物,得到了大西洋鲑鱼10条物种特征肽段、大马哈鱼2条物种特征肽段和虹鳟鱼3条物种特征肽段,并对市售的商品三文鱼产品进行了方法应用。结果显示,该方法操作方便、准确可靠、特异性好、适用性强,可在常规分析实验室对商品三文鱼产品进行有效的鉴别分析。 展开更多

关键词 大西洋鲑鱼 大马哈鱼 虹鳟鱼 特征肽段 质谱 蛋白质组学 物种鉴别

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羊乳婴幼儿配方粉中牛乳成分鉴别与测定模型的建立

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作者 张立佳 莫楠 +5 位作者 刘丽君 韩晓旭 赖世云 任一平 尹睿杰 李翠枝 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第8期195-203,共9页

目的 基于超高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立羊乳婴幼儿配方粉中牛乳的鉴别与测定模型,实现羊乳婴幼儿配方粉中牛乳成分的快速分析。方法 样品经胰蛋白酶水... 目的 基于超高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)建立羊乳婴幼儿配方粉中牛乳的鉴别与测定模型,实现羊乳婴幼儿配方粉中牛乳成分的快速分析。方法 样品经胰蛋白酶水解,采用四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(quadrupole-orbitrap high resolution mass spectrometry, Q-Orbitrap-HRMS)结合蛋白数据库筛选特征肽段。选择具有代表性的羊全脂乳粉、牛全脂乳粉、羊乳清粉、牛乳清粉,分别按不同的比例进行混合, UPLC-MS/MS测定,通过换算系数构建特征肽与牛全脂奶粉和牛乳清粉的鉴别和定量分析模型。结果 牛β-酪蛋白与牛全脂奶粉的换算系数k1为2.8343,牛β-乳球蛋白与牛全脂奶粉的换算系数k2为1.6542,牛β-乳球蛋白与牛乳清粉的换算系数k3为27.8598。牛β-乳球蛋白和牛β-酪蛋白在20~1000 nmol/L范围内,线性关系良好;方法的检出限为1.9 g/kg,定量限为6.4g/kg;日内精密度为3.2%~8.1%,日间精密度为3.4%~7.3%,准确度为99.0%~103.0%;经3家实验室验证,方法准确度为91.5%~103.0%;重复性相对标准偏差为4.3%~5.1%,再现性相对标准偏差为4.7%~5.7%。结论 该模型可分别对羊乳婴幼儿配方粉中牛乳清粉和牛全脂乳粉进行鉴别与测定,两者之和即为牛乳含量。该模型极大地简化了前处理,具有操作简便、快速、方法实用性强等优点。 展开更多

关键词 超高效液相色谱-串联质谱法 特征肽段 羊乳婴幼儿配方粉 牛乳 模型

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超高效液相色谱串联质谱法鉴定皮革的动物源属性 被引量：3

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作者 杜业刚 刘奕雄 +2 位作者 王韦达 朱雨田 郑燕燕 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2022年第3期74-78,共5页

基于猪牛羊皮的特征肽段建立了一种鉴定皮革动物源属性的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)。皮革样品经高温高压提取蛋白,酶解消化,收集多肽待测溶液,经C_(18)柱分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,通过多反应监测(MRM)... 基于猪牛羊皮的特征肽段建立了一种鉴定皮革动物源属性的超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)。皮革样品经高温高压提取蛋白,酶解消化,收集多肽待测溶液,经C_(18)柱分离,以0.1%甲酸水溶液和乙腈为流动相梯度洗脱,通过多反应监测(MRM)扫描,从多肽溶液中特征肽段的出峰情况来鉴定皮革样品的动物源属性。所建立的方法特异性强,适用范围广,准确可靠,为皮革鉴定提供了新的技术手段。 展开更多

关键词 皮革 液相色谱-串联质谱 特征肽段

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