反义DLC-1基因对结直肠癌LoVo细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：8

1

作者 金月玲 商延芳 +2 位作者 田小强 方媛 黄培林 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期493-496,共4页

目的应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响。方法构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株。采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC... 目的应用核糖核酸干扰(RNAi)技术,通过对大肠癌细胞株LoVo中DLC-1基因mRNA表达的抑制,初步探讨DLC-1基因对大肠癌细胞株的生物学行为影响。方法构建DCL-1的RNAi重组体pGCsiDLC,转染大肠癌LoVo细胞株。采用RT-PCR观察转染前后细胞株中DLC-1 mRNA以及Bax、Bcl-2基因表达的改变,MTT比色法检测转染前后细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建发卡siRNA真核表达载体pGCsiDLC;pGCsiDLC转染LoVo细胞后,电泳显示DLC-1 mRNA表达水平明显下降;LoVo细胞生长曲线增长幅度亦随时间的增加而逐渐增高,在48h最为明显,RNAi组细胞比脂质体组及空白对照组细胞增殖明显增高(P<0.05);干扰后的LoVo细胞株G0/G1期发生阻滞,而G2/M期细胞数量分布减少。而Bax和bcl-2基因表达在干扰前后未见明显改变。结论成功构建载体介导的DLC-1靶向RNAi重组体可有效抑制LoVo细胞DLC-1 mRNA表达;DLC-1基因可抑制结直肠癌细胞增殖并且对细胞周期重新分布,其可能与结直肠癌的发生发展有一定关系,可能是一个新的抑癌基因。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 DLC-1基因 LOVO细胞株 结直肠癌

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RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究 被引量：5

2

作者 程光 章翔 +5 位作者 鲍炜 张赟 张新海 曹卫东 高大宽 宋蕾 《医学研究生学报》 CAS 2006年第4期292-297,i0011,共7页

目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上... 目的:通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸(siRNA)表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞U87细胞中对MAGE1基因表达的干涉作用。方法:化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE1基因核苷酸链,克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建核糖核酸干扰(RNAi)质粒载体。利RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干效果。结果:重组构建的pSUPERMAGE1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成地插入至预计位点,且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达RTPCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论:载体的成功构建并能对U细胞中的MAGE1分子进行RNAi,为进一步研究MAGE1在肿瘤中的作用,分析基因功能,展开肿瘤基因治疗奠了基础。 展开更多

关键词 PSUPER 短片段双链核糖核酸 核糖核酸干扰 MAGE—1 胶质瘤

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Caspase-3 siRNA减少骨髓间充质干细胞稳定株细胞凋亡的实验研究 被引量：6

3

作者 刘立宝 黄蕾 +4 位作者 张军航 廖洪映 胡爱玲 许世磊 华平 《器官移植》 CAS CSCD 2014年第5期283-288,共6页

目的探讨在体外采用Caspase-3小干扰核糖核酸(siRNA)减少骨髓间充质干细胞(MSC)稳定株细胞凋亡的方法,以构建稳定表达的MSC细胞株。方法使用逆转录病毒包装系统,在293FT细胞中进行包装生产含Caspase-3 siRNA的病毒颗粒,然后转染给大鼠M... 目的探讨在体外采用Caspase-3小干扰核糖核酸(siRNA)减少骨髓间充质干细胞(MSC)稳定株细胞凋亡的方法,以构建稳定表达的MSC细胞株。方法使用逆转录病毒包装系统,在293FT细胞中进行包装生产含Caspase-3 siRNA的病毒颗粒,然后转染给大鼠MSC,对转染后的细胞进行筛选并扩增培养得到稳定株细胞。根据逆转录病毒的特性,利用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-QPCR)对细胞株进行稳定表达的鉴定,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定(TUNEL)法对稳定株细胞和正常MSC进行凋亡检测并进行定位比较。结果与正常细胞比较,MSC稳定株细胞中的Caspase-3蛋白表达量和mRNA含量明显降低;在同样体外环境下,MSC稳定株细胞的凋亡数量比正常细胞明显减少。结论利用逆转录病毒包装系统可得到稳定表达Caspase-3 siRNA的MSC稳定株细胞。MSC稳定株细胞比正常细胞凋亡明显减少。 展开更多

关键词 CASPASE-3 核糖核酸干扰 逆转录病毒 细胞凋亡 骨髓间充质干细胞

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ShRNA-LDH纳米颗粒的制备及薇甘菊生物防治 被引量：1

4

作者 莫亦琳 陈伟钊 +4 位作者 黄丽娟 吴飞燕 肖念 于宇 刘学东 《深圳大学学报（理工版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期163-170,共8页

核糖核酸干扰(ribonucleic acid interference,RNAi)技术在植物保护中具有高效、安全和环保的特点.外源喷施短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)可以有效沉默薇甘菊(Mikania micrantha)叶绿素a/叶绿素b结合蛋白相关基因.为提高喷施shRN... 核糖核酸干扰(ribonucleic acid interference,RNAi)技术在植物保护中具有高效、安全和环保的特点.外源喷施短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)可以有效沉默薇甘菊(Mikania micrantha)叶绿素a/叶绿素b结合蛋白相关基因.为提高喷施shRNA对薇甘菊的防治效果,制备直径为10~100 nm的层状双氢氧化物(layered double hydroxide,LDH)黏土纳米片为shRNA的载体,该载体具有良好的生物相容性,具环境友好.研究发现,LDH结合shRNA的最佳质量比为1∶10.shRNA喷施实验表明,有轻微创伤的薇甘菊叶片对shRNA更敏感,并且LDH直接喷施对薇甘菊的生长几乎没有任何影响.为比较LDH-shRNA和单独的shRNA对薇甘菊的控制效果,利用分别搭载了6个shRNA的LDH纳米颗粒或单独的shRNA喷施薇甘菊叶片,在喷施6 d后观察到叶片喷施LDH-shRNA有更加明显的坏死表型.研发的基于LDH的shRNA携带系统可显著提高RNAi在防控薇甘菊中的有效性. 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 植物保护 薇甘菊 叶绿素a/b结合蛋白 黏土纳米片 短发夹核糖核酸

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siRNA分子设计研究进展 被引量：3

5

作者 孟庆霞 徐宝林 《吉林大学学报（信息科学版）》 CAS 2012年第2期198-202,共5页

为了设计高效的siRNA(Short-interfering Ribonucleic Acid)分子、最大限度地减少siRNA分子的脱靶效应(off-target effects),siRNA分子设计已经成为热门研究领域。siRNA分子设计主要是基于序列和能量特征,以及靶标的二级结构特征,基于... 为了设计高效的siRNA(Short-interfering Ribonucleic Acid)分子、最大限度地减少siRNA分子的脱靶效应(off-target effects),siRNA分子设计已经成为热门研究领域。siRNA分子设计主要是基于序列和能量特征,以及靶标的二级结构特征,基于这些特征设计的siRNA分子已经有了较高的抑制基因表达的效率。RNAi(RNA in-terference)在基因发现以及疾病治疗领域已有非常广泛的应用,就siRNA分子设计近年的研究进展作一综述,为今后siRNA研究提供参考。 展开更多

关键词 小干扰核糖核酸分子设计 核糖核酸干扰 基因沉默 脱靶效应

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RNA干扰技术及其在放射医学研究中的应用 被引量：3

6

作者 沈波 鞠桂芝 《辐射研究与辐射工艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期321-324,共4页

核糖核酸(RNA)干扰技术是一个经典的基因调控途径,它可使与小片段干扰性RNA序列互补的RNA发生降解。从其应用前景上说,它会成为研究特定基因功能、细胞内防御机制及维护RNA正常功能的重要工具,RNA干扰技术也会被应用于放射医学研究领域... 核糖核酸(RNA)干扰技术是一个经典的基因调控途径,它可使与小片段干扰性RNA序列互补的RNA发生降解。从其应用前景上说,它会成为研究特定基因功能、细胞内防御机制及维护RNA正常功能的重要工具,RNA干扰技术也会被应用于放射医学研究领域,成为辐射敏感性、辐射效应及放射治疗等研究工作的有效工具。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 小片段干扰性核糖核酸

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大鼠细胞因子信号转导抑制因子3基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：4

7

作者 张旭 刘正娟 +1 位作者 翟娜 王玉川 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期756-759,共4页

目的研究构建大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体的方法。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后... 目的研究构建大鼠细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体的方法。方法根据大鼠SOCS3基因(NM053565),用Ambion在线软件选择3个靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补单链寡核苷酸,与经BamHⅠ和XhoⅠ酶切后的慢病毒载体质粒pRNA-Lenti-绿色荧光蛋白(GFP)(含U6启动子和GFP)连接产生pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒重组质粒,然后分别转染C6大鼠神经胶质瘤细胞,通过荧光显微镜观察细胞转染情况,利用荧光实时定量PCR方法检测RNAi组(siRNA1、siRNA2、siRNA3),空白细胞组和阴性序列组(siRNA-Negative)SOCS3的表达情况,筛选出干扰效果最佳的重组质粒。此慢病毒重组质粒与慢病毒包装混合物共转染293T细胞,包装产生慢病毒,收集病毒上清,采取系列稀释法测定慢病毒滴度。结果将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。荧光实时定量PCR检测显示慢病毒重组质粒感染C6大鼠神经胶质瘤细胞后,与空白细胞组比较,3个RNAi组均不同程度地抑制SOCS3表达,其中siRNA1组抑制效果最佳,可使SOCS3 mRNA表达量下调达80%。系列稀释法检测慢病毒悬液的滴度为1.0×1010TU.L-1。结论运用pRNA-Lenti-GFP载体构建的pRNA-Lenti-SOCS3-GFP慢病毒载体可有效地抑制大鼠SOCS3的表达。大鼠SOCS3基因RNAi慢病毒载体的构建成功,为SOCS3相关疾病的深入研究和治疗奠定基础。 展开更多

关键词 细胞因子信号转导抑制因子3 核糖核酸干扰 慢病毒载体

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RNA干扰对5637膀胱癌细胞生存素基因表达的影响 被引量：3

8

作者 薛义军 温端改 +1 位作者 侯建全 何军 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期630-632,共3页

目的研究RNA干扰(RNAi)对膀胱癌5637细胞生存素(survivin)基因表达的干扰效应。方法化学合成生存素序列特异性双链RNA(dsRNA),用Lipofectamine2000转染5637细胞,采用荧光定量PCR检测生存素基因的表达,用流式细胞仪检测Annexin v标记的... 目的研究RNA干扰(RNAi)对膀胱癌5637细胞生存素(survivin)基因表达的干扰效应。方法化学合成生存素序列特异性双链RNA(dsRNA),用Lipofectamine2000转染5637细胞,采用荧光定量PCR检测生存素基因的表达,用流式细胞仪检测Annexin v标记的凋亡细胞。结果序列特异性dsRNA-生存素可显著抑制生存素基因在转录水平上的表达,和阴性对照组相比,浓度为40nmol/L的dsRNA-生存素在转染5637细胞24、48h后生存素mRNA表达的抑制率分别为29%和53%,浓度为100nmol/L时抑制率为46%和86%。生存素基因表达的抑制与5637细胞的凋亡呈正相关。结论转染dsRNA-生存素可明显抑制膀胱癌5637细胞株生存素基因的表达,并伴有细胞凋亡。 展开更多

关键词 膀胱癌 核糖核酸干扰 5637细胞株 生存素基因

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RNA干扰沉默Ki67基因对裸鼠肾癌细胞移植瘤生长及凋亡的影响 被引量：4

9

作者 郑典宝 郑骏年 +1 位作者 陈家存 孙晓青 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期1742-1744,F0003,共4页

目的应用RNA干扰(RNAi)技术沉默Ki67基因,探讨其对裸鼠人肾癌细胞移植瘤细胞生长及凋亡的影响。方法建立裸鼠人肾癌细胞移植瘤模型,随机分组,于肿瘤内分别注射生理盐水0.2 ml(C组)、pSilencer空质粒20μg/只(P组)、pSilencer-Ki67重组质... 目的应用RNA干扰(RNAi)技术沉默Ki67基因,探讨其对裸鼠人肾癌细胞移植瘤细胞生长及凋亡的影响。方法建立裸鼠人肾癌细胞移植瘤模型,随机分组,于肿瘤内分别注射生理盐水0.2 ml(C组)、pSilencer空质粒20μg/只(P组)、pSilencer-Ki67重组质粒20μg/只(PK组),每隔2天注射一次,共7次。取肿瘤测量体积,免疫组化染色检测Ki67的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 PK组移植瘤体积明显小于C、P组,移植瘤细胞Ki67表达率也明显降低,肿瘤细胞凋亡率明显增加(P<0.01)。结论应用RNAi技术沉默Ki67基因可以降低人肾癌细胞裸鼠移植瘤Ki67基因表达,同时引起细胞凋亡进而抑制肿瘤的生长。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 KI67基因 肾癌 细胞凋亡

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食管鳞癌中微小核糖核酸let-7的表达及病理生物学意义 被引量：3

10

作者 刘清 吕国栋 +4 位作者 郑树涛 刘涛 伊力亚尔·夏合丁 林仁勇 卢晓梅 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期231-234,共4页

目的 探讨微小RNA（miRNA）1et-7对食管鳞癌细胞增殖的影响及食管鳞癌组织中let-7表达水平与临床病理特征间的关系.方法 利用RNA干扰（RNAi）和细胞转染技术将食管鳞癌细胞Eca109分别转染入let-7、let-7抑制剂及随机序列.以正常培养的Ec... 目的 探讨微小RNA（miRNA）1et-7对食管鳞癌细胞增殖的影响及食管鳞癌组织中let-7表达水平与临床病理特征间的关系.方法 利用RNA干扰（RNAi）和细胞转染技术将食管鳞癌细胞Eca109分别转染入let-7、let-7抑制剂及随机序列.以正常培养的Eca109细胞为阴性对照组.噻唑蓝（MTT）比色法检测各组Eca109细胞的增殖情况.实时荧光定量聚合酶链反应（qRTPCR）检测各组细胞、45例食管鳞癌组织及其癌旁组织中let-7的表达水平,并分析其与食管鳞癌临床病理特征间的关系.结果 转染后72 h,转染let-7组吸光度（A）值较阴性对照组明显降低（P=0.005）,转染let-7抑制剂组A值较阴性对照组明显升高（P=0.029）.与阴性对照组let-7表达量比较,转染let-7组表达增加33%（1.33比1.00,P=0.039）,转染let-7抑制剂组表达降低50%（0.50比1.00,P=0.014）.食管鳞癌组织和癌旁组织中let-7相对表达量的比值为0.66±0.47,差异有统计学意义（P=0.001）.汉族患者食管鳞癌组织中let-7相对表达量（0.48±0.43）低于哈萨克族（0.88±0.51,P=0.019）.低分化食管鳞癌组织中let-7相对表达量（0.42±0.30）低于高分化食管鳞癌组织（0.84±0.38,P=0.015）.有淋巴结转移者食管鳞癌组织中let-7相对表达量（0.50±0.35）低于无淋巴结转移者（0.80±0.52,P=0.032）.结论 let-7对食管鳞癌的发生、发展起抑制作用,其表达水平与组织分化程度、淋巴结转移及民族相关. 展开更多

关键词 食管肿瘤 癌 鳞状细胞 核糖核酸 小核 转染 核糖核酸干扰

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小干扰RNA沉默Bcl-2表达增强食管癌细胞放射敏感性研究 被引量：2

11

作者 刘冬梅 李国文 +1 位作者 田希凤 张松辉 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2011年第5期435-437,共3页

目的探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA（siRNA）对食管癌细胞（EC9706细胞）Bcl-2蛋白表达和凋亡的影响及放射增敏作用。方法化学合成Bcl-2基因的siRNA，通过脂质体转染法转入EC9706细胞。流式细胞仪检测转染前后Bcl-2蛋白表达及细胞凋... 目的探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA（siRNA）对食管癌细胞（EC9706细胞）Bcl-2蛋白表达和凋亡的影响及放射增敏作用。方法化学合成Bcl-2基因的siRNA，通过脂质体转染法转入EC9706细胞。流式细胞仪检测转染前后Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡，成克隆分析siRNA联合x线照射对EC9706细胞的放射敏感性影响。结果Bcl-2siRNA2、Bcl-2siRNA2、Bcl-2siRNA，转染后Bcl-2蛋白在EC9706细胞中的阳性表达率分别为25．13％、38．87％、30．55％，较对照组的84．28％明显下降（t=4．01、3．04、3．64，P均〈0．05）。Bcl-2siRNA．转染组凋亡率为33．86％，明显高于空白对照组的5．51％（t=6．55，P〈0．01）和阴性siRNA1转染组的5．59％（t=6．54，P〈0．01）；Bcl-2siRNA1联合x线照射的细胞凋亡率为56．76％，明显高于单纯照射组的24．51％（t=3．59，P〈0．05）。成克隆分析的Bcl-2siRNA，转染加照射组D0、Dq、SF2值均低于单纯照射组，放射增敏比为1．33（D0值之比）。结论Bcl-2基因的特异性siRNA可明显增强EC9706细胞的放射敏感性，具有良好临床应用前景。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 放射敏感性 BCL-2表达 细胞系 食管肿瘤

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化学合成小干扰核糖核酸抑制大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达 被引量：2

12

作者 邱雪峰 董念国 +2 位作者 孙宗全 苏伟 史嘉玮 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2009年第4期304-307,共4页

目的:探讨血管壁组织因子小干扰核糖核酸(siRNA)对大鼠血管平滑肌细胞组织因子基因沉默作用的可行性和有效性。方法:设计并合成针对大鼠组织因子的25 bp双链siRNA分子。使用组织因子siRNA、对照siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞,同时设立空... 目的:探讨血管壁组织因子小干扰核糖核酸(siRNA)对大鼠血管平滑肌细胞组织因子基因沉默作用的可行性和有效性。方法:设计并合成针对大鼠组织因子的25 bp双链siRNA分子。使用组织因子siRNA、对照siRNA转染大鼠血管平滑肌细胞,同时设立空白对照,实验共分6组(各组n=5)。荧光显微镜观察转染效率。血小板源性生长因子-BB刺激血管平滑肌细胞后逆转录多聚酶链反应检测组织因子信使核糖核酸表达,免疫印迹和免疫组化检测组织因子蛋白表达。结果:siRNA成功转染到血管平滑肌细胞,转染效率约(90.0±2.3)%。3对候选siRNA筛选出基因抑制效率最高一对,与阴性对照组相比,转染24 h组织因子信使核糖核酸表达减少(86.0±0.6)%,转染48 h蛋白质印迹分析组织因子蛋白表达减少(92.0±1.0)%,同时免疫组化检测组织因子表达明显减弱。结论:RNA干扰能明显下调大鼠血管平滑肌细胞组织因子表达。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 组织因子 血管平滑肌细胞

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短发夹RNA缄默survivin基因对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响 被引量：3

13

作者 黄涛 胡群 +2 位作者 陶红芳 刘爱国 胡迎 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期849-851,共3页

目的探讨survivin短发夹RNA(shRNA)表达质粒对白血病细胞株体外生长和凋亡的影响。方法酶切法构建干扰survivin基因表达的重组质粒和阴性对照质粒,电击转染质粒入Jurkat细胞。实验分为未转染组、无功能shRNA组(阴性对照组)及重组质粒组... 目的探讨survivin短发夹RNA(shRNA)表达质粒对白血病细胞株体外生长和凋亡的影响。方法酶切法构建干扰survivin基因表达的重组质粒和阴性对照质粒,电击转染质粒入Jurkat细胞。实验分为未转染组、无功能shRNA组(阴性对照组)及重组质粒组。分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织细胞化学染色法检测各组细胞中survivin mRNA、蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定各组细胞的生长抑制率,流式细胞仪计数(FCM)测定各组细胞凋亡率。结果DNA测序证实sur-vivin短发夹RNA表达质粒和阴性对照质粒构建成功。重组质粒组与未转染组及无功能shRNA组比较,RT-PCR结果显示转染后重组质粒转染组survivin基因表达相对于未转染组及阴性对照组显著下降(Pa<0.05);免疫组织细胞化学染色结果显示重组质粒转染组survivin蛋白表达相对于未转染组及阴性对照组显著下降;MTT显示重组质粒生长抑制率为(24.65±1.10)%,而未处理组为(2.04±0.16)%,阴性质粒组为(2.17±0.15)%;FCM结果示未转染组细胞凋亡率为(2.13±0.42)%,阴性质粒组凋亡率为(2.55±0.95)%,重组质粒转染组细胞凋亡率为(11.48±1.11)%。shRNA重组质粒介导的RNA干扰抑制survivin表达,抑制Jurkat细胞生长和促进其凋亡(P<0.05)。结论靶向为survivin基因的RNA干扰技术可为儿童白血病治疗提供新的手段。 展开更多

关键词 survivin 核糖核酸干扰 白血病

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靶向VEGF siRNA联合5-FU对人乳腺癌MCF-7荷瘤裸鼠的作用 被引量：3

14

作者 刘小梅 张诚霖 +4 位作者 殷荣平 郑曦晨 房兆续 胡海天 王学祥 《江苏医药》 CAS 2017年第10期681-684,F0003,共5页

目的探讨慢病毒介导靶向VEGF小干扰RNA(siRNA)联合应用5-氟尿嘧啶(5-FU)对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞荷瘤裸鼠的作用。方法 (1)以携带VEGF siRNA序列的慢病毒重组载体(VEGF-RNAi-Lv)及无义序列的慢病毒重组载体(NC-Lv)分别感染正常MCF-7细... 目的探讨慢病毒介导靶向VEGF小干扰RNA(siRNA)联合应用5-氟尿嘧啶(5-FU)对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞荷瘤裸鼠的作用。方法 (1)以携带VEGF siRNA序列的慢病毒重组载体(VEGF-RNAi-Lv)及无义序列的慢病毒重组载体(NC-Lv)分别感染正常MCF-7细胞,Western blot检测各组细胞VEGF蛋白表达量。(2)30只SPF级雌性裸鼠随机分成五组:正常对照组(接种正常MCF-7细胞)、NC-Lv阴性组(接种已感染NC-Lv的MCF-7细胞)、VEGF-siRNA组(接种已感染VEGF-RNAi-Lv的MCF-7细胞)、5-FU组(接种正常MCF-7细胞,腹腔注射5-FU20mg·kg^(-1)·3d^(-1))及VEGF-siRNA+5-FU组(接种已感染VEGF-RNAi-Lv的MCF-7细胞,腹腔注射5-FU 20mg·kg^(-1)·3d^(-1)),测量肿瘤生长曲线;提取各组移植瘤组织的总蛋白,Western blot检测VEGF、p53和Bcl-2蛋白表达量。结果与正常对照组细胞相比,VEGF-siRNA组细胞VEGF蛋白水平降低(P<0.01),NC-Lv阴性组细胞VEGF蛋白水平相近(P>0.05)。与正常对照组和NC-Lv阴性组裸鼠肿瘤生长速度相比,VEGF-siRNA组、5-FU组和VEGF-siRNA+5-FU组肿瘤生长缓慢(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组和NC-Lv阴性组相比,VEGF-siRNA组、5-FU组及VEGF-siRNA+5-FU组VEGF、Bcl-2蛋白水平降低,p53蛋白水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论慢病毒介导的siRNA显著降低人乳腺癌细胞VEGF基因的表达,抑制乳腺肿瘤的生长并诱导细胞的凋亡,提高了乳腺癌细胞对5-FU的敏感性。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 核糖核酸干扰 乳腺癌 5-氟尿嘧啶

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RNA干扰抑制STAT-1基因表达对食管癌细胞放射生物效应影响 被引量：3

15

作者 李曙光 祝淑钗 +2 位作者 刘志坤 王巍 陶晓哲 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第1期53-57,共5页

目的 利用RNA干扰技术抑制人食管癌细胞（ECA109）信号转导与转录活化因子1（STAT 1）基因表达,观察其对放射敏感性和细胞周期影响。 方法 针对基因STAT 1 设计构建干扰质粒pSTAT 1-shRNA,与慢病毒包装质粒混合后共同转染293T细胞,收集... 目的 利用RNA干扰技术抑制人食管癌细胞（ECA109）信号转导与转录活化因子1（STAT 1）基因表达,观察其对放射敏感性和细胞周期影响。 方法 针对基因STAT 1 设计构建干扰质粒pSTAT 1-shRNA,与慢病毒包装质粒混合后共同转染293T细胞,收集病毒液感染ECA109细胞。采用RT-PCR和蛋白印迹法测定STAT 1在mRNA水平和蛋白水平的表达,采用克隆形成实验和流式细胞术检测ECA109细胞放射敏感性和周期分布。 结果 空白对照、转染阴性、转染阳性细胞的D 0-值分别为2.98、3.02、2.03,SF2分别为0.88、0.88、0.83,Dq值分别为1.39、1.57、1.20。4 Gy照射后12、24、48 h 转染阳性细胞比空白对照和转染阴性细胞的G1G0期比例增高（34.13%∶22.03%∶22.27%、43.80%∶28.40%∶28.63%、53.20%∶42.2%∶41.83%,F=7.56、10.01、10.73,P=0.023、0.012、0.010）和G2＋M期比例降低（14.33%∶32.23%∶32.23%、27.73%∶43.53%∶44.00%、14.23%∶27.97%∶27.93%,F=16.86、26.62、40.34,P=0.003、0.001、0.000）。结论 RNA干扰不影响ECA109细胞的增殖活性,可能是通过调节照射后细胞周期分布来增加放射敏感性。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 信号转导与转录活化因子 放射敏感性 细胞周期 细胞系 食管肿瘤

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TIMP-1-shRNA基因体外转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究 被引量：3

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作者 朱颖炜 龚镭 +2 位作者 吴高珏 王小云 陈卫昌 《江苏医药》 CAS 2015年第11期1258-1260,F0003,共4页

目的探讨联合应用RNA干扰与干细胞移植技术在肝纤维化治疗中的应用。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并进行流式细胞学鉴定。按使用慢病毒包装系统建立沉默基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因不同位点... 目的探讨联合应用RNA干扰与干细胞移植技术在肝纤维化治疗中的应用。方法采用全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并进行流式细胞学鉴定。按使用慢病毒包装系统建立沉默基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)基因不同位点分为三组:BMSCs株SH1组(LV-3-TIMP-1-rat-246),SH2组(LV-3-TIMP-1-rat-142),SH3组(LV-3-TIMP-1-rat-373)。同时设立转染空载体组(LV-3-shNC,D组)。观察各组细胞转染前后形态和荧光的表达;抽提蛋白,应用Western blot技术检测TIMP-1蛋白的表达。结果原代培养大鼠BMSCs呈梭形,传代后漩涡状生长。慢病毒转染BMSCs 7d后,各组均可检测到荧光出现,转染前后细胞形态无改变。在3个实验组中,SH3组TIMP-1蛋白表达最低(P<0.05)。结论应用慢病毒包装系统可以建立沉默TIMP-1基因的BMSCs株,为BMSCs联合RNA干扰技术治疗肝纤维化提供了实验基础。 展开更多

关键词 核糖核酸干扰 骨髓间充质干细胞

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针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒的构建及其对人肝癌细胞生长的影响 被引量：2

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作者 李俊 孙倍成 +4 位作者 邓蕾 张勇 席力森 高云 王学浩 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期75-77,共3页

目的构建人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,并观察其对肝癌细胞生长的影响。方法将目的片段亚克隆入慢病毒载体中,包装成病毒后感染人肝癌细胞,检测细胞IKKα、IKKβ的表达,并将感染细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况。结果目的... 目的构建人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,并观察其对肝癌细胞生长的影响。方法将目的片段亚克隆入慢病毒载体中,包装成病毒后感染人肝癌细胞,检测细胞IKKα、IKKβ的表达,并将感染细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况。结果目的片段被成功克隆入载体质粒。pLenti-GFP-IKKα-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKα蛋白表达明显降低,pLenti-GFP-IKKβ-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKβ蛋白表达明显降低。实验组裸鼠皮下肿瘤出现晚且生长缓慢。结论成功构建了针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,包装成病毒后感染人肝癌细胞后能抑制其生长。 展开更多

关键词 IKKα基因 IKKβ基因 核糖核酸干扰 肝癌

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骨桥蛋白siRNA在肝癌HepG2细胞中的沉默效应 被引量：2

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作者 林艳 张国新 +4 位作者 刘兵团 徐泽宽 郝波 王宏娣 黄祖瑚 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期737-739,F0002,共4页

目的观察骨桥蛋白(OPN)RNA干扰(siRNA)在肝癌HepG2细胞中的沉默效应。方法设计合成骨桥蛋白RNA干扰寡核苷酸片段,将之克隆至pGCsi真核表达载体上,并经测序分析鉴定。用脂质体法将质粒转染HepG2细胞筛选稳定转染OPNsiRNA的细胞,并经Weste... 目的观察骨桥蛋白(OPN)RNA干扰(siRNA)在肝癌HepG2细胞中的沉默效应。方法设计合成骨桥蛋白RNA干扰寡核苷酸片段,将之克隆至pGCsi真核表达载体上,并经测序分析鉴定。用脂质体法将质粒转染HepG2细胞筛选稳定转染OPNsiRNA的细胞,并经Westernblot鉴定。结果成功构建3个pGCsiOPN质粒,瞬时转染293T细胞后发现pGCsiOPN2有干扰效应;进一步稳定转染肝癌HepG2细胞,筛选到4株阳性细胞克隆。结论OPNsiRNA在肝癌HepG2细胞中有沉默效应。 展开更多

关键词 骨桥蛋白 核糖核酸干扰 肝癌

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短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54基因的干扰效应 被引量：1

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作者 吕延成 潘晓瑜 +1 位作者 樊俊 黄畅 《中国临床研究》 CAS 2014年第8期901-903,906,F0002,共5页

目的研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因的干扰效应。方法针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(shRNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计... 目的研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2)UL54基因的干扰效应。方法针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(shRNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计不针对任何基因的序列为阴性对照组(阴性对照组)及不加任何重组表达载体的空白对照(空白对照组)。重组表达载体通过脂质体转染人胚胎肾细胞(HEK293)后接种HSV-2,48 h后利用荧光定量RT-PCR检测各组细胞UL54 mRNA的表达水平,终点滴定法测定HSV-2子代病毒滴度。结果荧光定量RT-PCR结果示,与空白对照组相比,shRNA1081、shRNA1407和shRNA1508能够降低HSV-2 UL54 mRNA的表达水平(P均<0.01);对UL54基因的抑制率在阴性对照组(加shRNA NC)、shRNA1081组、shRNA1407组、shRNA1508组分别为7%、69%、56%及55%,以shRNA1081组为最高。终点滴定法结果示,与空白对照组比较,shRNA 1081组、shRNA 1407组、shRNA 1508组病毒滴度不同程度下降(P均<0.01)。结论成功构建UL54 shRNA重组表达载体,shRNA1081、shRNA1407、shRNA1508能在体外细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL54基因表达,从而抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制。 展开更多

关键词 短发夹核糖核酸 核糖核酸干扰 2型单纯疱疹病毒 UL54基因

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微小核糖核酸与肿瘤发生 被引量：1

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作者 郭晓强 刘海燕 《新医学》 北大核心 2006年第4期270-271,共2页

微小核糖核酸（microribonucleic acids，miRNAs）是指含有19．25个核苷酸的小核糖核酸分子，近年研究发现其与肿瘤的发生密切相关，该文综述近年miRNAs与肿瘤关系的研究，为临床研究提供理论基础。

关键词 微小核糖核酸 核糖核酸干扰 肿瘤

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