期刊文献+
共找到51篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
烟草DREB转录因子新基因的克隆与功能分析 被引量:12
1
作者 耿芳 郭伟华 +2 位作者 郭玉双 孟现美 张放 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期22-30,共9页
采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE),从烟草中克隆到1个新的烟草DREB基因,命名为NbDREB2 a.序列分析表明该基因全长1191 bp,编码330个氨基酸,具有典型的DREB转录因子保守的AP2结构域.实时RT-PCR... 采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(rapid amplification of cDNA ends,RACE),从烟草中克隆到1个新的烟草DREB基因,命名为NbDREB2 a.序列分析表明该基因全长1191 bp,编码330个氨基酸,具有典型的DREB转录因子保守的AP2结构域.实时RT-PCR分析表明,该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,受低温、干旱和高盐诱导.酵母转录激活实验证明,该基因可以特异性结合DRE顺式作用元件,并能激活报告基因的表达.为了研究该基因在植物抗逆反应中的功能,利用农杆菌介导法,将该基因转化到模式生物拟南芥中,筛选到了单拷贝插入的、纯合的拟南芥株系;对获得的转基因拟南芥进行干旱及高盐处理,结果表明,与对照相比,超量表达该基因能够明显地提高拟南芥对干旱及高盐的抗性. 展开更多
关键词 DREB转录因子 干旱 高盐 拟南芥
下载PDF
农杆菌介导的pCB302-3载体在本氏烟中瞬时表达条件优化 被引量:11
2
作者 孙春莲 王洪洋 田振东 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期8-12,共5页
以GFP为报告基因构建植物表达载体pCB302-3-GFP,采用农杆菌叶片注射法对其在本氏烟叶片中瞬时表达条件进行优化。分析基因沉默抑制子p19、菌液不同浓度以及侵染时间对GFP荧光强度的影响,结果显示,当农杆菌菌液D600为0.8-1.0并与含有p19... 以GFP为报告基因构建植物表达载体pCB302-3-GFP,采用农杆菌叶片注射法对其在本氏烟叶片中瞬时表达条件进行优化。分析基因沉默抑制子p19、菌液不同浓度以及侵染时间对GFP荧光强度的影响,结果显示,当农杆菌菌液D600为0.8-1.0并与含有p19基因的载体共注射条件下,农杆菌注射3-5d后本氏烟草叶片表现出很强的绿色荧光,实现了GFP在本氏烟草中的高效瞬时表达。 展开更多
关键词 pCB302-3载体 瞬时表达优化 农杆菌叶片注射 基因沉默抑制子p19 GFP
下载PDF
马铃薯X病毒荧光定量PCR检测体系的建立及应用 被引量:9
3
作者 尚晓楠 吴蓓蕾 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期165-169,共5页
马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是危害茄科作物的一种重要病毒,为了建立特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系,本研究以PVX-1985分离物中外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列为模板,设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的... 马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是危害茄科作物的一种重要病毒,为了建立特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系,本研究以PVX-1985分离物中外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列为模板,设计引物构建重组质粒并选择扩增效率高、特异性强的引物成功构建出标准曲线。利用建立的体系,成功检测到以含pCaPVX440侵染性克隆载体的农杆菌C58C1接种后的本氏烟(Nicotiana benthamiana)中PVX病毒RNA的拷贝数。 展开更多
关键词 马铃薯X病毒 荧光定量PCR
下载PDF
苜蓿花叶病毒和白三叶草花叶病毒复合侵染对本氏烟中5种激素含量的影响 被引量:8
4
作者 岳阳 梁巧兰 +5 位作者 魏列新 何辉 孟秀鹏 姜玉玲 蔺珂 陈应娥 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2255-2265,共11页
为探明苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)和白三叶草花叶病毒(white clover mosaic virus,WCMV)复合侵染的协生作用致病机理,以复合接种AMV+WCMV的本氏烟为处理,分别以单独接种AMV、WCMV、磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0,PBS)的本氏烟为对... 为探明苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)和白三叶草花叶病毒(white clover mosaic virus,WCMV)复合侵染的协生作用致病机理,以复合接种AMV+WCMV的本氏烟为处理,分别以单独接种AMV、WCMV、磷酸盐缓冲溶液(pH 7.0,PBS)的本氏烟为对照,采用DAS-ELISA(double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay)方法检测了接种病毒72 h的本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片中的病毒含量及72~720 h内水杨酸(salicylic acid,SA)、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、独脚金内酯(strigolactones,SLs)、油菜素内酯(brassinolide,BR)、乙烯(ethylene,ETH)含量的变化。结果表明:AMV和WCMV接种比例为3∶1的植株720 h时的发病症状比单独接种一种病毒(AMV或WCMV)明显,主要症状表现为轻花叶、斑驳花叶、重花叶、明脉、皱缩。检测接种72 h时叶片病毒浓度发现,接种比例3∶1的植株中AMV的浓度比单独接种AMV以及AMV和WCMV接种比例为1꞉1和1꞉3的处理高,而WCMV的浓度略低于其单独接种WCMV处理,高于AMV和WCMV接种比例为1꞉1和1꞉3的处理;接种AMV和WCMV混合液后复合侵染的本氏烟叶片中SA、JA、SLs、BR、ETH含量在一定时间内与单独接种AMV、WCMV及对照之间差异显著(P<0.05),其中,AMV和WCMV接种比例为3∶1的混合液可在一定时间段内提高本氏烟叶片中SA(216~504 h)、SLs(216~432 h)、BR(216~504 h)、ETH(288~720 h)含量,降低JA(216~504 h)含量,其SA、SLs、BR、ETH含量分别比单独接种AMV、WCMV和健康植株(CK)提高了36.27%以上,JA含量降低了59.09%多。 展开更多
关键词 水杨酸 茉莉酸 独角金内酯 油菜素内酯 乙烯 双抗夹心酶联免疫吸附法
下载PDF
烟草曲茎病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较 被引量:4
5
作者 青玲 周雪平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期308-310,共3页
The molecular variation of satellite DNA associated with Tobacco curly shoot virus (TbCSV) was compared by DNA sequencing of progenies of TbCSV DNA in Nicotiana benthamiana and N. glutinosa plants agroinoculated with ... The molecular variation of satellite DNA associated with Tobacco curly shoot virus (TbCSV) was compared by DNA sequencing of progenies of TbCSV DNA in Nicotiana benthamiana and N. glutinosa plants agroinoculated with infectious clones of TbCSV and its associated DNA. Comparisons indicated that TbCSV DNA populations had the higher levels of mutation frequency in N. glutinosa than that in N. benthamiana, and mutations generated in N. benthamiana were found upstream or downstream of C1 ORF whereas those in N. glutinosa were mostly located in A-rich region. No mutation was found in C1 ORF and satellite conserved region of DNA. The biological significance of the mutation accumulation and its role in disease epidemic were discussed. 展开更多
关键词 草曲茎病毒 卫星DNA 变异 心叶
下载PDF
苜蓿花叶病毒和白三叶草花叶病毒复合侵染本氏烟的发病流行因素 被引量:2
6
作者 陈应娥 梁巧兰 +5 位作者 魏列新 王冬 田龙 同发宇 张国印 程守丰 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期90-100,共11页
为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)在室内条件下复合侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana)的发病流行因素,以接种磷酸缓冲盐溶液(PBS)的本氏烟为对照,通过对AMV和WCMV单独接种侵染、复合侵染的不同接种浓度、不同温度和相... 为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)在室内条件下复合侵染本氏烟(Nicotiana benthamiana)的发病流行因素,以接种磷酸缓冲盐溶液(PBS)的本氏烟为对照,通过对AMV和WCMV单独接种侵染、复合侵染的不同接种浓度、不同温度和相对湿度(RH)对本氏烟发病的影响及本氏烟中两种病毒含量变化进行了研究。结果表明最适合本氏烟发病的AMV和WCMV单独接种浓度分别为20%(AMV:PBS=1:4)和50%(WCMV:PBS=1:1),两种病毒复合侵染接种的浓度为75%和25%(AMV:WCMV=3:1);最适宜发病的温度为25℃、RH为60%,在此条件下,AMV和WCMV复合接种侵染本氏烟的平均病情指数为80.12,比单独接种AMV、WCMV的病情指数分别提高了22.36%、45.28%,其病毒含量是两种病毒单独接种本氏烟中的2.11和1.60倍。综上可见,当温度为25℃、RH为60%以及AMV和WCMV复合侵染接种浓度为75%和25%时,本氏烟发病最严重。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 白三叶草花叶病毒 复合侵染 发病条件 接种浓度 温湿度
下载PDF
本氏烟NbGAD1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
7
作者 陈龙发 李凯楠 +3 位作者 王晓雯 曹梦瑶 陈曜 朱峰 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS 北大核心 2024年第2期128-133,共6页
γ-氨基丁酸(GABA)作为一种非蛋白质氨基酸,普遍存在于植物体内,在植物生长发育和抗胁迫方面发挥着重要作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)是合成GABA的关键蛋白酶,目前关于GAD介导GABA调控植物防御病毒侵染的分子机制尚不清楚。利用RT-PCR克隆本... γ-氨基丁酸(GABA)作为一种非蛋白质氨基酸,普遍存在于植物体内,在植物生长发育和抗胁迫方面发挥着重要作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)是合成GABA的关键蛋白酶,目前关于GAD介导GABA调控植物防御病毒侵染的分子机制尚不清楚。利用RT-PCR克隆本氏烟NbGAD1基因,并与原核表达载体pET-28a连接,构建重组载体pET-28a-NbGAD1,诱导产生重组蛋白,经Ni-NTA柱纯化蛋白后免疫新西兰白兔,最终获得抗血清。结果表明:成功构建原核表达载体pET-28a-NbGAD1,经大肠埃希菌诱导纯化后获得分子量约57 ku的重组蛋白NbGAD1。免疫制备的抗血清经Western blot检测显示,抗血清效价达1∶100000,抗血清稀释2000倍仍能检测到浓度为0.005 mg·mL^(-1)的重组蛋白,且能检测到本氏烟中内源表达的NbGAD1蛋白,说明该抗血清特异性强、灵敏度高,为今后深入探究GAD在植物病毒侵染过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 Γ-氨基丁酸 谷氨酸脱羧酶 原核表达 抗血清制备
下载PDF
壳寡糖抑制辣椒疫霉的生长发育和侵染 被引量:1
8
作者 翟新羽 黄太萍 +4 位作者 冯国荣 陈意 刘洋 靳晶豪 陈孝仁 《江苏农业科学》 北大核心 2023年第15期106-111,共6页
色菌界的疫霉菌所引发的作物疫病是农业生产上的毁灭性病害,严重威胁粮食安全和农业可持续发展。为探明壳寡糖是否可用于作物疫病的绿色防控,分析壳寡糖对辣椒疫霉的抑菌活性及作用机制。在壳寡糖终浓度为0、10、30、50、100、300、500 ... 色菌界的疫霉菌所引发的作物疫病是农业生产上的毁灭性病害,严重威胁粮食安全和农业可持续发展。为探明壳寡糖是否可用于作物疫病的绿色防控,分析壳寡糖对辣椒疫霉的抑菌活性及作用机制。在壳寡糖终浓度为0、10、30、50、100、300、500 mg/L的PDA平板上接种辣椒疫霉、恶疫霉、瓜类疫霉、寄生疫霉和荔枝霜疫霉,测定菌丝生长情况;在壳寡糖终浓度为0、10、30、50、100 mg/L的10%V8培养液中培养辣椒疫霉菌丝,观察菌丝形态变化;添加0、10、30、50、100 mg/L壳寡糖,观察对辣椒疫霉游动孢子囊的产生,以及游动孢子释放、游动和萌发的影响;对本氏烟喷施浓度为0、10、30、50、100、1000 mg/L的壳寡糖后接种辣椒疫霉,观察病害发生情况。结果表明,壳寡糖能直接抑制辣椒疫霉和其他4种卵菌(恶疫霉、瓜类疫霉、寄生疫霉和荔枝霜疫霉)的菌丝生长,但抑菌效果在种间存在差异,当浓度为100 mg/L时对辣椒疫霉的生长抑制率达到了52.50%。自50 mg/L浓度起,壳寡糖对辣椒疫霉的菌丝形态,游动孢子囊形成,以及游动孢子的释放、游动和萌发均有强烈的抑制作用,当浓度升高时抑制效果更加显著。经1000 mg/L壳寡糖喷施处理过的本氏烟叶片上产生的病斑面积明显小于对照叶片,显示壳寡糖可以保护本氏烟免遭辣椒疫霉的侵染。本研究综合表明,壳寡糖可抑制辣椒疫霉的营养生长、生长发育和侵染致病,具有防控作物疫病的生防潜力。 展开更多
关键词 壳寡糖 辣椒疫霉 卵菌 生物防治 绿色防控
下载PDF
苜蓿花叶病毒和白三叶草花叶病毒复合侵染对本氏烟4种抗病相关酶活性的影响 被引量:1
9
作者 王冬 梁巧兰 +5 位作者 魏列新 程守丰 陈应娥 同发宇 田龙 张国印 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2023年第5期122-129,140,共9页
【目的】探明苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)和白三叶草花叶病毒(white clover mosaic virus,WCMV)(3∶1)复合侵染后对本氏烟(Nicotiana benthamiana)的致病机理。【方法】试验以单独摩擦接种AMV、WCMV和PBS缓冲液(pH 7.0)的... 【目的】探明苜蓿花叶病毒(alfalfa mosaic virus,AMV)和白三叶草花叶病毒(white clover mosaic virus,WCMV)(3∶1)复合侵染后对本氏烟(Nicotiana benthamiana)的致病机理。【方法】试验以单独摩擦接种AMV、WCMV和PBS缓冲液(pH 7.0)的本氏烟为对照,分别采用生物化学法测定了AMV+WCMV(3∶1)复合接种的本氏烟在第2、4、6、8、10天时叶片中4种抗病相关酶的活性。【结果】当AMV+WCMV(3∶1)复合接种的本氏烟叶片中过氧化物酶(peroxidase,POD)、多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)、苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonialyase,PAL)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性达到最大值时,与单独接种AMV、WCMV和PBS缓冲液对照相比显著提高(P<0.01),且4种酶应激反应速度不同。【结论】AMV+WCMV(3∶1)复合侵染可加重病毒病害的发生,并显著提高寄主中与抗病性相关的POD、PAL、PPO、CAT4种酶活性。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 白三叶草花叶病毒 复合侵染 抗病相关酶
下载PDF
叶绿体特异蛋白质表达谱对本氏烟不同气孔密度的响应 被引量:1
10
作者 撒世娟 伍涵宇 +3 位作者 温媛 陈雪娜 郑蕊 姚新灵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期193-202,共10页
CO_(2)通过气孔进入叶绿体,叶绿体如何在分子水平响应气孔密度变化的研究鲜有报道。本研究通过调控本氏烟草NtEPF 2(Nicotiana benthamiana EPIDERMAL PATTERNING FACTOR 2)体内表达,分别得到气孔密度增加和降低的本氏烟草转化株系,用... CO_(2)通过气孔进入叶绿体,叶绿体如何在分子水平响应气孔密度变化的研究鲜有报道。本研究通过调控本氏烟草NtEPF 2(Nicotiana benthamiana EPIDERMAL PATTERNING FACTOR 2)体内表达,分别得到气孔密度增加和降低的本氏烟草转化株系,用叶绿素积累、光合参数和iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantification)蛋白质表达谱,表征气孔关闭和不同气孔密度开张株系,揭示叶绿体组成动态对气孔密度变化的响应。结果显示,气孔密度增加株系形成PSI-PSII-LHCII超复合体和加速电子传递的分化表达蛋白质(differential expression proteins,DEPs)显著上调积累,PSI光保护与光损伤修复DEPs则显著下调,叶绿素积累和净光合速率均值分别高于对照43%和67%。气孔密度降低株系叶片发育初期,由于高水平的光合磷酸化ATP合成代谢,叶绿素积累和光合参数显著高于对照,但随叶龄增加,叶绿素积累显著降低。结果表明,气孔密度增加,加速了PSII-PSI复合体形成和其电子传递,降低了光损伤修复水平,保持了不同叶龄叶绿素高水平积累;气孔密度降低,ATP合成和碳固定失衡,随叶龄增加,叶绿素积累模式发生了倒置。研究结果有助于更深入理解气孔的工作原理,拓宽通过调控气孔增加碳固定的视野。 展开更多
关键词 ITRAQ NtEPF 2 蛋白质 叶绿素 叶绿体 气孔密度
下载PDF
Ca^(2+)信号通路对本氏烟叶位介导的核盘菌抗性的影响 被引量:4
11
作者 吕琳慧 徐幼平 +3 位作者 任至玄 康冬 王继鹏 蔡新忠 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期605-610,共6页
组合采用药理学、分子生物学和反向遗传学等技术,分析叶位对本氏烟抗核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的影响及其机制.结果表明,叶位显著影响本氏烟对核盘菌的抗性,随着叶位自上而下,该抗性逐渐增强.药理学分析结果显示,Ca2+通道抑制剂... 组合采用药理学、分子生物学和反向遗传学等技术,分析叶位对本氏烟抗核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的影响及其机制.结果表明,叶位显著影响本氏烟对核盘菌的抗性,随着叶位自上而下,该抗性逐渐增强.药理学分析结果显示,Ca2+通道抑制剂LaCl3和NaVO3处理消除了本氏烟叶片对核盘菌抗性的叶位间差异.定量反转录聚合酶链反应检测结果显示,3个Ca2+信号通路基因NbCNGC20、NbCAMTA3和NbCML1在本氏烟不同叶位叶片中的表达存在显著差异,随着叶位自上而下逐渐增加.病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)分析结果表明,钙调素类似蛋白基因NbCML1的沉默导致叶位介导的本氏烟对核盘菌抗病性的丧失.这些结果说明叶位对本氏烟抗核盘菌具有显著影响,揭示了包括NbCML1基因在内的Ca2+信号通路对叶位介导的核盘菌抗性的重要调控作用. 展开更多
关键词 核盘菌 叶位 Ca2 + 信号通路 钙调素类似蛋白 抗病性
下载PDF
烟草脉斑驳病毒侵染本氏烟的转录组研究
12
作者 张荠丹 孙振琪 +4 位作者 岳建英 王海娟 赵倩倩 杨向东 赵明敏 《激光生物学报》 CAS 2023年第6期525-536,共12页
为了研究烟草脉斑驳病毒(TVMV)侵染本氏烟的抗病分子机制,本文建立了TVMV转录组数据库,挖掘抗病相关基因以及代谢和信号通路,采用Illumina Novaseq 6000高通量测序平台对侵染TVMV的本氏烟进行转录组测序,并进行生物信息学分析;利用R pac... 为了研究烟草脉斑驳病毒(TVMV)侵染本氏烟的抗病分子机制,本文建立了TVMV转录组数据库,挖掘抗病相关基因以及代谢和信号通路,采用Illumina Novaseq 6000高通量测序平台对侵染TVMV的本氏烟进行转录组测序,并进行生物信息学分析;利用R package:edge R等软件分析了有关抗病的差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)基于途径的通路富集分析。基于TVMV侵染本氏烟转录组的测序结果中共获得4593个差异表达基因,其中3564个基因上调表达,1029个基因下调表达。共筛选出10个抗病相关的差异表达显著基因,6个上调,4个下调。GO数据库中注释到生物学过程、细胞组分及分子功能等三大类共50个功能组。其中,在第三大类分子功能中,蛋白质结合功能以及ATP结合功能所涉及的差异表达基因最显著,分别为501个和453个差异基因。KEGG共富集20条通路,注释到核糖体途径的差异基因富集程度最高,基因最显著,差异表达基因数为307个。蛋白质结合、ATP结合、核糖体、真核生物核糖体的生物反应、DNA复制(DNA replication)等通路可能在调控本氏烟抗TVMV病毒中起着重要作用。通过对转录组中筛选的差异表达基因进行分析研究,为后续本氏烟抗TVMV病毒的深入研究奠定了重要的基础。 展开更多
关键词 草脉斑驳病毒 转录组 KEGG通路 生物信息学分析
下载PDF
利用TRV-HIGS技术鉴定核盘菌致病相关的分泌蛋白基因 被引量:4
13
作者 远俊虎 丁一娟 +4 位作者 杨文静 闫宝琴 柴亚茹 梅家琴 钱伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第23期4274-4284,共11页
【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是我国油菜种植上的主要问题,严重威胁着菜籽产量及品质。分泌性蛋白在病原菌致病过程中起着重要作用,核盘菌基因组中包含大量编码分泌性蛋白的基因,本研究旨在鉴定并筛选与致... 【目的】由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是我国油菜种植上的主要问题,严重威胁着菜籽产量及品质。分泌性蛋白在病原菌致病过程中起着重要作用,核盘菌基因组中包含大量编码分泌性蛋白的基因,本研究旨在鉴定并筛选与致病性相关的分泌蛋白基因,揭示核盘菌的致病机理,为菌核病防控提供重要靶标。【方法】采用SMART软件对核盘菌在侵染抗病、感病甘蓝过程中差异表达明显的8个具有信号肽的候选基因进行蛋白质结构域的分析,随后将SMART分析得到的结构域分别于SCOP、Pfam、PDB数据库进行功能注释。利用基因特异性引物进行目的基因特异片段的PCR扩增,构建pTRV2-Gene和pTRV2-GFP载体。随后等量混合含有pTRV1及pTRV2-Gene,pTRV1及pTRV2-GFP载体的重悬菌液。室温静置3 h后,利用针筒浸润法将pTRV2-Gene载体及对照(TRV-GFP)侵染5-6周龄的本氏烟(Nicotiana benthamiana)。侵染植株于黑暗环境中培养48 h后,再置于正常光照条件的环境中生长7 d。将直径6 mm的核盘菌PDA菌丝块接种于侵染9 d后的烟草叶片叶腹的中央,其中带菌面紧贴叶片,随后将接种植株培养48 h后统计病斑面积。提取接种48 h后的病斑及病斑周围组织叶片(距腐烂组织边缘1 cm左右)的RNA,利用特异引物进行目的基因的qRT-PCR,计算目的基因在携带TRV-HIGS载体的烟草植株中的相对表达量。【结果】SMART及结构域注释预测这8个候选基因可能参与了蛋白、核酸或多糖的水解,影响植物的免疫反应,参与核盘菌对药物耐受性的调节及生物素合成。核盘菌接种携带这8个基因的TRV-HIGS载体及对照载体的烟草,48 h后对照植株的病斑面积平均为3.44 cm2,除SS1G07655外,其余7个候选基因的TRV-HIGS植株上的病斑面积相比对照植株均显著减小(P≤0.05),其病斑面积介于1.63-2.61 cm2。qRT-PCR结果显示,这7个致病相关的候选基因在核盘菌侵染烟草过 展开更多
关键词 核盘菌 TRV-HIGS 分泌蛋白 致病性 实时荧光定量PCR
下载PDF
烟草谷氧还蛋白基因NbGRX1的克隆与表达特性分析 被引量:3
14
作者 郭玉双 张建华 +2 位作者 张吉顺 史跃伟 陈静 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期47-52,共6页
采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(RACE),从烟草中克隆到1个谷氧还蛋白基因(Grx),命名为NbGRX1。该基因全长1021bp,编码298个氨基酸,具有典型的Grx基因结构域。Real-timeRT-PCR分析表明,该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,并且受低温... 采用同源克隆及cDNA末端快速扩增法(RACE),从烟草中克隆到1个谷氧还蛋白基因(Grx),命名为NbGRX1。该基因全长1021bp,编码298个氨基酸,具有典型的Grx基因结构域。Real-timeRT-PCR分析表明,该基因能在烟草的根、茎、叶中表达,并且受低温、干旱和高盐诱导。 展开更多
关键词 谷氧还蛋白基因 荧光定量PCR
下载PDF
NSvc4和CP蛋白与水稻条纹病毒的致病相关 被引量:4
15
作者 袁正杰 贾东升 +2 位作者 吴祖建 魏太云 谢联辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期45-53,共9页
【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence... 【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系(Yeast two-hybrid,YTH)对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术验证致病性鉴定结果。【结果】RSV NSvc4蛋白能与CP蛋白互作,且蛋白复合体在本氏烟细胞中能够定位到叶绿体。致病性鉴定显示,PVX-RSV-NSvc4侵染的本氏烟表现为花叶症状;PVX-RSV-CP能够在侵染叶上诱导花叶症状,但是系统叶却恢复健康;PVX-RSV-NSvc4与PVX-RSV-CP共侵染的本氏烟和PVX-RSV-NSvc4CP侵染的本氏烟的侵染叶、系统叶均表现出了严重病症。Real-time PCR结果显示,PVX载体在各侵染本氏烟中的累积量均较低,而RSV CP和NSvc4基因的表达量与本氏烟的发病症状紧密相关。【结论】NSvc4和CP蛋白均有致病性。CP蛋白的致病力不能持久,但是与NSvc4蛋白互作后具有持久致病力,表明二者协同在RSV致病过程中发挥作用。 展开更多
关键词 水稻条纹病毒 NSvc4和CP蛋白 致病性
下载PDF
AMV和WCMV复合侵染对本氏烟4种内源激素的影响
16
作者 田龙 梁巧兰 +2 位作者 魏列新 陈应娥 程守丰 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2023年第11期99-108,共10页
为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)混合接种协生作用以及对本氏烟中4种内源激素的影响,以接种0.02 mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH 7.0)的本氏烟为空白对照,对AMV+WCMV(3∶1)混合接种本氏烟发病症状以及接种后不同时间本氏... 为明确苜蓿花叶病毒(AMV)和白三叶草花叶病毒(WCMV)混合接种协生作用以及对本氏烟中4种内源激素的影响,以接种0.02 mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS,pH 7.0)的本氏烟为空白对照,对AMV+WCMV(3∶1)混合接种本氏烟发病症状以及接种后不同时间本氏烟中病毒浓度和生长素(IAA)、玉米素核苷(ZR)、赤霉素(GA)、脱落酸(ABA)4种内源激素含量变化进行了研究。结果表明:AMV和WCMV混合接种后,主要表现为接种叶片褪绿、黄化、后期死亡脱落,新生叶变小、卷曲呈圆筒状、叶面呈现畸形皱缩,植株矮化;本氏烟叶中两种病毒浓度在接种后第10 d时最大,比单独接种AMV、WCMV的病毒浓度分别提高了1.70倍和1.48倍,症状加重,表明AMV和WCMV两种病毒存在复合侵染协生作用,WCMV为协生病毒,AMV为被协生病毒;AMV和WCMV混合接种后第2、6、10 d的IAA、ZR、GA含量均显著低于单独接种和对照,ABA含量则显著高于单独接种和对照,在接种后第10 d,混合接种处理的IAA、ZR、GA含量较CK分别降低了59.40%、63.39%、64.56%,而ABA含量提高了287.30%(P<0.01)。综上所述,AMV+WCMV(3∶1)混合接种使本氏烟症状表现加重,病毒浓度增加,显著降低IAA、ZR、GA含量,提高ABA含量。 展开更多
关键词 苜蓿花叶病毒 白三叶草花叶病毒 复合侵染 症状表现 病毒含量 内源激素
下载PDF
本氏烟NbWRKY40亚家族转录因子抗病相关功能研究 被引量:4
17
作者 马丽娜 张雄 +1 位作者 窦道龙 柴春月 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期791-802,共12页
植物WRKY类转录因子的IIa亚类广泛参与调控植物的生物胁迫和非生物胁迫过程。本研究根据拟南芥和普通烟中具有抗病和抗胁迫功能的IIa亚类WRKY40转录因子的序列,利用基因同源克隆法,获得本氏烟中Nb WRKY40基因。序列分析表明在本氏烟中有... 植物WRKY类转录因子的IIa亚类广泛参与调控植物的生物胁迫和非生物胁迫过程。本研究根据拟南芥和普通烟中具有抗病和抗胁迫功能的IIa亚类WRKY40转录因子的序列,利用基因同源克隆法,获得本氏烟中Nb WRKY40基因。序列分析表明在本氏烟中有5个属于IIa亚类的基因,其序列之间具有高度相似性。qRT-PCR检测发现Nb WRKY40基因是受寄生疫霉侵染诱导上调表达的基因,通过VIGS技术研究该类基因在本氏烟中的抗病相关功能,用半活体营养型寄生疫霉进行抗病性试验,结果表明Nb WRKY40基因的沉默降低了本氏烟对寄生疫霉的抗性,且在侵染点的细胞坏死程度增强,过氧化氢积累和胼胝质沉积都明显减少。Nb WRKY40基因沉默同样降低了本氏烟对死体营养型灰霉菌的抗性。检测Nb WRKY40基因沉默后4个不同抗病信号通路下游基因的表达,发现基因沉默导致参与抗病和SA途径的PR1b、PR2b基因受疫霉侵染诱导表达的水平明显下降。综上,推测Nb WRKY40基因可能依靠SA介导的信号通路参与调控本氏烟抗病性。 展开更多
关键词 VIGS 转录因子 NbWRKY40 抗病性
原文传递
利用CRISPR/Cas9敲除NbLFY基因延迟本氏烟开花时间
18
作者 宁宇 刘静 +4 位作者 刘之洋 夏彭飞 袁希汉 徐海 陈龙正 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第24期8101-8108,共8页
开花是植物从营养生长转向生殖生长的重要标志,过早开花会造成植物早衰,严重影响以营养体为产品器官的经济作物的产量和品质,因此研究植物开花基因并对其进行编辑以延迟开花时间具有重要的理论意义和应用价值。LFY基因可抑制叶原基生长... 开花是植物从营养生长转向生殖生长的重要标志,过早开花会造成植物早衰,严重影响以营养体为产品器官的经济作物的产量和品质,因此研究植物开花基因并对其进行编辑以延迟开花时间具有重要的理论意义和应用价值。LFY基因可抑制叶原基生长并促进花分生组织及花器官形成,是调控植物开花的关键“分子开关”。为利用LFY基因延迟易早花植物的开花时间,本研究以本氏烟为试验材料,构建了NbLFY基因的CRISPR/Cas9敲除载体,利用农杆菌介导法转化叶盘并对编辑植株的表型进行了观察分析。结果表明,通过抗性筛选和PCR检测共获得了10株T_(0)代植株,靶位点测序分析发现其中有2株NbLFY基因发生了突变,编辑效率为20%,突变类型均为缺失了一个碱基(T)而造成了移码突变。对T_(1)代基因编辑植株进行表型性状观察发现,与野生型相比,基因编辑植株株高显著降低,现蕾期延迟20 d,第一花序节位也明显提高,表明NbLFY基因的突变导致本氏烟开花时间延后,生殖生长进程延迟。本研究结果证实了NbLFY基因可促进本氏烟开花,敲除该基因可以推迟开花时间。上述研究结果为其他经济作物利用LFY基因延迟开花时间提供了参考依据。 展开更多
关键词 LFY基因 CRISPR/Cas9 开花
原文传递
本氏烟Ⅰ型启动子的克隆及其转录起始位点分析 被引量:3
19
作者 李志英 牟红珍 +3 位作者 高丁梅 丁国平 马婷 王盛 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期28-35,共8页
启动子是转录水平上一个重要的调控元件,其决定着基因的表达模式和表达强度。Ⅰ型启动子具有高转录活性和种属间特异性等特点。如将其应用于植物RNA病毒载体表达系统,有利于提高表达系统的表达效率和生物安全性。本氏烟(Nicotiana benth... 启动子是转录水平上一个重要的调控元件,其决定着基因的表达模式和表达强度。Ⅰ型启动子具有高转录活性和种属间特异性等特点。如将其应用于植物RNA病毒载体表达系统,有利于提高表达系统的表达效率和生物安全性。本氏烟(Nicotiana benthaminana)是一种被广泛地应用于植物生物反应器和植物病理学的模式生物,但是现有核酸数据库中尚没有其Ⅰ型启动子的相关信息。因此,克隆本氏烟Ⅰ型启动子并分析其转录起始位点就具有重要的应用价值。通过半巢式PCR获得了514 bp的本氏烟Ⅰ型启动子序列(KC352713);生物信息学分析初步预测其转录起始位点位于其核心序列TATA(G)TA(N)GGGGG中的第3位A处;通过植物RNA病毒表达载体和5'RACE技术在体内验证本氏烟Ⅰ型启动子转录起始位点与生物信息学预测结果一致。研究结果为深入研究Ⅰ型启动子和构建Ⅰ型启动子介导转录的植物RNA病毒载体表达系统奠定了基础。 展开更多
关键词 I型启动子 转录起始位点 病毒载体
原文传递
本氏烟半胱氨酸蛋白酶基因家族特征及其在TMV侵染中的功能 被引量:1
20
作者 裴悦宏 李凤巍 +6 位作者 刘维娜 温玉霞 朱鑫 田绍锐 樊光进 马小舟 孙现超 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第21期4196-4210,共15页
【目的】明确抗病毒化合物氯吲哚酰肼(chloroinconazide,CHI)诱导的本氏烟(Nicotiana benthamiana)半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,CP)在烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)侵染过程中的作用及其基因家族特征,为理解茄科作物... 【目的】明确抗病毒化合物氯吲哚酰肼(chloroinconazide,CHI)诱导的本氏烟(Nicotiana benthamiana)半胱氨酸蛋白酶(cysteine proteinase,CP)在烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)侵染过程中的作用及其基因家族特征,为理解茄科作物抗病毒分子机制及化学调控提供理论依据。【方法】利用全基因组策略,从茄科作物基因组数据库Sol Genomics Network中检索获得本氏烟NbCP的全家族基因序列,利用生物信息学分析NbCP基因家族的进化关系、Motif基序及启动子顺式作用元件。根据生物信息分析结果,利用实时荧光定量PCR技术分析TMV侵染后NbCP基因的表达,以此筛选出潜在抗病蛋白。使用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默技术和马铃薯X病毒(potato virus X,PVX)介导的基因过表达技术验证该关键蛋白对TMV-GFP侵染的影响,结合实时荧光定量PCR手段探索该关键蛋白的抗病毒机制。【结果】NbCP家族共有24个成员,根据其染色体定位命名为NbCP1—NbCP24。进化关系分析表明NbCP分成5个亚家族,其中Group V含有7个NbCP,而Group I仅含2个NbCP;Motif分析表明不同分支NbCP具有相似的motif分布;启动子顺式作用元件分析表明NbCP家族基因受光调控,并且多个NbCP家族基因启动子含有茉莉酸甲酯、水杨酸甲酯、脱落酸、赤霉素和生长素等激素响应元件。结合生物信息学分析,从上述各个亚家族中分别筛选1个关键潜在抗病相关NbCP基因(NbCP8、NbCP12、NbCP13、NbCP18、NbCP22),并利用实时荧光定量PCR技术分析上述基因在TMV侵染第5天的表达,发现NbCP8表达差异性最大,上升了2.6倍,NbCP8在叶中的表达量最高,其次是茎和根,在花中的表达量最低。TRV介导的NbCP8沉默能显著增加TMV-GFP的侵染,而PVX介导的NbCP8过表达能显著抑制TMV-GFP侵染,表明NbCP8作为植物正调控因子抑制病毒侵染。沉默NbCP8显著抑制了水杨酸信号途径相关基因PR1以及茉 展开更多
关键词 全基因组 半胱氨酸蛋白酶 NbCP8 草花叶病毒
下载PDF
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部