缺氧/辐射双敏感性启动子调控HSV-TK表达对肺癌移植瘤的作用 被引量：8

1

作者 王卫东 陈正堂 +3 位作者 李德志 段玉忠 王志新 曹正怀 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期788-793,共6页

背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因... 背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因治疗效果。方法利用基因重组构建HRE-Egr启动子及其调控的HSV-TK表达载体;脂质体介导重组质粒转染肺癌A549细胞,分为对照组、放射组(6Gy)、缺氧组(1%氧浓度)和放射合并缺氧组,Northernblot法检测转染细胞中HSV-TK表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测放射、缺氧和GCV处理后的细胞存活率。建立BALB/c裸鼠肺癌移植瘤模型,检测放射合并质粒转染后移植瘤体积变化并计算抑瘤率。结果对照组细胞仅可检测到HyTK的低水平表达(21U),放射组和缺氧组HyTK基因表达水平均显著升高(分别为227U和94U),放射合并缺氧组(769U)显著高于放射组。在缺氧条件下,放射合并GCV处理后细胞存活率为(7.2±1.8)%,显著低于常氧组的(32.7±4.6)%。放射联合GCV可明显抑制HRE-Egr启动子转染肺癌移植瘤,抑瘤率达91.2%。结论HRE-Egr启动子具有辐射/缺氧双重敏感性,并使放射后的HSV-TK表达水平在缺氧下得到显著增强。放射联合HRE-Egr启动子可显著抑制肺癌移植瘤的生长。 展开更多

关键词 肺肿瘤 放射-基因治疗 缺氧反应元件

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放射诱导调控序列的合成及其辐射诱导特性的研究 被引量：2

2

作者 余东升 黄洪章 +3 位作者 潘朝斌 王建广 马健 王安训 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2004年第1期1-4,共4页

目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这... 目的　合成放射诱导调控序列并鉴定其辐射诱导特性。方法　利用人工寡核苷酸片段合成含有 6个重复CArG元件的放射诱导调控序列 ,以绿色荧光蛋白 (GFP)作为报告基因转染Tca8113细胞检测其辐射诱导特性。结果　低剂量放射线照射可诱导这种人工调控序列增强GFP在Tca8113细胞中的表达 ,且 3Gy剂量最为明显 ,提高到放射前的 16 1%。结论　人工合成放射诱导调控序列在低剂量放射线照射下能明显增强其下游外源性基因的表达 ,为进一步研究放射 -基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 放射诱导启动子 放射-基因治疗 绿色荧光蛋白 放射诱导调控序列

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缺氧反应元件对肺癌放射-基因治疗的乏氧增敏实验研究 被引量：3

3

作者 王卫东 陈正堂 +2 位作者 李德志 段玉忠 曹正怀 《重庆医学》 CAS CSCD 2004年第7期962-964,共3页

目的　实体瘤的缺氧微环境限制了放射 基因治疗的效果。本研究利用缺氧反应元件 (hypoxiaresponseelements,HREs)实现放射诱导及缺氧增强肿瘤坏死因子α(TNF α)表达 ,以提高乏氧实体瘤的放射 基因治疗效果。方法　将HREs与放射敏感性E... 目的　实体瘤的缺氧微环境限制了放射 基因治疗的效果。本研究利用缺氧反应元件 (hypoxiaresponseelements,HREs)实现放射诱导及缺氧增强肿瘤坏死因子α(TNF α)表达 ,以提高乏氧实体瘤的放射 基因治疗效果。方法　将HREs与放射敏感性Egr 1启动子串联 ,构建缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,用脂质体介导该载体转染肺癌A5 4 9细胞 ,予以照射 (6Gy)和 /或缺氧 (1 %氧浓度 )处理后 ,ELISA法检测转染细胞TNF α表达水平。通过细胞剂量 存活曲线及其参数D0 值 ,计算氧增比 (OER)及增敏比 (SER)。建立裸鼠A5 4 9皮下移植瘤模型 ,计算 5 0 %肿瘤控制所需照射剂量 (TCD50 )及SER。结果　HREs可使缺氧下转染细胞照射后的TNF α表达水平较常氧条件下增加到 3.4倍 ,且转染组D0 (1 .341Gy)和OER(0 .81 )均显著低于对照组 (6 .1 72Gy ,2 .6 5 ) ,SER(4 .6 0 )则显著升高 (P <0 .0 1 )。两组皮下移植瘤亦有相似的改变。 结论　成功构建了缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,该载体转染的A5 4 9细胞及其移植瘤 ,均有显著的放射乏氧增敏作用。 展开更多

关键词 肺肿瘤 放射—基因治疗 缺氧反应元件

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放射敏感性启动子调控Apoptin基因表达对肺腺癌细胞的杀伤作用研究 被引量：2

4

作者 毛丽伟 廖国清 +3 位作者 王红梅 刘鹏辉 谢国清 王亚林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期553-556,共4页

目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线... 目的构建放射敏感性启动子调控的凋亡素(Apoptin)基因的真核表达质粒pE6-Apoptin-EGFP,探讨其在X线调控下对肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法分别以限制性内切酶EcoRⅠ/NotⅠ双酶切质粒pE6-p53-EGFP及pApoptin-EGFP,电泳分离,回收目的线性DNA片段,T4连接酶连接,构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,测序、鉴定。脂质体介导瞬时转染肺腺癌细胞A549,RT-PCR、荧光显微镜等检测照射前后融合蛋白表达,流式细胞仪检测放射诱导前后转染细胞的凋亡变化。结果成功构建重组质粒pE6-Apoptin-EGFP,并在被转染A549细胞中检测到Apoptin基因表达;经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照组pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(32.48±3.56)%和(10.67±2.42)%,未经放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞及对照pE6-EGFP/A549细胞的凋亡率分别为(6.33±1.21)%、(4.25±0.87)%;与其它3组相比,放射诱导的pE6-Apoptin-EGFP/A549细胞凋亡率明显增高,具有非常显著统计学差异(P<0.01)。结论放射敏感性启动子调控的Apoptin基因表达可在放射线调控下在A549细胞中有效表达并诱导凋亡,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 凋亡素 放射-基因治疗 凋亡

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DNA修复靶向性放射-基因治疗研究进展

5

作者 宫友陵 王谨 《华西医学》 CAS 2007年第1期213-214,共2页

关键词 放射-基因治疗 靶向性 DNA修复 肿瘤基因治疗 体内抑制 外源性基因 基因表达 肿瘤治疗

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放射诱导型增强子E6可提高hTERTp的放射敏感性

6

作者 胡璟 胡可锦 +1 位作者 赵素萍 唐瑶云 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第13期2472-2475,共4页

目的:构建融合启动子E6.hTERTp,以探讨放射干预后放射敏感启动子片段E6对人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)启动活性以及对鼻咽癌靶向调控的影响。方法:通过Overlap PCR法合成融合启动子E6.hTERTp,连接至PGL3 basic质粒。构建含EGR-1启动... 目的:构建融合启动子E6.hTERTp,以探讨放射干预后放射敏感启动子片段E6对人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)启动活性以及对鼻咽癌靶向调控的影响。方法:通过Overlap PCR法合成融合启动子E6.hTERTp,连接至PGL3 basic质粒。构建含EGR-1启动子(EGR-1p)以及hTERTp的PGL3 basic载体做对照。使用Lipo2000将报告载体以及pRL-SV40质粒共转染正常人成纤维细胞HDF以及人鼻咽癌CNE-2细胞,并给予不同剂量放射干预,双荧光素酶法检测其启动活性。t检验分析不同细胞系中不同放射条件下各启动子启动活性差别。结果:在正常HDF细胞系内,无论放射与否,hTERTp组以及E6.hTERTp组的启动活性均很低;而在CNE2细胞系中,三种启动子启动活性均随放射剂量增加而增加,其增长幅度从大到小分别是EGR-1p组、E6.hTERTp组、hTERTp组。在相同放射剂量干预下,EGR-1P组、E6.hTERTp组与hTERTp组三组间的启动活性两两之间均有统计学差别(p<0.01)。结论:放射诱导型增强子E6能够明显提高hTERTp放射敏感性,且不影响其在鼻咽癌中靶向性调控作用,为该类肿瘤的放射-基因治疗提供了新的思路。 展开更多

关键词 放射-基因治疗 靶向性抗癌治疗 HTERT启动子 放射增敏元素

原文传递

恶性肿瘤放射治疗的新思考 被引量：3

7

作者 刘树铮 《中国实验诊断学》 2001年第3期143-144,共2页

关键词 恶性肿瘤 放射治疗 低剂量辐射兴奋效应 放射基因治疗

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分子核医学研究进展 被引量：2

8

作者 唐刚华 《同位素》 CAS 2002年第2期105-110,共6页

简要介绍分子核医学的基础理论,重点阐述分子核医学的前沿领域:代谢显像与血流量显像、放射免疫显像与放射免疫治疗、放射受体显像与受体介导治疗以及放射基因显像与放射基因治疗。

关键词 分子核医学 代谢显像 血流显像 放射免疫显像 放射免疫治疗 放射受体显像 受体介导治疗 放射基因显像 放射基因治疗

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肿瘤乏氧与放射基因治疗 被引量：2

9

作者 赵慧云 杨姝雅 李五岭 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期167-170,共4页

关键词 肿瘤乏氧 放射基因治疗 放射增敏剂 细胞毒剂

原文传递

pEgr-MIP3α重组质粒的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达 被引量：2

10

作者 邹岚 朱波 +2 位作者 陈敬 杜剑平 陈正堂 《重庆医学》 CAS CSCD 2004年第7期968-970,共3页

目的　探讨辐射对转染pEgr MIP3α质粒的Lewis肺癌细胞MIP3α表达的影响。方法　用PCR方法扩增出MIP 3α基因 ,构建 pEgr MIP3α重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和Western方法检测不同剂量X射线照射后的MIP 3α表... 目的　探讨辐射对转染pEgr MIP3α质粒的Lewis肺癌细胞MIP3α表达的影响。方法　用PCR方法扩增出MIP 3α基因 ,构建 pEgr MIP3α重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和Western方法检测不同剂量X射线照射后的MIP 3α表达水平。结果　所构建的重组质粒 pEgr MIP3α中MIP 3αcDNA正确插入表达载体 ;各照射组在不同剂量电子线照射后 ,MIP 3α表达均高于未转染组和假照射组。结论　Egr 1启动子具有辐射启动和诱导下游MIP 3α基因在Lewis肺癌中增强表达的功能 ,为pEgr MIP3α用于放射 展开更多

关键词 巨噬细胞炎症蛋白3α 早期生长反应启动子 树突状细胞 放射基因治疗

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小鼠MIP-3α基因在Lewis肺癌中的放射诱导表达

11

作者 邹岚 朱波 +2 位作者 陈敬 杜剑平 陈正堂 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2188-2190,共3页

目的　构建pEgr 1 MIP 3α(pEM)质粒 ,探讨辐射对被转染的Lewis肺癌细胞中MIP 3α表达的影响。方法　用定向克隆方法 ,构建pEM重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和ELISA方法检测不同剂量电子线照射后的MIP 3α表达... 目的　构建pEgr 1 MIP 3α(pEM)质粒 ,探讨辐射对被转染的Lewis肺癌细胞中MIP 3α表达的影响。方法　用定向克隆方法 ,构建pEM重组表达质粒 ,脂质体介导转染Lewis肺癌细胞 ,用RT PCR和ELISA方法检测不同剂量电子线照射后的MIP 3α表达水平。结果　本实验构建的重组质粒pEM中MIP 3αcDNA正确插入表达载体 ;各照射组在不同剂量电子线照射后 ,MIP 3α表达均高于未转染组和假照射组。结论　Egr 1启动子具有辐射启动和诱导下游MIP 3α基因在Lewis肺癌中增强表达的功能 ,为pEM用于放射 -基因治疗的体内研究 ,提供了实验基础。 展开更多

关键词 巨噬细胞炎症蛋白-3α 早期生长反应-1启动子 树突状细胞 放射基因治疗

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放射诱导的一氧化氮同步放大基因电路的构建及鉴定

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作者 康保国 王卫东 陈正堂 《中国肺癌杂志》 CAS 2007年第2期88-92,共5页

背景与目的正反馈基因电路(gene circuits)对基因表达有放大作用,目的基因在细胞内的同步化表达可进一步增强基因治疗效果。本研究旨在构建由放射诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)同步放大基因电路,以探索提高目的基因表达水平、延长表... 背景与目的正反馈基因电路(gene circuits)对基因表达有放大作用,目的基因在细胞内的同步化表达可进一步增强基因治疗效果。本研究旨在构建由放射诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)同步放大基因电路,以探索提高目的基因表达水平、延长表达时间的新途径,从而进一步完善肿瘤放射基因治疗模式。方法将具有放射诱导性的c-fos启动子与诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)串联,构建c-fos启动子驱动的i NOS和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)双顺反子表达载体pfos-i NOS/GFP;用脂质体介导该载体转染肺腺癌A549细胞,予以一定剂量照射,观察照射后不同时相点细胞荧光强度,检测i NOS蛋白表达水平。结果转染载体pfos-i NOS/GFP的细胞照射后细胞荧光强度、iNOS表达水平均较对照组明显增加,其中以照射后16h增加最为明显。结论成功构建了放射诱导的NO同步放大基因电路,大大提高了放射诱导的目的基因的表达水平,为进一步提高肿瘤放射基因治疗的疗效奠定了理论基础。 展开更多

关键词 放射基因治疗 基因电路 一氧化氮

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