三七总皂苷对AngⅡ诱导心肌细胞凋亡的影响 被引量：16

1

作者 陈彦静 李建东 黄启福 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期778-781,共4页

目的:研究三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo3荧光探针标记测定... 目的:研究三七总皂苷对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养心肌细胞凋亡的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,通过MTT法观察三七总皂苷对培养心肌细胞活力的影响;AO荧光染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡,Fluo3荧光探针标记测定钙离子荧光强度。结果:AngⅡ(10-7mol·L-1)孵育48h后心肌细胞凋亡明显多于对照组;三七总皂苷(25,50,100mg·L-1)组心肌细胞活力显著高于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L-1)组AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡率明显低于AngⅡ组;三七总皂苷(50mg·L-1)组心肌细胞内钙超载明显轻于AngⅡ组。结论:三七总皂苷对AngⅡ诱导的细胞凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制心肌细胞内钙超载有关。 展开更多

关键词 心肌细胞凋亡 三七总皂苷 AngⅡ 心肌细胞活力 细胞内钙超载 血管紧张素-Ⅱ 流式细胞术检测 钙离子荧光强度 Ans 细胞凋亡率 诱导培养 原代培养 MTT法 形态改变 染色观察 探针标记 抑制作用 细胞核 对照组

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一种标记cDNA芯片探针的新方法 被引量：6

2

作者 范保星 张开泰 +1 位作者 王升启 吴德昌 《生物技术通讯》 CAS 2001年第4期254-256,共3页

探讨mRNA长片段反转录PCR技术 (RT LDPCR)在cDNA芯片微量探针标记和信号放大中的应用。首先提取BEP2D细胞的总RNA ,然后用两种不同的方法进行标记 ,一种为RT LDPCR ,用荧光素Cy3 dCTP进行标记 ;另一种为传统的RNA反转录 ,用荧光素Cy5 d... 探讨mRNA长片段反转录PCR技术 (RT LDPCR)在cDNA芯片微量探针标记和信号放大中的应用。首先提取BEP2D细胞的总RNA ,然后用两种不同的方法进行标记 ,一种为RT LDPCR ,用荧光素Cy3 dCTP进行标记 ;另一种为传统的RNA反转录 ,用荧光素Cy5 dCTP进行标记。将两种方法标记好的探针等量混合后与含有 44 0个点 (4 4个基因 )的cDNA芯片同时杂交 ,发现二者具有很高的一致性 (0 .5 <Cy3 Cy5 >2 .0 )。由于RNA反转录法为cDNA芯片探针标记的传统方法 ,从而验证了RT LDPCR用于cDNA芯片探针标记的可行性。RT LDPCR具有对样品总RNA的需要量少和可对样品中信号进行放大的优点 ,特别适合于对材料来源受到限制的RNA进行标记。 展开更多

关键词 RT-LDPCR CDNA芯片 探针标记

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人βNGFDNA地高辛标记探针的制备及在小鼠颌下腺中的基因表达 被引量：2

3

作者 陆璐 曹铮 +5 位作者 丁斐 顾静 顾晓松 汪家政 余云开 范明 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期119-124,共6页

本研究在国内首先制备非放射性地高辛标记的人βＮＧＦＤＮＡ（ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ）探针，并应用原位杂交技术结合计算机图像分析，对ＮＧＦｍＲＮＡ在ＩＣＲ雄性小鼠颌下腺中的分布进行了观察。实验结果显示ＮＧＦｍＲＮＡ主... 本研究在国内首先制备非放射性地高辛标记的人βＮＧＦＤＮＡ（ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ）探针，并应用原位杂交技术结合计算机图像分析，对ＮＧＦｍＲＮＡ在ＩＣＲ雄性小鼠颌下腺中的分布进行了观察。实验结果显示ＮＧＦｍＲＮＡ主要分布于颌下腺纹状管（ＳＳＴ）和颗粒曲管（ＧＣＴ）的上皮细胞，其细胞基底部胞质呈杂交反应强阳性，细胞顶部呈弱阳性，图像分析显示二者具有显著性差异。本实验制备的ｄｉｇ－ｈ－βＮＧＦＤＮＡ探针灵敏度高达０．１ｐｇ／ｍｌ，并且特异性强，分辨力高，重复性好，是研究ＮＧＦｍＲＮＡ基因表达和调控的有力工具。 展开更多

关键词 神经生长因子 地高辛 探针标记 颌下腺 原位杂交

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新疆多浪羊IFN-γ基因地高辛探针的标记与敏感性检测 被引量：2

4

作者 艾东旭 徐宏伟 +3 位作者 李玮 张晶 宋显明 李莲瑞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1436-1441,共6页

为获得多浪羊IFN-γ地高辛探针,并对其标记效率进行检测。将多浪羊pMD-18T-IFN-γ克隆菌进行PCR扩增,经切胶回收及目的基因浓缩后获得目的基因IFN-γ,然后用地高辛标记和检测试剂盒对IFN-γ基因进行标记,获得IFN-γ地高辛探针。IFN-γ的... 为获得多浪羊IFN-γ地高辛探针,并对其标记效率进行检测。将多浪羊pMD-18T-IFN-γ克隆菌进行PCR扩增,经切胶回收及目的基因浓缩后获得目的基因IFN-γ,然后用地高辛标记和检测试剂盒对IFN-γ基因进行标记,获得IFN-γ地高辛探针。IFN-γ的PCR扩增产物经8g/L琼脂糖电泳分离后转移至Hybond N+膜,膜上显影后进行敏感性检测并计算探针质量浓度,结果显示,IFN-γ地高辛探针在杂交液中的质量浓度为30μg/L。Southern杂交显示,Hybond N+膜上有IFN-γ基因的双链DNA,且浓缩后的DNA(2.5μg)标记的特异性探针质量浓度较高,可以在Hybond N+膜上呈现出清晰的杂交条带,证明获得的探针质量浓度符合要求。 展开更多

关键词 多浪羊 IFN-Γ基因 地高辛 探针标记 检测

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用PCR技术标记双链DNA探针

5

作者 宋建明 孙毅 +1 位作者 杨居祥 司履生 《西安医科大学学报》 CSCD 1996年第4期548-550,共3页

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果。ＰＣＲ标记法具有经济、快速、简易和标记量大等优点。实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的质量、ｄＴＴＰ和Ｂｉｏ... 利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果。ＰＣＲ标记法具有经济、快速、简易和标记量大等优点。实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的质量、ｄＴＴＰ和Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 探针标记 核酸杂交 DNA探针

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人17号染色体计数探针的制备及应用 被引量：1

6

作者 李三华 牛银银 +3 位作者 翟晋豫 刘玲玲 刘文第 齐华 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期487-490,共4页

[目的]利用PCR法(链式聚合酶反应)制备17号染色体的绿色荧光计数探针。[方法]首先通过对人类基因组17号染色体着丝粒序列分析,找出其特异性的重复序列,设计引物,通过PCR法制备绿色荧光探针,然后利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ h... [目的]利用PCR法(链式聚合酶反应)制备17号染色体的绿色荧光计数探针。[方法]首先通过对人类基因组17号染色体着丝粒序列分析,找出其特异性的重复序列,设计引物,通过PCR法制备绿色荧光探针,然后利用荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)实验检验所制备17号染色体计数探针质量。[结果]FISH实验结果显示,利用PCR法制备的计数探针荧光信号清晰可辨。[结论]PCR法可良好地应用于17号染色体计数探针(Chromosome 17 enumeration probe,Cep17)的制备,制备的探针可用于相关疾病的检测。 展开更多

关键词 PCR(聚合酶链式反应) 探针标记 荧光原位杂交

原文传递

一种适合本科教学实验的探针标记方法 被引量：1

7

作者 许本波 谢伶俐 +1 位作者 赵福永 田志宏 《实验科学与技术》 2013年第2期6-8,共3页

分子杂交技术是分子生物学和基因工程研究、教学中常用的实验技术。常规方法存在成本高、效率低、安全性低等不足,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的适合本科生教学的分子杂交方法。文章结合教学和科研实践,提出利用普通的Taq... 分子杂交技术是分子生物学和基因工程研究、教学中常用的实验技术。常规方法存在成本高、效率低、安全性低等不足,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的适合本科生教学的分子杂交方法。文章结合教学和科研实践,提出利用普通的Taq酶进行PCR探针标记的改进方法,结果发现该方法简便、效率高和成本低,非常适合本科生基因工程实验教学。 展开更多

关键词 基因工程 实验教学 分子杂交 探针标记

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地高辛标记LEA3蛋白基因探针的制备及其在转基因草莓核酸杂交中的应用 被引量：1

8

作者 王俊丽 葛会波 +2 位作者 彭士琪 张红梅 续九如 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期331-333,共3页

用地高辛对胚胎发生晚期丰富蛋白LEA3基因片段(1.0 kh)进行了探针标记。斑点杂交表明,该探针的检测灵敏度为5 Pg。用地高辛标记和未标记的标准分子量DL 2000进行杂交时,只检测到2.00、1.00、0.75、0.50 kb4条杂交带。应用LEA3探针对转... 用地高辛对胚胎发生晚期丰富蛋白LEA3基因片段(1.0 kh)进行了探针标记。斑点杂交表明,该探针的检测灵敏度为5 Pg。用地高辛标记和未标记的标准分子量DL 2000进行杂交时,只检测到2.00、1.00、0.75、0.50 kb4条杂交带。应用LEA3探针对转基因草莓(Fragaria ananassa Duch.)进行了Southern blot分析,检测到1.0 kh杂交带,表明外源LEA3基因整合到草莓染色体上。 展开更多

关键词 地高辛 LEA3基因 探针标记 转基因草莓

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两种探针标记试剂盒在橡胶树单染色体FISH验证的效果比较

9

作者 王波 王英 +1 位作者 高和琼 庄南生 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第14期4729-4734,共6页

以巴西橡胶树‘热研7-33-97’同一条染色体的LA-PCR纯化产物为实验对象,通过两种探针标记试剂盒——罗氏生物素切口平移标记试剂盒和碧云天生物素随机引物标记试剂盒对其进行探针标记,从信号覆盖面积,准确性,杂点多少等方面比较这两种... 以巴西橡胶树‘热研7-33-97’同一条染色体的LA-PCR纯化产物为实验对象,通过两种探针标记试剂盒——罗氏生物素切口平移标记试剂盒和碧云天生物素随机引物标记试剂盒对其进行探针标记,从信号覆盖面积,准确性,杂点多少等方面比较这两种标记探针方法的荧光原位杂交检测效率。结果显示:在这两种标记方法中,罗氏生物素切口平移标记试剂盒比碧云天生物素随机引物标记试剂盒在标记相同单染色体探针进行FISH检测时,其荧光原位杂交的准确性高,杂点少,且信号在‘热研7-33-97’中期染色体标本的单条染色体上覆盖面更广。说明罗氏生物素切口平移标记试剂盒更适用于橡胶树单染色体的荧光原位杂交验证。本研究为后续巴西橡胶树单染色体高通量测序及序列分析、基因功能注释、分子辅助育种等实验提供理论基础。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 单染色体 荧光原位杂交(FISH) 探针标记

原文传递

基因组探针非试剂盒标记系统中DNaseI用量优化

10

作者 谢素霞 王力军 +1 位作者 袁红雨 魏文辉 《信阳师范学院学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2006年第3期294-296,共3页

用10U的DNA Polymerase Ⅰ，一个跨度达百万倍的DNase Ⅰ量，在15℃分别标记了1μg甘蓝型油菜中油821的基因组DNA，发现DNase Ⅰ用量为0．1U时，10min后就可获得较好的探针标记效果．DNase Ⅰ用量为0．01U时，标记2h就显示较深的颜色．... 用10U的DNA Polymerase Ⅰ，一个跨度达百万倍的DNase Ⅰ量，在15℃分别标记了1μg甘蓝型油菜中油821的基因组DNA，发现DNase Ⅰ用量为0．1U时，10min后就可获得较好的探针标记效果．DNase Ⅰ用量为0．01U时，标记2h就显示较深的颜色．随着DNase Ⅰ用量的降低，标记时间需要相应地延长．其用量超过1U时，无法获得较好的探针标记效果．综合考虑DNase Ⅰ用量及标记时间，DNase Ⅰ用量为0．01U、标记时间为3～7h获得的标记效果最佳． 展开更多

关键词 油菜 基因组DNA 探针标记 DNASE Ⅰ量

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新疆多浪羊IL-1β基因地高辛探针的标记和敏感性检测

11

作者 曾国航 徐宏伟 +3 位作者 潘伊微 贾山岭 曹玉华 李莲瑞 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期560-565,共6页

【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-... 【目的】IL-1β是一种多效的促炎因子,在细胞因子炎性反应中为重要介质,处于介导炎性反应的重要因子,在造血和免疫活性中都发挥重要的作用。该实验结果为进一步研究绵羊分子免疫学,从多浪羊外周血淋巴细胞c DNA文库的筛选基因,寻找与IL-1β相关的新基因奠定基础。【方法】将构建好的多浪羊的p MD-18T-IL-1β质粒[1]进行PCR扩增,经过切胶回收,目的基因的浓缩后,采用罗氏地高辛标记和检测试剂盒标记IL-1β基因,获得IL-1β地高辛探针,进行敏感性检测,在Hybond N+膜上显影,计算探针浓度。【结果】计算出标记后的探针浓度为17.1 g/m L。【结论】通过southern杂交可以得知,Hybond N+膜上有IL-1β基因的双链DNA,标准杂交液中为DIG标记的IL-1β基因单链DNA,通过避光显色,在Hybond N+膜有深紫色的杂交条带,证明探针的浓度达到标准浓度。 展开更多

关键词 多浪羊IL-1β基因 地高辛 探针标记 检测

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不吸水链霉菌基因文库的构建及初步筛选 被引量：6

12

作者 桓明辉 陈飞 +3 位作者 吴红艳 关艳丽 王志 程永涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期134-137,共4页

采用碱裂解法从不吸水链霉菌提取染色体DNA,用Sau3AI对染色体DNA进行部分水解,利用透析袋法回收3.5～9kb之间的DNA片段。以pUC18为载体,用BamHI对其进行酶切,再用热敏磷酸酶去磷酸化,酶切产物与外源DNA按一定比例混合后,加入T4DNA连接... 采用碱裂解法从不吸水链霉菌提取染色体DNA,用Sau3AI对染色体DNA进行部分水解,利用透析袋法回收3.5～9kb之间的DNA片段。以pUC18为载体,用BamHI对其进行酶切,再用热敏磷酸酶去磷酸化,酶切产物与外源DNA按一定比例混合后,加入T4DNA连接酶进行连接。连接产物用受体菌E.coliDH5α进行转化,根据α-互补性质产生的颜色反应,挑选白色菌落,构建了相应的不吸水链霉菌基因文库。分别利用特异性探针2-1-1及1-2-1对不吸水链霉菌基因文库进行筛选,利用DIG-Ⅱ-dUTP对特异性探针进行标记,与基因文库中的阳性转化子进行Southern杂交,通过显色反应对杂交结果进行检测,由于时间关系,暂未筛选出阳性克隆,但这些工作对以后的相关实验研究具有很好的借鉴作用。 展开更多

关键词 不吸水链霉菌 基因文库 地高辛探针标记 SOUTHERN杂交 菌落原位杂交

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斑马鱼血管内脂代谢研究方法的构建 被引量：5

13

作者 陈侃 王长谦 +4 位作者 范虞琪 韩志华 汪月 高霖 曾华盨 《中国动脉硬化杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期398-403,共6页

目的构建系统的斑马鱼血管内脂代谢的研究方法。方法利用油红O染色、荧光探针标记、直接血脂检测等方法研究斑马鱼胚胎、幼鱼、成鱼等不同发育时期血管内的脂质代谢,以及不同饮食对斑马鱼血脂的影响。结果油红可将斑马鱼胚胎血管内的脂... 目的构建系统的斑马鱼血管内脂代谢的研究方法。方法利用油红O染色、荧光探针标记、直接血脂检测等方法研究斑马鱼胚胎、幼鱼、成鱼等不同发育时期血管内的脂质代谢,以及不同饮食对斑马鱼血脂的影响。结果油红可将斑马鱼胚胎血管内的脂质染色,荧光探针可荧光标记斑马鱼胚胎血管内的胆固醇。喂食蛋黄液可升高斑马鱼幼鱼的血脂水平,油红O染色可反映这种血脂的变化。高胆固醇饮食可升高斑马鱼幼鱼血管内胆固醇水平,荧光探针可标记幼鱼血管内胆固醇的变化。血脂检测显示高脂饮食的斑马鱼血清总胆固醇和甘油三酯均高于普通饮食的斑马鱼。结论本研究利用油红O染色、荧光探针标记及血脂检测等技术构建了斑马鱼不同发育阶段血管内脂代谢的研究方法。 展开更多

关键词 斑马鱼 脂代谢 油红O染色 荧光探针标记

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原位杂交技术展望 被引量：2

14

作者 胡守萍 尹训南 +1 位作者 付德霞 李伟杰 《畜牧兽医科技信息》 2005年第12期14-15,共2页

关键词 原位杂交技术 爪蟾核糖体基因 卵母细胞 细胞定位 探针标记法 免疫PCR技术

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一种快速低廉的PCR探针标记方法 被引量：3

15

作者 许本波 谢伶俐 +2 位作者 柴友荣 李加纳 田志宏 《中国农学通报》 CSCD 2007年第9期82-84,共3页

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现... 【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。 展开更多

关键词 DNA探针标记 TAQ DNA PCR标记

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多寡核苷酸探针同步标记在Northern blot多基因分析中的应用

16

作者 杜明梅 叶玲 +3 位作者 翟冰 刘建伟 刘静 杨立娜 《医学研究生学报》 CAS 2007年第7期685-688,共4页

目的:建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法。方法:通过T4多聚核苷酸激酶5′末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测。结果... 目的:建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法。方法:通过T4多聚核苷酸激酶5′末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测。结果:与常规mRNA逐一检测的效果进行比较,同步简化法的各目的基因同时得到较好的检测。结论:同步简化法简化了实验过程,缩减了实验时间,节省了实验试剂,并使各基因表达丰度之间的比较具有更高的准确性,提高了Northern blot的检测效率和成功率。 展开更多

关键词 NORTHERN BLOT 寡核苷酸探针 多探针标记 多基因分析

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光动力效应致靶细胞线粒体损伤的机制研究 被引量：3

17

作者 戴维德 曾晶 +2 位作者 李晓松 刘凡光 顾瑛 《山西医科大学学报》 CAS 2009年第1期13-15,38,95,共5页

目的探讨光动力效应对靶细胞线粒体损伤的发生机制。方法先将血卟啉单甲醚与ECV304细胞共同孵育12h,采用荧光探针标记技术和细胞器-细胞荧光强度比值法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析。应用荧光显微镜汞灯照射以激发光敏剂产生... 目的探讨光动力效应对靶细胞线粒体损伤的发生机制。方法先将血卟啉单甲醚与ECV304细胞共同孵育12h,采用荧光探针标记技术和细胞器-细胞荧光强度比值法对细胞内HMME进行亚细胞定位和定量分析。应用荧光显微镜汞灯照射以激发光敏剂产生光动力效应,并加入ROS探针H2DCF-DA检测单线态氧的产生。分别在光照前后采集线粒体及DCF的荧光图像并进行荧光强度的定量分析。结果细胞总荧光光强在光照后较光照前降低26.4%;以细胞器光照前的平均荧光光强比值为基准,则光照后线粒体降低了31.1%。线粒体区域在单纯光照和有HMME存在情况下均检测到DCF荧光的增强。结论光动力效应会引起线粒体内光敏剂发生一定程度的光漂白作用,表明线粒体内产生了一定数量的单线态氧,后者导致线粒体损伤。 展开更多

关键词 光动力效应 线粒体损伤 荧光探针标记术

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化学衍生辅助液相色谱-串联质谱测定枇杷膏中的齐墩果酸和熊果酸 被引量：3

18

作者 骆丹 冯钰锜 +3 位作者 姚劲挺 孙友宝 黄涛宏 端裕树 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期27-31,共5页

建立了一种液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)同时测定齐墩果酸和熊果酸含量的分析方法,利用衍生化试剂N,N-二甲基乙二胺(DMED)和d4-N,N-二甲基乙二胺(d4-DMED)分别衍生样品和标准工作溶液中的目标分析物,并将标准工作液的衍生产物作为稳定... 建立了一种液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)同时测定齐墩果酸和熊果酸含量的分析方法,利用衍生化试剂N,N-二甲基乙二胺(DMED)和d4-N,N-二甲基乙二胺(d4-DMED)分别衍生样品和标准工作溶液中的目标分析物,并将标准工作液的衍生产物作为稳定同位素内标。该方法线性关系良好,相关系数均>0.99;齐墩果酸和熊果酸的检出限(S/N=3)分别为0.92 ng/L和1.06 ng/L,加标回收率分别为98.7%~102.7%和97.2%~105.0%。该方法简单、快速、准确,可满足枇杷膏中齐墩果酸和熊果酸高灵敏度检测的需求。 展开更多

关键词 液相色谱-串联质谱 同位素质谱探针标记技术 化学衍生 齐墩果酸 熊果酸

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地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立 被引量：2

19

作者 余进 张锐发 +2 位作者 李明 万军梅 李伯南 《广州医学院学报》 1995年第2期10-16,共7页

本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针... 本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。 展开更多

关键词 HLA-DR DQ基因序列特异性寡核苷酸探针杂交 非同位素DNA探针标记

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一种利用Taq酶快速标记DNA探针的方法 被引量：2

20

作者 杜浛 梁颖 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期34-35,共2页

目的 :探索低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。方法 :以特定引物和 16mer的随机引物作为延伸引物 ,利用Taq酶标记DNA探针。以大肠杆菌Klenow片断随机引物延伸标记法作为对照。点杂交方法检测探针标记效果。结果与结论 :Taq酶标记法... 目的 :探索低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。方法 :以特定引物和 16mer的随机引物作为延伸引物 ,利用Taq酶标记DNA探针。以大肠杆菌Klenow片断随机引物延伸标记法作为对照。点杂交方法检测探针标记效果。结果与结论 :Taq酶标记法和大肠杆菌Klenow片段随机引物延伸标记法同样有较好的标记效果 ,且随机引物或特定引物作为延伸引物均可以合成足够有效的探针。Taq酶标记法是一种低成本、高效。 展开更多

关键词 DNA探针标记 TAQDNA聚合酶 随机引物 特定引物

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