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姜黄素对鼻咽癌细胞迁移的影响及相关机制研究
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作者 熊晖 姚运红 +2 位作者 蔡琼珍 李飞虹 余建华 《宁夏医科大学学报》 2010年第5期559-563,571,共6页
目的研究姜黄素对鼻咽癌增殖和迁移的影响,探讨姜黄素抗鼻咽癌的可能机理。方法考马斯蓝染色和图像分析法检测不同浓度姜黄素(0、10、20、40μmol.L-1)对H5细胞骨架的影响;细胞刮痕实验观察不同浓度姜黄素对H5细胞迁移能力的影响;以免... 目的研究姜黄素对鼻咽癌增殖和迁移的影响,探讨姜黄素抗鼻咽癌的可能机理。方法考马斯蓝染色和图像分析法检测不同浓度姜黄素(0、10、20、40μmol.L-1)对H5细胞骨架的影响;细胞刮痕实验观察不同浓度姜黄素对H5细胞迁移能力的影响;以免疫细胞化学方法检测EGFR、PCNA、PI3K、Tubulin-β在各组细胞中的表达情况;RT-PCR方法检测不同浓度姜黄素对H5细胞EGER mRNA表达的影响;通过体内H5裸鼠移植瘤实验,观察姜黄素对移植瘤生长的影响,免疫组织化学方法检测不同浓度姜黄素作用H5裸鼠移植瘤组织中EGFR、PCNA、PI3K、Tubulin-β的表达。结果随着姜黄素浓度的增加,刮痕边缘的H5细胞向划痕外迁出减少(P<0.05);H5细胞骨架染色逐渐降低(P<0.01);不同浓度的姜黄素可抑制H5细胞中EGFR、PCNA、PI3K和Tubulin-β的表达,并使EGFR mRNA表达下调。姜黄素抑制H5裸鼠移植瘤生长,用药组的移植瘤组织坏死更为广泛(P<0.01);高剂量姜黄素处理组H5裸鼠移植瘤组织中的EGFR表达与对照组相比明显减弱(P<0.05)。Spearman相关分析显示EGFR、PCNA和Tubulin-β随姜黄素剂量的增高表达减弱,呈剂量效应关系(P<0.05或0.01);EGFR与PI3K、EGFR与Tubulin-β表达具有相关性(P<0.05);PCNA与PI3K表达具有相关性(P<0.05)。结论姜黄素可能通过下调EGFR影响细胞骨架,从而抑制鼻咽癌细胞H5的增殖及迁移。 展开更多
关键词 姜黄素 鼻咽癌 细胞骨架 表皮生长因子受体 微管蛋白-β
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蛋白质印迹法中免染技术和总蛋白定量方法的研究进展 被引量:1
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作者 韩欣霖 杨佳儒 +1 位作者 宝福凯 柳爱华 《生物技术通讯》 CAS 2017年第5期709-714,共6页
当含有蛋白质的SDS-PAGE胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中时,经三氯化合物的作用,使得蛋白质中的色氨酸经紫外光照射会发出可见光,因而可在SDS-PAGE凝胶上实现对蛋白质条带的定位与定性。免染技术即是基于此原理而发明的。基于免染技术,我们可... 当含有蛋白质的SDS-PAGE胶浸泡在三氯乙酸或氯仿中时,经三氯化合物的作用,使得蛋白质中的色氨酸经紫外光照射会发出可见光,因而可在SDS-PAGE凝胶上实现对蛋白质条带的定位与定性。免染技术即是基于此原理而发明的。基于免染技术,我们可以检测到待测样品中的总蛋白条带的光密度,进而利用目的蛋白条带光密度与总蛋白条带光密度的比值对目的蛋白进行定量。本文就蛋白质印迹法技术中的免染技术和总蛋白定量方法的原理和优势进行简要综述。 展开更多
关键词 免染技术 β肌动蛋白(β-actin) β微管蛋白(β-tublin) 甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 蛋白定量
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β-榄香烯注射液对人肝癌HepG2细胞微管系统的影响 被引量:6
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作者 毛雨秋 高山 +1 位作者 付海雁 崔晓楠 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期211-215,共5页
目的:探讨β-榄香烯对人肝癌细胞HepG2生长抑制作用及微管系统的影响。方法:将实验分为对照组(未加药物)与实验组(不同浓度β-榄香烯注射液0.02,0.04,0.08 g.L-1组);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定β-榄香烯对HepG2细胞增殖的影响,流式... 目的:探讨β-榄香烯对人肝癌细胞HepG2生长抑制作用及微管系统的影响。方法:将实验分为对照组(未加药物)与实验组(不同浓度β-榄香烯注射液0.02,0.04,0.08 g.L-1组);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定β-榄香烯对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞技术分析肿瘤细胞周期时相分布,激光共聚焦显微技术观察β-榄香烯处理的HepG2细胞内微管的表达、分布;逆转录-多聚酶连反应技术(RT-PCR)观察微管蛋白βmRNA水平表达;采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)分析微管蛋白β蛋白水平的表达、聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果:0.1,0.08,0.06,0.04,0.02,0.01 g.L-1的β-榄香烯注射液对HepG2细胞增殖具有抑制作用,抑制效应呈时间和浓度依赖性;将细胞阻滞在S期。激光共聚焦分析表明,β-榄香烯不同浓度作用的HepG2细胞微管网络异常;β-榄香烯注射液抑制HepG2细胞β微管蛋白mRNA表达,呈浓度依赖性。蛋白免疫印迹显示β-榄香烯能抑制微管蛋白β的表达,同时抑制细胞内微管蛋白的聚合,呈浓度依赖性。结论:β-榄香烯注射液能够抑制人肝癌细胞HepG2增殖,下调微管蛋白β的表达,抑制HepG2细胞内微管的聚合可能是造成HepG2细胞生长抑制的因素之一。 展开更多
关键词 β-榄香烯 肝癌 微管 微管蛋白β 微管聚合
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外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡促进神经元轴突的伸长
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作者 孙海涛 任春朋 +3 位作者 杨永涛 黄永辉 秦入结 李震 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2025年第23期4924-4930,共7页
背景:神经元轴突损伤可致神经功能障碍,促进轴突伸长有望在神经系统疾病治疗中发挥重要作用。目的:探究外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡(ectomesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles,EMSC-EVs)能否促进神经元轴突伸... 背景:神经元轴突损伤可致神经功能障碍,促进轴突伸长有望在神经系统疾病治疗中发挥重要作用。目的:探究外胚层间充质干细胞来源细胞外囊泡(ectomesenchymal stem cells-derived extracellular vesicles,EMSC-EVs)能否促进神经元轴突伸长。方法:(1)组织贴壁法获取鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,免疫荧光鉴定特异性标志物;超速离心法获取EMSC-EVs并进行鉴定;(2)EMSC-EVs(0,0.5,1.0,1.5 mg/mL)与PC12细胞共孵育72 h,CCK-8分析EMSC-EVs对PC12细胞的细胞毒性及增殖作用;(3)EMSC-EVs(1.0 mg/mL)与PC12细胞或神经元共孵育72 h,显微镜下观察轴突长度变化,实时荧光定量PCR及Western blot分析轴突相关标志物微管蛋白β3(早期)、生长相关蛋白43(中期)和神经丝蛋白200(成熟)表达变化,以探究EMSC-EVs是否能够促进PC12细胞或神经元轴突伸长。结果与结论:(1)所获取外胚层间充质干细胞大部分呈长梭形,少数呈不规则形,高表达间充质干细胞特异性标记物Nestin、CD44及Vimentin;所获取EMSC-EVs符合细胞外囊泡的生物学标准;(2)在0.5-1.5 mg/mL质量浓度范围内,EMSC-EVs促进PC12细胞增殖,且随浓度增加而增强;(3)EMSC-EVs促进PC12细胞及神经元轴突长度增加,促进轴突相关标志物微管蛋白β3、生长相关蛋白43和神经丝蛋白200的表达。这些结果说明,EMSC-EVs能够促进神经元轴突伸长。 展开更多
关键词 间充质干细胞 神经元 PC12细胞 细胞外囊泡 轴突伸长 微管蛋白β3 生长相关蛋白43 神经丝蛋白200
柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链基因EtTBC的克隆、表达及特性的初步分析
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作者 谢馨锐 赵其平 +6 位作者 朱顺海 郭慧琳 王丽慧 于钰 董辉 韩红玉 刘伟 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期405-414,共10页
鸡球虫病是一种由艾美耳属原生动物寄生虫引起的肠道疾病,是影响家禽业的最重要疾病之一。目前,球虫病的控制主要依赖于抗球虫药物的使用,但由于药物的长期广泛使用导致了球虫的严重耐药性。为研究其耐药性机制,本实验室前期对柔嫩艾美... 鸡球虫病是一种由艾美耳属原生动物寄生虫引起的肠道疾病,是影响家禽业的最重要疾病之一。目前,球虫病的控制主要依赖于抗球虫药物的使用,但由于药物的长期广泛使用导致了球虫的严重耐药性。为研究其耐药性机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株、盐霉素耐药株进行了转录组测序分析,发现与敏感株相比,柔嫩艾美耳球虫微管蛋白β链(Et TBC)仅在地克珠利耐药株高表达。本研究在此基础上,克隆、表达了EtTBC,并初步分析了其功能及与地克珠利的关系;以柔嫩艾美耳球虫敏感株cDNA为模板成功克隆了EtTBC基因,构建了原核表达重组质粒pET28a-Et TBC,并成功诱导表达了重组蛋白r Et TBC;利用qPCR对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段以及不同虫株(耐药株、敏感株和田间耐药株)的mRNA转录水平进行了分析,结果显示,该基因的转录水平在敏感株未孢子化卵囊阶段最高,且其mRNA转录水平仅在地克珠利耐药株上调;间接免疫荧光定位结果表明该蛋白主要分布在子孢子除折光体外的细胞质和表面,第二代裂殖子的细胞质和表面。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 微管蛋白β 耐药性
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人和小鼠神经干细胞的体外培养的分化研究 被引量:3
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作者 吴益民 喻红 +3 位作者 林丽珠 何以丰 赵寿元 李昌本 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期57-62,共6页
首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白 βⅢ基因 ,从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽 ,进一步证实用抗人微管蛋白 βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞 .免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体... 首次克隆了小鼠神经元标志性微管蛋白 βⅢ基因 ,从核苷酸序列推导出小鼠与人两者之间在其羧基端有相同的EAQGPK六肽 ,进一步证实用抗人微管蛋白 βⅢ单抗可检测小鼠神经干细胞分化成的神经元细胞 .免疫组化鉴定显示小鼠神经干细胞在体积分数为 1%胎牛血清 (FBS)诱导下 ,可分化成神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞 .同时培养了 13周龄胎儿脑来源的人类神经干细胞 ,用特异性的抗人nestin抗体鉴定 ,全部为阳性细胞 ,但是它们经诱导分化产生较不同寻常的细胞分化结果和分化程度 ,在生长因子减半和 1%FBS诱导条件下可分化为神经元和星形胶质细胞 ,而无少突胶质细胞分化 。 展开更多
关键词 微管蛋白β 体外分化 神经干细胞
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切除修复交叉互补基因1、乳腺癌易感基因1及微管蛋白β3检测在晚期肺鳞状细胞癌患者GP方案治疗中的指导意义
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作者 李勇平 雷傲利 +1 位作者 李文革 李复红 《癌症进展》 2023年第21期2411-2414,共4页
目的 探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)及微管蛋白β3(TUBB3)检测在晚期肺鳞状细胞癌患者吉西他滨+顺铂(GP)方案治疗中的指导意义。方法 选取74例行GP方案治疗的晚期肺鳞状细胞癌患者,采用免疫组化法检测ERCC1... 目的 探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)、乳腺癌易感基因1(BRCA1)及微管蛋白β3(TUBB3)检测在晚期肺鳞状细胞癌患者吉西他滨+顺铂(GP)方案治疗中的指导意义。方法 选取74例行GP方案治疗的晚期肺鳞状细胞癌患者,采用免疫组化法检测ERCC1、BRCA1及TUBB3表达情况。比较不同临床特征晚期肺鳞状细胞癌患者的ERCC1、BRCA1及TUBB3表达情况。根据免疫组化结果对患者进行分组,3阳性为A组(n=16),2阳性+1阴性为B组(n=18),1阳性+2阴性为C组(n=19),3阴性为D组(n=21),比较4组患者的临床特征、总有效率及疾病控制率。结果 74例晚期肺鳞状细胞癌患者肺鳞状细胞癌组织中ERCC1、BRCA1、TUBB3阳性表达率分别为45.95%、55.41%、47.30%。不同性别、临床分期、分化程度肺鳞状细胞癌患者肺鳞状细胞癌组织中ERCC1、BRCA1及TUBB3阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。4组患者的性别、年龄、吸烟时间比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);4组患者的临床分期、分化程度比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。4组患者的总有效率和疾病控制率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01),其中D组患者的总有效率和疾病控制率均最高,A组均最低。结论 ERCC1、BRCA1、TUBB3联合检测能够为GP方案治疗晚期肺鳞状细胞癌提供参考,有助于筛选有效治疗人群,提高GP方案治疗的有效性。 展开更多
关键词 切除修复交叉互补基因1 乳腺癌易感基因1 微管蛋白β3 晚期肺鳞状细胞癌 GP方案
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微管蛋白和肝肠钙粘连蛋白在胃腺癌中的表达及相关性分析 被引量:1
8
作者 郭绪峰 雷晓斐 +1 位作者 吕晓光 董卫国 《临床内科杂志》 CAS 2013年第2期130-132,共3页
目的探讨微管蛋白(Tubulin β-2c)和肝肠钙粘连蛋白(LI-cadherin)在胃腺癌组织中表达的临床意义及两种蛋白的相关性。方法应用免疫组化S-P法,检测Tubulin β-2C及LI-cadherin在60例胃腺癌组织中的表达,并分析两种蛋白的相关性。结... 目的探讨微管蛋白(Tubulin β-2c)和肝肠钙粘连蛋白(LI-cadherin)在胃腺癌组织中表达的临床意义及两种蛋白的相关性。方法应用免疫组化S-P法,检测Tubulin β-2C及LI-cadherin在60例胃腺癌组织中的表达,并分析两种蛋白的相关性。结果Tubulin β2C及LI—cadherin在胃腺癌组织中的阳性表达率分别为73.33%和68.33%,在癌旁及正常组织中均不表达,两种蛋白的表达呈正相关(r=0.450,P〈0.05)。Tubulin β-2C与肿瘤分化程度有关,与年龄、性别以及淋巴结转移无关。LI—cadherin与肿瘤浸润程度及淋巴结转移有关(P〈0.05),与性别、年龄无关。结论Tubulin β-2c是胃腺癌发生发展过程中一种重要的蛋白分子,其表达强度与胃腺癌分化程度有关,且与LI—cadherin的表达呈正相关。 展开更多
关键词 胃腺癌 微管蛋白β 肝肠钙粘连蛋白
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REST/TUBB3轴对卵巢癌紫杉醇化疗耐药性的影响及作用机制
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作者 余婷玉 方珊珊 +2 位作者 朱言亮 刘波 李泉 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期1129-1135,共7页
目的 探究PE1沉默转录因子(REST)/微管蛋白β(TUBB)3对卵巢癌紫杉醇耐药性影响及作用机制。方法 免疫组织化学法检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药肿瘤组织中REST、TUBB3表达,Western印迹检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药细胞中REST、TUBB3蛋白表达... 目的 探究PE1沉默转录因子(REST)/微管蛋白β(TUBB)3对卵巢癌紫杉醇耐药性影响及作用机制。方法 免疫组织化学法检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药肿瘤组织中REST、TUBB3表达,Western印迹检测卵巢癌紫杉醇敏感及耐药细胞中REST、TUBB3蛋白表达,定量聚合酶链反应(qPCR)检测卵巢癌组织中REST、TUBB3 mRNA表达。不同浓度紫杉醇作用于SKOV3、OVCAR3和SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞后,分析细胞凋亡与周期变化,CCK8检测细胞活力,Western印迹检测REST、TUBB3蛋白表达。过表达或敲低REST后,qPCR和Western印迹分别检测TUBB3 mRNA和蛋白表达,检测细胞凋亡水平和周期阻滞。染色质免疫沉淀法检测H3-ac、H4-ac、HADC1与TUBB3基因第2个CpG位点的结合。结果 REST在卵巢癌紫杉醇耐药肿瘤组织及细胞系中低表达,TUBB3异常高表达于卵巢癌紫杉醇化疗耐药肿瘤组织及细胞系,两者mRNA表达呈显著负相关(P<0.05)。不同浓度紫杉醇作用下,REST蛋白表达逐渐明显降低,TUBB3蛋白表达逐渐明显升高,SKOV3/tax、OVCAR3/tax细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著低于SKOV3、OVCAR3(P<0.05)。过表达REST后,TUBB3表达明显降低,细胞对紫杉醇敏感性明显提高,细胞凋亡水平和细胞周期阻滞显著提高(P<0.05)。敲低REST后H3-ac、H4-ac与TUBB3基因第2个CpG位点的结合增强,促进TUBB3基因转录。结论 在卵巢癌紫杉醇化疗耐药组织及细胞系中,REST低表达,而TUBB3异常高表达,REST和TUBB3的RE-1序列结合调控其转录,在紫杉醇化疗耐药中发挥负调控作用。 展开更多
关键词 卵巢癌 紫杉醇 耐药 RE1沉默转录因子(REST) 微管蛋白β(TUBB)3
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食管鳞癌基因多态性表达与生存分析 被引量:5
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作者 贾卓奇 周维茹 +4 位作者 贺海奇 李硕 游江涛 付军科 张勇 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第10期1673-1677,共5页
目的:探讨食管鳞癌肿瘤组织中ERCC1、TYMS、TUBB3基因表达与预后生存的关系。方法:选择2012年9月至2016年5月我科收治的68例食管鳞癌患者,术后病理分期II a-III a期;检测肿瘤组织ERCC1、TYMS、TUBB3 mRNA表达水平。术后患者分为个体化... 目的:探讨食管鳞癌肿瘤组织中ERCC1、TYMS、TUBB3基因表达与预后生存的关系。方法:选择2012年9月至2016年5月我科收治的68例食管鳞癌患者,术后病理分期II a-III a期;检测肿瘤组织ERCC1、TYMS、TUBB3 mRNA表达水平。术后患者分为个体化化疗组和标准化疗组,个体化组患者根据基因检测结果选择敏感药物化疗方案(CF/DCF/TC方案)进行化疗,标准组应用CF方案化疗,所有患者长期随访,统计化疗不良反应及生存数据。结果:肿瘤组织中ERCC1、TYMS、TUBB3阳性表达率分别为43%、47%、51%,无统计学差异(P>0.05)。所有患者总一年生存率、两年生存率及三年生存率为分别为90.57%,72.45%和59.77%。生存曲线分析提示:0项基因阳性组预后最佳(P<0.05),而1项、2项和3项基因阳性组间无统计学差异(P>0.05)。个体化化疗组的III/IV级化疗不良反应发生率明显低于标准化疗组(P<0.05)。结论:食管鳞癌患者中ERCC1、TYMS、TUBB3表达具有特定的临床特征,其高表达患者预后欠佳。根据基因检测结果进行个体化化疗可以获得更好的疗效和耐受性,不良反应更轻。 展开更多
关键词 食管鳞癌 修复交叉互补基因1(ERCC1) 胸腺嘧啶合酶(TYMS) 微管蛋白β3基因(TUBB3) 化疗 生存率
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TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制
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作者 孙晓彤 韩崇旭 +2 位作者 王婵 任传利 张明明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期2176-2182,共7页
目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、... 目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、500μmol/L组和1000μmol/L组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞克隆、细胞划痕和Hoechst染色实验检测细胞活力、增殖、伤口愈合率和凋亡。qPCR检测细胞中TMEM39A mRNA表达量;Western blot检测TMEM39A和LC3的蛋白表达量。结果与control组相比较,1000μmol/L组的细胞活力、增殖和伤口愈合率降低,细胞凋亡现象最明显。在构建的原发性胆汁性胆管炎的模型中,过表达TMEM39A会促进LC3的表达。结论TMEM39A的表达增高引起胆管细胞自噬增强使胆管受损,可能是引起原发性胆汁性胆管炎的机制之一。 展开更多
关键词 TMEM39A 原发性胆汁性胆管炎 人肝胆管癌细胞 微管相关蛋白3β 甘氨鹅脱氧胆酸
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牛磺酸促进宫内生长受限胎鼠神经干细胞分化的研究 被引量:2
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作者 刘方 付薇 +3 位作者 刘敬 彭海波 庄学玲 梁小琴 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期290-294,共5页
目的通过观察牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)胎鼠神经干细胞(NSCs)分化的影响,探讨其脑保护机制。方法采用低蛋白饮食法建立IUGR胎鼠模型。取胎鼠室管膜下生发基质区(SVZ)脑组织进行NSCs培养。将传代培养所得NSCs分为3组:正常对照组、IUGR... 目的通过观察牛磺酸对宫内生长受限(IUGR)胎鼠神经干细胞(NSCs)分化的影响,探讨其脑保护机制。方法采用低蛋白饮食法建立IUGR胎鼠模型。取胎鼠室管膜下生发基质区(SVZ)脑组织进行NSCs培养。将传代培养所得NSCs分为3组:正常对照组、IUGR组和IUGR+牛磺酸组。分别对3组细胞进行诱导分化5d。采用免疫荧光法检测各组分化细胞的神经细胞特异性微管蛋白β3(βⅢ-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)阳性细胞数,计算各种细胞所占比例;采用Westernblot法检测各组细胞βⅢ-tubulin及GFAP蛋白水平。结果1.正常对照组、IUGR及IUGR+牛磺酸组βⅢ-tubulin阳性细胞计数比例分别为(18.50±0.64)%、(15.61±0.76)%、(18.42±0.82)%,GFAP阳性细胞计数比例分别为(72.19±0.82)%、(74.87±0.67)%、(71.68±0.92)%,组间比较差异均有统计学意义(F=49.103、44.643,均P<0.01)。与正常对照组比较,IUGR组βⅢ-tubulin阳性细胞计数比例显著减少(P<0.01),GFAP阳性细胞计数比例显著增加(P<0.01);与IUGR组相比,IUGR+牛磺酸组βⅢ-tubulin阳性细胞计数比例显著增高(P<0.01),GFAP阳性细胞计数比例显著减少(P<0.01);正常对照组与IUGR+牛磺酸组二种细胞计数比例比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。2.正常对照组、IUGR及IUGR+牛磺酸组βⅢ-tubulin蛋白相对表达量分别为0.44±0.02、0.33±0.03、0.42±0.02,GFAP蛋白相对表达分别为1.13±0.02、1.50±0.04、1.21±0.01,组间比较差异均有统计学意义(F=45.191、234.525,均P<0.01)。与正常对照组相比,IUGR组βⅢ-tubulin蛋白表达显著减少(P<0.01),GFAP蛋白水平显著增高(P<0.01);与IUGR组相比,IUGR+牛磺酸组βⅢ-tubulin蛋白表达显著增高(P<0.01),GFAP蛋白水平显著减少(P<0.01);正常对照组与IUGR+牛磺酸组2种蛋白水平比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论牛磺酸可促进IUGR胎鼠NSCs向神经元方向分化,并保持各种分化细胞比例正常。 展开更多
关键词 牛磺酸 宫内生长受限 神经干细胞 分化 神经细胞特异性微管蛋白β3 胶质纤维酸性蛋白
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RRM1、β-Tubb3、ERCC1表达在Ⅲb/Ⅳ期非小细胞肺癌个体化治疗中的研究 被引量:1
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作者 刘海涛 陈余清 +7 位作者 李殿明 李伟 王效静 黄礼年 闵生萍 张永 徐晓玲 孙耕耘 《蚌埠医学院学报》 CAS 2013年第12期1541-1544,1547,共5页
目的:探讨Ⅲb/Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中核苷酸还原酶M1(RRM1)、人微管蛋白β3(β-Tubb3)和核苷酸切除修复互补基因1(ERCC1)表达与吉西他滨、紫杉类和铂类药物疗效之间的关系。方法:Ⅲb/Ⅳ期NSCLC患者480例,随机分为试验组和对照组... 目的:探讨Ⅲb/Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC)组织中核苷酸还原酶M1(RRM1)、人微管蛋白β3(β-Tubb3)和核苷酸切除修复互补基因1(ERCC1)表达与吉西他滨、紫杉类和铂类药物疗效之间的关系。方法:Ⅲb/Ⅳ期NSCLC患者480例,随机分为试验组和对照组各240例,试验组采用实时荧光定量聚合酶链反应-高分辨溶解曲线法检测石蜡组织标本中RRM1、β-Tubb3、ERCC1 mRNA的表达,并根据RRM1、β-Tubb3表达结果,试验组选择铂类联合吉西他滨(GP方案)、长春瑞滨(NP方案)、紫杉醇(TP方案)或培美曲赛的两药化疗方案;对照组随机给予任何一种两药联合化疗。比较2组化疗疗效及总生存期。结果:试验组和对照组的客观缓解率分别为66.1%和31.7%,疾病控制率分别为79.7%和46.3%,差异均有统计学意义(P<0.01);总生存期分别为11.2个月和9.8个月,差异无统计学意义(P>0.05)。GP方案治疗后试验组患者客观缓解率为70.7%,较对照组32.6%显著增高(P<0.01)。NP、TP方案治疗后试验组患者客观缓解率为66.7%,较对照组29.5%显著增高(P<0.01)。试验组ERCC1低表达与高表达患者客观缓解率分别为78.7%和50.9%,差异有统计学意义(P<0.01),低表达与高表达生存期分别11.4个月和10.9个月,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:依据RRM1、β-Tubb3表达水平指导Ⅲb/Ⅳ期NSCLC个体化治疗较随机选用标准一线化疗方案可明显提高客观缓解率。 展开更多
关键词 非小细胞肺 微管蛋白β3 核苷酸还原酶M1 核苷酸切除修复互补基因1
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α-常春藤皂苷对小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响 被引量:3
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作者 刘宇 王园园 +1 位作者 李智涛 王梅林 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期226-230,共5页
目的 研究α-常春藤皂苷(α-hederin)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响。方法 按体重将ICR小鼠随机分为正常组(等体积2%吐温80溶液),模型组(急性肝损伤模型,等体积2%吐温80溶液),低、高2个剂量实验组(急性肝损... 目的 研究α-常春藤皂苷(α-hederin)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响。方法 按体重将ICR小鼠随机分为正常组(等体积2%吐温80溶液),模型组(急性肝损伤模型,等体积2%吐温80溶液),低、高2个剂量实验组(急性肝损伤模型,40,80 mg·kg^(-1)α-常春藤皂苷)和阳性对照组(急性肝损伤模型,150 mg·kg^(-1)联苯双酯)。酶法测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。苏木精-伊红染色(HE)观察组织病理变化。蛋白质印迹法检测肝组织中细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和血管内皮组织酵母自噬基因-1(Beclin-1)蛋白表达水平。结果 在CCl4所致急性肝损伤小鼠实验中,正常组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性对照组小鼠血清GPT酶活力分别为(10.12±3.86),(97.96±17.07),(48.76±22.23),(34.80±14.38)和(51.57±17.13)U·L^(-1);血清GOT酶活力分别为(14.56±3.13),(39.04±6.21),(27.93±6.66),(24.39±2.60)和(31.44±3.32)U·L^(-1);正常组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性对照组小鼠血清中TNF-α含量分别为(110.73±24.54),(187.55±28.08),(160.51±14.30),(121.96±20.50)和(114.90±24.65)pg·mL^(-1);这5组小鼠血清中IL-6量分别为(26.38±3.11),(42.01±5.47),(34.13±3.89),(28.62±5.15)和(29.62±4.25)pg·mL^(-1);正常组、模型组和低、高2个剂量实验组LC3BⅡ蛋白表达量分别为2.23±0.36,1.00±0.17,2.47±0.62和3.41±0.49;这4组Beclin-1蛋白表达量分别为1.51±0.14,1.00±0.03,1.23±0.10和1.38±0.12。上述指标,模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);低、高2个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 α-常春藤皂苷对小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗炎症反应有关;α-常春藤� 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 急性肝损伤 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素-6 微管相关蛋白1轻链3β 血管内皮组织酵母自噬基因1
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基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响 被引量:2
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作者 封壮壮 宋瑞平 +3 位作者 豆鹏程 陈心怡 左娇娇 舒劲 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第4期361-370,共10页
目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWF... 目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。 展开更多
关键词 胃癌前病变 制萎扶胃丸 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1) 微管相关蛋白1轻链3β(LC3B) 自噬
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LC3B在心力衰竭中的研究进展
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作者 张琪琪 崔英华 《医学诊断》 2024年第2期221-226,共6页
心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段,亦是医学界尚未攻克的最后堡垒,给患者、家庭、社会带来沉重负担。LC3B属于LC3/GABARAP蛋白家族,通过介导自噬底物的招募、自噬体的运动、自噬基因的转录,参与自噬调节,保护细胞应对饥饿、缺血、缺... 心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段,亦是医学界尚未攻克的最后堡垒,给患者、家庭、社会带来沉重负担。LC3B属于LC3/GABARAP蛋白家族,通过介导自噬底物的招募、自噬体的运动、自噬基因的转录,参与自噬调节,保护细胞应对饥饿、缺血、缺氧,抗线粒体氧化应激,在心肌梗死、心肌病、心肌肥大中有重要作用。本综述对LC3B的生物学特点、功能及其通过调节自噬改善心力衰竭进行综述,并为心力衰竭的治疗提供新思路。 展开更多
关键词 心力衰竭 自噬 自噬体 微管相关蛋白1轻链3β
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微管相关蛋白1轻链3β在胃癌组织的表达及其临床意义
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作者 邢文凤 朱恒利 +3 位作者 张碧涛 黄国全 钱昆 孙建华 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第2期230-234,共5页
目的基于单细胞测序技术解析微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)在胃癌中的表达及其与患者预后的关系。方法选用3对胃癌及配对的癌旁组织样本行单细胞转录组测序(scRNA-seq)。CellTypist对过滤后的单细胞表达数据进行亚群分类, 使用Wilcoxon ra... 目的基于单细胞测序技术解析微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)在胃癌中的表达及其与患者预后的关系。方法选用3对胃癌及配对的癌旁组织样本行单细胞转录组测序(scRNA-seq)。CellTypist对过滤后的单细胞表达数据进行亚群分类, 使用Wilcoxon rank-sum对测序数据进行拟时序分析, 探究不同细胞簇中LC3B的差异表达。通过癌症基因组图谱(TCGA)及免疫组织化学技术(IHC)分析LC3B在胃癌组织中的表达。采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型确定影响胃癌患者预后的独立因素。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分析胃癌细胞中LC3B的表达水平, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、Transwell检测LC3B表达改变后, 胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。两组间比较采用两独立样本t检验。结果 scRNA-seq分析结果显示, LC3B在胃癌组织中的表达量高于癌旁组织(2.001±2.706比1.010±1.634, t=44.094, P<0.01)且LC3B在内皮细胞、单核细胞中表达量高于其余细胞亚群(3.610±3.294, 3.214±3.889, F=1 039.267, P<0.01)。通过TCGA和IHC分析结果显示, LC3B在原发性胃癌组织中的表达高于正常组织[67.983(53.874, 83.827)比48.114(39.147, 78.174), P<0.01;60.3%比19.1%, χ^(2)=9.299, P<0.01]。生存分析显示, LC3B高表达的胃癌患者总体生存时间短于LC3B低表达的患者[风险比(HR)=4.143, 95%可信区间(CI):2.352~7.298, P<0.05]。多因素Cox回归分析显示, LC3B为总生存期相关的危险因素(HR=4.966, 95%CI:2.241~11.005, P<0.01)。CCK-8、Transwell迁移及侵袭实验、克隆形成实验检测分析发现, 过表达LC3B后胃癌细胞的活力、迁移、侵袭、增殖能力高于空载体组[(1.837±0.057)比(1.287±0.091)、(338.000±39.950)个比(152.333±4.509)个、(287.667±44.230)个比(148.667±27.465)个、(202.333±12.503)个比(104.667±11.240)个, t=8.883、7.999、4.624、10.062, P<0.05], 抑制LC3B表达后, 胃癌细胞的活力、迁移、侵袭� 展开更多
关键词 胃癌 单细胞转录组测序 自噬 微管相关蛋白1轻链3β 预后
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长链非编码RNASNHG5在卵巢癌组织中表达及对卵巢癌细胞自噬影响 被引量:3
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作者 沈晓萍 张金春 《中国计划生育学杂志》 2020年第11期1731-1735,1935,共6页
目的:观察卵巢癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因5(SNHG5)的表达,并分析SNHG5表达对卵巢癌细胞自噬的影响。方法:选取2018年8月—2019年3月本院卵巢癌手术取得的卵巢癌组织73例(卵巢癌组),卵巢囊肿手术取得卵巢组织82例(... 目的:观察卵巢癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因5(SNHG5)的表达,并分析SNHG5表达对卵巢癌细胞自噬的影响。方法:选取2018年8月—2019年3月本院卵巢癌手术取得的卵巢癌组织73例(卵巢癌组),卵巢囊肿手术取得卵巢组织82例(囊肿组),实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测两组组织中SNHG5表达并分析与卵巢癌患者临床病理关系。培养人卵巢癌细胞SKOV3作为对照组,应用Lipofectamine 2000试剂将转染空质粒pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1-SNHG5重组质粒的SKOV3细胞分别作为阴性对照组、SNHG5过表达组。细胞计数试剂盒(CCK8)法检测各组SKOV3细胞增殖情况,通过透视电镜、单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测各组SKOV3细胞自噬水平,应用免疫印迹法(WB)检测LC3-I、LC3-II、Beclin 1蛋白表达水平。结果:lnc RNA-SNHG5相对表达量卵巢癌组(0.49±0.06)低于囊肿组(1.13±0.23),且卵巢癌组组织学分级G3、FIGO分期III^IV期中lnc RNA-SNHG5低表达者占比更高(P<0.05);SNHG5相对表达量SNHG5过表达组(1.97±0.37)高于空白组(1.03±0.20)和阴性对照组(1.05±0.21)(P<0.05);转染48h、72h、96h时SKOV3细胞增殖抑制率SNHG5过表达组(23.64±4.73%、43.57±8.71%、57.82±11.56%)高于空白组和阴性对照组(P<0.05);与空白组和阴性对照组比较,MDC阳性细胞占比SNHG5过表达组(42.38±7.64)最高,LC3-I蛋白表达量(0.16±0.03)降低,LC3-II(0.86±0.18)、beclin 1(0.97±0.18)升高(均P<0.05)。结论:lncRNA-SNHG5在卵巢癌组织中低表达,lncRNA-SNHG5过表达可明显抑制人卵巢癌细胞活力,促进细胞自噬。 展开更多
关键词 卵巢癌 长链非编码RNA 核仁小RNA宿主基因5 自噬 微管相关蛋白轻链3-β
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一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法 被引量:1
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作者 杨侃 李晓宁 +3 位作者 OmaribaGideon 李凯 周宇荀 肖君华 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期65-71,共7页
目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-... 目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-LC3β充分表达后给予药物刺激以激活或阻断细胞自噬通路,然后进行免疫荧光染色。对染色操作进行优化:首先,延长多聚甲醛的固定细胞时间(从15min延长至45min);其次,提高Triton X-100处理时间,除第一次和最后一次使用PBS润洗,其余每一次使用的PBS都添加0.2%Triton X-100;最后,提升抗体稀释液中BSA和Triton X-100含量,BSA从3%提升至5%,TritonX-100的含量从0.1%提升至0.2%。结果拍照后统计自噬小体发现,新方法更加准确地标记GFP-LC3β指示物,自噬激活条件下示踪准确度显著提升(达4.2倍);新方法更加清晰地呈现自噬小体的形态和胞内分布,将自噬小体示踪的清晰度显著提升(达2.5倍);新方法还能使用不同荧光通道,同时标记其他自噬相关基因。结论本研究提供的一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法将为全面展示细胞自噬进程、深入了解细胞自噬相关机制提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 细胞自噬 绿色荧光蛋白-小鼠微管相关蛋白1轻链3β 自噬小体示踪 原代培养
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