硬骨鱼类干扰素调节因子4,8,9,10基因比较 被引量：3

1

作者 庹锐 许巧情 +4 位作者 赵朝阳 万晶 袁汉文 李鹏 江涛 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1-8,共8页

目的：为了阐明硬骨鱼类IRF4、IRF8、IRF0和IRF10在进化上的保守及分化。方法：从Ensembl和NCBI数据库下载基因的DNA和蛋白序列，绘制基因框架图，利用Mega5．0构建系统进化树，采用DNAStar计算蛋白相似率，利用Pfam软件分析保守结构域... 目的：为了阐明硬骨鱼类IRF4、IRF8、IRF0和IRF10在进化上的保守及分化。方法：从Ensembl和NCBI数据库下载基因的DNA和蛋白序列，绘制基因框架图，利用Mega5．0构建系统进化树，采用DNAStar计算蛋白相似率，利用Pfam软件分析保守结构域。结果：IRF8和IRFIO是相当保守的。各种硬骨鱼类中IRF8和IRF10基本一致。不同物种IRF8蛋白相似性最高（60％-87％），其次为IRF10（49～78％）。但IRF9和IRF4分化较大。硬骨鱼类有1—2个IRF9基因，1—3个IRF4基因。不同物种IRF4蛋白相似率为54—88％，IRF0更低（35—71％）。此外，在硬骨鱼类IRF9和IRF4蛋白上还发现有多种结构域。结论：硬骨鱼类IRF8和IRFIO非常保守，不同物种均含有8个外显子和7个内含子，蛋白相似性分别达到60％-87％和49。78％。IRF4和IRF0分化更大，不同物种基因数量从1变化到3，蛋白相似率低。 展开更多

关键词 干扰素调节因子(irf)4 irf8 irf9 irf10 保守 分化

原文传递

内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭 被引量：3

2

作者 谢昌利 郭变琴 +5 位作者 刘翠颖 林艳 吴碧涛 王秦 李紫微 涂植光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期865-869,875,共6页

目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1... 目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。 展开更多

关键词 β干扰素(IFN-β) 巨噬细胞 极化 增殖 侵袭 干扰素调节因子(irf)

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中国西部人群IRF6基因SNPs与非综合征型唇腭裂相关性的研究 被引量：8

3

作者 黄永清 马敏 +7 位作者 马坚 李亚娣 李迎春 王珑 高军 张雷 乔光伟 石冰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期227-231,共5页

目的:探讨干扰素调节因子6(IRF6)基因rs2013162和rs2235375位点单核苷酸多态性(SNPs)与非综合征型唇腭裂的相关性。方法:收集病例组非综合征型唇腭裂患儿332例,患者父亲243例,患者母亲289例,完整的核心家庭206个。对照组收集正常新生儿... 目的:探讨干扰素调节因子6(IRF6)基因rs2013162和rs2235375位点单核苷酸多态性(SNPs)与非综合征型唇腭裂的相关性。方法:收集病例组非综合征型唇腭裂患儿332例,患者父亲243例,患者母亲289例,完整的核心家庭206个。对照组收集正常新生儿174例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测IRF6基因这2个多态位点基因型,进行病例对照和传递不平衡(TDT)分析。结果:在中国西部人群中,与正常对照组比较,唇腭裂组rs2235375位点的基因型和等位基因的频率存在统计学差异(均P<0.01)。运用传递不平衡研究发现IRF6基因rs2235375位点的G等位基因在唇腭裂患者中存在过传递(P<0.01)。有5种单倍型组合显示有传递不平衡。结论:在中国西部人群中IRF6基因多态性与非综合征型唇腭裂的发生存在强的相关性。 展开更多

关键词 非综合征型唇腭裂(NSCL/P) 干扰素调节因子6(irf6) 单核苷酸多态性(SNP)

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IRF8新发移码突变的基因功能分析

4

作者 李乐盈 陈尧 +3 位作者 周维涛 何晨 张端午 钱莉玲 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期359-367,共9页

目的对反复肺炎患儿队列病因筛查中发现的干扰素调节因子8基因(interferon regulator factor 8,IRF8)新发突变(c.1266dupA)进行分子细胞水平的功能研究与验证。方法针对IRF8突变序列构建野生与突变蛋白过表达载体,通过质粒转染或构建慢... 目的对反复肺炎患儿队列病因筛查中发现的干扰素调节因子8基因(interferon regulator factor 8,IRF8)新发突变(c.1266dupA)进行分子细胞水平的功能研究与验证。方法针对IRF8突变序列构建野生与突变蛋白过表达载体,通过质粒转染或构建慢病毒感染不同工具细胞,通过qPCR、Western blot、免疫荧光等实验手段检测其表达差异及对下游炎症相关基因表达调控的改变。结果IRF8野生及突变过表达载体构建成功,且转染效率可观,包装成的慢病毒感染效率亦较高。突变基因IRF8(c.1266dupA)相较于野生型IRF8转录水平降低,表达蛋白的相对分子质量略增大,表达量降低,突变蛋白IRF8mut相对野生型IRF8蛋白核质比增加,IRF8(c.1266dupA)对下游ISRE元件的抑制功能增强。结论IRF8新发移码突变属于功能获得型(gain of function,GOF)突变。 展开更多

关键词 干扰素调节因子8(irf8) 移码突变 反复感染 转录调控

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吉富罗非鱼IRF9基因克隆及表达特征分析

5

作者 韩鹏夫 彭文 +5 位作者 童桂香 纪月鑫 陈铭曲 文水平 韦信贤 韦友传 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1817-1827,共11页

【目的】明确吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)干扰素调节因子9基因(OnIRF9)的结构特征和组织表达模式,以及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的免疫应答情况,为揭示IRF9在罗非鱼免疫应答中的作用机制提供理论依据,进而丰富鱼类的IRF... 【目的】明确吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)干扰素调节因子9基因(OnIRF9)的结构特征和组织表达模式,以及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的免疫应答情况,为揭示IRF9在罗非鱼免疫应答中的作用机制提供理论依据,进而丰富鱼类的IRF免疫学知识。【方法】通过RACE扩增OnIRF9基因cDNA序列,通过ExPASy、SMART、SignalP-5.0、TMHMM-2.0和Euk-mPLoc 2.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼组织中的表达特征及无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后的表达变化。【结果】OnIRF9基因cDNA序列全长1828 bp,包含50 bp的5'端非编码区(5'-UTR)、485 bp的3'端非编码区(3'-UTR)和1293 bp的开放阅读框(ORF),共编码430个氨基酸残基。OnIRF9蛋白分子量为48.42 kD,理论等电点(pI)为6.23,含有IRF典型的DBD结构域和IAD结构域,不含信号肽和跨膜结构域。OnIRF9氨基酸序列与其他硬骨鱼类IRF9氨基酸序列的相似性为56.2%~95.7%,其中与美妊丽鱼IRF9氨基酸序列的相似性最高(95.7%);基于IRF9氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示,吉富罗非鱼与其他参考鱼类聚为一簇,尤其与美妊丽鱼的亲缘关系最近。OnIRF9基因在健康吉富罗非鱼脑、血液、肌肉、肝脏、皮肤、心脏、脾脏、头肾、肠道和鳃组织中均有表达,以脑组织中的相对表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),而鳃组织中的相对表达量最低。经无乳链球菌感染和Poly(I:C)刺激后,OnIRF9基因在吉富罗非脾脏、头肾和脑组织中的相对表达量在6 h内均极显著上升(P<0.01),但其相对表达量达到峰值的时间并不一致,提示OnIRF9基因在各组织中响应免疫应答时可能具有互补协调性。【结论】OnIRF9具有IRF典型的结构域(DBD和IAD),尤其是DBD结构域的功能在脊椎动物中较保守;OnIRF9基因在中枢神经系统中发挥重要作用,且参与吉富罗非鱼抵御病原体入� 展开更多

关键词 吉富罗非鱼 干扰素调节因子9(irf9) 无乳链球菌 Poly(I:C) 免疫应答

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干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4和sST2的表达情况及临床意义 被引量：1

6

作者 陈耀华 顾佩霞 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2023年第6期904-907,共4页

目的:探讨干眼患者结膜上皮细胞及泪液中干扰素调节因子4(IRF4)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)表达情况及其临床意义。方法:选取本院2019-01/2021-12期间收治的94例干眼患者作为干眼组,同期选取97例行眼科检查的体检者作为对照组,收集研... 目的:探讨干眼患者结膜上皮细胞及泪液中干扰素调节因子4(IRF4)、可溶性致癌抑制因子2(sST2)表达情况及其临床意义。方法:选取本院2019-01/2021-12期间收治的94例干眼患者作为干眼组,同期选取97例行眼科检查的体检者作为对照组,收集研究对象结膜上皮细胞及泪液,记录临床指标泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光素染色(CFS)评分、基础泪液分泌试验(SⅠt)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测结膜上皮细胞IRF4、sST2水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测泪液IRF4、sST2水平,采用Pearson法分析干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与临床指标的相关性。结果:干眼组治疗前结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著高于对照组(P<0.001)。干眼患者治疗4wk后结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均显著低于治疗前(P<0.001)。干眼患者治疗4wk后BUT、SⅠt显著增加,CFS评分显著降低(P<0.001)。干眼患者治疗前结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平与治疗前CFS评分均呈正相关,与治疗前BUT、SⅠt均呈负相关(P<0.001)。结论:干眼患者结膜上皮细胞及泪液中IRF4、sST2水平均升高,且与干眼临床指标BUT、SⅠt、CFS评分均呈显著相关性,有潜力成为干眼新的治疗靶点。 展开更多

关键词 干眼 干扰素调节因子4(irf4) 可溶性致癌抑制因子2(sST2) 结膜上皮细胞 泪液

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慢性应激小鼠脑内STING-TBK1-IRF3通路相关蛋白的表达及意义

7

作者 孙健屿 王粤 +1 位作者 王强 翟茜 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期208-213,共6页

目的探索慢性应激小鼠脑内干扰素刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)-TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)-干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)信号通路相关蛋白的表达变化及意义。方法将小鼠分... 目的探索慢性应激小鼠脑内干扰素刺激因子(stimulator of interferon gene,STING)-TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1,TBK1)-干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)信号通路相关蛋白的表达变化及意义。方法将小鼠分为对照(control,CON)组与束缚应激(chronic restraint stress,RST)组,RST组小鼠给予慢性束缚应激刺激(每天6 h,共14 d)后,采用q RT-PCR、组织免疫荧光共标染色与Western blotting方法检测两组小鼠脑内促炎因子CCL2、CXCL10、IL-1β、IL-6、IL-10、TNFαm RNA与STING、TBK1、p-TBK1、IRF3、p-IRF3的蛋白表达变化。结果q RT-PCR实验结果显示,与CON组相比,RST组小鼠脑内促炎因子m RNA表达显著升高(P均<0.05);组织免疫荧光共标染色实验结果显示,STING与小胶质细胞标记物Iba-1高度共标,RST组小鼠脑内STING表达降低;Western blotting结果显示,STING、p-TBK1、p-IRF3蛋白表达均显著降低(P均<0.01)。结论慢性束缚应激小鼠脑内存在神经炎症反应,STING-TBK1-IRF3通路被显著抑制。 展开更多

关键词 慢性束缚应激 干扰素刺激因子(STING) TANK结合激酶1(TBK1) 干扰素调节因子3(irf3) 神经炎症

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鸭干扰素因子7基因克隆及组织表达特异性分析

8

作者 邓志超 章程 +4 位作者 罗沛 詹晓芝 江丹莉 阳佑天 刘文俊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2606-2616,共11页

【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体,分析IRF7蛋白结构和生物特性,检测不同组织内IRF 7基因的表达水平,为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT... 【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体,分析IRF7蛋白结构和生物特性,检测不同组织内IRF 7基因的表达水平,为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区,构建真核表达质粒,利用Western blotting检测蛋白表达。使用荧光显微镜观察Poly(I∶C)对IRF7蛋白核移位的影响。对IRF 7基因序列进行核苷酸相似性比对,构建系统进化树,并通过生物信息学方法在线分析预测IRF7蛋白的分子和结构特征。实时荧光定量PCR检测不同组织中IRF 7基因的表达特异性。【结果】成功克隆樱桃谷鸭IRF 7基因CDS区,长1536 bp,共编码512个氨基酸,通过对重组质粒的真核表达,提取细胞总蛋白,Western blotting检测蛋白表达,结果显示重组蛋白大小约为110 ku。Poly(I∶C)处理鸭胚成纤维细胞促使pCMV-C-EGFP-IRF7的核内定位增加。核苷酸相似性结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡的IRF 7基因核苷酸序列相似性分别为99.1%和80.8%,与非洲爪蛙的相似性仅为41.8%。系统进化树结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡亲缘关系最近,与非洲爪蛙亲缘关系最远。IRF7蛋白表现为结构不稳定的疏水性蛋白,主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成。IRF 7基因在各个组织内均有表达,在胆囊中表达量最高,在肺脏中表达量最低。【结论】樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区序列大小为1536 bp,编码512个氨基酸,IRF7蛋白为结构不稳定的疏水性蛋白,Poly(I∶C)刺激可引起IRF7发生核移位,该基因在不同组织表达差异较大。 展开更多

关键词 干扰素调节因子7(irf7) 蛋白结构 亚细胞定位

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中华鳖IRF4基因克隆及免疫功能研究 被引量：1

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作者 付建平 陈丹婷 +1 位作者 赵昕 刘毅 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期368-374,共7页

干扰素调节因子IRF4基因仅表达于免疫相关细胞,在先天性免疫和特异性免疫中发挥重要作用。本研究根据中华鳖高通量测序预测的IRF4基因序列(GenBank登录号:XM_014581444),设计特异性引物扩增片段验证其编码区;通过荧光定量检测IRF4基因... 干扰素调节因子IRF4基因仅表达于免疫相关细胞,在先天性免疫和特异性免疫中发挥重要作用。本研究根据中华鳖高通量测序预测的IRF4基因序列(GenBank登录号:XM_014581444),设计特异性引物扩增片段验证其编码区;通过荧光定量检测IRF4基因在健康中华鳖中组织表达情况以及脂多糖、聚肌胞苷酸诱导后在外周血淋巴细胞中的表达情况;构建真核表达载体p3xflag-IRF4,检测过表达IRF4基因后细胞对中华鳖虹彩病毒的敏感性,以及对干扰素启动子、NF-κB启动子的活性。试验结果显示,IRF4基因编码区和GenBank中序列完全相同,其推测的氨基酸序列含有1个DNA结合结构域和1个IRF相关结构域;荧光定量结果分析显示,IRF4基因表达于所检测的组织和器官,其中在血液、肝、脾中表达较高,脂多糖和聚肌胞苷酸均能诱导外周血淋巴细胞中IRF4基因的表达;过表达IRF4基因后降低细胞对中华鳖虹彩病毒的敏感性,过表达IRF4基因能显著诱导干扰素启动子活性,抑制NF-κB启动子活性。上述结果为更深入研究中华鳖IRF4参与机体免疫应答提供基础。 展开更多

关键词 中华鳖 干扰素调节因子irf4基因 干扰素 NF-ΚB

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宁夏地区IRF6基因突变与非综合征型唇腭裂的相关性研究 被引量：1

10

作者 赵桂治 郭胜胜 +5 位作者 章根训 王杨洋 马坚 任红旺 李亚娣 黄永清 《宁夏医科大学学报》 2011年第12期1138-1139,1143,共3页

目的探讨干扰素调节因子6(IRF6)基因Q49X、F57L和L436V突变位点与非综合征型唇腭裂的相关性。方法收集宁夏地区非综合征型唇腭裂患者186例,对照组正常新生儿200例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测IRF6基因Q49... 目的探讨干扰素调节因子6(IRF6)基因Q49X、F57L和L436V突变位点与非综合征型唇腭裂的相关性。方法收集宁夏地区非综合征型唇腭裂患者186例,对照组正常新生儿200例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测IRF6基因Q49X、F57L和L436V突变位点基因型,进行病例对照分析。结果与对照组比较,病例组Q49X、F57L和L436V突变位点的基因型和等位基因的频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论宁夏地区IRF6基因Q49X、F57L和L436V位点突变与非综合征型唇腭裂无相关性。 展开更多

关键词 非综合征型唇腭裂(NSCL/P) 干扰素调节因子6(irf6) 突变

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人干扰素调节因子3基因启动子的初步鉴定 被引量：1

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作者 徐华国 任伟 +1 位作者 陆超 周国平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期732-736,共5页

目的克隆并鉴定人干扰素调节因子3（IRF3）基因启动子，为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系IRF3启动子序列，以人类基因组DNA为模板，通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了覆... 目的克隆并鉴定人干扰素调节因子3（IRF3）基因启动子，为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系IRF3启动子序列，以人类基因组DNA为模板，通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略，构建了覆盖IRF3基因5’侧翼区转录起始位点上游1kb区域的一系列IRF3启动子虫荧光素酶报告基因重组体并瞬时转染宫颈癌HeLa细胞，用虫荧光素酶检测报告基因启动子的活性。结果在人、小鼠的IRF3推断的启动子区域进行同源比较发现，推断的E2F和GATA-1高度进化保守；启动子活性分析表明，IRF3启动子区域定位于主要转录起始位点区域前111～167bp的区域内。采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明，该区域内存在E2F转录因子结合位点。结论-167～111bp区存在IRF3启动子的核心调控元件，转录因子E2F可能参与IRF3的转录调控。 展开更多

关键词 干扰素调节因子3(irf3) 虫荧光素酶活性检测 启动子鉴定 转录调控

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NF-κB p65调控IRF-8基因启动子活性及其启动子结合元件的初步鉴定 被引量：1

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作者 王文博 钱宝梅 +6 位作者 罗灿 彭明玉 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 季明德 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期638-644,共7页

目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反... 目的:探讨大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65亚基在细胞内过表达和其活性变化对干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)基因启动的影响,并初步筛查IRF-8启动子上可能的p65结合元件。方法:采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增大鼠p65基因蛋白编码区(complete sequence coding,CDS)序列,将其插入到空载p IRES2-EGFP质粒中,构建大鼠野生型(wild type,WT)p65过表达质粒(pIRES2-p65 WT)。在此基础上,将p65第535位丝氨酸(serine,S)突变为天冬氨酸(aspartic,D)或丙氨酸(alanine,A),分别构建p65持续活化突变型质粒(pIRES2-p65 S535D)和p65显性负性突变型质粒(pIRES2-p65 S535A)。之后应用生物信息学软件预测IRF-8基因启动子区p65的结合元件,并据此构建IRF-8启动子全长(full-length,FL)和3个截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-IRF-8-FL(-1892^+174 nt)、pGL3-IRF-8-1(-1360^+174 nt)、pGL3-IRF-8-2(-752^+174 nt)和pGL3-IRF-8-3(-68^+174 nt)。将上述质粒行不同组合共转染人胚肾293T(human embryonic kidney 293T,HEK-293T)细胞,Western blot和荧光素酶实验分别检查p65的表达和IRF-8的启动子活性,并分析IRF-8启动子区可能的p65结合元件。结果:菌液PCR及测序证实上述质粒构建成功。分别将pIRES2-p65 WT、pIRES2-p65S535D、pIRES2-p65 S535A和p GL3-IRF-8-FL共转染HEK-293T,发现过表达pIRES2-p65 WT或pIRES2-p65 S535D均可明显增加IRF-8启动子活性,且以pIRES2-p65 S535D更为显著;而过表达pIRES2-p65 S535A后,IRF-8启动子活性无明显变化。将pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1~3和pIRES2-p65 S535D共转染HEK-293T后发现,pGL3-IRF-8-3的启动子活性显著低于pGL3-IRF-8-FL、pGL3-IRF-8-1和p GL3-IRF-8-2,提示大鼠IRF-8启动子-752~68 nt区域可能存在p65结合元件。结论:在HEK-293T细胞内过表达野生型或持续活化突变型p65可显著促进IRF-8基因的启动,且p65与IRF-8启动子的结合元件可能位于-752^-68 nt部位。 展开更多

关键词 核因子-κB p65(NF-κB p65) 干扰素调节因子-8(irf-8) 启动子 结合元件

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大鼠MIP-1α基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其IRF-8结合元件的初步鉴定 被引量：1

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作者 钱宝梅 王文博 +4 位作者 罗灿 张婧 赵聃 王迎伟 邱文 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期10-15,共6页

目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α... 目的:构建大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞(HEK-293T)中过表达干扰素调节因子-8(interferon regulatory factor-8,IRF-8)对MIP-1α基因启动活性的影响,同时筛选其可能的IRF-8结合元件。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠MIP-1α基因启动子序列,将MIP-1α基因启动子插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建MIP-1α基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-FL)。将上述p GL3-MIP-1α-FL和本课题组已构建的大鼠IRF-8过表达质粒(pIRES2-IRF-8)共转染HEK-293T细胞,检测细胞内荧光素酶活性,确定IRF-8对MIP-1α基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件,并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(pGL3-MIP-1α-1～3)。将上述MIP-1α基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒和IRF-8过表达质粒共转染HEK-293T细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定IRF-8的结合元件。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述pGL3-MIP-1α-FL(-1 400～+94 nt)质粒构建成功。将pGL3-MIP-1α-FL和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,过表达IRF-8可显著增加MIP-1α基因启动子活性。应用生物信息学软件预测发现MIP-1α基因启动子上IRF-8的结合元件(-1 157～-1 144nt、-740～-734 nt、-683～-670 nt、-365～-359 nt、-249～-236 nt),并据此构建3个MIP-1α基因启动子截短的荧光素酶报告质粒,即pGL3-MIP-1α-1(-453～+94 nt)、p GL3-MIP-1α-2(-352～+94 nt)和pGL3-MIP-1α-3(-3～+94 nt)。将pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1～3和pIRES2-IRF-8共转染HEK-293T后发现,p GL3-MIP-1α-3的启动活性显著低于pGL3-MIP-1α-FL、pGL3-MIP-1α-1和pGL3-MIP-1α-2。提示IRF-8可能结合在大鼠MIP-1α基因启动子的-352～-3 nt区域的IRF-8结合元件(-249～-236 nt)上。结论:本实验成功构建了大鼠MIP-1α基因启动子全长� 展开更多

关键词 巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α) 干扰素调节因子-8(irf-8) 启动子

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PRRSV-GP5蛋白对干扰素调节因子-3磷酸化的影响 被引量：1

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作者 牛晓芸 王艳丽 +3 位作者 熊志轩 张显浩 李康宁 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期17-20,205,共5页

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSV CH-1a毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV-GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转染Marc-... 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSV CH-1a毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV-GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转染Marc-145细胞,间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达,应用SDS-PAGE和Western-blot分析GP5对IRF-3的影响。结果表明:经RT-PCR扩增,得到的GP5基因大小与预期一致;间接免疫荧光试验证明,GP5蛋白在Marc-145细胞中成功表达;SDS-PAGE和Western-blot分析显示,GP5基因可以抑制IRF-3的磷酸化。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因 真核表达 干扰素调节因子-3(irf-3)

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广东地区口面裂患者IRF6基因编码区序列特点分析 被引量：5

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作者 邬文莉 华亮 +1 位作者 王洪涛 黎凡 《中国优生与遗传杂志》 2011年第8期12-14,共3页

目的探讨广东地区口面裂患者干扰素调节因子6(Interferon regulatory factor 6,IRF6)基因编码区序列的特点。方法收集广东籍口面裂患者及部分双亲血样共47例,包括1个Van der Woude综合征(van der Woude syndrome,VWS)患者核心家庭,NSCL/... 目的探讨广东地区口面裂患者干扰素调节因子6(Interferon regulatory factor 6,IRF6)基因编码区序列的特点。方法收集广东籍口面裂患者及部分双亲血样共47例,包括1个Van der Woude综合征(van der Woude syndrome,VWS)患者核心家庭,NSCL/P患者40例,面横裂3例,正中裂3例;同时采取13例正常人血液样本做为对照,所有样本提取DNA后扩增IRF6基因的编码区,并进行序列测定和分析。结果共检测到3个突变位点。其中459G>T和820G>A两种突变在正常对照及未患病双亲中均被检出,NSCL/P组与正常对照组之间无差异(P>0.05)。1234C>T仅在VWS综合征患者中检出,与国际已报道的致病性突变一致。结论广东地区口面裂患者IRF6基因编码区存在三个突变,其中IRF6基因外显子9的1234C>T突变可能是广东地区VWS患者的一个致病因素。 展开更多

关键词 唇腭裂 面裂 干扰素调节因子6(irf6)基因 编码区 基因突变

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TLR4和IRF7在宫颈病变组织中的表达及临床病理学意义 被引量：4

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作者 凡尔克·艾合买提江 夏衣达·吐尔逊 +2 位作者 郭文涛 塔来古丽·西仁白克 阿仙姑·哈斯木 《新疆医科大学学报》 CAS 2019年第12期1559-1563,1568,共6页

目的探讨Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)和干扰素调节因子7(interferon regulatory factor7,IRF7)在宫颈病变组织中的表达及相关性。方法选取在新疆医科大学第一附属医院和自治区人民医院妇科收治的宫颈疾病患者标本,包括36例... 目的探讨Toll样受体4(toll-like receptor4,TLR4)和干扰素调节因子7(interferon regulatory factor7,IRF7)在宫颈病变组织中的表达及相关性。方法选取在新疆医科大学第一附属医院和自治区人民医院妇科收治的宫颈疾病患者标本,包括36例宫颈上皮内瘤变Ⅱ-Ⅲ级(cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ,CINⅡ-Ⅲ)、44例宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC),19例因子宫肌瘤手术切除的轻度慢性宫颈炎组织共99例。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫组织化学方法检测慢性宫颈炎、CINⅡ-Ⅲ和CSCC组织中TLR4和IRF7mRNA和蛋白的表达水平及与CSCC患者临床病理参数间的关系。结果qRT-PCR结果显示,慢性宫颈炎和CSCC组织中TLR4及IRF7 mRNA的相对表达量分别为(2.251±1.491)、(1.403±0.908)及(21.480±17.010)、(13.830±8.345)。TLR4和IRF7两者均在CSCC中的表达水平显著增高(P<0.05)。随着宫颈病变的加重其蛋白表达显著增加,且蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。与CSCC的临床病理特征之间进行比较,发现TLR4和IRF7蛋白表达量与肿瘤的分化程度呈正相关(χ2=3.106、3.512,P<0.05),但与临床分期、是否有淋巴结转移及肿瘤大小无相关性(χ2=0.420、0.9470、0.268,P>0.05)、(χ2=1.052、0.449、1.159,P>0.05)。在CINⅡ-Ⅲ和CSCC组织中,TLR4和IRF7蛋白表达呈正相关(r=0.860,r=0.962,P<0.05)。结论TLR4和IRF7表达上调可能参与了CSCC发病进程,两者有协同作用,但具体调控机制尚待进一步研究。 展开更多

关键词 子宫颈鳞状细胞癌(CSCC) Toll样受体4(TLR4) 干扰素调节因子7(irf7)

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TLR4介导汉滩病毒感染的血管内皮细胞转录因子NF—κB和IRF-3的细胞核移位

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作者 于海涛 王平忠 +5 位作者 白雪帆 张颖 张野 南雪平 姜泓 李彧 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期224-227,共4页

目的观察汉滩病毒（HTNV）感染的TLR4基因沉默的EVC304细胞（TLR4-EVC304）转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况，为抗HTNV固有免疫及其信号转导研究提供新资料。方法用汉滩病毒76．118株分别感染TLR4-和TLR4＋EVC304细胞，同时以LP... 目的观察汉滩病毒（HTNV）感染的TLR4基因沉默的EVC304细胞（TLR4-EVC304）转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况，为抗HTNV固有免疫及其信号转导研究提供新资料。方法用汉滩病毒76．118株分别感染TLR4-和TLR4＋EVC304细胞，同时以LPS作为阳性对照组，无任何刺激作为阴性对照组，6h后用间接免疫荧光方法检测NF—κB和IRF-3的细胞核移位现象。结果汉滩病毒76—118株刺激6h后，在TLR4＋EVC304细胞中，NF—KB和IRF-3发生细胞核移位，而在TLR4-EVC304细胞中未出现细胞核移位现象。结论TLR4可能介导了HTNV感染的EVC304细胞中NF—κB和IRF-3的细胞核移位。 展开更多

关键词 Toll样受体4(TLR4) 汉滩病毒 核因子κB(NF-κB) 干扰素调节因子-3(irf-3) 细胞核移位

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