层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子F基因的克隆和表达 被引量：8

1

作者 郑敏 答亮 +3 位作者 邓明刚 秦艺旻 周明 赵开弘 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期168-174,共7页

以层理鞭枝藻总 DNA为模板 ,用 PCR技术扩增得到藻红蓝蛋白操纵子 F基因(pec F) ,然后克隆于质粒 p Bluescript sk(+)。将 pec F基因亚克隆于表达载体 p GEMD,所形成重组质粒 p GEMD- pec F在 E.coli BL2 1 (DE3 )中获得 1 0 %外源表达... 以层理鞭枝藻总 DNA为模板 ,用 PCR技术扩增得到藻红蓝蛋白操纵子 F基因(pec F) ,然后克隆于质粒 p Bluescript sk(+)。将 pec F基因亚克隆于表达载体 p GEMD,所形成重组质粒 p GEMD- pec F在 E.coli BL2 1 (DE3 )中获得 1 0 %外源表达蛋白并形成包涵体。这个表达产物的分子量为 2 2 .5 k Da,与按 DNA序列预测的蛋白分子量一致。经藻红蓝蛋白α-亚基的重组实验证明 ,该 pec F基因编码的表达产物 Pec F与藻红蓝蛋白操纵子 E基因(pec E)的表达产物 Pec E共同存在时 ,具有藻红蓝蛋白裂合酶活性。 展开更多

关键词 藻红蓝蛋白 操纵子F基因 基因克隆 基因表达 层理鞭枝藻

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层理鞭枝藻藻蓝蛋白E和F基因的克隆及序列分析 被引量：4

2

作者 朱菁萍 武栋 +2 位作者 周明 周宜开 赵开弘 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 2002年第4期245-250,共6页

克隆并测定了层理鞭枝藻藻蓝蛋白 E和 F基因全序列 ,通过将其氨基酸序列与其他蓝藻的相应序列进行比较 ,表明层理鞭枝藻中 cpc E、cpc F所编码的蛋白质是层理鞭枝藻中 α-

关键词 层理鞭枝藻 藻蓝蛋白E 序列分析 藻蓝蛋白F cpcE cpcF 基因克隆

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藻红蓝蛋白连接/异构酶重组体系 被引量：3

3

作者 周明 王鲁 +1 位作者 郑雷 赵开弘 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期114-116,共3页

把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A ,E和F基因分别克隆在表达载体pET30中 ,转入大肠杆菌表达了相应蛋白质 .利用 pET30载体表达的蛋白质具有 6个连续组氨酸亲和标记 ,用Ni2 + 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质 .用这些纯化的蛋白质建立了... 把层理鞭枝藻藻红蓝蛋白操纵子A ,E和F基因分别克隆在表达载体pET30中 ,转入大肠杆菌表达了相应蛋白质 .利用 pET30载体表达的蛋白质具有 6个连续组氨酸亲和标记 ,用Ni2 + 螯合亲和层析柱提纯了表达的蛋白质 .用这些纯化的蛋白质建立了藻红蓝蛋白α亚基体外重组系统 ,从而证明藻红蓝蛋白操纵子E和F基因编码层理鞭枝藻藻红蓝蛋白为连接 展开更多

关键词 藻红蓝蛋白 连接/异构酶 层理鞭枝藻 表达 重组

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藻红蓝蛋白裂合异构酶E基因突变体的构建、表达与酶活性检测 被引量：4

4

作者 马聪 周明 +1 位作者 张富铁 赵开弘 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期614-618,共5页

通过诱变分别得到PecE的N端 ,C端和中间位置缺失突变的一系列突变基因的编码产物 ,测定了这 5种缺失蛋白质的酶活性的大小。实验结果显示 :来自层理鞭枝藻 (M laminosus,UTEX 1931)的PecE[简称PecE(UTEX1931) ]与来自层理鞭枝藻 (M lami... 通过诱变分别得到PecE的N端 ,C端和中间位置缺失突变的一系列突变基因的编码产物 ,测定了这 5种缺失蛋白质的酶活性的大小。实验结果显示 :来自层理鞭枝藻 (M laminosus,UTEX 1931)的PecE[简称PecE(UTEX1931) ]与来自层理鞭枝藻 (M laminosus, PCC 76 0 3)的PecE[简称PecE(PCC 76 0 3) ]有 81%的同源性。PecE(UTEX1931) PecF(PCC 76 0 3)的酶催化活性与PecE(PCC 76 0 3) PecF(PCC 76 0 3)的酶催化活性相当。PecE(UTEX 1931)的N端缺失 2 2个氨基酸的蛋白质显示出了约 2 0 %的催化活性 ;而N端缺失 36个氨基酸、5 6个氨基酸的蛋白质 ,C端缺失 2 3个氨基酸的蛋白质和PecE(PCC 76 0 3)中间缺失 2 7个氨基酸的蛋白质均丧失活性 。 展开更多

关键词 藻胆蛋白 裂合异构酶 重组 基因突变体 表达 层理鞭枝藻

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嗜热蓝藻层理鞭枝藻（Mastigocladus　laminosus）藻胆体在解离过程中荧光发射光谱和光能传递的研究 被引量：4

5

作者 路荣昭 李凤平 +1 位作者 顾天青 高士杰 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期494-498,共5页

研究了层理鞭枝藻藻胆体在不同浓度磷酸缓冲溶液中解离过程中荧光发射光谱的变化和光能传递。完整藻胆体的７７Ｋ荧光光谱中只有一个峰，位于６８５ｎｍ它是末端发射体（核心－膜连接多肽和别藻蓝蛋白－Ｂ）的荧光峰。部分解离藻胆体的... 研究了层理鞭枝藻藻胆体在不同浓度磷酸缓冲溶液中解离过程中荧光发射光谱的变化和光能传递。完整藻胆体的７７Ｋ荧光光谱中只有一个峰，位于６８５ｎｍ它是末端发射体（核心－膜连接多肽和别藻蓝蛋白－Ｂ）的荧光峰。部分解离藻胆体的荧光光谱的主峰位移至６５２ｎｍ：次峰位于６８５ｎｍ；６６０ｎｍ为一弱荧光发射肩。它们依次为Ｃ－藻蓝蛋白，末端发射体和别藻蓝蛋白的荧光。严重解离藻胆体的荧光主峰移６４４ｎｍ；次峰由６８５ｎｍ移至６８２ｎｍ；６６０ｎｍ荧光发射肩消失。这表明Ｃ－藻蓝蛋白所捕获的光能已不能传递给别藻蓝蛋白，但可传递给末端发射体洞时又表明Ｃ－藻蓝蛋白不仅与别藻蓝蛋白相连接而且还与末端发射体相连接。 展开更多

关键词 嗜热蓝藻 层理鞭枝藻 藻胆体 荧光 光能传递

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层理鞭枝藻pecF基因的N端缺失及其表达 被引量：3

6

作者 周明 马聪 赵开弘 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期80-84,共5页

采用PCR技术 ,以层理鞭枝藻DNA为模板 ,扩增藻红蓝蛋白重组酶F基因 (pecF)部分DNA片段 ,从而获得pecF的N端缺失突变 ,该片段 (pecFn)的大小为 4 86bp .把pecFn插入pBluscript的多克隆位点得重组质粒pBlu pecFn ,经DNA序列测定 ,与文献... 采用PCR技术 ,以层理鞭枝藻DNA为模板 ,扩增藻红蓝蛋白重组酶F基因 (pecF)部分DNA片段 ,从而获得pecF的N端缺失突变 ,该片段 (pecFn)的大小为 4 86bp .把pecFn插入pBluscript的多克隆位点得重组质粒pBlu pecFn ,经DNA序列测定 ,与文献报道的pecF基因该部分序列一致 .表达载体pGEMD经PvuⅡ、XhoⅠ双酶切消化 ,与pecFn连接 ,酶切鉴定pecFn已正确插入到该表达载体中 .将表达质粒pGEMD pecFn转化E .coliBL2 1(DE3) ,细胞经IPTG诱导 ,获得了高效表达 ,表达蛋白质的分子量为 18kDa。 展开更多

关键词 藻红蓝蛋白 基因克隆 基因表达 层理鞭枝藻 pecF基因 N端缺失 原核蓝绿藻

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层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基的固定化与光化学稳定性研究 被引量：1

7

作者 王宇飞 周明 +1 位作者 赵开弘 冉勇 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2004年第3期411-416,共6页

　研究了层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基(α PEC)的可逆光致变色活性的pH稳定性、热稳定性及耐疲劳性等光化学性质。将α PEC固定于琼脂糖、明胶、海藻酸钠和聚乙烯醇-海藻酸钠等不同载体上,检测了固定化α PEC在不同时间、不同可逆光致变... 　研究了层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基(α PEC)的可逆光致变色活性的pH稳定性、热稳定性及耐疲劳性等光化学性质。将α PEC固定于琼脂糖、明胶、海藻酸钠和聚乙烯醇-海藻酸钠等不同载体上,检测了固定化α PEC在不同时间、不同可逆光致变色循环次数后的剩余光化学活性,经过对凝胶的机械强度,稳定性及制作工艺等的比较,发现琼脂糖是α PEC的一种较好的固定化载体。 展开更多

关键词 层理鞭枝藻 藻红蓝蛋白 Α亚基 固定化 稳定性 可逆光致变色 藻胆蛋白 包埋剂

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优化培养基增加层理鞭枝藻藻胆蛋白产量

8

作者 李月 邓迎峰 +1 位作者 周明 赵开弘 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 2000年第6期531-535,共5页

关键词 层理鞭枝藻 藻红蓝蛋白 藻蓝蛋白 别藻蓝蛋白

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可逆光致变色的藻红蓝蛋白α亚基分子设计 被引量：1

9

作者 邓明刚 王菲 +1 位作者 周明 赵开弘 《华中科技大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第8期110-113,共4页

从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD pecA出发 ,通过酶切、削平或补齐粘末端及重新环合等技术 ,使其后的阅读框发生移码突变 ,从而得到C 端缺失 2 4个和 36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD pecA C2 4和 pGEMD pecA C36 .用PC... 从层理鞭枝藻藻红蓝蛋白α亚基基因表达质粒pGEMD pecA出发 ,通过酶切、削平或补齐粘末端及重新环合等技术 ,使其后的阅读框发生移码突变 ,从而得到C 端缺失 2 4个和 36个氨基酸的两个缺失突变体pGEMD pecA C2 4和 pGEMD pecA C36 .用PCR技术将已突变的基因片段转入表达载体 pET30中 ,得到pET30 pecA C2 4和 pET30 pecA C36 ,获得高效表达 .利用PCR技术从 pGEMD pecA中扩增出N 端缺失 2 0个和 32个氨基酸 pecA的突变基因片段 ,并克隆于表达载体 pET30中 ,得到pET30 pecA N2 0和 pET30 pecA N32 ,获得高效表达 .两个C 端缺失突变的脱辅基蛋白无论有或无藻红蓝蛋白连接 /异构酶催化 ,均不能与藻蓝胆素共价偶联 .两个N 端缺失突变脱辅基蛋白均能在藻红蓝蛋白连接 /异构酶催化下与藻蓝胆素共价偶联 。 展开更多

关键词 藻红蓝蛋白α亚基 分子设计 重组 层理鞭枝藻 连接/异构酶

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层理鞭枝藻的藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白α-亚基及其色素肽的光化学与光谱性质

10

作者 赵开弘 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1998年第6期757-760,共4页

用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学，这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域．藻... 用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学，这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域．藻蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻蓝蛋白α－亚基的相应性质很相似，藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻红蓝蛋白α－亚基的相应性质相似，不过藻红蓝蛋白α－亚基色素肽还具有一种新的可逆光化学性质，本文中称为类型Ⅲ可逆光化学，藻红蓝蛋白α－亚基在１ｍｏｌ／Ｌ硫氰化钾和４ｍｏｌ／Ｌ尿素中也具有该类型Ⅲ可逆光化学． 展开更多

关键词 藻蓝蛋白 藻红蓝蛋白 色素肽 层理鞭枝藻 光化学

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鞭枝藻与其突变体提取液对人膀胱癌细胞生长的影响

11

作者 钱凯先 Gordon H. Sato 《浙江大学学报（自然科学版）》 CSCD 1989年第6期876-882,共7页

本文以EMS(乙基甲烷磺酸盐,Sigma)诱变嗜温的层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus),并经9T24C人膀胱癌细胞生长选择获得突变体。在0.3％FBS(胎牛血清)+DME/F12培养液中加入100μg/ml层理鞭枝藻突变体提取液可促进9T24C癌细胞数在6天中增... 本文以EMS(乙基甲烷磺酸盐,Sigma)诱变嗜温的层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus),并经9T24C人膀胱癌细胞生长选择获得突变体。在0.3％FBS(胎牛血清)+DME/F12培养液中加入100μg/ml层理鞭枝藻突变体提取液可促进9T24C癌细胞数在6天中增长3.1倍,而在同样条件下野生型层理鞭枝藻的提取液则对9T24C癌细胞无明显刺激生长作用。这种未知的刺激癌细胞生长的活性物质分子量>3500。 展开更多

关键词 层理鞭枝藻 人膀胱 癌细胞 突变体

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