四环素调控的真核表达体系Hep3B Tet-On细胞株的建立 被引量：11

1

作者 王俊茹 覃文新 +3 位作者 舒惠群 潘勇 张玉燕 万大方 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期191-193,共3页

目的　建立可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体系Hep3BTet On细胞株 ,用于基因功能的研究。方法　将pTet On质粒用脂质体介导法转染Hep3B细胞 ,经G4 18筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化。单克隆分别扩增后 ,瞬时转染p... 目的　建立可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体系Hep3BTet On细胞株 ,用于基因功能的研究。方法　将pTet On质粒用脂质体介导法转染Hep3B细胞 ,经G4 18筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化。单克隆分别扩增后 ,瞬时转染pTRE luc(编码荧光素酶蛋白 )质粒 ,Dox诱导表达后 ,检测荧光素酶活性 ,逐一筛选四环素调控高表达外源基因的Hep3BTet On细胞株。结果　成功构建了一株受Dox调控的高表达低背景的Hep3BTet On细胞株。结论　Hep3BTet On细胞株可用于外源基因的真核调控高表达 ,为研究真核基因功能提供了一种有力的实验手段。 展开更多

关键词 真核表达体系 Hep3BTet-On细胞株 诱导表达 四环素调控 基因治疗 基础研究 基因表达

下载PDF 职称材料

单一质粒四环素系统调控IL-24表达对胃癌细胞系的作用 被引量：2

2

作者 林宁晶 朱军 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2006年第20期1956-1962,共7页

目的：通过构建单一质粒四环素调控载体pCEP4-tetR-IL-24,将其转染胃癌细胞系后,探讨IL-24对胃癌细胞的初步作用以及此系统能否发挥四环素的调控作用。方法：将hIL-24基因片段从pORF9-hIL-24定向克隆至pcDNA4-TO-Xpress中,再亚克隆到pCE... 目的：通过构建单一质粒四环素调控载体pCEP4-tetR-IL-24,将其转染胃癌细胞系后,探讨IL-24对胃癌细胞的初步作用以及此系统能否发挥四环素的调控作用。方法：将hIL-24基因片段从pORF9-hIL-24定向克隆至pcDNA4-TO-Xpress中,再亚克隆到pCEP4-tetR中构建pCEP4-tetR-IL-24；利用脂质体转染法转染细胞；Western blotting检测蛋白表达；MTT法与台盘蓝拒染法检测细胞增殖；annexinV法检测细胞的凋亡.结果：pCEP4-tetR-IL-24转染胃癌细胞系MGC803,BGC823与正常胃黏膜细胞系GES-1后,在强力霉素诱导下均可表达IL-24蛋白；MGC803,BGC823细胞中,强力霉素诱导组的增殖较未诱导组、空载体组与对照组明显受抑制(P＜0.01,0.001-0.006)；强力霉素诱导组与未诱导组相比,凋亡细胞比例明显增多(23.5%/25.6%→33.8%/36.7%,P＜0.01)：GES-1中,诱导组与未诱导组、空载体组及对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论：IL-24可以抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,对正常胃黏膜上皮细胞无明显毒性；构建的单一质粒四环素调控系统pCEP4- tetR-IL-24可以发挥四环素的调控作用. 展开更多

关键词 四环素调控 白细胞介素24 胃癌 增殖 凋亡

下载PDF 职称材料

利用四环素调控系统研究CHIP对TGF-β信号通路的抑制性调节 被引量：2

3

作者 徐夏莲 辛宏 +3 位作者 张新军 任芳丽 王银银 常智杰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期557-561,共5页

为了研究伴侣分子相互作用蛋白CHIP对TGF-β信号通路的调控,利用四环素基因表达调控系统,建立四环素调控表达CHIP的稳定细胞系(Mv1Lu-Tetoff-CHIP).利用此细胞模型,发现CHIP的过量表达可显著降低细胞内Smad2/3蛋白水平;荧光素酶报告分... 为了研究伴侣分子相互作用蛋白CHIP对TGF-β信号通路的调控,利用四环素基因表达调控系统,建立四环素调控表达CHIP的稳定细胞系(Mv1Lu-Tetoff-CHIP).利用此细胞模型,发现CHIP的过量表达可显著降低细胞内Smad2/3蛋白水平;荧光素酶报告分析也表明开启CHIP蛋白表达可明显降低Smads介导的基因转录活性;进一步的免疫印迹结果显示CHIP蛋白可明显下调TGF-β所诱导的下游基因JunB的表达.上述结果提示CHIP可以作为一种新的蛋白质分子抑制性调节TGF-β信号通路. 展开更多

关键词 四环素调控 CHIP TGF-Β SMAD2/3 JUNB 抑制

下载PDF 职称材料

四环素调控livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响 被引量：2

4

作者 李鸿茹 涂洵崴 +1 位作者 翁丽红 陈愉生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期236-239,共4页

目的:探讨四环素调控(Tet-on)livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livi... 目的:探讨四环素调控(Tet-on)livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观察其抑制肺癌细胞增殖情况。结果:经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-onNC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[(5.31±0.86)vs(8.22±0.63)、(7.17±0.54)g,P<0.05];提示该调控系统可显著下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡。结论:Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提供重要的研究工具。 展开更多

关键词 LIVIN基因 四环素调控 RNA干扰 肺癌 A549细胞 动物模型

下载PDF 职称材料

Tet基因表达调控系统及其应用 被引量：1

5

作者 芦小燕 解慧琪 邓力 《中国医药生物技术》 CSCD 2007年第4期303-307,共5页

　　基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要.哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关,如热休克蛋白(Hsp)启动子可在高温下被诱导,还有重金属、糖皮质激素诱导的启动子等,但这些系统均存在着诱导表达不具备特异性、... 　　基因治疗中导入基因表达时间和水平的调控极其重要.哺乳动物细胞中用到的诱导型载体主要与启动子有关,如热休克蛋白(Hsp)启动子可在高温下被诱导,还有重金属、糖皮质激素诱导的启动子等,但这些系统均存在着诱导表达不具备特异性、系统处于关闭状态时表达有遗漏以及诱导剂本身具有毒性会对细胞造成损伤等缺陷.如果设置一种导入基因的'开关',能调控基因的表达,则有望大幅度提高基因治疗在临床应用的安全性.1992年,Gossen和Bujard[1]首次成功地利用原核基因调控元件构建了真核细胞基因表达调控系统--四环素基因表达调控系统(Tet系统),该系统能通过在培养基中加入或者去除四环素或其衍生物(如强力霉素)诱导或抑制所感兴趣基因的表达,故被广泛应用于基因表达调控、蛋白质功能和基因功能研究以及基因治疗研究中.本文就近年来Tet系统的研究进展等做一综述.…… 展开更多

关键词 TET 质粒 细胞系 基因载体 四环素调控 基因表达调控

下载PDF 职称材料

胶质源性神经生长因子在人胚胎神经干细胞中的表达调控 被引量：1

6

作者 王淑艳 任萍 +3 位作者 关云谦 邹春林 付琳琳 张愚 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期868-875,共8页

胶质源性神经生长因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病等神经退行性疾病的治疗有广泛的应用前景,而人胚胎神经干细胞已被证实是一种将GDNF安全而有效地携带到受损脑区的良好细胞载体.本研究利用含有GDNF基因... 胶质源性神经生长因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病等神经退行性疾病的治疗有广泛的应用前景,而人胚胎神经干细胞已被证实是一种将GDNF安全而有效地携带到受损脑区的良好细胞载体.本研究利用含有GDNF基因的可调控慢病毒载体转染人胚胎神经干细胞,实现了GDNF在人胚胎神经干细胞在体外培养条件下的表达调控.实验中首先利用含有GDNF基因的慢病毒载体成功转染人胚胎神经干细胞,其中GDNF基因受四环素操纵子7(tetracy cline operator7,tetO7)调控,由延长因子1(elongation factor1,EF1-)驱动;转染后的神经干细胞经过潮霉素筛选后同时转入对下游基因起抑制作用的慢病毒载体TTS(tetra-cycline repressorfusi onprotein,TTS),TTS蛋白表达后可与tetO7相互作用抑制GDNF在人神经干细胞中的表达.当加入强力霉素(doxycycline,DOX)后,TTS与tetO7解离,GDNF表达可恢复到未调控前水平.转染GDNF后的人胚胎神经干细胞仍然表达神经干细胞特异性抗原nestin,Sox2;放线菌素D诱导凋亡后,转染GDNF组较正常对照组凋亡细胞比例有显著降低;同时,转染GDNF的神经干细胞分化成神经元的比例有显著提高.利用可调控的慢病毒调控GDNF在人胚胎神经干细胞中的表达为GDNF应用于神经退行性疾病的治疗提供了实验数据. 展开更多

关键词 神经干细胞 胶质源性神经营养因子 慢病毒载体 四环素调控

原文传递

乙肝病毒X基因可调控表达细胞模型的构建

7

作者 白荷露 刘蕊 朱乃硕 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期140-145,共6页

利用四环素诱导型慢病毒系统(Lentil-XTMTet-On Advanced Inducible Expression System)构建了含有乙肝病毒X基因(HBx)的可诱导表达载体质粒,利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控元件rt-TA和HBx基因的病毒颗粒,滴度达到108... 利用四环素诱导型慢病毒系统(Lentil-XTMTet-On Advanced Inducible Expression System)构建了含有乙肝病毒X基因(HBx)的可诱导表达载体质粒,利用慢病毒包装细胞系HEK293T细胞分别获得含有调控元件rt-TA和HBx基因的病毒颗粒,滴度达到108LPs/mL。将两种病毒先后感染HepG2肝癌细胞系,分别利用G418和Puromycin抗生素筛选获得整合有HBx基因的稳定细胞株。在体系中加入Dox时,应用RT-PCR和Western blot方法验证了HBx基因的可诱导表达。可诱导表达细胞模型构建成功,为进一步研究HBx基因在对宿主感染致病和免疫耐受中的作用提供了一种较理想的试验模型。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒基因 慢病毒表达载体 四环素调控 可诱导表达

下载PDF 职称材料

RevTet-Off系统调控凋亡素基因在人肝癌细胞表达的研究

8

作者 顾红祥 朱惠明 +1 位作者 刘玉杰 黄友明 《世界肿瘤杂志》 2006年第1期38-40,48,共4页

目的 应用RevTet-Off系统，于体外观察四环素调节下凋亡素基因的表达及其对人肝癌细胞系HepG2的作用。方法 将RevTet-Off基因调控系统的调节质粒pRevTet-Off和含凋亡素基因的重组表达质粒载体pRevTRE-VP3分别转染PT67细胞，包装出RevTet... 目的 应用RevTet-Off系统，于体外观察四环素调节下凋亡素基因的表达及其对人肝癌细胞系HepG2的作用。方法 将RevTet-Off基因调控系统的调节质粒pRevTet-Off和含凋亡素基因的重组表达质粒载体pRevTRE-VP3分别转染PT67细胞，包装出RevTet-Off和RevTRE-VP3重组逆转录病毒，依次将此两种病毒感染HepG2细胞，建立整合了RevTet-Off和RevTRE-VP3重组逆转录病毒的阳性细胞株HepG2／Off-VP3。通过四环素调节凋亡素基因在HepG2／Off-VP3中的表达，Annexin V-FITC／PI双染色后，以流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 经RT-PCR证实凋亡素基因在HepG2／Off-VP3-8细胞得到了表达；HepG2细胞在无四环素环境下的细胞凋亡率明显高于1μg／mL四环素环境下的凋亡率。结论 凋亡素基因经RevTet-Off系统导入HepG2细胞后，可在四环素调控下表达产生凋亡素并诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 凋亡素 四环素调控 逆转录病毒载体 细胞凋亡 肝癌细胞

下载PDF 职称材料

四环素调控的WT1基因表达系统在U937中的建立

9

作者 周箭 陈蓉 魏琴 《四川省卫生管理干部学院学报》 2004年第2期83-84,共2页

目的 :在白血病细胞系U937中建立四环素诱导的WT1基因表达系统。方法 :运用脂质体将质粒pRevTet On、pRevTRE -Luc和pRevTRE WT1分别转染逆转录病毒的包装细胞PT6 7以产生逆转录病毒。将逆转录病毒RevTet On感染U937细胞 ,经G4 18筛选 ... 目的 :在白血病细胞系U937中建立四环素诱导的WT1基因表达系统。方法 :运用脂质体将质粒pRevTet On、pRevTRE -Luc和pRevTRE WT1分别转染逆转录病毒的包装细胞PT6 7以产生逆转录病毒。将逆转录病毒RevTet On感染U937细胞 ,经G4 18筛选 ,产生抗性细胞 ,用有限稀释法将U937/Tet On抗性细胞单克隆化。 14天后 ,克隆逐步形成 ,在显微镜下标记并移出。再将逆转录病毒RevTRE Luc瞬时感染这些克隆 ,培养基中加入强力酶素 (Dox) 2mg/L或不加Dox ,应用荧光素酶报告基因分析试剂盒检测荧光素酶的活性。挑选一株低背景和高诱导倍数的U937/Tet On克隆 ,最后将逆转录病毒RevTRE WT1感染这株克隆。结果 :在U937中建立四环素调控的WT1基因表达系统。结论 :建立逆转录病毒整合的U937细胞株 ,可用四环素及其衍生物精确调控WT1基因的表达 。 展开更多

关键词 四环素调控 基因表达 建立

下载PDF 职称材料

bFGF及Shh时序传递促进骨再生的实验研究 被引量：6

10

作者 宋珂 饶念静 +2 位作者 陈美玲 黄正江 曹颖光 《中国口腔种植学杂志》 2011年第1期11-12,共2页

骨再生的治疗应着重于模拟机体自然的骨修复过程。我们假设在骨再生治疗的早期阶段应用促血管生成因子联合促骨再生因子来模拟自然的骨再生过程能更好更快的促进成骨。首先我们利用腺相关病毒分别携带这两个关键因子,构建了rAAV2-tet-of... 骨再生的治疗应着重于模拟机体自然的骨修复过程。我们假设在骨再生治疗的早期阶段应用促血管生成因子联合促骨再生因子来模拟自然的骨再生过程能更好更快的促进成骨。首先我们利用腺相关病毒分别携带这两个关键因子,构建了rAAV2-tet-off-bFGF and rAAV2-Shh,前者还加入了四环素调控系统,能通过四环素的添加来控制bFGF的表达。将这两种病毒共感染骨髓间充质干细胞,通过实时定量RT-PCT检测诸如核心结合因子1、碱性磷酸酶及骨钙素等成骨相关的标志因子,同时应用Western blot检测转基因的蛋白表达变化。接着,将这些转基因细胞与β-磷酸三钙颗粒复合,植入到大鼠的标准颅骨缺损中(直径为8mm)。30只SD大鼠平均分为6组,每组5只大鼠。A组植入两种转基因细胞及材料复合物;B组植入rAAV2-tet-off-bFGF转基因细胞及材料复合物;C组植入rAAV2-Shh转基因细胞及材料复合物;D组植入rAAV2-EGFP转基因细胞及材料复合物;E组植入单纯的骨髓间充质干细胞及材料复合物;F组为空白组,不植入任何细胞及材料。术后后5天,除B组外,每日在其它组的动物饮水中添加四环素的衍生物---强力霉素来关闭A组中bFGF的表达,并消除其它对照组的组间差异。术后4周收集颅骨标本,行Micro CT扫描及骨组织形态学分析。结果分析中我们发现,双因子共感染的细胞内成骨相关因子有显著的升高趋势(p<0.05),Micro CT及骨组织切片看见双因子时序调控的治疗组有相当显著的新骨再生,其中新生骨的面积及血管密度显著高于其它对照组,有统计学意义(p<0.05)。因此,我们得出结论,在骨再生初期的治疗过程中引入促血管生成因子及促成骨生成因子的时序协同作用能模拟机体自身的骨再生过程,能显著促进及加快新骨再生。 展开更多

关键词 组织工程 碱性成纤维生长因子 sonichedgehog 骨髓间充质干细胞 四环素调控系统

下载PDF 职称材料

无血清无饲养层条件下培养小鼠胚胎干细胞 被引量：6

11

作者 韩甫 叶荣 +2 位作者 鲍柳君 张军超 张焕相 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期254-257,I0002,共5页

目的研究在无血清无饲养层条件下小鼠胚胎干细胞的培养方法,为最终建立无血清无饲养层培养系统打下基础。方法比较小鼠胚胎干细胞ES-S8株在无血清培养体系和有血清培养体系中的生长情况,分析ES-S8细胞克隆形成效率,测定其生长速度;然后... 目的研究在无血清无饲养层条件下小鼠胚胎干细胞的培养方法,为最终建立无血清无饲养层培养系统打下基础。方法比较小鼠胚胎干细胞ES-S8株在无血清培养体系和有血清培养体系中的生长情况,分析ES-S8细胞克隆形成效率,测定其生长速度;然后在撤去血清和饲养层的条件下培养ES-S8细胞,进行AKP染色和表面标记物SSEA-1免疫荧光检测。结果ES-S8细胞在无血清培养条件下细胞生长速度减缓,克隆形成率降低,但AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性;在无血清无饲养层条件下ES-S8细胞培养仍能形成克隆,且AKP染色、SSEA-1免疫荧光均显阳性。结论研究表明ES-S8细胞能够在无血清无饲养层的培养条件下生长,保持其良好的未分化特性。 展开更多

关键词 载脂蛋白 四环素调控反式激活子

下载PDF 职称材料

大黄鱼细胞适用四环素调控系统的构建与验证

12

作者 葛金鑫 颜廷鼎 +3 位作者 王克智 刘也 何志巧 申望 《浙江农业科学》 2024年第6期1285-1290,共6页

构建大黄鱼(Larimichthys crocea)细胞适用的四环素调控系统,为大黄鱼蛋白质功能研究提供可靠工具。以pEGFP-N1质粒的CMV增强子/启动子替换四环素调控载体pTRE3G-MCS-EGFP-3×FLAG-Tetone-Puro(简称pTRE3G)转录激活子(rtTA)的EF-1... 构建大黄鱼(Larimichthys crocea)细胞适用的四环素调控系统,为大黄鱼蛋白质功能研究提供可靠工具。以pEGFP-N1质粒的CMV增强子/启动子替换四环素调控载体pTRE3G-MCS-EGFP-3×FLAG-Tetone-Puro(简称pTRE3G)转录激活子(rtTA)的EF-1α启动子及其下游5′-长末端重复序列(5′-LTR),构建重组载体pTRE3G-CMV;转染大黄鱼头肾细胞系YCK-hk细胞,Dox诱导EGFP表达,验证pTRE3G-CMV在大黄鱼细胞中驱动外源基因表达的可靠性。成功构建四环素调控载体pTRE3G-CMV;pTRE3G-CMV质粒转染的大黄鱼YCK-hk细胞经Dox诱导表达EGFP,表明CMV增强子/启动子在YCK-hk细胞中正常驱动rtTA表达;pTRE3G-CMV质粒转染YCK-hk细胞效率低(<1%),经嘌呤霉素筛选后EGFP表达阳性细胞率上升至约30%,表明嘌呤霉素能有效筛选转染成功细胞,提示可结合单克隆筛选建立稳转细胞系。研究构建的四环素调控载体pTRE3G-CMV在大黄鱼细胞中正常表达外源基因,可用于大黄鱼蛋白质功能研究。 展开更多

关键词 四环素调控系统 大黄鱼 重组蛋白表达

下载PDF 职称材料

tTS/rtTA系统下调目的基因基础表达的细胞模型研究 被引量：2

13

作者 张若霜 帅丽芳 +1 位作者 赵勇 陈系古 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期361-364,共4页

【目的】构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型。【方法】通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7... 【目的】构建带有肝脏特异性启动子和tTS沉默子的四环素调控系统,观察其在人HepG2细胞内的表达,建立严密型四环素调控系统的HepG2细胞模型。【方法】通过二次分子克隆构建重组真核表达质粒载体pliv7-rtTA-tTS-Neo,用脂质体法将质粒pliv7-rtTA-tTS-Neo及pliv7-rtTA-Neo转染人HepG2细胞,经G418筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,克隆扩增后瞬时转染pTRE-Luc质粒,强力霉素(1mg/L)诱导表达后检测荧光素酶活性,挑选出低背景和高诱导表达的HepG2细胞克隆。【结果】带有tTS的细胞株其诱导倍数明显高于不带有tTS的细胞株(192︰21),其中克隆9的诱导倍数最高(256),获得1株高表达、低背景的HepG2/pLiv7-rtTA-tTS-Neo细胞株。【结论】荧光素酶活性检测结果验证了tTS对四环素调控系统的内在泄露问题有一定的抑制作用,使四环素调控系统的开关具有真正意义上的严密性。 展开更多

关键词 四环素调控系统 tTS沉默子 诱导表达 HEPG2细胞

下载PDF 职称材料

利用基因枪转化法获得受四环素调控的水稻雄性不育植株 被引量：2

14

作者 田继微 廖江林 +2 位作者 刘建丰 李文彬 肖国樱 《杂交水稻》 CSCD 北大核心 2006年第5期59-63,共5页

利用基因枪法通过pTET-BI-Bar和pTATx-BN-Bin质粒分别将TetR和Barnase基因共转化粳稻品种台北309、4008S和籼稻品种D68。通过对R0代植株不同的基因进行PCR及Southern分析,结果表明,Barnase、TetR基因和控制Barnase基因的TA29-TX启动子... 利用基因枪法通过pTET-BI-Bar和pTATx-BN-Bin质粒分别将TetR和Barnase基因共转化粳稻品种台北309、4008S和籼稻品种D68。通过对R0代植株不同的基因进行PCR及Southern分析,结果表明,Barnase、TetR基因和控制Barnase基因的TA29-TX启动子均已整合到水稻基因组。其中,台北309和4008S分别获得了15株和6株阳性转基因植株,其外源基因转化率分别为4.5%和1.9%,其外源基因TetR和Barnase的共转化率分别为0.6%和0.3%。D68没有获得阳性转基因植株。 展开更多

关键词 水稻 基因枪转化 四环素调控的雄性不育基因

下载PDF 职称材料

DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应检测 被引量：2

15

作者 李朵璐 周玉冰 +5 位作者 韩超 安琪 李峰 段震峰 张晓坚 阚全程 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期30-35,共6页

目的观察构建的DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应。方法构建DNA载体介导的小干扰RNA(siRNA)Tet-on表达载体,pDIRS4.1 siRNA。以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和白细胞介素6(IL-6)基因为目的基因,应用脂质体介导的瞬... 目的观察构建的DNA载体介导的小干扰RNA Tet-on基因表达系统的调控效应。方法构建DNA载体介导的小干扰RNA(siRNA)Tet-on表达载体,pDIRS4.1 siRNA。以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因和白细胞介素6(IL-6)基因为目的基因,应用脂质体介导的瞬时转染方法,分别将pDIRS4.1/EGFP siRNA载体和p EGFP-N3质粒、pDIRS4.1IL-6siRNA载体和p IRESIL-6质粒共转染人成骨肉瘤细胞,加入系列浓度的四环素(Dox)后,观察其诱导效应。结果 pDIRS4.1 siRNA在人成骨肉瘤细胞中能够高效转染;随着Dox浓度升高,pDIRS4.1 siRNA载体在人成骨肉瘤细胞中对目的基因的沉默作用有较好的调控性,且目的基因的表达与Dox具有严格的剂量依赖关系,高浓度Dox时,IL-6表达水平降低约12倍。结论该研究构建的以DNA载体介导的能够高效调控siRNA沉默基因效应的Tet-On基因表达系统,能够促进其在更多模型系统中进行基因功能研究的应用。 展开更多

关键词 小分子干扰RNA 四环素调控系统 DNA载体 基因调控

下载PDF 职称材料

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立 被引量：1

16

作者 杨国柱 傅思莹 +5 位作者 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 陈系古 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期373-377,共5页

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究... 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 展开更多

关键词 HCV-C 丙型肝炎病毒核心蛋白 转基因小鼠模型 四环素调控系统 组织特异性表达

下载PDF 职称材料

基于四环素调控系统的ApoE-rtTA/TRE-HCV-C双转基因小鼠的制备 被引量：1

17

作者 杨国柱 陈系古 +4 位作者 黄冰 单于 肖东 马芸 邓新燕 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第5期321-325,共5页

目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转... 目的为了丰富现有的四环素调控系统的小鼠资源库,同时也为更好地研究目的基因HCV-C的作用机制提供一个活体的动物模型,制备基于四环素调控系统原理的调控部分ApoE-rtTA的转基因小鼠,与反应部分TRE-HCV-C转基因小鼠,相互交配制作出双转基因小鼠。方法应用显微注射法将构建好的两种基因片段ApoE-rtTA及TRE-HCV-C分别注入超排的昆明母鼠的受精卵,再植入假母输卵管,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,将两者及阳性后代交配产生携带5只转基因鼠再经Western blot和RT-PCR在RNA和蛋白水平上进一步鉴定。结果产生了3只整合有ApoE-rtTA基因的首见鼠和125只阳性子代,以及产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首见鼠和16只阳性子代。PCR及Southern Blot证实上述阳性鼠确有转基因整合。将两者交配产生携带5只双转基因鼠。结论成功制备了携带有ApoE-rtTA及TRE-HCV-C转基因小鼠,建立了分别携带有这两种基因的鼠群,以及同时携带有两种基因的双转基因小鼠,为四环素调控系统提供了一个良好的通用型的调控动物模型,同时也可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。 展开更多

关键词 载脂蛋白 四环素调控反式激活子 四环素反应元件 丙肝病毒核心蛋白 转基因鼠

下载PDF 职称材料

建立可诱导表达TNFAIP1的稳定细胞系 被引量：1

18

作者 李红 贺志成 +1 位作者 刘倩 周建林 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第2期96-99,共4页

利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞... 利用Tet-Off可诱导表达系统在HT1080细胞中建立可诱导表达TNFAIP1基因的稳定细胞系.首先将融合表达GFP的TNFAIP1片段克隆到反应质粒pTRE2hyg中,然后将该质粒转染到HT1080/Tet-off细胞中,使用潮霉素B筛选,挑取单克隆,得到稳定转染的细胞系,扩大培养后在荧光显微镜下观察克隆的诱导效率,得到了低背景,高效诱导表达GFP-TNFAIP1的稳定细胞系,便于研究TNFAIP1在细胞生长、细胞周期和细胞信号通路等方面的作用. 展开更多

关键词 TNFAIP1 四环素调控系统 诱导表达

下载PDF 职称材料

四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子活性及组织特异性的影响 被引量：1

19

作者 雷俊川 宫卫东 +3 位作者 赵亚 姜河 刘忠湘 易军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1103-1105,共3页

目的:分析四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)活性及组织特异性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp荧光素酶报告基因质粒中C... 目的:分析四环素调控系统对乙型肝炎病毒核心启动子(Cp)活性及组织特异性的影响。方法:利用PCR从质粒pTL-8扩增7个Teto序列,并将其克隆入T载体pMD19-T Simple中。测序正确后将7个Teto序列亚克隆入pGL3-Basic/Cp荧光素酶报告基因质粒中Cp启动子的上游,以构建质粒pGL3-Basic/7t/Cp。将能表达TetR的质粒pTL-8的荧光素酶编码基因切除后,与pGL3-Basic/7t/Cp共转染肝癌细胞系HepG2,宫颈癌细胞系HeLa,绿猴肾细胞系COS-7,乳腺癌细胞系MDA-MB-231和结肠癌细胞系HT-29,通过双荧光素酶检测系统检测荧光素酶在这些不同细胞系中的活性,以鉴定四环素调控系统对Cp活性及组织特异性的影响。结果:成功构建了质粒pGL3-Basic/7t/Cp,将其转染入不同组织来源的细胞系后表明将7个teto序列克隆入Cp上游后增强了Cp在各细胞系中的活性。结论:四环素调控系统明显增强了Cp的转录活性。但同时,Cp失去了其组织特异性的特点,即在这些细胞系中均有较强活性。 展开更多

关键词 四环素调控系统 CP 肝细胞特异性 荧光素酶

下载PDF 职称材料

四环素调控的介导bFGF重组腺相关病毒的构建及体外实验 被引量：1

20

作者 宋珂 陈美玲 +2 位作者 石琦 青莹 曹颖光 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期851-855,共5页

目的:制备携带碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的病毒载体,能被四环素调控表达。方法:构建重组质粒pAAV-S3-bFGF,生产重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF,并感染小鼠颅骨前成骨细胞MC3T3-E1,实时定量PCR检测强力... 目的:制备携带碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的病毒载体,能被四环素调控表达。方法:构建重组质粒pAAV-S3-bFGF,生产重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF,并感染小鼠颅骨前成骨细胞MC3T3-E1,实时定量PCR检测强力霉素(doxycycline,Dox)调控下rAAV2-tet-off-bFGF对MC3T3-E1中成骨相关因子的影响。结果:生产出高滴度及纯度的重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF,能被Dox调控,感染MC3T3-E1后能促进胞内成骨相关因子的表达升高。结论:这种重组病毒rAAV2-tet-off-bFGF能在Dox调控下有效传递外源基因,为骨组织工程中的种子细胞提供基因传递载体。 展开更多

关键词 腺相关病毒 基因传递 碱性成纤维细胞生长因子 四环素调控系统

下载PDF 职称材料