ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证 被引量：2

1

作者 张曦 刘小静 +4 位作者 陈云茹 孔颖 杨雪亮 叶峰 蔺淑梅 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期292-297,共6页

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共... 目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 PRES1蛋白 ASGPR 蛋白质-蛋白质相互作用 哺乳动物双杂交 免疫共沉淀

下载PDF 职称材料

以HIF-1α和P300相互作用为靶点的抑制剂筛选模型的建立 被引量：2

2

作者 来芳芳 牛非 +2 位作者 杨瀚泽 周琬琪 陈晓光 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期849-853,共5页

本研究以HIF-1α和P300的相互作用为靶点,设计并构建了基于哺乳动物双杂交体系的HIF-1特异性抑制剂筛选方法。通过克隆HIF-1α和P300相互作用的基因序列,成功构建重组质粒pBIND-HIF1α和pACT-P300,进而在HEK293细胞中验证了HIF-1α和P30... 本研究以HIF-1α和P300的相互作用为靶点,设计并构建了基于哺乳动物双杂交体系的HIF-1特异性抑制剂筛选方法。通过克隆HIF-1α和P300相互作用的基因序列,成功构建重组质粒pBIND-HIF1α和pACT-P300,进而在HEK293细胞中验证了HIF-1α和P300蛋白在哺乳动物双杂交体系中确实存在直接的相互作用,并进一步优化了模型构建条件。化合物黑毛霉素(chetomin)、甲萘醌(menadione)在此筛选模型上能抑制其相互作用。在此基础上,联合U251-HRE的HIF-1转录活性抑制剂筛选方法,充分肯定了黑毛霉素能有效抑制HIF-1活性。因此,联合哺乳动物双杂交和U251-HRE这两个细胞模型,成功建立了以HIF-1α和P300相互作用为靶点的筛选模型,为特异性小分子肿瘤靶向药物的开发奠定了基础。 展开更多

关键词 缺氧诱导因子1-Α P300 相互作用 哺乳动物双杂交 筛选

原文传递

HCV NS5A结合蛋白顺乌头酸酶1的验证研究

3

作者 王晓杰 相久全 +2 位作者 韩乐强 张锦前 成军 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第32期36-38,共3页

目的筛选人肝脏cDNA文库中与HCV NS5A的结合蛋白基因,验证其中顺乌头酸酶1与HCV NS5A的相互作用。方法应用酵母双杂交系统3筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,应用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证其中顺乌头酸酶1蛋白与HC... 目的筛选人肝脏cDNA文库中与HCV NS5A的结合蛋白基因,验证其中顺乌头酸酶1与HCV NS5A的相互作用。方法应用酵母双杂交系统3筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,应用哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证其中顺乌头酸酶1蛋白与HCV NS5A之间的相互作用。结果成功筛选出人肝脏cD-NA文库中与HCV NS5A存在相互作用的蛋白基因,哺乳动物双杂交及免疫共沉淀实验结果证实HCV NS5A与顺乌头酸酶1蛋白在HepG2细胞内存在相互作用。结论本实验成功筛选人肝脏cDNA文库中的HCV NS5A结合蛋白基因,并且在体外水平即细胞内证实HCV NS5A与其中的顺乌头酸酶1蛋白之间的相互作用,为进一步细胞内及体内的糖、脂类代谢等功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 HCV NS5A 顺乌头酸酶1 酵母双杂交 哺乳动物双杂交 免疫共沉淀

下载PDF 职称材料

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白间的相互作用 被引量：1

4

作者 巩雪俐 张丽 +1 位作者 张建龙 张锦前 《新疆医科大学学报》 CAS 2010年第2期113-115,共3页

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相... 目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内是否存在相互作用关系,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-CDK5RAP3,哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组差别均有统计学意义(P<0.05)。结论LHBs与人胰腺CDK5RAP3蛋白在细胞内存在相互作用关系,且单独转染后没有自身激活作用。 展开更多

关键词 HBV表面抗原大蛋白 胰腺癌细胞 哺乳动物双杂交

下载PDF 职称材料

HCBP1的细胞定位及与HCV核心蛋白在体内的相互作用 被引量：1

5

作者 陈天艳 刘敏 +6 位作者 陈云茹 蔺淑梅 叶峰 张曦 刘锦锋 赵英仁 张树林 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1809-1812,共4页

目的探讨HCV核心蛋白与(HCBP1)HCV核心蛋白的相互作用蛋白在真核细胞内的相互作用。构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HCBP1融合蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法PCR分别扩增含HCV核心及HCBP1的cDNA片段,克... 目的探讨HCV核心蛋白与(HCBP1)HCV核心蛋白的相互作用蛋白在真核细胞内的相互作用。构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HCBP1融合蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位。方法PCR分别扩增含HCV核心及HCBP1的cDNA片段,克隆入pGEMT载体,经测序正确后,分别克隆入哺乳双杂交的表达质粒pM和pVP16中,并转染入COS-7细胞,48h后检测细胞中报告基因CAT的表达水平。将HCBP1的cDNA片段克隆入绿色荧光表达载体pEGFP-C1中,构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,转染COS-7细胞,以Western blot和荧光显微镜分析融合蛋白的表达及其细胞定位。结果CAT-ELISA检测显示pM-核心蛋白与pVP16-HCBP1实验孔吸光度值高于其他阴性对照,但低于阳性对照组。成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,Western blot证实融合蛋白在转染细胞中的表达,荧光显微镜示HCBP1-EGFP融合蛋白分布于细胞浆,而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变。结论成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达。哺乳双杂交系统证实HCV核心蛋白与新基因HCBP1确有一定的相互作用。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 哺乳动物双杂交 绿色荧光蛋白 融合蛋白

下载PDF 职称材料

FOXO1基因在中国人群非梗阻性无精子症中的突变筛查

6

作者 刘胜男 彭弋峰 +2 位作者 祝晓梅 金琪 马旭 《中国煤炭工业医学杂志》 2014年第5期789-793,共5页

目的探讨非梗阻性无精子症患者FOXO1基因编码区的变异。方法 PCR扩增81例中国男性非梗阻性无精子症患者和207例中国男性健康对照组FOXO1基因全编码区域,对PCR扩增产物进行测序筛查基因突变类型。随后进行功能实验来初步研究这些变异的... 目的探讨非梗阻性无精子症患者FOXO1基因编码区的变异。方法 PCR扩增81例中国男性非梗阻性无精子症患者和207例中国男性健康对照组FOXO1基因全编码区域,对PCR扩增产物进行测序筛查基因突变类型。随后进行功能实验来初步研究这些变异的功能。结果一名非梗阻性无精子症患者发现一个新的杂合性错义突变(p.Ser318Gly)。功能实验证实这个突变会影响FOXO1的生物学功能。结论第一次在非梗阻性无精子症患者中发现FOXO1基因的突变,表明FOXO1基因可能是导致非梗阻性无精子症发病的一个候选基因。 展开更多

关键词 无精子症 非梗阻性 FOXO1基因 突变 哺乳动物双杂交

原文传递

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺突触角蛋白6之间的相互作用

7

作者 张海栋 张锦前 +7 位作者 赵龙凤 贾因棠 王琦 刘顺爱 温少芳 孙荣华 李卓 成军 《中华实验和临床感染病杂志（电子版）》 CAS 2012年第2期22-24,共3页

目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6(STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用。结果实... 目的验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6(STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础。方法构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用。结果实验组和各阴性对照组相对荧光素酶活性值均存在差异,且均具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 LHBs与人胰腺STX6在胰腺细胞内存在相互作用。 展开更多

关键词 HBV表面抗原大蛋白 突触角蛋白6 哺乳动物双杂交

原文传递

LIM结构域蛋白FHL1C与GNB2不存在相互作用

8

作者 刘娟 赵俊龙 +3 位作者 王媛媛 韩骅 秦鸿雁 张丙芳 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第11期1068-1073,共6页

目的通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制。方法分别构建融合质粒p CMVGAL4-DBD-FHL1C和p CMV-VP16-GN... 目的通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制。方法分别构建融合质粒p CMVGAL4-DBD-FHL1C和p CMV-VP16-GNB2,并将其共转染He La细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体p CMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体p CMV-myc-FHL1C共转染He La细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用。结果哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用。结论成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用。 展开更多

关键词 LIM结构域 FHL1C GNB2 哺乳动物双杂交 免疫共沉淀

下载PDF 职称材料

哺乳动物双杂交技术验证HBV表面抗原大蛋白与胰腺弹性蛋白酶2A的相互作用

9

作者 刘文祥 张楠 +1 位作者 汪涛 侯鹏 《国际病毒学杂志》 2013年第2期63-66,共4页

目的验证乙型肝炎病毒（hepatitisBvires，HBV）表面抗原大蛋白（hepatitisBvireslargesurfaceprotein，LHBs）与人胰腺弹性蛋白酶2A（elastase2A）蛋白在细胞内是否存在明确的相互作用关系。方法构建真核表达质粒pACT—Elastase2A，设... 目的验证乙型肝炎病毒（hepatitisBvires，HBV）表面抗原大蛋白（hepatitisBvireslargesurfaceprotein，LHBs）与人胰腺弹性蛋白酶2A（elastase2A）蛋白在细胞内是否存在明确的相互作用关系。方法构建真核表达质粒pACT—Elastase2A，设立阳性对照组、实验组、阴性对照组和空细胞组，用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与人胰腺Elastase2A蛋白之间的相互作用。结果实验组与3个阴性对照组之间，均数都存在统计学差异（其P值分别为0．031、0．006和0．007）。结论哺乳动物双杂交技术证实了从慨与人胰腺Elastase2A蛋白在Capan2细胞内存在相互作用关系。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 表面抗原大蛋白 人胰腺弹性蛋白酶2A 哺乳动物双杂交

原文传递

野生型ADAR1蛋白与其R916W突变体在哺乳动物细胞中相互作用的研究 被引量：1

10

作者 刘扬 柳青 +4 位作者 赵谨 吕丹 华芮 罗阳 张学 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2007年第5期450-454,共5页

目的:应用酵母双杂交和哺乳动物双杂交系统研究野生型双链RNA腺苷酸脱氨基酶ADAR1蛋白(ADAR1WT)与其突变体R916W(ADAR1R916W)之间的相互作用,从而探讨ADAR1基因错义突变在遗传性对称性色素异常症中的分子致病机制。方法:通过RT-PCR方法... 目的:应用酵母双杂交和哺乳动物双杂交系统研究野生型双链RNA腺苷酸脱氨基酶ADAR1蛋白(ADAR1WT)与其突变体R916W(ADAR1R916W)之间的相互作用,从而探讨ADAR1基因错义突变在遗传性对称性色素异常症中的分子致病机制。方法:通过RT-PCR方法从患者外周血白细胞中获得含ADAR1基因R916W突变的全长cDNA,将野生型和突变cDNA分别克隆到相关质粒载体上,利用MatchmakerTMGAL4酵母双杂交系统3和CheckMateTM哺乳动物双杂交系统检测蛋白单体间的相互作用。结果:在酵母细胞中未检测到野生型-野生型ADAR1蛋白及野生型-突变体ADAR1蛋白间的相互作用;与对照细胞相比,pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT共转染的HeLa细胞中荧光素相对活性显著升高(P<0.05);与共转染pBIND-ADAR1WT和pACT-ADAR1WT的HeLa细胞比较,pBIND-ADAR1R916W和pACT-ADAR1WT共转染的细胞中荧光素相对活性明显降低(P<0.05),为前者的66%。结论:在哺乳动物细胞中ADAR1WT自身相互作用,ADAR1WT和ADAR1R916W突变体蛋白相互作用依然存在但作用明显减弱。 展开更多

关键词 ADAR1蛋白 R916W突变 酵母双杂交系统 哺乳动物双杂交系统

下载PDF 职称材料

噬菌体展示技术筛选与白介素-32相互作用的蛋白 被引量：2

11

作者 孙伟 庄重 +3 位作者 冯金荣 孙晓雷 朱丹丹 段义农 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1038-1042,共5页

目的利用T7噬菌体展示技术筛选与白介素-32(interleukin-32,IL-32)相互作用的蛋白。方法构建IL-32α的原核表达重组质粒,表达并纯化重组IL-32α蛋白(recombinant IL-32α,rIL-32α);以纯化后的rIL-32α作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术... 目的利用T7噬菌体展示技术筛选与白介素-32(interleukin-32,IL-32)相互作用的蛋白。方法构建IL-32α的原核表达重组质粒,表达并纯化重组IL-32α蛋白(recombinant IL-32α,rIL-32α);以纯化后的rIL-32α作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术对人肝细胞cDNA文库进行筛选;对筛选到的阳性克隆进行DNA测序及计算机辅助分析;利用哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验对筛选到的阳性克隆进行验证。结果成功表达并亲和纯化了rIL-32α蛋白;经过5轮筛选,投入和产出的噬菌体滴度比值达到稳定;同源性分析初步确定9个与IL-32α蛋白相互作用的蛋白;进一步实验证实IL-32α与这9个蛋白片段能发生相互作用。结论利用T7噬菌体展示技术成功筛选到9个与IL-32α相互作用的蛋白,我们的发现为深入揭示IL-32的生物学功能奠定了研究基础。 展开更多

关键词 白介素-32 T7噬菌体 原核表达 哺乳动物双杂交实验

下载PDF 职称材料

丙型肝炎病毒核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在HepG2细胞中的相互作用

12

作者 李小权 张树林 +3 位作者 成军 王琦 李国力 洪源 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2008年第16期1468-1471,共4页

目的:使用哺乳动物双杂交系统探讨HCV-core与HCBP12在人肝癌细胞HepG2细胞中的相互作用.方法:PCR分别扩增含HCV core及HCBP12的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,经测序正确后再分别克隆入哺乳动物双杂交的表达质粒PBIND和PACT中,并转染HepG2... 目的:使用哺乳动物双杂交系统探讨HCV-core与HCBP12在人肝癌细胞HepG2细胞中的相互作用.方法:PCR分别扩增含HCV core及HCBP12的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,经测序正确后再分别克隆入哺乳动物双杂交的表达质粒PBIND和PACT中,并转染HepG2细胞,48h后检测细胞中报告基因luciferase activity的表达水平.结果:Dual-Luciferase Activety系统检测显示PBIND-core与PACT-HCBP12实验组萤火虫荧光与海肾素荧光的比值明显高于其他阴性对照组,但低于阳性对照组.结论:哺乳动物双杂交系统证实HCV核心蛋白与其结合蛋白HCBP12在人肝癌细胞系中HepG2中有一定的相互作用,为进一步研究HCV-core和HCBP12的功能奠定基础. 展开更多

关键词 肝炎病毒 病毒核心蛋白质类 HCBP12 哺乳动物双杂交系统 基因 报告

下载PDF 职称材料

H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体的构建及其在MCF-7细胞中的表达

13

作者 高秀丽 段文博 +2 位作者 王婧 王涛 任珊 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期24-29,共6页

目的构建人源组蛋白H2A.X和核仁磷蛋白NPM1哺乳动物双杂交表达载体,并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达。方法PCR扩增H2A.X及NPM1基因表达序列,TA克隆后连接至p BIND和PACT载体,双酶切和测序验证后转染MCF-7细胞,RT-PCR检测表达效果。结... 目的构建人源组蛋白H2A.X和核仁磷蛋白NPM1哺乳动物双杂交表达载体,并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达。方法PCR扩增H2A.X及NPM1基因表达序列,TA克隆后连接至p BIND和PACT载体,双酶切和测序验证后转染MCF-7细胞,RT-PCR检测表达效果。结果PCR结果产生与H2A.X和NPM1编码序列大小一致DNA片段;目的片段的TA,p BIND,PACT克隆及双酶切验证后均产生预期大小DNA片段;测序结果表明所构建的H2A.X-pBIND和NPM1-PACT产生的DNA序列同H2A.X和NPM1编码序列完全匹配;转染H2A.X-pBIND和NPM1-PACT表达载体的细胞相应mRNA表达水平明显增加。结论成功构建H2A.X和NPM1哺乳动物双杂交表达载体并实现其在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,为研究乳腺癌中二者的相互作用及功能提供实验基础。 展开更多

关键词 H2A.X NPM1 哺乳动物双杂交表达载体 乳腺癌

下载PDF 职称材料

利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体的作用 被引量：8

14

作者 王小娟 王海彬 +2 位作者 于静娟 杨俊兴 黄志伟 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第23期2030-2032,共3页

目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFR... 目的:利用哺乳动物细胞双杂交体系研究仙灵骨葆对雌激素受体(ERs)活性的影响。方法:通过MTT法检测仙灵骨葆对Hela细胞活力的影响,并构建含有ERs配体结合域(LBD)的质粒pCMV-BD及含有报告基因Lusferase的质粒pFR-Luci,将二者与内标质粒pFRTlaczeo共转染到Hela细胞中,形成Gal4DBD-ERa和ERb LBD细胞杂交报告系统。以染料木苷为阳性对照验证本杂交系统,并利用本系统考察仙灵骨葆对ERs活性的影响。结果:仙灵骨葆在25～2 500 ng·mL-1浓度范围内可以促进HeLa细胞的增殖。10μmol．L-1染料木苷可以显著提高Gal4DBD-ERα和ERβLBD细胞杂交报告系统中ERa和ERb的活性,证明本系统构建成功。仙灵骨葆对ERa具有浓度依赖性的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERa的相对荧光活性是DMSO对照组的18倍;仙灵骨葆对ERb也具有一定的激活作用,2500 ng·mL-1浓度时ERb的相对荧光活性是DMSO对照组的4倍。结论:本研究成功构建了含有雌激素受体配体结合域的细胞杂交系统,仙灵骨葆对该系统的ERs具有激活作用。 展开更多

关键词 哺乳动物细胞双杂交 仙灵骨葆 雌激素受体 配体结合域 细胞转染

下载PDF 职称材料

双杂交和质谱技术在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的应用

15

作者 张影 王恒睴 《生物技术通讯》 CAS 2006年第2期216-220,共5页

基因的功能是由蛋白质来执行的,而蛋白质要通过与其他生物分子相互作用来完成其各种生物功能。因此,如果能够快速做出蛋白质在不同时间、空间和不同环境中的相互作用图谱,就会帮助我们了解这些蛋白质的功能,进而了解许多生命活动的机制... 基因的功能是由蛋白质来执行的,而蛋白质要通过与其他生物分子相互作用来完成其各种生物功能。因此,如果能够快速做出蛋白质在不同时间、空间和不同环境中的相互作用图谱,就会帮助我们了解这些蛋白质的功能,进而了解许多生命活动的机制。目前,用于大规模研究蛋白质间相互作用的方法主要有酵母双杂交系统及其衍生系统、亲和纯化与质谱分析联用技术,前者用于研究蛋白分子间的两两相互作用,后者用于研究蛋白质复合物间的相互作用。本文主要阐述了酵母双杂交、细菌双杂交、哺乳动物细胞双杂交、亲和纯化与质谱联用技术在大规模蛋白质相互作用研究中的应用。 展开更多

关键词 蛋白质-蛋白质相作用 酵母双杂交 细菌双杂交 哺乳动物细胞双杂交 亲和纯化-质谱技术

下载PDF 职称材料

角质细胞生长因子-2与核糖体蛋白L22相互作用的发现及在哺乳动物细胞中的验证

16

作者 白秉学 徐东刚 +3 位作者 王金凤 彭善云 邹民吉 范明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期936-940,共5页

通过聚合酶链式反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体 pAS2 1 KGF 2并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库 ,挑选双阳性克隆 .DNA序列分析和同源检索显示 ,所获侯选蛋白为人核糖体... 通过聚合酶链式反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体 pAS2 1 KGF 2并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库 ,挑选双阳性克隆 .DNA序列分析和同源检索显示 ,所获侯选蛋白为人核糖体蛋白L2 2 (RPL2 2 ) .将KGF 2和侯选蛋白分别克隆至哺乳动物细胞双杂交的BD、AD质粒中 ,共同转染COS 7细胞 ,通过CAT分析验证了KGF 2和侯选蛋白之间的相互作用 .为阐明KGF 2作用的分子机制提供有益线索 . 展开更多

关键词 角质细胞生长因子-2 相互作用蛋白 酵母双杂交 哺乳动物细胞双杂交 核糖体蛋白122

下载PDF 职称材料

激活素受体相互作用蛋白4的基因克隆

17

作者 王世瑶 柳忠辉 +4 位作者 牟大鹏 张红军 杨琼 常颖 台桂香 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期37-40,共4页

目的:克隆新的与激活素受体ⅡA(ActRⅡA)相互作用蛋白,即激活素受体相互作用蛋白4(ActRIP4)基因。方法:应用ActRIP2基因片段作为探针,从小鼠cDNA文库中钓取ActRIP4 cDNA;采用哺乳细胞双杂交进一步确定ActRIP4与ActRⅡA的相互作用;RT-PC... 目的:克隆新的与激活素受体ⅡA(ActRⅡA)相互作用蛋白,即激活素受体相互作用蛋白4(ActRIP4)基因。方法:应用ActRIP2基因片段作为探针,从小鼠cDNA文库中钓取ActRIP4 cDNA;采用哺乳细胞双杂交进一步确定ActRIP4与ActRⅡA的相互作用;RT-PCR检测ActRIP4 mRNA在组织中的表达情况。结果:克隆的ActRIP4基因全长691bp,ORF区编码118个氨基酸残基;ActRIP4与ActRⅡA具有特异性结合作用;天然的ActRIP4 mRNA在小鼠多种组织中表达。结论:ActRIP4属于ActRIP家族新成员,可以与ActRⅡA相互作用,可能在多种组织中介导激活素受体信号传导过程。 展开更多

关键词 激活素 受体相互作用蛋白 哺乳动物细胞双杂交 逆转录聚合酶链反应

下载PDF 职称材料