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K亚群禽白血病病毒5′LTR序列及启动活性分析 被引量：10
1
作者 赵子君 饶明章 +4 位作者 陈建 张杰 袁丽霞 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期754-760,共7页
通过对ALV-K 5′LTR序列及其启动活性比较分析,以探究5′LTR对ALV-K体外复制能力的影响。选取广东某黄羽祖代种鸡场健康鸡群中分离到的ALV-K(GDFX0601)毒株作为研究对象,将其5′LTR核苷酸序列与国内外不同亚群ALV分离株比较分析,并将该A... 通过对ALV-K 5′LTR序列及其启动活性比较分析,以探究5′LTR对ALV-K体外复制能力的影响。选取广东某黄羽祖代种鸡场健康鸡群中分离到的ALV-K(GDFX0601)毒株作为研究对象,将其5′LTR核苷酸序列与国内外不同亚群ALV分离株比较分析,并将该ALV-K接种DF-1细胞,采用ELISA对细胞培养上清进行ALV p27抗原检测以分析其在DF-1细胞上的复制能力,还分别将ALV-K(GDFX0601)、ALV-J(CHN06)、ALV-E(ev-1)和ALV-K(JS11C1)5′LTR克隆进pGL3-Basic载体,分别转染DF-1、CEF和293T细胞后测定荧光素酶活性来评估不同毒株5′LTR的启动活性。结果显示,ALV-K(GDFX0601)与其他内源性ALV LTR相似性为98.5%,而与其他外源性ALV的相似性仅有70%左右,且其LTR U3区转录调节元件与外源性病毒差异较大,与内源性病毒相似。ALV-K(GDFX0601)在ALV易感细胞DF-1上的复制速度与感染能力均弱于外源性病毒ALV-A、ALV-B和ALV-J。5′LTR的启动活性试验发现ALV-K(GDFX0601)毒株LTR的启动活性比ALV-J和LTR为外源性的ALV-K(JS11CI)毒株的启动活性弱(P<0.05)。ALV-K比其他亚群ALV复制能力低可能与5′LTR启动活性有关。 展开更多
关键词 ALV-K 致病性 LTR 启动活性
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香蕉Actin1启动子的分离及启动活性的分析 被引量：3
2
作者 徐碧玉 刘歌 金志强 《热带作物学报》 CSCD 2005年第1期34-37,共4页
从香蕉基因组DNA中分离香蕉Actin1启动子序列,序列测定结果表明,该片段1253bp,包含完整的G-box和TATAbox,5'非翻译区和其下游的内含子,与文献报道序列的同源性达97.53%。以全长序列取代植物表达载体pCAMBIA3300上的35S启动子序列构... 从香蕉基因组DNA中分离香蕉Actin1启动子序列,序列测定结果表明,该片段1253bp,包含完整的G-box和TATAbox,5'非翻译区和其下游的内含子,与文献报道序列的同源性达97.53%。以全长序列取代植物表达载体pCAMBIA3300上的35S启动子序列构建成瞬间表达载体pCAMBIA-Act1,以内含子序列HindⅢ和XbaⅠ双酶切片段(584bp)取代植物表达载体pBI121上的35S启动子,构建成瞬间表达载体pBI121-Act1-1。采用基因枪法对香蕉根、叶和果实的薄片进行转化,转化材料经培养3h,采用分光光度法测定各组织GUS的活性。结果表明,Actin1启动子在所转化的3种组织中均可启动报告基因的表达,表达活性与35S启动子接近,具有组成型表达的特点。内含子部分序列(584bp)也具有启动活性,但启动活性较低。 展开更多
关键词 香蕉 Actin1 启动子 分离 启动活性 肌动蛋白基因 瞬间表达 基因枪法
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小麦TaPR1基因启动子的克隆及启动活性分析 被引量：1
3
作者 王丽珊 王珅 +2 位作者 王菲 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期7-11,68,共6页
PR1是植物病程相关(Pathogenesis related,PR)蛋白家族成员之一,参与植物抗病防御反应。研究前期明确了小麦TaPR1基因受叶锈菌及信号分子水杨酸(Salicylic acid,SA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)的诱导表达。本研究基于中国春小麦数据库... PR1是植物病程相关(Pathogenesis related,PR)蛋白家族成员之一,参与植物抗病防御反应。研究前期明确了小麦TaPR1基因受叶锈菌及信号分子水杨酸(Salicylic acid,SA)、脱落酸(Abscisic acid,ABA)的诱导表达。本研究基于中国春小麦数据库,克隆获得了小麦TaPR1基因上游2200 bp启动子序列,对启动子区域所包含的顺式作用元件进行分析预测,利用β-葡萄糖苷酸酶(β-Glucuronidase,GUS)组织化学染色、绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)观察对不同长度启动子区段进行启动活性验证,结果表明TaPR1基因启动子-2200~-290 bp区段具有启动活性,为进一步解析TaPR1基因转录调控机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 小麦 TaPR1 启动子 启动活性 GUS染色
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干扰素调节因子-3启动子区序列分离、鉴定及在人类胚胎肾-293细胞中启动活性分析
4
作者 任伟 徐华国 +1 位作者 陆超 周国平 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期1344-1345,1348,共3页
目的构建表达干扰素调节因子-3(IRF-3)基因转录起始位点上游启动子的表达质粒,转染人类胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)-293细胞,评价其启动子活性。方法以人全血细胞总DNA为模板,PCR扩增IRF-3转录起始位点上游1 000 bp的启动子区... 目的构建表达干扰素调节因子-3(IRF-3)基因转录起始位点上游启动子的表达质粒,转染人类胚胎肾(human embryonic kidney,HEK)-293细胞,评价其启动子活性。方法以人全血细胞总DNA为模板,PCR扩增IRF-3转录起始位点上游1 000 bp的启动子区片段。亚克隆此片段至无启动子活性的pGL-3基本载体荧光素酶报告基因上游的多克隆位点,构建含IRF-3启动子的重组报告质粒。转染HEK-293细胞,行荧光素酶活性检测,计算相对活性单位(RLU)。生物信息学分析转录因子结合位点。结果酶切,测序鉴定证实成功构建含有IRF-3基因转录起始位点上游1 000 bp的启动区的表达质粒。IRF-3的启动子与正常的pGL-3基本质粒比较,其RLU增加了42.2倍。其上游启动子区序列中含多个转录因子结合序列如GATA-1、Sp1和E2F等。结论IRF-3转录起始位点上游序列在HEK-293细胞中具有较强的启动活性。 展开更多
关键词 干扰素调节因子-3 启动子 启动活性
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盐穗木盐相关转录因子HcSCL13基因启动子的克隆及活性初步分析 被引量：3
5
作者 樊寿德 王艳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期131-138,共8页
为探明盐穗木盐相关转录因子基因Hc SCL13的表达调控规律,利用基因组步移法成功克隆获得该基因2 200 bp的启动子序列。Plant CARE数据库分析结果表明,该启动子不仅含有启动子区的核心元件CAAT-box和TATA-box,还包含多个与逆境应答有关... 为探明盐穗木盐相关转录因子基因Hc SCL13的表达调控规律,利用基因组步移法成功克隆获得该基因2 200 bp的启动子序列。Plant CARE数据库分析结果表明,该启动子不仅含有启动子区的核心元件CAAT-box和TATA-box,还包含多个与逆境应答有关的顺式调控元件。将克隆获得的Hc SCL13转录因子基因启动子序列定向替换p BI121载体上的35S启动子,构建融合表达载体并转染模式植物拟南芥,对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色。结果显示转基因拟南芥整株被染色,提示该启动子具有表达活性且可能为组成型启动子。 展开更多
关键词 盐穗木转录因子HcSCL13基因 染色体步移 启动子克隆 元件及启动活性分析
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丙型肝炎病毒5’端非编码区的5’端序列对其翻译启动活性的影响 被引量：2
6
作者 刘水平 赵俊琴 +2 位作者 谭德明 朱海鹏 余俊龙 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期355-358,共4页
目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5’端非编码区(5’NCR)的5’端序列对其翻译启动活性的影响。方法用PCR技术扩增获得全长和5’端17个碱基缺失的HCV5’NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5’端截短的HCV... 目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5’端非编码区(5’NCR)的5’端序列对其翻译启动活性的影响。方法用PCR技术扩增获得全长和5’端17个碱基缺失的HCV5’NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5’端截短的HCV5’NCR调控SEAP表达的重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP。用脂质体方法将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,并用化学发光法检测SEAP的表达。结果酶切和测序结果表明,重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP构建成功。表达的发光强度分别为390482±42856和635265±52285RLU,二者有差异显著性(P<0.01)。结论HCV5’NCR的5’端碱基缺失提高了它对SEAP基因的翻译启动活性,为进一步分析HCVIRES的结构提供了实验基础。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 5’端非编码区 内部核糖体进入位点 翻译启动活性
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结构域Ⅰ缺失的丙型肝炎病毒5′NCR调控荧光素酶基因的表达 被引量：1
7
作者 杨滔 赵俊琴 +2 位作者 刘水平 李洪涛 李建华 《现代生物医学进展》 CAS 2007年第5期699-701,共3页
目的:分析丙型肝炎病毒(HCV)5′端非编码区(NCR)的结构域Ⅰ序列在其翻译启动活性中的作用。方法:以质粒pCMVN CRluc为模板,PCR扩增分别得到缺失5′端20nt和43nt的HCV 5′NCR片段,并分别替换pCMVNCRluc中的完整HCV 5′NCR,构建结构域Ⅰ... 目的:分析丙型肝炎病毒(HCV)5′端非编码区(NCR)的结构域Ⅰ序列在其翻译启动活性中的作用。方法:以质粒pCMVN CRluc为模板,PCR扩增分别得到缺失5′端20nt和43nt的HCV 5′NCR片段,并分别替换pCMVNCRluc中的完整HCV 5′NCR,构建结构域Ⅰ缺失的HCV 5′NCR调控萤火虫荧光素酶(luc)基因表达的真核表达质粒(pCN1-d1、pCNl-d2)。以脂质体方法转染人肝癌细胞株HepG2,用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶相对于内参考的海肾荧光素酶表达活性,同时采用RT-PCR方法检测转染后细胞中萤火虫荧光素酶基因的相对表达水平。结果:酶切和测序结果表明,各重组质粒构建成功。各重组质粒转染细胞后luc mRNA的相对表达水平与pCMVNRluc相比差异无显著性(P＞0．05);pCNl-dl、pCNl-d2表达的荧光素酶活性与pCMVNCRluc差异无显著性(P＞0．05)。结论:HCV 5′NCR的5′端20nt和43nt序列缺失不影响它的翻译启动活性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 荧光素酶 翻译启动活性
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丙型肝炎病毒5'端非编码区结构域Ⅰ、Ⅱ在其翻译启动活性中的作用具有细胞特异性
8
作者 黄小晔 刘丽莎 +4 位作者 崔光晶 刘西霞 刘美佟 马琼山 刘水平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1826-1829,共4页
目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5'UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因转染技术,将截短型HCV 5'UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒p RL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h:6提取... 目的分析在不同宿主细胞的翻译体系下,缺失不同片段的HCV 5'UTR翻译启动活性的差异。方法以脂质体介导基因转染技术,将截短型HCV 5'UTR调控Fluc的真核表达质粒与Rluc真核表达质粒p RL-TK共转染至不同的细胞中,转染后36 h:6提取细胞RNA,半定量RT-PCR检测目的质粒的转录水平;6用双荧光素酶报告基因检测系统检测Fluc基因相对表达活性,分析HCV 5'UTR缺失不同结构域后在不同翻译体系中翻译启动活性的差异。结果 6缺失5'端44个碱基的HCV 5'UTR的翻译启动活性分别与缺失前相比:在He La细胞和C6细胞中无明显影响,在L-02细胞中活性下降为46%,而在293T细胞则为缺失前的146%;6缺失5'端118个碱基后,HCV 5'UTR的活性分别与缺失前相比:在He La细胞中,缺失后活性仅为缺失前的49%,而在L-02细胞、C6细胞和293T细胞中,活性分别为缺失前的140%、160%和235%。在本研究使用的四种细胞中,p CNl的翻译启动活性的差异无统计学意义,p CNl-d2在293T细胞中活性最高,在L-02细胞中活性最低。p CNl-d3在293T、C6和L-2细胞中活性相近,但在He La细胞中的活性明显比其他细胞低。结论 HCV 5'UTR的DomainⅠ和DomainⅡ对其翻译启动活性的影响与宿主细胞种类相关,具细胞特异性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 5'端非编码区 翻译启动活性 细胞特异性
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牛Nramp1基因启动子的克隆及其活性分析 被引量：17
9
作者 王洪梅 张利博 +5 位作者 侯明海 王长法 王玲玲 孙涛 何洪彬 仲跻峰 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期1022-1028,共7页
【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光... 【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5′侧翼区长片段及固定3′端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定。【结果】牛Nramp1基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58—-89区域具有基本的启动子功能,+58—-1 748启动子活性最强。进一步研究表明,-89—-205 bp区域、-278—-1 495 bp区域存在着正调控元件,在-205—-278 bp区域内存在着负调控元件;另外,LPS能显著增强启动子活性,其诱导牛Nramp1基因的表达具有细胞特异性和剂量依赖性。【结论】成功构建了含推测的牛Nramp1基因启动子片段的重组报告基因载体,确定了启动子核心区域和主要的调控区域。 展开更多
关键词 牛Nramp1基因 启动子活性 调控区 LPS诱导
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植物细胞中瞬时表达系统的建立及研究进展 被引量：13
10
作者 周丹丹 俞嘉宁 《中国农学通报》 CSCD 2013年第24期151-156,共6页
瞬时表达是近年来发展的一种快速、高效的检测蛋白质表达的方法,并逐渐被应用到生物学各方面的研究中。植物细胞瞬时表达系统的建立为方便、快捷的研究启动子活性、基因功能和蛋白质定位等开辟了新途径。本研究主要归纳了植物瞬时表达... 瞬时表达是近年来发展的一种快速、高效的检测蛋白质表达的方法,并逐渐被应用到生物学各方面的研究中。植物细胞瞬时表达系统的建立为方便、快捷的研究启动子活性、基因功能和蛋白质定位等开辟了新途径。本研究主要归纳了植物瞬时表达系统的建立和发展过程,总结了近年来的应用以及对生物学研究的意义,并指出了该系统在当前应用中存在的不足,并针对这些不足提出了合理的建议。最后,结合最新的研究进展,对瞬时表达系统在分子细胞生物学、蛋白质组学、病毒学等方面的研究工作做了展望。 展开更多
关键词 瞬时表达系统 外源基因 基因功能分析 启动子活性分析
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香菇印gpd-Le和ras-Le启动子的功能分析 被引量：9
11
作者 郭丽琼 王秀旭 +2 位作者 柳永 舒薇 林俊芳 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期249-256,共8页
利用从香菇菌丝体中克隆的启动子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分别连接于报告基因gfp(绿色荧光蛋白基因)的上游,构建了启动子功能活性检测表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介导法把表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp分别与辅助质粒pCc10... 利用从香菇菌丝体中克隆的启动子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分别连接于报告基因gfp(绿色荧光蛋白基因)的上游,构建了启动子功能活性检测表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介导法把表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp分别与辅助质粒pCc1001(含有trp1基因)共转化进色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞粉孢子的原生质体中。经过选择培养基筛选、假定转化子的分子鉴定以及GFP荧光检测。结果表明:香菇gpd-Le启动子在灰盖鬼伞的菌丝中具有较强驱动外源gfp基因表达的活性,在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察到gfp基因表达的绿色荧光。而香菇ras-Le启动子没有检测到有驱动外源gfp基因表达的活性。 展开更多
关键词 香菇 启动子活性 灰盖鬼伞 共转化 GFP基因
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黑曲霉诱变株Aspergillus niger T21糖化酶产量提高的分子基础 被引量：5
12
作者 范晓春 仇润祥 +1 位作者 刘丽 唐国敏 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2001年第3期202-207,共6页
黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　Ｔ２１是以Ａ．ｎｉｇｅｒＡＳ３．７９５为出发株经诱变获得的糖化酶高产菌株，产量比原株提高１０～１７倍．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析知Ｔ２１的糖化酶ｍＲＮＡ含量约为ＡＳ３．７９５的２０... 黑曲霉Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　Ｔ２１是以Ａ．ｎｉｇｅｒＡＳ３．７９５为出发株经诱变获得的糖化酶高产菌株，产量比原株提高１０～１７倍．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析知Ｔ２１的糖化酶ｍＲＮＡ含量约为ＡＳ３．７９５的２０倍，表明糖化酶基因（ｇｌａＡ）转录水平的提高是糖化酶产量提高的主要原因．以编码葡糖苷酸酶（ＧＵＳ）的　Ｅ．Ｃｏｌｉ　ｕｉｄＡ　为报告基因，分别与　Ｔ２１和　ＡＳ３．７９５的　ｇｌａＡ５＇调控区融合后，引入Ａ．　ｎｉｇｅｒ，根据转化子　ＧＵＳ酶活性测定结果，　Ｔ２１ｇｌａＡ　５＇调控区的启动子活性是ＡＳ３．７９５相应启动子活性的３倍多，提示ｃｉｓ调控的改变是Ｔ２１　ｇｌａＡ转录水平提高的重要原因之一，但ｔｒａｎｓ调控的改变是Ｔ２１　ｇｌａＡ转录水平提高的更重要的原因．作为　ｔｒａｎｓ调控研究的第　１步，进行了　Ｔ２１　ｇｌａＡ　５＇调控区的功能分析，结果表明，ＡＴＧ上游－４０８～－５１３间的约　１００　ｂｐ区域与　ｇｌａＡ基因高水平表达相关． 展开更多
关键词 黑曲霉 糖化酶 启动因子活性比较 功能分析 产量 发酵工业 育种
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ELOVL5基因遗传变异与中国荷斯坦奶牛乳质性状的关联分析及功能验证 被引量：9
13
作者 郭鹏程 戴珊珊 +2 位作者 杨浩然 赵志辉 闫守庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期741-745,共5页
采用测序的方法鉴定136头中国荷斯坦奶牛ELOVL5基因启动子区域的遗传多态性位点,通过统计学分析遗传多态性位点与乳质性状的关联性,并根据差异显著性多态性位点构建ELOVL5基因启动子双荧光素酶报告载体,检测不同基因型的启动子活性。结... 采用测序的方法鉴定136头中国荷斯坦奶牛ELOVL5基因启动子区域的遗传多态性位点,通过统计学分析遗传多态性位点与乳质性状的关联性,并根据差异显著性多态性位点构建ELOVL5基因启动子双荧光素酶报告载体,检测不同基因型的启动子活性。结果表明:在奶牛ELOVL5基因启动子区域中发现了7个SNPs及1个单碱基缺失突变,其中SNP7g.-385C>G与尿素氮、校正奶量显著相关(P<0.05),单碱基缺失突变与牛奶中的体细胞数极显著相关(P<0.01)。双荧光素酶报告载体检测结果显示,缺失纯合基因型的启动子活性极显著高于野生型(P<0.01)。 展开更多
关键词 中国荷斯坦奶牛 ELOVL5基因 多态性 乳质性状 启动子活性
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肿瘤特异性Survivin启动子与甲胎蛋白启动子的活性评价与比较 被引量：4
14
作者 况舸 黄爱龙 唐霓 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期440-442,共3页
目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP 基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒... 目的研究并比较肿瘤特异性Survivin和甲胎蛋白(AFP)基因启动子在不同肝细胞癌细胞系中的转录活性,为肝癌靶向性基因治疗提供依据。方法采用聚合酶链反应法扩增获得Survivin和AFP 基因的启动子片段,并克隆入表达虫荧光素酶基因的报告质粒中,通过测定荧光素酶报告基因的表达情况, 测定Survivin与AFP基因启动子的转录活性,同时采用巨细胞病毒启动子为对照,评价其转录活性水平。结果Survivin启动子在肝癌细胞中具有相当强的活性,其活性水平在高表达AFP的肝癌细胞中为AFP启动子的54～100倍,达到巨细胞病毒启动子活性的16%～21%。结论Survivin启动子在肝癌细胞系中具有较强的启动活性,可望开发成为新的肝癌靶向性基因治疗工具。 展开更多
关键词 Survivin 肿瘤特异性 甲胎蛋白启动子 活性评价 荧光素酶报告基因 巨细胞病毒启动子 靶向性基因治疗 聚合酶链反应法 基因启动子 荧光素酶基因 AFP启动子 转录活性 活性水平 AFP基因 启动子活性 肝癌细胞系 表达情况 治疗工具
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马铃薯损伤诱导型启动子Wun1基因的克隆及其GFP表达活性 被引量：3
15
作者 贾笑英 向云 +1 位作者 张金文 王蒂 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第3期333-338,共6页
通过聚合酶链式反应(PCR),以马铃薯基因组DNA为模板,根据已报道Wun1序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Wun1基因片段,通过序列分析与文献报道的碱基序列有96.86%的同源性,该基因已登录到GenBank(No.AY803296)。以pBI... 通过聚合酶链式反应(PCR),以马铃薯基因组DNA为模板,根据已报道Wun1序列设计了一对特异引物,在优化的PCR反应条件下扩增出了Wun1基因片段,通过序列分析与文献报道的碱基序列有96.86%的同源性,该基因已登录到GenBank(No.AY803296)。以pBIPG(携带GFP基因)的质粒DNA为模板,通过PCR技术亚克隆到了源自水母(Aequorea)大小为756bp的绿色荧光蛋白(GFP)基因,与已知序列同源率为100%。利用GFP基因作为报告基因,构建了用于比较鉴定所克隆启动子活性的pBIG(35S-GFP)和pBIWG(Wun1-GFP)两个植物表达载体,采用基因枪法进行对洋葱表皮细胞的遗传转化,检测Wun1启动子在受体细胞中调控基因表达的活性,结果表明克隆到的Wun1启动子活性强于组成型表达的35S启动子,GFP瞬时表达的分析方法也让我们有效的筛选到用于进行马铃薯抗病育种的调控元件。 展开更多
关键词 Wun1启动子 GFP基因 基因枪法 启动子活性分析
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不同病变型J亚群禽白血病病毒LTR启动子序列分析及活性比较 被引量：7
16
作者 张贺楠 齐岩 +4 位作者 史伟伟 梁艺瑜 刘红波 曹伟胜 廖明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期402-406,共5页
从ALV-J中国地方分离株SCAU-HN06株（血管瘤病变型）、NX0101株和JS-nt株（骨髓瘤病变型）病毒的细胞培养物提取前病毒DNA,通过PCR扩增各毒株的LTR并克隆,随后进行测序分析。与国内外ALV-J参考毒株LTR序列比较发现：国内地方分离株与英... 从ALV-J中国地方分离株SCAU-HN06株（血管瘤病变型）、NX0101株和JS-nt株（骨髓瘤病变型）病毒的细胞培养物提取前病毒DNA,通过PCR扩增各毒株的LTR并克隆,随后进行测序分析。与国内外ALV-J参考毒株LTR序列比较发现：国内地方分离株与英国ALV-J原型株HPRS-103和美国ALV-J原型株ADOL-7501的LTR核苷酸序列相似性为88.0%~97.2%;LTR中的U5区及R区具有较高的保守性,而U3区内存在较大差异。将不同病变型ALV-J的LTR片段分别插入pCAT-basic载体CAT报告基因5＇端。用所得的重组报告基因表达质粒转染DF-1细胞,48h后通过测定转染细胞中的CAT表达量来评价LTR启动子的活性。结果表明,SCAU-HN06株与骨髓瘤病变型ALV-J（JS-nt株,NX0101株）LTR启动子活性差异不显著。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 血管瘤 长末端重复序列 启动子活性
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鸡内源白血病病毒ev21与慢羽非连锁分析和LTR区启动子活性分析 被引量：7
17
作者 王麒 王晗 +4 位作者 张秀玲 刘春杨 张乐超 李兰会 李祥龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期930-937,共8页
旨在分析鸡内源ev21病毒与慢羽的连锁关系及其结构特征和启动子活性,为建立无内源ev21病毒的慢羽种鸡提供检测方法,并对ev21的启动转录活性进行探索。长片段PCR扩增获得鸡内源ev21病毒基因序列,检测太行鸡、坝上长尾鸡、海兰褐、海兰灰... 旨在分析鸡内源ev21病毒与慢羽的连锁关系及其结构特征和启动子活性,为建立无内源ev21病毒的慢羽种鸡提供检测方法,并对ev21的启动转录活性进行探索。长片段PCR扩增获得鸡内源ev21病毒基因序列,检测太行鸡、坝上长尾鸡、海兰褐、海兰灰及其祖代五个品系259份样本的病毒携带情况。利用NCBI数据库Blast比对分析并PCR获得病毒基因全长。构建ev21基因5′和3′LTR区的pGL3-basic重组质粒转染A375细胞检测其启动子活性。结果显示:获得完整ev21病毒基因组全长7 524bp,发现其反向插入在鸡Z染色体g.10681671-10681672之间,长片段7 590bp PCR检测发现ev21与海兰灰慢羽鸡完全连锁,但与太行鸡、坝上长尾鸡和海兰褐慢羽并不完全连锁,尤其海兰褐快羽公鸡ev21全部阳性。ev21基因5′LTR区具有高强度的启动子活性(P<0.01),3′LTR区活性高于阴性对照,但差异不显著(P>0.05)。综上,内源ev21病毒与鸡慢羽性状并不完全连锁,7 590bp长片段PCR为内源ev21病毒的筛查提供检测方法,ev21基因5′LTR区具有强启动子活性。 展开更多
关键词 ev21 慢羽 染色体位置 LTR 启动子活性
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激素和非生物胁迫对月季RhPIP1;1启动子活性的调节作用 被引量：7
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作者 阴霞 陈雯 +3 位作者 王磊 杨若韵 薛璟祺 高俊平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期107-117,共11页
通过反向PCR方法克隆得到月季（RosahybridaL.）‘萨蔓莎’质膜型水孔蛋白基因RhPIP1;1上游2 126 bp的启动子序列。PLACE分析发现,RhPIP1;1启动子序列中含有GA、ABA和乙烯等激素诱导相关顺式作用元件及干旱、低温和盐胁迫等非生物胁迫... 通过反向PCR方法克隆得到月季（RosahybridaL.）‘萨蔓莎’质膜型水孔蛋白基因RhPIP1;1上游2 126 bp的启动子序列。PLACE分析发现,RhPIP1;1启动子序列中含有GA、ABA和乙烯等激素诱导相关顺式作用元件及干旱、低温和盐胁迫等非生物胁迫相关顺式作用元件。在RhPIP1;1promoter：：GUS转基因拟南芥中发现,RhPIP1;1启动子活性与植株发育进程相关;几乎所有器官均可检测到GUS表达,而且在迅速扩展的器官以及叶片和花的维管组织中尤为强烈。同时在6 d和9 d苗龄的转基因植株中,GA处理上调了莲座叶中RhPIP1;1启动子的活性,而ABA、甘露醇、NaCl和冷处理分别下调了莲座叶和根中RhPIP1;1启动子的活性。将RhPIP1;1启动子不同长度的5′端缺失片段融合GUS基因,并在烟草叶片中瞬时表达,缺失–580 ~–256之间的324 bp片段后,启动子活性显著降低。研究结果表明RhPIP1;1启动子对多种激素和非生物胁迫存在响应,并且这种响应具有发育和器官特异性;RhPIP1;1启动子中–580~–256区段对于启动子活性具有重要的作用。%@ 展开更多
关键词 月季 RhPIP1 1 启动子活性 激素 非生物胁迫
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BRD7基因调控区的克隆与功能研究 被引量：3
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作者 刘华英 罗晓敏 +7 位作者 牛朝霞 周艳宏 周鸣 彭聪 向波 李伟松 李小玲 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第6期531-539,共9页
BRD7基因是采用cDNA代表性差异分析法克隆得到的一个新的Bromodomain基因(GenBank登录号AF152604).它在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调,过表达BRD7基因能部分逆转鼻咽癌细胞的恶性表型.为了揭示BRD7基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调... BRD7基因是采用cDNA代表性差异分析法克隆得到的一个新的Bromodomain基因(GenBank登录号AF152604).它在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调,过表达BRD7基因能部分逆转鼻咽癌细胞的恶性表型.为了揭示BRD7基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,利用生物信息学技术已预测出其启动子区.荧光素酶活性检测结果表明该区域具有强启动子活性;转录因子Sp1特异性地结合于BRD7该启动子区;Sp1特异性阻断剂mithramycinA能明显地抑制BRD7启动子的活性和BRD7基因的表达. 展开更多
关键词 BRD7基因 启动子 启动子活性 sp1转录因子 mithramycinA
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牡丹花青素苷合成关键基因PsDFR启动子活性分析
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作者 周琳 袁梦 +2 位作者 齐宇 张梦杰 王雁 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2024年第2期16-26,共11页
[目的]分析牡丹花青素苷合成关键基因PsDFR启动子的顺式作用元件及活性,为进一步研究PsDFR启动子的功能及其在牡丹花色形成中的调控机制奠定基础。[方法]以‘黑花魁’牡丹花瓣中提取的基因组DNA为模板,通过染色体步移法克隆PsDFR的启动... [目的]分析牡丹花青素苷合成关键基因PsDFR启动子的顺式作用元件及活性,为进一步研究PsDFR启动子的功能及其在牡丹花色形成中的调控机制奠定基础。[方法]以‘黑花魁’牡丹花瓣中提取的基因组DNA为模板,通过染色体步移法克隆PsDFR的启动子序列。利用生物信息在线软件预测分析启动子序列的顺式作用元件。构建5个不同长度缺失启动子与GUS基因融合的表达载体,并瞬时转化烟草叶片,通过GUS组织化学染色和酶活性检测分析缺失启动子的活性,及其对脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、光照等不同胁迫处理的响应。[结果]克隆得到PsDFR上游1687 bp的启动子序列。生物信息学分析发现PsDFR启动子含有多个光信号、激素响应、逆境响应及组织特异表达等顺式作用元件,这暗示PsDFR的表达可能受光信号、激素和胁迫等多种信号的共同调节。GUS组织化学染色和酶活性检测表明,随启动子片段的缩短,启动子活性逐渐下降,-1623至-916区段对于启动子活性具有重要作用。MeJA和黑暗处理对各启动子片段活性均有显著抑制作用,恢复光照可促使启动子活性明显回升,而参与ABA响应的核心调控区域位于-443至-76 bp。[结论]PsDFR启动子含有多个光信号、激素响应、逆境响应及组织特异表达等顺式作用元件,其活性受光的正调控以及MeJA的负调控;-1623至-916 bp间的区域对于启动子活性具有重要作用,-443至-76 bp是响应ABA处理的核心区域。该研究为进一步揭示PsDFR应答环境信号参与牡丹花色形成的分子调控机制提供参考。 展开更多
关键词 牡丹 花青素苷 PsDFR 启动子 顺式作用元件 启动子活性
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