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苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因克隆及油菜叶绿体遗传转化研究 被引量：30
1
作者 侯丙凯 陈正华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期39-40,共2页
关键词 苏云金芽孢杆菌 油菜 杀虫晶体蛋白基因 叶绿体转化
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叶绿体基因工程简介 被引量：22
2
作者 李宏韬 赵淑青 +1 位作者 赵彦修 张慧 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期495-498,共4页
叶绿体是植物细胞中一种特殊的细胞器。自1988年开始,人们认识到叶绿体在植物基因工程中的特殊地位。叶绿体基因工程的特点,特别是其高效表达和安全性,使其受到越来越多的重视,本文对叶绿体转化作了较为全面的介绍,包括其优势、方法、... 叶绿体是植物细胞中一种特殊的细胞器。自1988年开始,人们认识到叶绿体在植物基因工程中的特殊地位。叶绿体基因工程的特点,特别是其高效表达和安全性,使其受到越来越多的重视,本文对叶绿体转化作了较为全面的介绍,包括其优势、方法、用途及不足等内容。 展开更多
关键词 植物基因组工程 核转化 叶绿体 叶绿体转化 叶绿体基因组
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丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究 被引量：21
3
作者 张中林 山松 +4 位作者 陈曦 苏宁 吴祥甫 钱凯先 沈桂芳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期1-6,共6页
用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓ... 用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 基因融合 叶绿体转化 aadA基因 衣藻
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油菜叶绿体定点转化载体的构建及其杀虫性 被引量：14
4
作者 侯丙凯 张中林 +3 位作者 周奕华 章银梅 沈桂芳 陈正华 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2000年第7期5-11,共7页
首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建... 首先从油菜叶绿体基因组克隆得到包含rps7基因在内的 1.0kbDNA片段和包含ndhB基因在内的 2 .4kbDNA片段 ,同时从苏云金芽孢杆菌质粒上克隆得到一个全长 3.5kb的Bt杀虫蛋白基因cry1Aa。然后以rps7和ndhB基因作为同源重组片段 ,成功构建了包含Bt杀虫蛋白基因和aadA抗壮观霉素基因的油菜叶绿体定点转化载体 ,并对克隆菌体总蛋白进行了生物杀虫试验。结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因能够得到表达 ,并且对棉铃虫幼虫有很强的毒杀作用。含抗虫基因的油菜叶绿体转化载体的构建在国内外为首次报告 。 展开更多
关键词 油菜 叶绿体转化 载体构建 杀虫试验
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水稻叶绿体表达体系的建立及抗PPT叶绿体转化植株的获得 被引量：21
5
作者 李轶女 孙丙耀 +3 位作者 苏宁 孟祥勋 张志芳 沈桂芳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1849-1855,共7页
【目的】建立外源基因在水稻叶绿体中的表达体系。【方法】通过分析已公布的水稻叶绿体基因组全序列及其基因分布特点,选择ndhF与trnL的基因间序列作为除草剂PPT抗性基因bar定点整合的位点。以水稻叶绿体基因组DNA为模板,采用PCR方法克... 【目的】建立外源基因在水稻叶绿体中的表达体系。【方法】通过分析已公布的水稻叶绿体基因组全序列及其基因分布特点,选择ndhF与trnL的基因间序列作为除草剂PPT抗性基因bar定点整合的位点。以水稻叶绿体基因组DNA为模板,采用PCR方法克隆了两个适于水稻叶绿体基因组遗传转化的同源片段,构建了含水稻叶绿体16S高效表达启动子、外源基因bar、psbA基因的3′序列(终止子)以及两个同源片段的水稻叶绿体特异表达载体pRB。【结果】采用基因枪法转化水稻品种中花10号幼穗诱导的愈伤组织,并再生植株,获得转化体后代种子。对转化植株进行的分子检测结果表明,外源基因bar可能被整合到水稻叶绿体基因组中。后代种子的遗传学分析显示,外源基因bar可正常表达并遗传。【结论】利用所建立的水稻叶绿体外源基因表达体系,外源基因bar既可在水稻叶绿体基因组中正常表达,还可作为转化体筛选时的除草剂抗性选择标记。 展开更多
关键词 水稻 同源片段 BAR基因 叶绿体转化
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叶绿体遗传转化:植物导入外源基因的新途径 被引量：11
6
作者 张景昱 张中林 +1 位作者 苏宁 宋艳茹 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2001年第3期288-294,共7页
叶绿体转化系统 ,独立于传统的核转化 ,为植物导入外源基因提供了新途径。它有如下优点 :超量表达目的基因 ;以定点整合方式导入外源基因从而消除了位置效应及基因沉默 ;具原核表达方式 ,能以多顺反子的形式表达多个基因 ;母系遗传方式... 叶绿体转化系统 ,独立于传统的核转化 ,为植物导入外源基因提供了新途径。它有如下优点 :超量表达目的基因 ;以定点整合方式导入外源基因从而消除了位置效应及基因沉默 ;具原核表达方式 ,能以多顺反子的形式表达多个基因 ;母系遗传方式可防止基因扩散 ;基因产物区域化并能提供适于某些产物发挥功能的小环境等。随着这项技术在越来越多的领域发挥作用 ,其优越性逐渐得到认同。本文着重对此技术的特点、发展及应用作一综述。 展开更多
关键词 叶绿体转化 基因枪转化法 定点整合 植物 外源基因
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Bt叶绿体转基因植株的抗虫性及后代表型分析 被引量：12
7
作者 张中林 陈曦 +1 位作者 钱凯先 沈桂芳 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第9期947-951,共5页
将Ｂｔ ＣｒｙＩＡ（ｃ） 基因与水稻（ Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．） 叶绿体ｐｓｂＡ 基因的启动子和终止子构建成表达盒，连同烟草（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ Ｌ．） 叶绿体基因组同源片段ｒｐｌ２＿ｔｒｎＨ＿ｐｓｂＡ... 将Ｂｔ ＣｒｙＩＡ（ｃ） 基因与水稻（ Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．） 叶绿体ｐｓｂＡ 基因的启动子和终止子构建成表达盒，连同烟草（ Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ Ｌ．） 叶绿体基因组同源片段ｒｐｌ２＿ｔｒｎＨ＿ｐｓｂＡ和ｔｒｎＫ＿ＯＲＦ５０９Ａ 以及选择标记基因ａａｄＡ一起构建成烟草叶绿体转化载体ｐＴＲＳ８。基因枪法转化烟草叶片，经壮观霉素筛选获得转化再生植株。有些转基因植株对３龄棉铃虫（ Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ｚｅａ） 具有较强的毒杀作用，并能显著抑制昆虫蜕皮和生长发育。对高抗虫性植株的子一代（Ｔ１） 和子二代（Ｔ２） 进行的遗传学和分子生物学分析表明，Ｂｔ 基因已稳定地遗传给子代叶绿体。 展开更多
关键词 BT基因 叶绿体转化 抗虫作用 母系遗传 aadA基因
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烟草叶绿体转化载体的构建及转基因植株的获得 被引量：13
8
作者 邹竹荣 张中林 +2 位作者 山松 倪丕冲 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期410-415,共6页
选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植... 选择烟草叶绿体基因组同源片段rp12-trnH-psbA和trnK-ORF509A,及aadA抗壮观霉素基因,构建烟草叶绿体转化载体pTRZ。制备pTRZ DNA金粉子弹,通过基因枪轰击烟草幼苗叶片,经壮观霉素筛选获得了愈伤组织和转化再生植株。对烟草叶绿体转化植株进行PCR和Southern分析,结果证明其中No.13、16、23为整入了外源aadA的叶绿体转基因植株,同时其子代呈现壮观霉素抗性,aadA基因得到稳定遗传。 展开更多
关键词 烟草 叶绿体转化 载体 构建 转基因植株
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双价抗虫基因共转化烟草叶绿体的研究 被引量：11
9
作者 苏宁 杨波 +4 位作者 孟昆 李佚女 孙萌 孙丙耀 沈桂芳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期394-398,共5页
分别构建苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因 [BtCryIA(C) ]和水稻巯基蛋白酶基因 (Oryzacystatin ,OC)叶绿体转化载体 ,其中Bt基因叶绿体转化载体以烟草叶绿体基因trnH psbA trnK为同源片段 ,以水稻 (OryzasativaL .)叶绿体 psbA基因启动子... 分别构建苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因 [BtCryIA(C) ]和水稻巯基蛋白酶基因 (Oryzacystatin ,OC)叶绿体转化载体 ,其中Bt基因叶绿体转化载体以烟草叶绿体基因trnH psbA trnK为同源片段 ,以水稻 (OryzasativaL .)叶绿体 psbA基因启动子和终止子为调控基因 ;OC基因叶绿体表达载体以烟草叶绿体基因片段 psbA ORF5 12为同源片段 ,以烟草叶绿体 16S启动子和终止子为调控基因 ;两载体均以壮观霉素抗性基因 (aadA)为筛选基因。利用基因枪方法 ,共转化烟草叶片 ,获得壮观霉素抗性植株。经Southern、Western检测、表达蛋白活性测定证明 ,双价抗虫基因己整合到烟草叶绿体中并得到表达。转基因植株抗棉铃虫试验表明 。 展开更多
关键词 双价抗虫基因 共转化 OC基因 BT基因 叶绿体转化 抗虫作用 转基因烟草
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湖北麦冬、川麦冬及杭麦冬叶绿体基因组分析 被引量：9
10
作者 王梦涵 胡帅军 +2 位作者 杨楚虹 刘霞 徐江 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期182-191,共10页
目的:测定湖北麦冬、川麦冬及杭麦冬叶绿体基因组,分析其序列特征并完成特异性DNA条形码筛选。方法:通过高通量测序技术对湖北麦冬、川麦冬及杭麦冬叶绿体基因组进行测序、拼接及注释,利用生物信息学方法对叶绿体基因组结构特征及系统... 目的:测定湖北麦冬、川麦冬及杭麦冬叶绿体基因组,分析其序列特征并完成特异性DNA条形码筛选。方法:通过高通量测序技术对湖北麦冬、川麦冬及杭麦冬叶绿体基因组进行测序、拼接及注释,利用生物信息学方法对叶绿体基因组结构特征及系统发育进行分析。结果:湖北麦冬的叶绿体基因组全长155998 bp,鸟嘌呤与胞嘧啶(GC)总量37.7%,成功注释出85个蛋白编码基因,37个转运RNA(tRNA)基因和8个核糖体RNA(rRNA)基因,检测到274个简单重复序列(SSR),编码亮氨酸的密码子数量最多,编码色氨酸的密码子数量最少;川麦冬叶绿体基因组全长156078 bp,GC总量37.8%,成功注释出85个蛋白编码基因,37个tRNA基因和8个rRNA基因,检测到265个SSR,编码亮氨酸的密码子数量最多,编码色氨酸的密码子数量最少;杭麦冬叶绿体基因组全长156207 bp,GC总量37.7%,成功注释出85个蛋白编码基因,37个tRNA基因和8个rRNA基因,检测到274个SSR,编码亮氨酸的密码子数量最多,编码色氨酸的密码子数量最少。结论:系统发育树显示,与川麦冬相比,湖北麦冬与杭麦冬的亲缘关系更近。湖北麦冬、杭麦冬及川麦冬非编码区变异程度均大于编码区,叶绿体基因组可作为山麦冬属及沿阶草属植物物种鉴定的超级条形码。 展开更多
关键词 叶绿体 湖北麦冬 杭麦冬 川麦冬 叶绿体基因组 分子鉴定 叶绿体转化
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烟草叶绿体基因工程研究进展 被引量：10
11
作者 张剑锋 李阳 +5 位作者 金静静 陈千思 谢小东 王中 罗朝鹏 杨军 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第6期88-98,共11页
叶绿体基因工程通过同源重组实现定点整合,与细胞核基因工程相比,使外源基因的表达更为高效和安全。叶绿体基因工程在模式植物烟草中的研究最为广泛。为此,总结了近年来烟草叶绿体基因工程在提高光合效率、抗性和品质等方面的研究进展,... 叶绿体基因工程通过同源重组实现定点整合,与细胞核基因工程相比,使外源基因的表达更为高效和安全。叶绿体基因工程在模式植物烟草中的研究最为广泛。为此,总结了近年来烟草叶绿体基因工程在提高光合效率、抗性和品质等方面的研究进展,同时对利用该技术在生物反应器中生产生物质酶、次生代谢产物、疫苗和药用蛋白等方面进行了综述。在此基础上,对叶绿体基因工程的研究和应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 烟草 叶绿体转化 遗传改良 生物反应器
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棉花叶绿体基因组的研究进展 被引量：8
12
作者 江媛 俞嘉宁 +2 位作者 姚艳玲 宋美珍 范术丽 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期495-500,共6页
近年来,随着分子生物学技术的应用与发展,对棉花叶绿体基因组也有了新认识。本文概述了棉花叶绿体基因组的研究进展,从棉花叶绿体基因组的图谱、功能基因的克隆及研究、叶绿体RNA编辑以及叶绿体转化等方面进行了介绍和评述,并对其在基... 近年来,随着分子生物学技术的应用与发展,对棉花叶绿体基因组也有了新认识。本文概述了棉花叶绿体基因组的研究进展,从棉花叶绿体基因组的图谱、功能基因的克隆及研究、叶绿体RNA编辑以及叶绿体转化等方面进行了介绍和评述,并对其在基础研究与应用研究中的前景进行了展望。 展开更多
关键词 棉花 叶绿体基因组 RNA编辑 叶绿体转化
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植物防范转基因逃逸的分子策略 被引量：6
13
作者 贾婕 张金凤 +1 位作者 王斌 张登荣 《中国农学通报》 CSCD 2008年第4期390-393,共4页
转基因植物的外源基因可以通过花粉、种子、分泌物等方式释放到环境中去,会造成潜在的生态风险。因此如何防范转基因的逃逸,成为人们所关注的重点。综述了几种防范转基因逃逸的分子策略:叶绿体转化法、雄性不育法、终止子技术、染色体... 转基因植物的外源基因可以通过花粉、种子、分泌物等方式释放到环境中去,会造成潜在的生态风险。因此如何防范转基因的逃逸,成为人们所关注的重点。综述了几种防范转基因逃逸的分子策略:叶绿体转化法、雄性不育法、终止子技术、染色体组特异性选择、外源基因删除法,分析了这几种方法的优势及存在的问题,并对将来如何更好地防范植物转基因逃逸提出了一些建设性的对策及建议。 展开更多
关键词 转基因逃逸 叶绿体转化 雄性不育 终止子 外源基因删除
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Bt基因甜菜叶绿体转化载体构建及毒蛋白表达 被引量：6
14
作者 崔杰 杨谦 徐德昌 《细胞生物学杂志》 CSCD 2006年第3期486-490,共5页
利用植物叶绿体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草、菠菜、水稻叶绿体基因组全序列资料设计合成引物,PCR扩增并克隆了甜菜叶绿体两个重要功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为DQ067450和DQ067451),并以其作为定点整合外源基因... 利用植物叶绿体基因组在进化中高度保守的特点,根据烟草、菠菜、水稻叶绿体基因组全序列资料设计合成引物,PCR扩增并克隆了甜菜叶绿体两个重要功能基因rbcL和atpB(GenBank登录号分别为DQ067450和DQ067451),并以其作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了Bt基因CryIAc甜菜叶绿体定点转化载体pSKARBt,酶切鉴定表明:所构建载体符合预期设计。对克隆菌菌体总蛋白进行了生物杀虫试验,结果表明:Bt基因CryIAc能够在叶绿体特异性启动子及终止子的调控下表达,并对二龄末甘蓝夜蛾有很强的毒杀作用。该载体构建对培育甜菜高抗虫品种具有重要应用价值。叶绿体转化及后续工作正在进行中。 展开更多
关键词 BT基因 甜菜 叶绿体转化 载体构建 杀虫试验
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甜菜(Beta vulgaris L.)叶绿体转化体系建立及抗虫和抗除草剂植株的获得 被引量：7
15
作者 崔杰 李滨胜 +1 位作者 杨谦 程大友 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1437-1443,共7页
为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系,利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因Btcry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar,以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段,以甜菜叶绿体... 为建立外源基因甜菜叶绿体转化体系,利用分子生物学方法构建了包含有编码苏云金芽孢杆菌晶体蛋白基因Btcry1Ac和编码膦丝菌素乙酰转移酶基因bar的甜菜叶绿体转化载体pSKARBt/bar,以甜菜叶绿体基因组中atpB/rbcL做同源片段,以甜菜叶绿体16S启动子和终止子为调控基因,以bar基因为筛选标记基因.基因枪法转化甜菜叶柄,经筛选获得抗性转基因植株.对转基因植株进行外源基因Btcry1Ac和bar的PCR检测、DNA印迹分析,结果表明:外源基因Btcry1Ac和bar确已导入到甜菜叶绿体基因组中.转基因植株除草剂抗性鉴定及其离体叶片虫试鉴定结果表明:转基因植株具有较强的杀虫活性和抗除草剂特性,表达了相应的蛋白质.研究结果还表明:bar基因在植物叶绿体转化中,既可以用作抗性基因,又可用作转化体筛选的标记基因.建立了甜菜叶绿体转化体系. 展开更多
关键词 甜菜 叶绿体转化 成基因 BAR基因 同质化
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通过叶绿体基因工程在烟草中合成中长链羟基脂肪酸聚酯 被引量：3
16
作者 王玉华 张秀海 +4 位作者 吴忠义 杨清 陈国强 吴琼 黄丛林 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第10期979-986,共8页
中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯.PHA合酶(PHAsynthase,由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acylcarrierprotein-coenzymeAtransferase,由phaG基因编码)是mcl-P... 中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯.PHA合酶(PHAsynthase,由phaC基因编码)和3-羟酰基-酰基转移蛋白-辅酶A转移酶(3-hydroxyacyl-acylcarrierprotein-coenzymeAtransferase,由phaG基因编码)是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶.以aadA(氨基糖苷-3′-磷酸转移酶)基因做筛选标记,分别构建了含phaC2基因的单价叶绿体转化表达载体pTC2以及同时嵌合phaC和phaG基因的双价叶绿体转化表达载体pTGC.通过PDS1000/He基因枪转化法转化烟草,获得具有壮观霉素抗性的叶绿体型转基因烟草植株,PCR和SouthernBlot结果表明,外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中且基本达到同质化.气相色谱法检测转基因株系中的mcl-PHAs含量最高达4.8mg/g干重,合成的PHAs单体主要成分为3-羟基辛酸(3-hydroxyoctanoate,3-HO)和3-羟基癸酸(3-dydroxydecanoate,3-HD).透射电子显微镜观察到转基因烟草叶片叶绿体中确有PHAs颗粒累积. 展开更多
关键词 羟基脂肪酸 叶绿体基因工程 长链 Southern 转基因烟草植株 电子显微镜观察 叶绿体转化 生物合成途径 基因枪转化法 叶绿体基因组 基因编码 表达载体 PHAs 微生物聚酯 磷酸转移酶 气相色谱法 叶片叶绿体 筛选标记 氨基糖苷
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猪瘟病毒E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点整合载体的构建 被引量：7
17
作者 杨宗岐 李轶女 +2 位作者 张志芳 王勇 沈桂芳 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2648-2654,共7页
【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同... 【目的】构建猪瘟病毒主要抗原E2基因在百脉根叶绿体基因组中定点转化载体,为百脉根叶绿体的转化及用叶绿体生产动物可直接食用疫苗奠定基础。【方法】通过用BLAST、DNAMAN等分子生物学分析软件对百脉根叶绿体基因组序列进行分析选定同源重组片段,采用PCR、分子克隆技术进行载体构建和鉴定。【结果】在百脉根叶绿体基因组中选择合适的外源基因整合位点,设计引物用PCR扩增叶绿体同源片段,将同源片段克隆后,构建百脉根特异的叶绿体转化载体;构建的百脉根叶绿体定点转化载体pAKE2以扩增的1.35kbpsbA和1.5kbtrnK两段相邻叶绿体DNA为定点整合外源基因的同源重组片段,包含以叶绿体基因特异强启动子Prrn和终止子TpsbA为调控序列的E2基因表达盒和aadA壮观霉素抗性基因表达盒。【结论】经PCR和酶切验证,所构建的转化载体符合预期设计。叶绿体转化及后续工作目前正在进行之中。 展开更多
关键词 猪瘟病毒E2基因 叶绿体转化 同源重组 定点整合 百脉根
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叶绿体转化体系研究进展 被引量：6
18
作者 王金辉 李轶女 +3 位作者 倪丕冲 王国增 张志芳 沈桂芳 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-6,共6页
叶绿体转化具有表达效率高,安全性高,遗传稳定,以及多基因可以同时转化等特点。真核或原核的外源基因都能在叶绿体中进行成功表达,至少有20种植物成功的进行了叶绿体转化。叶绿体作为生物反应器具有广阔的应用前景。
关键词 叶绿体转化 物种 叶绿体 生物反应器
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叶绿体基因工程的研究进展 被引量：6
19
作者 桂腾琴 孙敏 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第8期3429-3431,3434,共4页
介绍了叶绿体基因工程的特点、叶绿体转化方法、转化中存在的问题及解决策略以及前景展望等,重点阐述了叶绿体基因工程的研究新进展。
关键词 叶绿体基因工程 叶绿体转化 同质化
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烟草分子农业的研究进展与应用前景 被引量：5
20
作者 黎定军 周清明 罗宽 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期171-174,共4页
烟草由于具有易于遗传工程操作、绿叶面积大、生长期短的独特优点,被广泛用于植物分子农业的基础研究和应用研究.至今,已有多种医用蛋白质,如单克隆抗体、疫苗、人体外激素等通过转基因烟草生产出来,其临床应用及大田栽培试验正在进行.... 烟草由于具有易于遗传工程操作、绿叶面积大、生长期短的独特优点,被广泛用于植物分子农业的基础研究和应用研究.至今,已有多种医用蛋白质,如单克隆抗体、疫苗、人体外激素等通过转基因烟草生产出来,其临床应用及大田栽培试验正在进行.烟草叶绿体转化系统的进一步完善为植物分子农业最终解决转基因产品产量低及花粉造成基因漂移或逃逸等问题提供了一条切实可行的途径.虽然烟草分子农业目前还存在一些有待解决的问题,但其在新世纪的开发应用前景无疑是广阔的. 展开更多
关键词 烟草 分子农业 医用蛋白质 叶绿体转化 应用 药用价值
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