基于受体配体结合技术研究酸枣仁镇静催眠活性成分 被引量：14

1

作者 李佳虹 唐旗羚 +11 位作者 郭纪全 王其友 祝曙光 王有娣 杨晨 高思远 刘金泳 高瑞萍 王军业 叶晓琼 潘雪刁 臧林泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期508-513,共6页

目的利用受体配体结合法探索酸枣仁中镇静催眠的活性成分,以及该成分的镇静催眠作用机制与苯二氮卓受体的关系。方法首先,对酸枣仁中的化学成分进行乙醇粗提;其次,制备Wistar大鼠脑组织匀浆液;根据受体-配体结合原理,采用体外饱和分子... 目的利用受体配体结合法探索酸枣仁中镇静催眠的活性成分,以及该成分的镇静催眠作用机制与苯二氮卓受体的关系。方法首先,对酸枣仁中的化学成分进行乙醇粗提;其次,制备Wistar大鼠脑组织匀浆液;根据受体-配体结合原理,采用体外饱和分子竞争的方法,利用高浓度的地西泮作为阳性竞争药,竞争低浓度的酸枣仁中可与脑组织中苯二氮卓受体结合的配体化合物;收集这些镇静催眠有效化合物,利用HPLC和LC-MS方法对酸枣仁与脑组织孵育提取化合物、地西泮与脑组织孵育提取化合物、地西泮+酸枣仁与脑组织孵育提取化合物进行谱图表征差异性分析鉴定,以确认被地西泮竞争置换出的酸枣仁中的有效镇静催眠化合物。结果 HPLC检测结果显示,与地西泮组、酸枣仁+地西泮组对比,酸枣仁作用组在出峰时间2.71min和46.87min处出现特殊峰。LC-MS检测结果表明,酸枣仁中与苯二氮卓受体结合的配体化合物分别为274.28 m/z、453.34 m/z、496.34 m/z和608.38 m/z,根据酸枣仁指纹图谱的比对这些化合物可能是脂肪酸类物质和三萜类化合物。结论利用受体配体结合技术的原理,结合HPLC和HPLC-MS分析技术研究酸枣仁中镇静催眠活性成分,实验结果发现,酸枣仁中镇静催眠的活性成分可能是脂肪酸类物质棕榈酸(palmitic acid,C_(16)H_(32)O_2)、三萜类化合物麦珠子酸(alphitolic acid,C_(30)H_(48)O_4)和斯皮诺素(spinosin,C_(28)H_(32)O_(15)),这3种化合物由于与地西泮竞争结合苯二氮卓受体,可能具有类似的镇静催眠作用,这为进一步开发新型镇静催眠药奠定了理论基础。 展开更多

关键词 酸枣仁 受体配体结合 苯二氮卓受体 地西泮 镇静催眠 作用机制

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基于受体配体-HPLC-MS联用技术筛选五味子镇静催眠成分方法学的研究 被引量：4

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作者 王有娣 杨圆圆 +3 位作者 李佳虹 高思远 杨晨 臧林泉 《广东药学院学报》 CAS 2016年第1期14-18,共5页

目的建立基于受体配体结合竞争试验和HPLC-MS分析技术联用初步确认五味子镇静催眠成分的方法学,为快速高效地分析五味子镇静催眠活性有效成分并确认作用靶标奠定方法学基础,也为简便迅速地研究中药中有效物质基础和作用机理提供新的研... 目的建立基于受体配体结合竞争试验和HPLC-MS分析技术联用初步确认五味子镇静催眠成分的方法学,为快速高效地分析五味子镇静催眠活性有效成分并确认作用靶标奠定方法学基础,也为简便迅速地研究中药中有效物质基础和作用机理提供新的研究思路和方法。方法运用受体配体结合原理,先制备大鼠脑组织中包含GABA(γ-氨基丁酸)受体的蛋白质提取物,构建供药物与GABA受体结合的体外模型,采用已知具有通过结合GABA受体发挥镇静催眠作用的地西泮,与五味子竞争性结合同一受体成分GABA的方法,用地西泮竞争置换出结合GABA受体的五味子中单体成分,通过HPLC-MS分析表征,鉴定结合GABA受体的五味子成分,再通过检索文献确认该成分是否具有镇静催眠活性的作用。结果利用受体配体结合技术和HPLC-MS联用技术成功建立了快速筛选单味中药中结合已知药靶成分的方法。利用该方法研究五味子中镇静催眠活性有效成分,通过模型药地西泮与五味子提取液竞争结合脑组织中的GABA受体,结合HPLC-MS检测分析结果,初步筛选出五味子中结合GABA受体的成分可能为五味子甲素(分子式:C24H32O6,相对分子质量:416.51),对比文献结果提示五味子甲素为五味子产生镇静催眠作用的有效成分。结论初步建立了基于受体配体结合-HPLC-MS联用技术筛选单味/复方中药中有效成分的方法学,同时利用该方法初步分析出了五味子中结合GABA受体的成分为五味子甲素。 展开更多

关键词 受体配体结合 HPLC-MS 五味子 有效成分 方法学

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新型核素报告基因系统hERL／核素标记雌二醇的实验研究 被引量：5

3

作者 兰晓莉 覃春霞 +4 位作者 田月丽 夏晓天 何勇 袁辉 张永学 《中华核医学与分子影像杂志》 CSCD 北大核心 2012年第1期10-15,共6页

目的在体外细胞摄取实验及在体显像基础上，评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域（hERL）／核素标记雌二醇（E2）应用的可行性，为其用于基因治疗的监测提供依据。方法以内部核糖体进入位点序列（IRES）方式构建携带hERL和治疗VEGF... 目的在体外细胞摄取实验及在体显像基础上，评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域（hERL）／核素标记雌二醇（E2）应用的可行性，为其用于基因治疗的监测提供依据。方法以内部核糖体进入位点序列（IRES）方式构建携带hERL和治疗VEGF165的重组质粒pDC316-hERL-IRES．VEGF165（简写为EIV），将其用腺病毒包装构建重组腺病毒复合体（Ad-EIV）。采用悬浮贴壁法从sD大鼠股骨和胫骨原代提取骨髓MSCs并培养。将Ad-EIV和脂质体2000包裹重组质粒（Lipo-EIV）分别转染MSCs，利用RT-PCR和Westernblot，对hERL和VEGF165mRNA和蛋白质水平的表达分别进行检测。测定Ad．EIV组、Lipo．EIV组和未转染组MSCs对125I-E在不同时间（1、3,6、9、12和24h）的摄取率。将转染Ad-EIV的MSCs注射至大鼠左前肢、未转染MSCs注射至右前肢后1d，注射16a-^18TMF-17a-E2（^18F-FES）进行micro PET／CT活体显像。2组间均数比较采用t检验，相关性研究采用Pearson相关分析。结果Ad—EIV转染MSCs后RT—PCR检测示hERL和VEGFl65mRNA的表达随着感染滴度的增加而增加，且呈正相关（r2分别为0．953和0．966，P均〈0．05）；感染复数（MOI）=25、50、75和100时，其mRNA表达高于Lipo-EIV组。Westernblot检测蛋白质水平的表达也得到同样的结果。Ad-EIV组和Lipo-EIV组MSCs对^125I-E2的摄取率均随时间延长逐渐增高，24h最高，分别达到（10．94±0．30）％和（8．934-0．18）％；各个时间点2种载体转染组均明显高于未转染对照组（3．54％-5．52％；t值分别为15．489-26．560、10．523-24．204，P均〈0．05），而Ad-EIV组摄取率高于Lipo-EIV组（t=g．132—16．168，P均〈0．05）。MicroPET／CT大鼠活体显像显示注射Ad-EIV转染的MSCs之左前肢放射性浓聚明显高于对侧。结论报告基因hERL可以通过腺病毒转染、脂质体包裹等多种形式转染细胞并成功表达，应用核素标记E2可以对其� 展开更多

关键词 基因 报告 雌激素受体配体结合域 放射性核素显像 雌二醇 同位素标记 大鼠

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酸枣仁提取物配柴胡提取物组方促进动物身高增高及机制研究 被引量：3

4

作者 吴晓龙 谢艳 +2 位作者 刘晓红 宁桃丽 殷娜 《药品评价》 CAS 2019年第16期1-3,共3页

目的:研究酸枣仁提取物配柴胡提取物组方(以下简称酸柴提取物)促进小鼠增高的作用及机制。方法:通过给予小鼠酸柴提取物,观察药物对发育期小鼠体长增长、生长激素分泌、5-羟色胺受体配体结合活性的影响;同时给予大鼠酸柴提取物,检测对... 目的:研究酸枣仁提取物配柴胡提取物组方(以下简称酸柴提取物)促进小鼠增高的作用及机制。方法:通过给予小鼠酸柴提取物,观察药物对发育期小鼠体长增长、生长激素分泌、5-羟色胺受体配体结合活性的影响;同时给予大鼠酸柴提取物,检测对慢波睡眠的影响。结果:灌胃20d后,酸柴提取物明显促进发育期小鼠体长增长,且显著提高小鼠脑组织5-羟色胺受体配体结合活性及体内生长激素的分泌,与空白组比较差异有显著性统计学意义(P<0.01);酸柴提取物可使大鼠慢波睡眠延长,与空白对照组比较差异有显著性统计学意义(P<0.01)。结论:酸柴提取物具有促进动物体长增长的作用,其机制是酸柴提取物通过提高脑组织5-羟色胺受体配体结合活性,延长慢波睡眠时长,进而促进生长激素的分泌。 展开更多

关键词 酸柴提取物 慢波睡眠 生长激素 骨骼增高 5-羟色胺受体配体结合活性

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芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT_(1,2)受体的结合实验

5

作者 董文心 倪湘莲 顾丰华 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期871-874,共4页

目的:研究芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT1和5-HT2受体体外是否有结合作用。方法:5-HT1受体取材于大鼠大脑皮质,5-HT2受体取材于大鼠海马。采用受体-配体结合测定法测定10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2对5-HT1,5-HT2受体的最大... 目的:研究芳烷酮哌嗪类化合物SCP-1和SCP-2与5-HT1和5-HT2受体体外是否有结合作用。方法:5-HT1受体取材于大鼠大脑皮质,5-HT2受体取材于大鼠海马。采用受体-配体结合测定法测定10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2对5-HT1,5-HT2受体的最大结合率、半数抑制浓度(IC50)和Hill系数。结果:10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的最大结合率分别为75％和63％。SCP-1和SCP-2与5-HT1受体结合的IC50分别为1．584和5．495μmol·L-1,二者与5-HT1受体结合的Hill系数分别为0．98和1．02。10-3mol·L-1的SCP-1和SCP-2与5-HT2受体的最大结合率分别为92％和87％。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体结合的IC50分别为1．0和2．512μmol·L-1,二者与5-HT2受体结合的Hill系数分别为0．86和0．88。结论:SCP-1和SCP-2与5-HT1受体的结合方式是与单一受体位点结合,并且这种结合服从质量作用定律(Hill系数接近于1)。SCP-1和SCP-2与5-HT2受体呈现不规则性结合,也可能有负相互作用或多种结合位点(Hill系数偏离1)。 展开更多

关键词 芳烷酮哌嗪类化合物SCP 5-HT1受体 5-HT2受体 受体配体结合实验 Hill系数

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MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建

6

作者 任雪 程谟斌 +1 位作者 张业 沈珝琲 《医学研究杂志》 2014年第10期29-32,共4页

目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白... 目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。 展开更多

关键词 人乳腺表皮细胞 雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白 他莫西芬 细胞转化

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实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内咪唑啉受体密度变化初步观察 被引量：4

7

作者 殷为勇 郑荣远 +4 位作者 朱振国 邱伟文 潘建春 李云峰 高燕 《温州医学院学报》 CAS 2006年第6期510-512,共3页

目的:探讨咪唑啉2受体(I2R)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:采用放射性受体-配体饱和实验,以[3H]idazoxan标记I2R,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化。结果:EAE大鼠脑组织的I2R受体密度上调74.5%(n=3,P<0.05... 目的:探讨咪唑啉2受体(I2R)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:采用放射性受体-配体饱和实验,以[3H]idazoxan标记I2R,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化。结果:EAE大鼠脑组织的I2R受体密度上调74.5%(n=3,P<0.05),I2R亲和力与对照组相比无统计学差异。结论:I2R在EAE大鼠脑组织中受体密度上调,可能与EAE发病有联系。 展开更多

关键词 实验性自身免疫性脑脊髓炎 咪唑啉2受体 受体-配体结合实验

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左旋咪唑对大鼠脑组织咪唑啉2受体-配体结合试验的影响 被引量：2

8

作者 殷为勇 郑荣远 +4 位作者 陈国钱 韩钊 潘建春 李云峰 陈洪霞 《中国临床药学杂志》 CAS 2007年第6期338-340,共3页

目的研究左旋咪唑(LMS)对大鼠脑组织咪唑啉2受体(I_2R)的影响。方法采用受体-配体竞争结合试验,观察LMS与受体的结合能力;采用受体-配体饱和试验,测定LMS处理大鼠和对照组大鼠脑内I_2R最大受体结合容量(B_(max))和平衡解离常数(K_d)变... 目的研究左旋咪唑(LMS)对大鼠脑组织咪唑啉2受体(I_2R)的影响。方法采用受体-配体竞争结合试验,观察LMS与受体的结合能力;采用受体-配体饱和试验,测定LMS处理大鼠和对照组大鼠脑内I_2R最大受体结合容量(B_(max))和平衡解离常数(K_d)变化。结果LMS抑制了放射性配基[~3H]idazoxan与大鼠脑组织内I_2R的结合,其半数抑制浓度(IC_(50))为4.04×10^(-7)mol·L^(-1)。LMS长期处理大鼠,脑内I_2R亲和力上调63%。结论LMS能与I_2R结合,长期应用LMS能通过刺激I_2R而改变了受体亲和力。 展开更多

关键词 左旋咪唑 咪唑啉2受体 受体-配体结合

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G蛋白偶联受体配体结合分析技术 被引量：2

9

作者 张君 金亚 +1 位作者 叶燕锐 谭文 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-7,共7页

G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)是迄今发现的最大的多药物靶点的受体超家族,其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病,在药物研发中扮演重要角色。测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不... G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)是迄今发现的最大的多药物靶点的受体超家族,其激动剂或拮抗剂常被用于治疗各种疾病,在药物研发中扮演重要角色。测定配体与受体亲和力的结合实验是药物评价、研发和作用机理研究中不可缺少的部分。用于研究GPCRs与其配体结合的分析技术,可以按照标记方式的异同分为三类:同位素标记法、非同位素标记法和非标记法。非同位素标记法多采用荧光配体标记,利用竞争法或荧光共振能量转移直接获知结合情况;非标记法中利用各种生物传感器,通过检测配体结合受体后胞内分子运动引起的电信号或光信号的变化来表征结合情况。此外,质谱也已被用于受体-配体平衡解离常数的测定,显示了其在非标记结合分析及受体功能研究中的潜力。本文归纳了目前用于GPCRs结合分析的主要技术,对其原理及优缺点进行了综述,并对受体-配体结合分析中新方法的应用进行了展望。 展开更多

关键词 G蛋白偶联受体 受体-配体结合分析 多药物靶点 同位素标记法 非标记法 生物传感器 质谱

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小肽信号在植物双受精过程中的作用 被引量：1

10

作者 瞿礼嘉 《中国基础科学》 2016年第1期41-46,共6页

可移动的信号分子对于植物的细胞之间、组织之间、器官之间以及植株与环境之间的交流非常重要。过去十几年的研究表明,作为一类信号分子,小肽在植物的干细胞维持、自交不亲和识别、气孔细胞的发育等重要生物学过程中起关键性作用。植物... 可移动的信号分子对于植物的细胞之间、组织之间、器官之间以及植株与环境之间的交流非常重要。过去十几年的研究表明,作为一类信号分子,小肽在植物的干细胞维持、自交不亲和识别、气孔细胞的发育等重要生物学过程中起关键性作用。植物的小肽有很多种类,数量庞大,但我们对于绝大多数小肽参与什么生物学过程的调控以及它们的受体是什么均所知甚少。本文将侧重于综述目前有关小肽信号及其受体参与植物双受精过程的国内外进展,提出未来的研究方向,为彻底解析和阐明小肽信号在植物双受精中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 植物 小肽信号 双受精 受体-配体结合

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CHO细胞表达人源μ型阿片受体及其活性分析 被引量：1

11

作者 刘威 段海清 +2 位作者 李淑琴 刘秀丽 张兆山 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期463-466,共4页

μ型阿片受体在阿片类药物镇痛与成瘾中发挥重要作用 .从人脑组织总RNA通过一次反转录和两次PCR法扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1 (+)中 ,转染CHO细胞后 ,筛选单克隆细胞株并制备膜受体 ,检测重组细胞株表达的 μ型... μ型阿片受体在阿片类药物镇痛与成瘾中发挥重要作用 .从人脑组织总RNA通过一次反转录和两次PCR法扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1 (+)中 ,转染CHO细胞后 ,筛选单克隆细胞株并制备膜受体 ,检测重组细胞株表达的 μ型阿片受体与特异性配体的结合能力 .通过饱和性结合和竞争性结合试验证实 ,重组细胞株表达的 μ型阿片受体与天然的 μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性 。 展开更多

关键词 μ型阿片受体 受体与配体结合 活性分析

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人源μ型阿片受体的cDNA克隆及转染CHO细胞的活性分析

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作者 刘威 段海清 +2 位作者 李淑琴 刘秀丽 张兆山 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期372-376,共5页

μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础。从人脑组织总RNA通过RT PCR扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1(+)中 ,用酶切鉴定正确的重组质粒转染CHO细胞。筛选的单克隆细胞株 ,检测阳性的细胞克隆表达的 μ型阿片... μ型阿片受体是阿片类药物镇痛与成瘾的分子基础。从人脑组织总RNA通过RT PCR扩增获得 μ型阿片受体的cDNA ,将其克隆至pcDNA3 1(+)中 ,用酶切鉴定正确的重组质粒转染CHO细胞。筛选的单克隆细胞株 ,检测阳性的细胞克隆表达的 μ型阿片受体介导胞内信号转导的能力。通过与激动剂和拮抗剂的信号转导分析证实 ,阳性的细胞克隆表达的 μ型阿片受体与天然的 μ型阿片受体具有基本一致的生物学特性 ,因此可以用来作为高效镇痛低成瘾药物筛选平台的候选细胞株。 展开更多

关键词 Μ型阿片受体 信号转导 受体-配体结合

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血小板活化因子拮抗剂研究通过鉴定

13

《医学信息》 1997年第3期4-4,共1页

血小板活化因子拮抗剂研究通过鉴定据有关方面信息，由山东医科大学附属医院血液病研究室承担的血小板活化因子拮抗剂ＡＰ９２１的研究，最近通过鉴定。该研究在筛选３０余种中药后发现ＡＰ９２１在体内外均具有显著抑制血小板活化因... 血小板活化因子拮抗剂研究通过鉴定据有关方面信息，由山东医科大学附属医院血液病研究室承担的血小板活化因子拮抗剂ＡＰ９２１的研究，最近通过鉴定。该研究在筛选３０余种中药后发现ＡＰ９２１在体内外均具有显著抑制血小板活化因子（ＰＡＦ）诱导的血小板聚集作用，对... 展开更多

关键词 血小板活化因子 受体拮抗剂 血小板聚集性 脑血栓形成 血小板释放功能 缺血性心脏病 血管性血友病 活化血小板 受体配体结合 分离纯化

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癫痫持续状态大鼠模型的GABAA受体亚单位α1的mRNA表达及[^3H]Flunitrazepam受体配体结合的变化 被引量：2

14

作者 陆钦池 苗玲 蔡琰 《脑与神经疾病杂志》 2001年第3期133-136,共4页

目的 :本实验研究大鼠癫痫持续状态动物模型的海马等部位 GABAA受体α1亚单位基因表达和受体一配体结合的变化。方法 :成年雄性大鼠经腹腔内注射 32 0～ 34 0± 5 .87毫克 /公斤毛果芸香碱 (Pilocarpine)以制成癫痫持续状态动物模... 目的 :本实验研究大鼠癫痫持续状态动物模型的海马等部位 GABAA受体α1亚单位基因表达和受体一配体结合的变化。方法 :成年雄性大鼠经腹腔内注射 32 0～ 34 0± 5 .87毫克 /公斤毛果芸香碱 (Pilocarpine)以制成癫痫持续状态动物模型 ,能在癫痫持续状态 (定义为在皮质脑电图上显示痫性放电的至少 40分钟的持续性痫性发作 )下存活的大鼠在 1小时和 2小时后处于死 ,分别研究 GABA受体基因表达和放射结合位点 ,用原位杂交方法来测定脑部 m RNA水平 ,用 [3H]flunirazepam标记 GABAA 受体 benzodiazepam结合位点。结果 :动物痫性发作 2小时后海马的 CA1和CA3区域 GABAA受体 α1亚单位 m RNA显著下降 ,但是齿状回的 α1m RNA没有变化。 [3H]flunirazepam标记受体 -配体放射结合在持续 2小时持续痫性发作后可见海马的 CA1及 CA3和齿状回中均见下降 ,1小时的持续痫性发作尚未引起海马区域的任何α1m RNA或 [3H]flunirazepam受体 -配体放射结合的任何改变 ,并用结晶染色 1及 2小时后的大脑海马部位。结论 :本研究结果提示大鼠的癫痫持续状态可诱发海马区 GABAA 受体 α1基因表达的改变和 [3H]flinirazepam受体 -配体结合的下降 。 展开更多

关键词 癫痫持续状态 GABAA受体 α1亚单位 [^3H]flunitrazepam受体-配体结合

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糖皮质激素受体水平在白血病、肾病治疗中临床意义的探讨 被引量：2

15

作者 张超 刘德宜 +2 位作者 王浩丹 侯桂华 李曙光 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2003年第5期506-507,510,共3页

目的:探讨糖皮质激素受体(GCR)水平高低对急性淋巴性白血病(ALL)、肾病综合征(NS)疗效的影响。方法:采用受体放射配体结合技术测定ALL、NS和对照组外周血淋巴细胞糖皮质激素高亲和力受体GCRH和低亲和力受体GCRL位点数,分析GCR与疗效之... 目的:探讨糖皮质激素受体(GCR)水平高低对急性淋巴性白血病(ALL)、肾病综合征(NS)疗效的影响。方法:采用受体放射配体结合技术测定ALL、NS和对照组外周血淋巴细胞糖皮质激素高亲和力受体GCRH和低亲和力受体GCRL位点数,分析GCR与疗效之间的关系;并通过动物实验观察中药小柴胡汤对应用糖皮质激素所产生的GCR“降调节”效应的影响。结果:疗前GCRH>4000位点/细胞的ALL患者对激素联合化疗疗效好,化疗后GCRH明显降调,但GCRL治疗前后无明显变化。NS患者疗前GCRH>6000位点/细胞,则对GC疗效好,当GCRH<3000位点/细胞,则GC治疗无效。SD大白鼠实验表明,小柴胡汤具有显著的调控GCR水平作用。结论:对ALL患者和NS患者治疗前检测GCR水平,有助于制定个体化的治疗措施。 展开更多

关键词 受体 糖皮质激素 受体放射配体结合分析法 白血病 肾病综合征 小柴胡汤 大鼠 近交系

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梗阻性黄疸大鼠肝脏GHR最大结合容量及结合力的改变 被引量：1

16

作者 别平 刘冰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1318-1320,共3页

目的　研究梗阻性黄疸大鼠肝脏生长激素受体 (GHR)表达及结合力的改变。方法　采用受体放射配体结合分析(RBA)技术检测肝脏GHR的最大结合容量和解离常数 ,并与血清总胆红素、前白蛋白、肿瘤坏死因子 α作相关分析。结果　梗阻性黄疸大... 目的　研究梗阻性黄疸大鼠肝脏生长激素受体 (GHR)表达及结合力的改变。方法　采用受体放射配体结合分析(RBA)技术检测肝脏GHR的最大结合容量和解离常数 ,并与血清总胆红素、前白蛋白、肿瘤坏死因子 α作相关分析。结果　梗阻性黄疸大鼠肝脏GHR最大结合容量 (Bmax)明显下降 ,解离常数 (kd)明显增加。Bmax值与血清前白蛋白水平呈正相关 ,与血清总胆红素、肝组织匀浆肿瘤坏死因子 α水平呈明显负相关 ;而kd 值与血清前白蛋白呈负相关 ,与血清总胆红素、肝组织匀浆肿瘤坏死因子 α水平呈明显正相关。结论　梗阻性黄疸大鼠GHR的最大结合容量和结合能力均明显降低 ,可能与梗阻时TNF α等炎症因子的高表达、肝细胞胆盐蓄积等有关。GHR容量和结合能力的降低 ,可显著下调肝脏蛋白合成 ,并且可加重肠粘膜屏障的损伤 ,促进内毒素的吸收、TNF α等炎症因子的释放。因此GHR的最大结合容量及结合力的降低是梗阻性黄疸时病理生理改变的重要环节。 展开更多

关键词 梗阻性黄疸 生长激素受体 结合容量 结合力 受体放射配体结合分析技术

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电针对过敏性哮喘豚鼠肺组织β受体的影响

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作者 赖新生 徐敏 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第S1期107-108,376-377,共4页

采用放射配基(~3H-DHA)结合分析法,测定过敏性哮喘模型组、模型加电针治疗组及正常对照组豚鼠肺组织中β受体的最大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd)。结果表明:(1)对照组、模型组 Bmax 比较,P【0.05;电针组 Bmax 与前两组比较,P】0.05;(2)... 采用放射配基(~3H-DHA)结合分析法,测定过敏性哮喘模型组、模型加电针治疗组及正常对照组豚鼠肺组织中β受体的最大结合容量(Bmax)和亲和力(Kd)。结果表明:(1)对照组、模型组 Bmax 比较,P【0.05;电针组 Bmax 与前两组比较,P】0.05;(2)对照组、模型组和电针组 Kd 值3组比较,P】0.05。本研究提示电针对过敏性哮喘豚鼠肺组织β受体的含量减少及亲和力增高趋势有一定的调整作用。 展开更多

关键词 肺组织β受体 过敏性哮喘 放射配基结合分析法 受体配体最大结合容量 平衡解离常数

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铁蛋白受体放射配体结合分析法

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作者 刘玉峰 李丰益 +1 位作者 廖清奎 罗春华 《中国小儿血液》 CAS 1997年第2期70-72,共3页

本文采用差速离心法制备胎盘微绒毛膜，用125I－Hunter试剂联接标记铁蛋白，在国内首次建立了胎盘微绒毛膜铁蛋白受体放射配体分析法，并进行了最适反应条件及铁蛋白受体的特性研究。所标记的125I一铁蛋白放化纯达95％以上，且免疫活性... 本文采用差速离心法制备胎盘微绒毛膜，用125I－Hunter试剂联接标记铁蛋白，在国内首次建立了胎盘微绒毛膜铁蛋白受体放射配体分析法，并进行了最适反应条件及铁蛋白受体的特性研究。所标记的125I一铁蛋白放化纯达95％以上，且免疫活性和生物活性均较好。用放射配体受体分析测定了11例正常足月孕妇胎盘微绒毛膜铁蛋白受体数为（3．534土1．105）×1012位点／毫克膜蛋白，亲和力常数Ka为（2．203土0．622）×107mol-1．L。实验条件为：膜蛋白160ug，125I互铁蛋白与游离铁蛋白分离的PEG浓度为12％。对铁蛋白受体特性研究表明：铁蛋白受体与铁蛋白结合具有高度特异性、可饱和性和中度亲和力。 展开更多

关键词 胎盘微绒毛膜 铁蛋白受体 受体放射配体结合分析

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优化雌激素受体α蛋白的可溶性表达条件

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作者 路晓庆 白文启 +5 位作者 刘向荣 杨芮 张继萍 郭晋锋 陈晓霞 张桓虎 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1223-1225,共3页

目的构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体,优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体,estrogen receptor),选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498;http://n2t... 目的构建雌激素受体α配体结合域(ERα-LBD)表达载体,优化表达条件得到可溶性ERα-LBD蛋白。方法在Addgene网站检索关键词ESR(雌激素受体,estrogen receptor),选择符合条件的质粒载体pcDNA-HA-ER WT(Addgene plasmid # 49498;http://n2t.net/addgene:49498;RRID:Addgene49498),设计引物并扩增得到目的片段ERα-LBD,分别构建蛋白表达载体pET-28a-LBD和pGEX-4T1-LBD,改变诱导温度、异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间对表达条件优化。待细菌裂解并提取蛋白后进行凝胶电泳,可在细菌上清的泳道中观察到明显的紫色蛋白表达条带,即为可溶性ERα-LBD蛋白。结果 pET-28a-LBD重组质粒未能表达重组蛋白ERα-LBD,重组质粒pGEX-4T1-LBD在Rosetta和BL21(DE3)感受态中以1 mmol/L IPTG诱导仅能得到包涵体;以0.2 mmol/L IPTG 16 ℃过夜诱导培养,则可得到可溶性ERα-LBD蛋白。结论成功构建ERα-LBD表达载体并优化诱导表达条件,获得可溶性ERα-LBD蛋白。 展开更多

关键词 雌激素受体α配体结合域 重组表达载体 条件优化 可溶性表达

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hERα-LBD原核表达载体的构建及蛋白表达活性鉴定

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作者 王艳芳 赵继军 +1 位作者 田再民 郭彦峰 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期61-65,共5页

目的构建人雌激素受体α亚型配体结合区(hERα-LBD)的原核表达载体,并进行表达蛋白的活性鉴定。方法以hERα-LBD质粒为模板,采用PCR方法扩增hERα-LBD基因,PCR扩增产物鉴定后与T载体(pGEM-T-easy)连接,将连接物转化到感受态细胞中,阳性... 目的构建人雌激素受体α亚型配体结合区(hERα-LBD)的原核表达载体,并进行表达蛋白的活性鉴定。方法以hERα-LBD质粒为模板,采用PCR方法扩增hERα-LBD基因,PCR扩增产物鉴定后与T载体(pGEM-T-easy)连接,将连接物转化到感受态细胞中,阳性菌落经酶切和测序鉴定,和pET-28a(+)质粒分别进行双酶切,T4DNA连接酶连接,构建重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD,转化到大肠杆菌JM109和BL21感受态细胞中。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导细胞表达hERα-LBD融合蛋白;将雌二醇-牛血清白蛋白(BSA)偶联抗原(E2-BSA)与融合蛋白混合,通过电泳法鉴定hERα-LBD的雌激素配体结合活性。结果 PCR扩增的hERα-LBD基因片段约为1.9kb,与预期目的片段大小一致。与T载体连接,形成pGM-T-hERα-LBD重组质粒,转化到感受态细胞,阳性菌落酶切和测序鉴定正确,与pET-28a(+)质粒酶切后连接,成功构建原核重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD;在大肠杆菌中异源表达人雌激素受体ERα的配体结合区hERα-LBD蛋白。经亲和色谱法纯化后,hERα-LBD蛋白的表达量可达250mg/L。电泳法证实hERα-LBD具有雌激素结合活性。结论成功构建原核重组表达载体pET-28a(+)-hERα-LBD,hERα-LBD具有雌激素结合活性。 展开更多

关键词 雌激素受体α亚型配体结合区 表达载体活性

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