新型冠状病毒S蛋白RBD的糖基化及其长度对蛋白疫苗免疫原性的影响 被引量：5

1

作者 张婷 王志荣 许雪梅 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第12期1645-1650,共6页

目的分析去糖基化及片段长度对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合结构域(RBD)三聚体蛋白免疫原性的影响。方法以SARS-CoV-2 S蛋白的RBD为基础,分别突变敲除长度为220个氨基酸的RBD(aa.331-550)中的3个N-糖基化残基(N331、N343、N360),... 目的分析去糖基化及片段长度对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合结构域(RBD)三聚体蛋白免疫原性的影响。方法以SARS-CoV-2 S蛋白的RBD为基础,分别突变敲除长度为220个氨基酸的RBD(aa.331-550)中的3个N-糖基化残基(N331、N343、N360),并分别在C端融合三聚化结构域,利用杆状病毒-昆虫细胞表达3个去糖基化的三聚体蛋白(RBDT-N1、RBDT-N2、RBDT-N3);同时构建表达2种糖基化位点不变的三聚体蛋白,即去糖基化蛋白的野生型对照RBDT和长度为273个氨基酸的RBDST(aa.319-591)。Western blot比较蛋白表达水平,亲和层析纯化后免疫小鼠,分析血清中RBD特异性IgG及SARS-CoV-2假病毒中和抗体水平。结果RBDT-N1、RBDT-N2及RBDT-N3的表达水平均较RBDT显著提高,3种去糖基化蛋白诱发的特异性IgG及假病毒中和抗体水平均与RBDT的相当;RBDST诱发的特异性IgG抗体及假病毒中和抗体滴度较RBDT的显著提高(P<0.05,P<0.01)。结论去除RBD的N-糖基化残基及适当延长RBD旁侧序列有利于提高RBD蛋白疫苗的表达水平及免疫原性,研究结果为以RBD为基础的SARS-CoV-2疫苗的研发策略提供了参考。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 受体结合结构域 糖基化

下载PDF 职称材料

具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定

2

作者 倪婉琦 任莉 +10 位作者 靳昌忠 杨馥榕 申玉敏 王硕 胡彩琴 郝彦玲 刘颖 朱彪 邵一鸣 李丹 王铮 《中国热带医学》 CAS 北大核心 2024年第3期258-264,共7页

目的从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coro‐navirus 2,SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 ... 目的从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coro‐navirus 2,SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC_(50))<0.1µg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒中进行中和能力及宽度测试。结果从2名康复者体内共获得21个RBD特异性单克隆B细胞,从中分离出13对抗体轻/重链,成功表达出9个抗体,P1-A1、P1-B6、P1-B9对原始株(WT)假病毒IC_(50)值均低于0.1µg/mL,其中P1-B6可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒,IC_(50)值均达到了0.01µg/mL。P1-B9可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)、Delta株(B.1.617.2)及Gamma株(P.1)活病毒,IC_(50)值分别为0.42、0.63、0.28、2.50µg/mL。此外,P1-B6对BA.5、BF.7假病毒具有较好的中和效果,IC_(50)值分别为0.06µg/mL和0.09µg/mL。结论SARS-CoV-2原始株感染可以诱导出具有广谱中和活性的抗体,且这些广谱中和抗体的产生不需要过高的体细胞高频突变率,获得的抗体可以作为诊断和预防新冠病毒感染的候选。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 中和抗体 受体结合结构域

原文传递

基于LLR载体表达SARS-CoV-2 RBD蛋白rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒的拯救及鉴定

3

作者 刘夏飞 任伟宏 +3 位作者 李杉 余俊杰 朱武洋 段招军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期952-960,共9页

2019年12月以来,严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)席卷全球,但在控制SARS-CoV-2大流行的综合策略中一直空缺3岁以下儿童的免疫接种。兰州羔羊株轮状病毒(Lanzhou lamb rotaviru... 2019年12月以来,严重急性呼吸综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARSCoV-2)席卷全球,但在控制SARS-CoV-2大流行的综合策略中一直空缺3岁以下儿童的免疫接种。兰州羔羊株轮状病毒(Lanzhou lamb rotavirus,LLR)是我国获批上市用于预防婴幼儿轮状病毒胃肠炎的常规减毒活疫苗,本研究利用反向遗传学技术将SARS-CoV-2的受体结合结构域(Receptor-binding domain,RBD)蛋白插入LLR/NSP3基因的ORF后进行重组病毒拯救,通过结合致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、dsRNA PAGE硝酸银染色和NSP3基因RT-PCR扩增证明我们成功拯救出rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒,且重组病毒的NSP3基因在P5代以内出现了与预期相符的条带迁移。本研究进一步通过Western blot和间接免疫荧光证明rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒可以在P5代以内稳定表达SARS-CoV-2 RBD蛋白。间接免疫荧光和qRT-PCR扩增的结果显示虽然rLLR/NSP3-CoV-2/RBD的滴度和在不同时间点的基因组拷贝数略低于亲本株rLLR,但不影响病毒的感染和复制。本研究通过反向遗传学技术成功拯救出能在P5代以内稳定表达SARS-CoV-2 RBD蛋白的rLLR/NSP3-CoV-2/RBD重组病毒,为进一步探索开发适合3岁以下儿童使用的口服轮状病毒和SARS-CoV-2联合疫苗提供了思路。 展开更多

关键词 新冠病毒 受体结合结构域 兰州羔羊株轮状病毒 反向遗传学 重组病毒

原文传递

新冠病毒中和单克隆抗体及纳米抗体研究进展 被引量：3

4

作者 陈玉磊 林锦锦 +2 位作者 郑培义 曹敏杰 金腾川 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3173-3193,共21页

由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)引起的疾病被命名为新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19),是一种具有强传染性、高易感性、长潜伏期的传染病。病... 由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)引起的疾病被命名为新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19),是一种具有强传染性、高易感性、长潜伏期的传染病。病毒刺突蛋白受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)和细胞血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)之间的相互作用使得SARS-CoV-2顺利进入细胞。本文对SARS-CoV-2与ACE2的相关作用机制进行了简单概述,对目前针对SARS-CoV-2中和单克隆抗体、纳米抗体的最新研究进展进行了总结,探讨了新冠肺炎的发展过程和抗体药物的研究方向,以期为包括新冠肺炎在内的新发、突发传染病中和抗体药物的研发提供参考。 展开更多

关键词 新冠病毒 新型冠状病毒肺炎 受体结合结构域 单克隆抗体 纳米抗体

原文传递

靶向SARS-CoV-2受体结合结构域的嵌合抗体表达及功能研究

5

作者 石慧春 焦凡珂 +3 位作者 徐巍 陈永康 陆路 邹鹏 《微生物与感染》 CAS 2023年第1期2-12,共11页

严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-... 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染所致的2019冠状病毒病(coronavirus disease 2019,COVID-19)给人民的生命健康造成了严重的威胁,目前该病毒仍然在广泛传播,针对SARS-CoV-2有效的治疗方法仍有限,因此寻找广谱中和抗体阻断SARS-CoV-2感染具有重要的意义。本文成功表达并纯化了3株靶向SARS-CoV-2的受体结合结构域(receptor-binding domain,RBD)的人鼠嵌合抗体,并且检测了这几株抗体对多种SARS-CoV-2假病毒和活病毒的中和活性。本研究表明这3株抗体能特异性地中和SARS-CoV-2野生型假病毒,IC 50分别为0.03μg/mL、0.06μg/mL、0.03μg/mL。此外,这3株抗体对Alpha株假病毒、Delta株假病毒和Lambda株假病毒也具有广谱中和活性,并可以抑制SARS-CoV-2 Delta株活病毒的复制。机制研究表明,这些抗体可以阻断SARS-CoV-2的S蛋白介导的细胞-细胞融合,且RBD上的K417、E484和N501位点可能是其与这3株抗体结合的关键位点。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 受体结合结构域 嵌合抗体 中和抗体

下载PDF 职称材料

新型冠状病毒感染实验动物的风险评估

6

作者 李永超 李韵峰 +5 位作者 关雅伦 黄忠强 刘书华 李雪娇 李舸 张钰 《实验动物科学》 2020年第5期78-84,共7页

目的2019年12月暴发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)迅速传播,严重影响了社会生活正常运行。由于新型冠状病毒受体血管紧张素转化酶(ACE2)在人及动物中的保守性,有必要对常见家畜及实验动物的易感性进行评估。方法基于ACE2的氨基酸序列,分... 目的2019年12月暴发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)迅速传播,严重影响了社会生活正常运行。由于新型冠状病毒受体血管紧张素转化酶(ACE2)在人及动物中的保守性,有必要对常见家畜及实验动物的易感性进行评估。方法基于ACE2的氨基酸序列,分析其在人、实验动物及家畜等动物中进化关系;根据冠状病毒受体结合结构域(Receptor binding domain,RBD)与ACE2的结合位点,比较其在物种间的变化,推测不同物种对新型冠状病毒的易感性。结果新型冠状病毒与ACE2的结合位点在不同物种间较为保守,且ACE2受体与新型冠状病毒RBD的结合位点在人、猴和仓鼠的完全一致。结论基于位点比较和SARS-CoV-2感染动物特性分析,猴和仓鼠可能对新型冠状病毒较为易感,可以优先选择它们作为SARS-CoV-2感染动物模型。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 猴 仓鼠 ACE2受体 受体结合结构域

下载PDF 职称材料

功能性新型冠状病毒RBD结构域在毕赤酵母表面的展示

7

作者 于璐 胡暄 +2 位作者 张小鹃 牛安娜 张晓鹏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期30-38,共9页

目的:设计并构建新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)在毕赤酵母表面的展示体系,并对表面展示的RBD进行功能性评价,从而为以RBD为靶点的高通量药物筛选平台奠定基础。方法:将四种锚定分子与新冠病毒RB... 目的:设计并构建新型冠状病毒(SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)在毕赤酵母表面的展示体系,并对表面展示的RBD进行功能性评价,从而为以RBD为靶点的高通量药物筛选平台奠定基础。方法:将四种锚定分子与新冠病毒RBD融合,电转化至毕赤酵母中;通过细胞免疫荧光分析,筛选能够成功展示RBD的锚定系统;进一步分析其与血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)受体的亲和力,证明展示在细胞表面RBD分子的功能。结果:仅Sed1p锚定分子能够有效呈递RBD至毕赤酵母细胞表面,展示效率约为70%;亲和力分析结果表明,ACE2受体和表面展示RBD的亲和力(K_(D)=30.42 nmol/L)与溶液中RBD的亲和力(K=16.00 nmol/L)较为接近。结论:这一体系能够在毕赤酵母表面高效地展示具有生物学功能的RBD,可用于抗新冠病毒RBD药物的高通量筛选和评价。 展开更多

关键词 表面展示 新型冠状病毒 毕赤酵母 受体结合结构域 亲和力

原文传递

新型冠状病毒刺突蛋白及其受体的结构与功能 被引量：8

8

作者 江明金 温金华 +3 位作者 潘德城 周健 吕燕妮 魏筱华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1497-1501,共5页

新型冠状病毒肺炎是一种由新型冠状病毒感染引发的急性传染病,已进入全球大流行状态。刺突蛋白(spike protein,S蛋白)是新型冠状病毒感染细胞的关键蛋白,在病毒的宿主嗜性和毒力等方面发挥重要作用。S蛋白三聚体结构自发呈现封闭和开放... 新型冠状病毒肺炎是一种由新型冠状病毒感染引发的急性传染病,已进入全球大流行状态。刺突蛋白(spike protein,S蛋白)是新型冠状病毒感染细胞的关键蛋白,在病毒的宿主嗜性和毒力等方面发挥重要作用。S蛋白三聚体结构自发呈现封闭和开放的构象状态对于受体的结合及膜融合构象变化的启动至关重要,其独特的弗林蛋白酶识别位点可能是导致高传染性的重要因素。因此,研究新型冠状病毒S蛋白及其受体的结构与功能,对进一步揭示新型冠状病毒入侵机制及相关靶向药物研发具有重要意义。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 S蛋白 受体 血管紧张素转化酶2 受体结合结构域-血管紧张素转化酶2复合物 结构 功能 入胞途径

下载PDF 职称材料

SARS-CoV-2广谱中和抗体性质鉴定

9

作者 陈秀婷 汪毅祯 +2 位作者 商慧娴 王思令 郑子峥 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期693-697,共5页

目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋... 目的:对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)广谱中和抗体XMA09进行性质鉴定,探究其广谱中和突变株的潜在机制,为SARS-CoV-2的疫苗设计与广谱中和抗体筛选提供参考。方法:通过ExpiCHO真核表达系统与Protein A层析柱表达纯化XMA09蛋白;冷冻电镜技术确定XMA09识别的受体结构域(RBD)上的关键氨基酸位点;间接ELISA与表面等离子共振(SPR)技术检测XMA09对SARS-CoV-2及其突变株Spike蛋白的亲和力;采用基于水疱性口炎病毒(VSV)的假病毒系统检测XMA09对SARS-CoV-2野生型及突变株的中和能力。结果:本研究发现XMA09识别的表位较为保守,对多种突变株Spike蛋白均具有强结合能力,能广谱中和关切突变株(VOCs),包括广泛流行的Omicron亚突变株BA.4/5。结论:XMA09是SARS-CoV-2广谱中和抗体,具有作为SARS-CoV-2治疗性抗体的潜力,并可为SARS-CoV-2的广谱疫苗设计与抗体药物开发提供参考意义。 展开更多

关键词 SARS-CoV-2 受体结合结构域(RBD) 广谱中和抗体

下载PDF 职称材料

北京市某综合医院医务人员SARS-CoV-2感染后RBD中和抗体的变化特征 被引量：1

10

作者 李锦 张春燕 +5 位作者 彭薇 张民杰 姚宏武 杜明梅 刘运喜 周红辉 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1574-1578,共5页

目的分析感染新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的医护工作人员特异性受体结合结构域(RBD)中和抗体变化,了解高风险人群免疫应答,为后续健康随访提供依据。方法随机选取2022年12月1日-2022年12月25日某综合医院385例感染SARS-CoV-2在岗医护工作... 目的分析感染新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的医护工作人员特异性受体结合结构域(RBD)中和抗体变化,了解高风险人群免疫应答,为后续健康随访提供依据。方法随机选取2022年12月1日-2022年12月25日某综合医院385例感染SARS-CoV-2在岗医护工作人员,收集流行病学史和临床症状信息,检测末梢血SARS-CoV-2特异性抗体[S-IgM、S-IgG和RBD中和抗体(荧光免疫层析法)]表达水平,JPR模型分析表达趋势。结果JPR模型分析显示,S-IgM、S-IgG和RBD中和抗体分别在出现症状后4天、6天和6天上升趋势明显,S-IgM在出现症状后8天开始下降。广义线性混合模型多因素分析显示,性别和发热症状均与RBD中和抗体关联性弱;随着年龄增加,RBD中和抗体表达下降;接种疫苗会增加RBD中和抗体表达。结论SARS-CoV-2特异性抗体S-IgM、S-IgG和RBD中和抗体在出现典型症状后4~6天升高趋势明显,RBD中和抗体维持时间长。此外,随年龄增加,RBD中和抗体水平呈下降趋势。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒感染 特异性受体结合结构域 抗体 中和活性 流行病学

原文传递

猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

11

作者 张国庆 姜宇航 +8 位作者 张爽 李乐天 郝嘉翼 陈竞 邹万成 李昌 李太元 高旭 金宁一 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期1575-1583,共9页

【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位... 【目的】设计合成猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的抗原表位,制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原,应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位,将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对,将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,合成多肽并免疫小鼠,制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定,通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对,利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株(0~14.28%)以及14株其他猪冠状病毒株(0~7.14%)序列相似性非常低,具有良好的保守性;Western blotting结果显示,制备的多肽抗体1∶500、1∶1000、1∶2000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白,1∶1000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白,而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达;ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位,免疫后获得的抗体具有较好的特异性。 展开更多

关键词 猪δ冠状病毒(PDCoV) 受体结合结构域(RBD) 抗原表位 多肽抗体

下载PDF 职称材料

湖州市德清县成年人群SARS-CoV-2灭活疫苗全程接种免疫效果的血清学评价 被引量：1

12

作者 毛传武 陈颖峰 +4 位作者 张莉 解玉阳 董晓莲 蒋露芳 姜庆五 《上海预防医学》 CAS 2022年第11期1118-1122,共5页

【目的】了解≥18岁成年人群在新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)灭活疫苗全程免疫后血清特异性抗体水平,并分析其影响因素。【方法】以浙江省湖州市德清县已完成2剂次SARS⁃CoV⁃2灭活疫苗全程接种的18岁及以上居民为研究对象,收集性别、年龄、... 【目的】了解≥18岁成年人群在新型冠状病毒(SARS⁃CoV⁃2)灭活疫苗全程免疫后血清特异性抗体水平,并分析其影响因素。【方法】以浙江省湖州市德清县已完成2剂次SARS⁃CoV⁃2灭活疫苗全程接种的18岁及以上居民为研究对象,收集性别、年龄、接种疫苗种类以及2剂次接种时间等信息,采集研究对象血清样本,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测SARS⁃CoV⁃2受体结合结构域(RBD)特异性抗体水平,并分析其影响因素。【结果】接种了SARS⁃CoV⁃2灭活疫苗加强针人群的IgG抗体水平中位数高于完成2剂次全程接种人群,也高于只接种1剂次疫苗人群(P<0.05)。男性IgG抗体水平中位数为9.73(4.01~23.70)RU‧mL^(−1),低于女性[17.76(7.07~49.23)RU‧mL^(−1)](P<0.05)。国药集团北京生物制品研究所疫苗接种人群IgG抗体水平中位数为6.53(0.97~13.69)RU‧mL^(−1),低于北京科兴中维生物技术有限公司疫苗接种人群[17.29(8.54~43.73)RU‧mL^(−1)](P<0.05),也低于2种疫苗序贯接种人群[12.00(5.45~40.06)RU‧mL^(−1)](P<0.05)。距离第2剂次接种的间隔时间>6个月人群的IgG抗体水平中位数为9.73(3.83~23.63)RU‧mL^(−1),低于接种3~6个月人群[14.66(6.36~35.98)RU‧mL^(−1)](P<0.05)。影响因素分析显示,女性比男性疫苗接种效果好(χ^(2)=16.464,P<0.05);18~45岁年龄组人群疫苗接种效果更好(χ^(2)=7.158,P<0.05);接种北京科兴中维生物技术有限公司疫苗的人群效果更好(χ^(2)=49.637,P<0.05);距离第2剂次接种时间间隔>6个月的人群,疫苗接种效果下降(χ^(2)=8.447,P<0.05)。【结论】性别、年龄、疫苗种类一定程度上会影响免疫接种的效果,18岁及以上成年人群全程接种SARS⁃CoV⁃2灭活疫苗后呈现较好的免疫原性,但在接种6个月以后会出现疫苗接种效果显著下降,应及时接种加强针,以保持体内特异性抗体水平。 展开更多

关键词 新型冠状病毒灭活疫苗 新型冠状病毒受体结合结构域IgG抗体 免疫效果 血清学评价

原文传递

核受体结合SET结构域蛋白2和狐猴酪氨酸激酶-3在前列腺癌组织的表达及其临床意义

13

作者 张海洋 张自刚 +2 位作者 李琳 李栎梁 朱秀民 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期2344-2346,共3页

目的探讨核受体结合SET结构域蛋白2(NSD2)和狐猴酪氨酸激酶-3(LMTK3)在前列腺癌组织的表达及其临床意义。方法收集2014年5月至2020年12月大庆油田总医院病理学检查确诊的26例良性前列腺增生组织标本和80例前列腺癌组织标本,使用免疫组... 目的探讨核受体结合SET结构域蛋白2(NSD2)和狐猴酪氨酸激酶-3(LMTK3)在前列腺癌组织的表达及其临床意义。方法收集2014年5月至2020年12月大庆油田总医院病理学检查确诊的26例良性前列腺增生组织标本和80例前列腺癌组织标本,使用免疫组织化学法检测组织中NSD2蛋白和LMTK3蛋白的表达水平,选用χ^(2)检验进行统计学分析。结果前列腺癌组织中NSD2蛋白阳性表达率为72.50%(58/80),明显高于前列腺增生组织[19.23%(5/26)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=23.095,P<0.01);前列腺癌组织中LMTK3阳性表达率为32.50%(26/80),明显低于前列腺增生组织[61.54%(16/26)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=6.917,P<0.01)。NSD2表达水平与前列腺癌组织学分级、精囊腺侵犯、临床分期明显相关(χ^(2)=6.304、4.287、5.205,P<0.05)。LMTK3表达水平与前列腺癌精囊腺侵犯、临床分期明显相关(χ^(2)=4.828、4.941,P<0.05)。结论NSD2高表达和LMTK3低表达在前列腺癌的发生发展过程中起重要作用,检测NSD2和LMTK3有助于判断前列腺癌侵袭转移能力。 展开更多

关键词 免疫组织化学方法 核受体结合SET结构域蛋白2 前列腺癌 狐猴酪氨酸激酶-3

原文传递

MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建

14

作者 任雪 程谟斌 +1 位作者 张业 沈珝琲 《医学研究杂志》 2014年第10期29-32,共4页

目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白... 目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。 展开更多

关键词 人乳腺表皮细胞 雌激素受体配体结合结构域-Src融合蛋白 他莫西芬 细胞转化

下载PDF 职称材料

NSD3促进组蛋白H3K36双甲基化抑制巨噬细胞中TNF-α的产生

15

作者 刘兆龙 程起江 +1 位作者 杨乐 孙燕翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期481-487,共7页

目的主要研究巨噬细胞中核受体结合SET结构域蛋白3(NSD3)对脂多糖(LPS)触发的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的调控作用,并探讨其调控机制。方法以小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264. 7细胞作为细胞模型。100 ng/m L LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞,采用实时... 目的主要研究巨噬细胞中核受体结合SET结构域蛋白3(NSD3)对脂多糖(LPS)触发的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的调控作用,并探讨其调控机制。方法以小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264. 7细胞作为细胞模型。100 ng/m L LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞,采用实时定量PCR检测NSD3 mRNA水平,Western blot法检测NSD3蛋白水平;在RAW264. 7细胞中过表达NSD3或采用RNA干扰技术敲低腹腔巨噬细胞中NSD3的表达,ELISA检测NSD3对LPS触发的TNF-α分泌的影响; Western blot法检测敲低NSD3对LPS触发的核因子κB p65(NF-κBp65)信号通路的影响;荧光素酶法检测NSD3对NF-κBp65介导的TNF-α基因转录活性的影响;染色质免疫沉淀实验检测TNF-α基因启动子区组蛋白H3的36位赖氨酸(H3K36)甲基化的募集。结果 LPS抑制巨噬细胞中NSD3的表达;过表达NSD3抑制LPS触发的TNF-α的产生,敲低NSD3则促进LPS触发的TNF-α的产生,但对NF-κB活化无影响; NSD3抑制NF-κBp65介导的TNF-α基因的转录活化,促进TNF-α基因启动子区的H3K36二甲基化。结论 NSD3促进TNF-α基因启动子区H3K36的双甲基化,抑制TNF-α的表达。 展开更多

关键词 核受体结合SET结构域蛋白3(NSD3) 脂多糖(LPS) 肿瘤坏死因子α(TNF-α) 组蛋白H3的36位赖氨酸(H3K36) 甲基化

下载PDF 职称材料

NF-κB信号通路抑制结肠炎及炎症相关结肠癌的研究 被引量：17

16

作者 孙伟东 张志强 朴大勋 《医学综述》 2020年第8期1521-1525,共5页

当前,炎症相关结肠癌的分子机制已受到人们的广泛关注,但其潜在的基因、蛋白及信号通路仍不十分明确,核因子κB(NF-κB)家族成员及其调控基因与恶性肿瘤的转化、肿瘤细胞增殖、存活、血管生成、肿瘤的侵袭转移和治疗的耐药性有关,NF-κ... 当前,炎症相关结肠癌的分子机制已受到人们的广泛关注,但其潜在的基因、蛋白及信号通路仍不十分明确,核因子κB(NF-κB)家族成员及其调控基因与恶性肿瘤的转化、肿瘤细胞增殖、存活、血管生成、肿瘤的侵袭转移和治疗的耐药性有关,NF-κB信号通路在结肠炎及炎症相关结肠癌中也发挥着重要作用,探究NF-κB信号通路作用于结肠炎及炎症相关结肠癌发生发展的机制对提高疾病的治疗效果和改善患者的生存质量都具有重要意义。 展开更多

关键词 溃疡性结肠炎 炎症相关结直肠癌 核因子ΚB 肿瘤坏死因子受体相关因子结合蛋白结构域

下载PDF 职称材料