目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中...目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。展开更多
目的探讨m iR-140-5p靶向去整合素金属蛋f t酶9(A D A M 9)抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。方法采用RT-PCR测定检测乳腺癌癌组织、癌旁组织和乳腺癌细胞中miR-140-5P表达。将B T549细胞分为mimic组、miR-140-5p组、pLV-ADAM9组和pLV-ADAM9...目的探讨m iR-140-5p靶向去整合素金属蛋f t酶9(A D A M 9)抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。方法采用RT-PCR测定检测乳腺癌癌组织、癌旁组织和乳腺癌细胞中miR-140-5P表达。将B T549细胞分为mimic组、miR-140-5p组、pLV-ADAM9组和pLV-ADAM9+miR-140-5p组,荧光素实验验证miR-140-5p和ADAM9靶向关系。检测各组细胞侵袭、迁移、细胞层粘连蛋白1(h m iin in l)、血管内皮生长因子(V E G F)、E钙黏附素(Ecadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达。结果与癌旁组织相比,癌组织中miR-140-5p表达下调(P<0.01),乳腺癌BT549细胞中m iR-140-5p表达量最低;m iR-140-5p可以靶向负调控ADAM9的表达,抑制细胞侵袭、迁移(P<0.05),上调E cadherin蛋白表达(P<0.05),下调L am ininl、V EG F和M M P-2蛋白表达(尸<0.05)。结论m iK-140-5p可以靶向负调控ADAM 9的表达,抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。展开更多
文摘目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。
文摘目的探讨m iR-140-5p靶向去整合素金属蛋f t酶9(A D A M 9)抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。方法采用RT-PCR测定检测乳腺癌癌组织、癌旁组织和乳腺癌细胞中miR-140-5P表达。将B T549细胞分为mimic组、miR-140-5p组、pLV-ADAM9组和pLV-ADAM9+miR-140-5p组,荧光素实验验证miR-140-5p和ADAM9靶向关系。检测各组细胞侵袭、迁移、细胞层粘连蛋白1(h m iin in l)、血管内皮生长因子(V E G F)、E钙黏附素(Ecadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达。结果与癌旁组织相比,癌组织中miR-140-5p表达下调(P<0.01),乳腺癌BT549细胞中m iR-140-5p表达量最低;m iR-140-5p可以靶向负调控ADAM9的表达,抑制细胞侵袭、迁移(P<0.05),上调E cadherin蛋白表达(P<0.05),下调L am ininl、V EG F和M M P-2蛋白表达(尸<0.05)。结论m iK-140-5p可以靶向负调控ADAM 9的表达,抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。
