奶牛骨髓源单核巨噬细胞诱导培养方法建立鉴定及应用

1

作者 王钰 杨效林 +6 位作者 郭莉莉 龚鹏飞 吴敬泽 毛伟 张双翼 刘博 曹金山 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1674-1681,共8页

为了建立奶牛骨髓源巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,选用3种不同的培养基(RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12)分别添加20%胎牛血清(FBS)、2.4%青-链霉素、1.2%谷氨酰胺(Gln)、M-CSF(20μg/L)将奶牛骨髓中提取出的单核细胞诱导为巨噬细胞,再通过... 为了建立奶牛骨髓源巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,选用3种不同的培养基(RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12)分别添加20%胎牛血清(FBS)、2.4%青-链霉素、1.2%谷氨酰胺(Gln)、M-CSF(20μg/L)将奶牛骨髓中提取出的单核细胞诱导为巨噬细胞,再通过加入脂多糖(Lipolyaccharide,LPS)将诱导出的M0型巨噬细胞极化为M1型巨噬细胞,光学显微镜在第1、4、7天观察巨噬细胞形态,比较3种培养基对分化巨噬细胞的差异。同时探究了前列腺素D_(2)(Prostaglandin D_(2),PGD_(2))-DP_(2)受体途径对大肠杆菌(Escherichia coli)诱导细胞因子(IL-6、TNF-α)分泌及巨噬细胞吞噬功能的影响。结果显示,RPMI-1640培养基中培养的细胞形态变化最为明显,且数量较多。并能够检测到大量的单核巨噬细胞特征性标志物(M0标志物:CD11b、CD14;M1标志物:CD11b、CD80)的表达,M0和M1型巨噬细胞纯度分别为79.9%和93.5%。与空白对照组相比,E.coli感染组COX-2和H-PGDS基因表达显著升高;PGD_(2)分泌量也显著上升(P<0.0001)。DP_(2)受体抑制剂(CAY10471、CAY10595)能够显著抑制E.coli诱导促炎性细胞因子(IL-6、TNF-α)的分泌和显著增强巨噬细胞对E.coli的杀伤作用。结果表明,诱导的细胞具有巨噬细胞特有的形态学特征和免疫表型;E.coli可诱导巨噬细胞PGD_(2)的产生,PGD_(2)-DP_(2)途径对E.coli感染的巨噬细胞细胞因子的分泌具有一定的调控作用。 展开更多

关键词 奶牛 骨髓源巨噬细胞 分离培养鉴定 PGD2

原文传递

奶牛临床型乳腺炎病原菌分离试验 被引量：3

2

作者 杨克礼 刘士喜 +2 位作者 朱先春 郭勇 卜英山 《安徽农业科学》 CAS 2000年第5期671-671,693,共2页

对 34份患临床型乳腺炎的乳样进行细菌分离培养及初步生化反应鉴定 ,检出肠科细菌 12株 ,检出率为 35 .3% ;球菌2 6株 ,检出率为 76 .5 % ;酵母菌 9株 ,检出率为 2 6 .5 % ;另有 7份乳样在分离培养过程中未见有细菌生长 ,占总检样的 2 0... 对 34份患临床型乳腺炎的乳样进行细菌分离培养及初步生化反应鉴定 ,检出肠科细菌 12株 ,检出率为 35 .3% ;球菌2 6株 ,检出率为 76 .5 % ;酵母菌 9株 ,检出率为 2 6 .5 % ;另有 7份乳样在分离培养过程中未见有细菌生长 ,占总检样的 2 0 .6 %。 展开更多

关键词 病原菌 分离培养鉴定 奶牛 临床型乳腺炎

下载PDF 职称材料

山西省奶牛乳腺炎流行病学调查研究 被引量：2

3

作者 武守艳 董春光 +4 位作者 韩文儒 杨丽华 刘文俊 陈剑波 韩一超 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期53-56,共4页

为了全面了解山西省奶牛乳腺炎的主要致病菌及其耐药情况,本研究对山西省榆次、清徐、祁县、太谷、山阴、永济及太原郊区奶牛场1 300头奶牛乳腺炎进行流行病学调查。随机从不同规模的奶牛场采集乳腺炎奶牛奶样120份,进行病原的分离培养... 为了全面了解山西省奶牛乳腺炎的主要致病菌及其耐药情况,本研究对山西省榆次、清徐、祁县、太谷、山阴、永济及太原郊区奶牛场1 300头奶牛乳腺炎进行流行病学调查。随机从不同规模的奶牛场采集乳腺炎奶牛奶样120份,进行病原的分离培养、鉴定及药敏试验。结果:120份样品共分离出8种402株病原菌,经鉴定主要病原菌为大肠杆菌78株(19.4%),大肠杆菌ESBL阳性株18株(4.5%),葡萄球菌88株(21.9%)、链球菌95株(23.6%)、小型原藻40株(10.0%)、克柔念珠菌45株(11.2%)。对试验用12种药物,大肠杆菌耐药的有1种,敏感的有11种;大肠杆菌ESBL阳性株(耐β内酰胺酶)敏感的有2种,耐药的有10种;链球菌耐药的有5种,敏感的有7种;葡萄球菌耐药的有2种,敏感的有10种。对5种抗真菌药物,小型原藻敏感的有1种,耐药的4种;克柔念珠菌敏感的2种,耐药的3种。结论:近年来真菌和大肠杆菌ESBL阳性株导致的奶牛乳腺炎的比例有所增加;其他几种细菌都有不同程度的耐药性。 展开更多

关键词 奶牛 乳腺炎 流行病学调查 分离培养鉴定 药敏试验

下载PDF 职称材料

咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验在手足口病患儿中的应用价值

4

作者 王振刚 《临床医学研究与实践》 2019年第6期92-94,共3页

目的分析咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验在手足口病(HFMD)患儿中的应用价值。方法选取我疾控中心收治的180例HFMD患儿作为研究对象,对其进行咽拭子细菌分离培养鉴定及药敏试验,总结病原菌分类及耐药情况。结果180例HFMD患儿咽... 目的分析咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验在手足口病(HFMD)患儿中的应用价值。方法选取我疾控中心收治的180例HFMD患儿作为研究对象,对其进行咽拭子细菌分离培养鉴定及药敏试验,总结病原菌分类及耐药情况。结果180例HFMD患儿咽拭子标本中,共检出61株致病菌,检出率为33.89%,包含13株革兰阳性菌,43株革兰阴性菌,5株白色假丝酵母菌。副流感嗜血菌、流感嗜血菌对四环素、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、氨苄西林耐药率较高,对氧氟沙星、头孢噻肟、利福平、阿莫西林/克拉维酸相对敏感。肺炎链球菌对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、四环素、克林霉素、红霉素耐药率较高,对万古霉素、左氧氟沙星、奎奴普丁/达福普汀、头孢噻肟相对敏感。结论 HFMD患儿咽部致病菌以嗜血菌属为主,其次为肺炎链球菌、白色假丝酵母菌,结合药敏试验,可为临床选取合理、安全、正确抗菌药物提供依据。 展开更多

关键词 手足口病 分离培养鉴定 咽拭子 药敏试验 合理用药

下载PDF 职称材料

两种方法检测冻肉中的小肠结肠炎耶尔森氏菌 被引量：4

5

作者 张健 邓志爱 +1 位作者 刘巧宜 陈守义 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第3期628-629,632,共3页

目的:建立适用于本实验室快速、准确检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法。方法:采用常规分离培养鉴定法与多重PCR方法对49份生肉进行检测,分析比较两种方法的检测结果。结果:两种方法的检测结果相同,符合率为100%。49份样品中均检出... 目的:建立适用于本实验室快速、准确检测致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法。方法:采用常规分离培养鉴定法与多重PCR方法对49份生肉进行检测,分析比较两种方法的检测结果。结果:两种方法的检测结果相同,符合率为100%。49份样品中均检出8份检出小肠结肠炎耶尔森氏菌,3株阳性对照以及6株阴性对照也均符合检测结果。但多重PCR方法所需的检测时间远少于常规分离培养鉴定法。结论:多重PCR较传统鉴定方法省时省力,对于监测小肠结肠炎耶尔森氏菌有重要意义。 展开更多

关键词 小肠结肠炎耶尔森氏菌 常规分离培养鉴定法 多重PCR法

原文传递

对微生物污染引起的食物中毒检验检测分析

6

作者 冉艳 张运依 《食品安全导刊》 2023年第13期95-97,101,共4页

目的:分析微生物污染引起的食物中毒检验结果并对比不同检测方法的应用效果。方法:选取2020年1月—2022年12月采集到的100例微生物污染引起的食物中毒患者样本,对微生物类型及占比、食物中毒季节分布进行统计,对比选择性平板直接分离培... 目的:分析微生物污染引起的食物中毒检验结果并对比不同检测方法的应用效果。方法:选取2020年1月—2022年12月采集到的100例微生物污染引起的食物中毒患者样本,对微生物类型及占比、食物中毒季节分布进行统计,对比选择性平板直接分离培养鉴定、聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)快速检测的结果差异。结果:100例微生物污染引起的食物中毒患者样本中副溶血性弧菌占比显著高于其他致病菌占比,差异有统计学意义(P<0.05);食物中毒季节分布中夏季最高、冬季最低,春季和秋季介于二者之间,差异有统计学意义(P<0.05);PCR快速检测的总检出率高于选择性平板直接分离培养鉴定,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:微生物污染引起的食物中毒以副溶血性弧菌最为常见且夏季高发,PCR快速检测的结果较选择性平板直接分离培养鉴定更为可靠。 展开更多

关键词 微生物污染 食物中毒 选择性平板直接分离培养鉴定 聚合酶链反应快速检测

下载PDF 职称材料

一例猪伪狂犬病和副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断与防治 被引量：2

7

作者 王宗建 夏培仁 +1 位作者 夏维婕 滕金玲 《中国动物保健》 2022年第3期118-119,124,共3页

某户外购900头育肥猪,体重约25kg,引进一周后发病。病猪主要表现发烧、气喘,用替米考星、多西环素等药物治疗效果不佳,发病率上升,重者死亡,造成一定损失。针对此类病情,作者进行了流行病学调查、临床观察、实体解剖及实验室诊断,确诊... 某户外购900头育肥猪,体重约25kg,引进一周后发病。病猪主要表现发烧、气喘,用替米考星、多西环素等药物治疗效果不佳,发病率上升,重者死亡,造成一定损失。针对此类病情,作者进行了流行病学调查、临床观察、实体解剖及实验室诊断,确诊该病例是由猪伪狂犬病和副猪嗜血杆菌病混合感染引起,通过采取综合措施控制了病情。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 副猪嗜血杆菌病 临床症状 剖检变化 gE抗体 细菌分离培养鉴定

下载PDF 职称材料

阴道加德纳菌4种检测方法的比较 被引量：2

8

作者 陈金花 李宁 胡辛兰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第24期4231-4232,共2页

目的比较4种方法在诊断阴道加德纳菌的价值。方法采集阴道分泌物,用直接免疫荧光法检测阴道加德纳菌,并随机选取30例阳性及30例阴性标本,分别进行直接涂片法观察线索细胞、阴道五联检检测唾液酸苷酶及p H值,并进行分离培养鉴定。结果 1 ... 目的比较4种方法在诊断阴道加德纳菌的价值。方法采集阴道分泌物,用直接免疫荧光法检测阴道加德纳菌,并随机选取30例阳性及30例阴性标本,分别进行直接涂片法观察线索细胞、阴道五联检检测唾液酸苷酶及p H值,并进行分离培养鉴定。结果 1 471例标本中,直接免疫荧光法检出阳性标本345例,检出率为23.5%。随机选取其中30例阳性标本,通过分离培养鉴定阳性率为26.7%,线索细胞的阳性率为80.0%,p H值均≥4.6,唾液酸苷酶检测阳性率为30.0%;随机选取其中30例阴性标本,通过分离培养鉴定加德纳菌均为阴性,线索细胞阳性率为20.0%,唾液酸苷酶检测阳性率为10.0%。结论免疫荧光法操作简便、快速、经济,具有高灵敏度和高特异性,更适合高危人群的快速筛选,值得临床应用。 展开更多

关键词 阴道加德纳菌 免疫荧光法 分离培养鉴定法 线索细胞 阴道五联检

原文传递

流行性乙型脑炎实验室检测技术

9

作者 吴俊导 张树辉 《按摩与康复医学》 2012年第8期201-202,共2页

流行性乙型脑炎是一种重要的人畜共患传染病.乙脑的实验室检测技术有乙脑病毒的分离培养鉴定,血清学检测（其中包括血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验等）,分子生物学检测等.本文将本实验室对乙脑病毒的检测常用技术、结果与研究进... 流行性乙型脑炎是一种重要的人畜共患传染病.乙脑的实验室检测技术有乙脑病毒的分离培养鉴定,血清学检测（其中包括血凝抑制试验、补体结合试验、中和试验等）,分子生物学检测等.本文将本实验室对乙脑病毒的检测常用技术、结果与研究进展等进行阐述. 展开更多

关键词 乙脑病毒 乙脑病毒的分离培养鉴定 血清学检测 分子生物学检测

原文传递

兔Tenon’s囊组织原代成纤维细胞分离培养与鉴定 被引量：1

10

作者 莫国艳 田代志 +2 位作者 张丽萍 罗继红 李杜军 《武汉大学学报（医学版）》 CAS 2017年第6期973-977,共5页

目的:改良和补充兔Tenon’s囊组织原代成纤维细胞的分离培养、鉴定方法,为开展抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物研究提供成熟的原代成纤维细胞。方法:应用组织块培养法,无菌条件下摘取组织,机械剪碎,于含10%胎牛血清的DMEM中培养,显微镜... 目的:改良和补充兔Tenon’s囊组织原代成纤维细胞的分离培养、鉴定方法,为开展抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物研究提供成熟的原代成纤维细胞。方法:应用组织块培养法,无菌条件下摘取组织,机械剪碎,于含10%胎牛血清的DMEM中培养,显微镜下观察细胞形态,免疫荧光法鉴定,实时荧光定量PCR法检测细胞波形蛋白、角蛋白的mRNA水平。结果:分离培养的细胞具有成纤维细胞形态,7-10d从组织块周围大量爬出,15d铺满培养皿;免疫荧光法鉴定显示,波形蛋白表达阳性,角蛋白阴性表达;实时荧光定量PCR检测出细胞中波形蛋白mRNA水平远远高于角蛋白。结论:改良和补充了兔Tenons囊组织成纤维细胞原代培养与鉴定方法,为后续青光眼术后滤过泡抗瘢痕化的药物研究奠定基础。 展开更多

关键词 Tenons囊 成纤维细胞 分离培养与鉴定 细胞免疫荧光 实时荧光定量PCR

原文传递

一例猪传染性胸膜肺炎的诊治 被引量：4

11

作者 乌伦吉如嘎 贾俊涛 娜仁图亚 《湖北农业科学》 2017年第17期3312-3313,3330,共3页

猪传染性胸膜肺炎是严重危害现代养猪业的一种呼吸道传染病,广泛流行于全国各地。在内蒙古包头市一养猪场分离培养出1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并通过治疗试验发现氟苯尼考和强力霉素对该菌株治疗效果好。对猪传染性胸膜肺炎的病因... 猪传染性胸膜肺炎是严重危害现代养猪业的一种呼吸道传染病,广泛流行于全国各地。在内蒙古包头市一养猪场分离培养出1株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌,并通过治疗试验发现氟苯尼考和强力霉素对该菌株治疗效果好。对猪传染性胸膜肺炎的病因进行了分析,并提出了控制疫情的有效措施。 展开更多

关键词 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 病原分离培养与鉴定

下载PDF 职称材料

肉雏鸡盲肠乳酸菌分离鉴定及对AFB1中毒保护效果的研究 被引量：1

12

作者 吴倩 陈媛媛 +2 位作者 张弘弢 高颖 徐闯 《黑龙江八一农垦大学学报》 2021年第6期35-41,共7页

为寻找合适的肉雏鸡霉菌中毒保护剂,采集30日龄健康肉雏鸡盲肠内容物进行分离培养及鉴定,通过16s rDNA序列及系统发育进化树分析,菌株M1、M4、M5、M8与敏捷乳杆菌(Lactobacillus agilis M58803.2)处于同一分支;菌株M2与肠乳杆菌(Lactoba... 为寻找合适的肉雏鸡霉菌中毒保护剂,采集30日龄健康肉雏鸡盲肠内容物进行分离培养及鉴定,通过16s rDNA序列及系统发育进化树分析,菌株M1、M4、M5、M8与敏捷乳杆菌(Lactobacillus agilis M58803.2)处于同一分支;菌株M2与肠乳杆菌(Lactobacillus intestinalis LC096206.1)处于同一分支。选用1日龄健康肉雏鸡每天饲喂含0.3 mg·kg^(-1) AFB1的饲粮,将菌株M1、M2、M4、M5、M8以1×10^(8) CFU·mL^(-1)添加到雏鸡饮水中,实验期为28 d,观察乳酸菌对AFB1中毒肉雏鸡的临床保护效果。结果表明与AFB1组相比,菌株M2、M4和M8可以减轻肉雏鸡由AFB1导致的体重、脏器指数和血液生化指标的影响(P<0.05),菌株M1和M5作用效果则不显著(P>0.05)。 展开更多

关键词 肉雏鸡 乳酸菌 细菌分离培养与鉴定 黄曲霉毒素B1

下载PDF 职称材料

鼠肝Kupffer细胞的分离、培养和鉴定 被引量：1

13

作者 陆伦根 曾民德 +3 位作者 范建高 李继强 华静 范竹萍 《胃肠病学》 1998年第2期90-92,共3页

目的:Kupffer细胞是固定于肝脏的吞噬细胞,Kupffer细胞的分离、培养对肝脏疾病发生机制中的有关细胞和分子生物学的研究具有重要意义。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠Ku-pffer细胞,再经贴壁培养,并应... 目的:Kupffer细胞是固定于肝脏的吞噬细胞,Kupffer细胞的分离、培养对肝脏疾病发生机制中的有关细胞和分子生物学的研究具有重要意义。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠Ku-pffer细胞,再经贴壁培养,并应用免疫组织化学、吞噬功能试验、电镜等方法进行鉴定。结果:本法能成功地获得高纯度的Kapffer细胞,Kapffer细胞得率为3～5×10~6/肝,贴壁后呈典型的星形及多角形,免疫组化染色示溶菌酶阳性、胞浆内见吞噬的印度墨汁及乳胶珠颗粒,电镜观察细胞表面有发达的伪足、微绒毛,胞浆内含大量溶酶体及吞噬的乳胶珠颗粒。结论:本实验所用的Kupffer细胞分离培养方法简单易行、可靠、细胞纯度高,可用于进一步研究Ku-pffer细胞的生物学功能。 展开更多

关键词 KUPFFER细胞 细胞分离、培养和鉴定 大鼠

下载PDF 职称材料

咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验对手足口病患儿抗菌药物合理使用的影响

14

作者 卢超 《首都食品与医药》 2018年第23期64-64,共1页

目的研究咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验对手足口病患儿抗菌药物合理使用的影响。方法选取3550例手足口病患儿,采取咽拭子标本菌株分离培养鉴定+药敏试验,分析其耐药情况。结果 3550例检出流感嗜血杆菌308株,分离率为8.68%(308... 目的研究咽拭子标本菌株分离培养鉴定联合药敏试验对手足口病患儿抗菌药物合理使用的影响。方法选取3550例手足口病患儿,采取咽拭子标本菌株分离培养鉴定+药敏试验,分析其耐药情况。结果 3550例检出流感嗜血杆菌308株,分离率为8.68%(308/3550),其中β-内酰胺酶阳性株147株(47.73%);经药敏实验可知,308株流感嗜血杆菌对阿莫西林、氧氟沙星、利福平、头孢噻肟耐药率较低。结论手足口病的主要病原菌为流感嗜血杆菌,了解其在手足口病患儿群体中分离情况、药敏试验情况,有助于为临床抗感染治疗提供合理参考依据,还可有效避免减少耐药现象。 展开更多

关键词 手足口病患儿 咽拭子标本菌株分离培养鉴定 药敏试验 抗菌药物

原文传递

小鼠细胞分离培养及鉴定操作的优化和分析

15

作者 冯婉婉 《生物技术世界》 2013年第12期1-1,共1页

目的 :探讨小鼠细胞分离培养及鉴定的优化操作,观察其应用效果。方法:选取0.25%胰蛋白酶对小鼠心室肌细胞进行分离,通过5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)处理分离到的心室肌细胞,差速离心后静止沉淀。使用观察仪器观察,实施鉴定处理。结果:心肌细... 目的 :探讨小鼠细胞分离培养及鉴定的优化操作,观察其应用效果。方法:选取0.25%胰蛋白酶对小鼠心室肌细胞进行分离,通过5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)处理分离到的心室肌细胞,差速离心后静止沉淀。使用观察仪器观察,实施鉴定处理。结果:心肌细胞明显同步搏动频率为50~160次,肌丝发达,鉴定结果显示为阳性。结论:在小鼠细胞分离培养的过程中使用胰蛋白酶能够加速分离效果,缩短培养周期。 展开更多

关键词 小鼠细胞 分离培养及鉴定 优化

原文传递