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免疫磁珠法检测食品中的沙门菌及分离菌株的耐药性 被引量:16
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作者 许学斌 顾宝柯 +1 位作者 金汇明 胡培玉 《中国食品卫生杂志》 2006年第3期202-204,共3页
为检测沙门菌在本市食品中的污染和耐药情况,采集各类食品样品303件,经增菌后通过特异的免疫磁珠(IMS)吸附并接种XLD平板分离沙门菌。分离的菌株按年度分成2组,分别以改良K-B法测试对28种抗生素的耐药性。在303件样品中检出87件阳性,总... 为检测沙门菌在本市食品中的污染和耐药情况,采集各类食品样品303件,经增菌后通过特异的免疫磁珠(IMS)吸附并接种XLD平板分离沙门菌。分离的菌株按年度分成2组,分别以改良K-B法测试对28种抗生素的耐药性。在303件样品中检出87件阳性,总阳性率28.71%。分离到的112株沙门菌以德比、肠炎血清型占优势。肉类制品的阳性率40.20%(82204)明显高于其它食品,共分离出107株沙门菌(107112,95.54%)。菌株耐药率在2年中有显著改变的抗生素有环丙沙星、复方新诺明、妥布霉素、二甲胺四环素、氯霉素和链霉素。耐10种以上抗生素的多重耐药株有12株(12112,10.71%),有4株头孢哌酮耐药株。IMS用于食品中沙门菌的分离效果较好。结果显示耐环丙沙星和多重耐药菌株的增多说明加强食源性沙门菌耐药监测的重要性。 展开更多
关键词 沙门氏菌属 免疫磁化分离 抗药性 食品
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慢性活动性EB病毒感染患儿外周血单个核细胞EB病毒DNA及感染细胞类型检测的临床意义 被引量:16
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作者 邢燕 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期495-500,共6页
目的研究EB病毒(Epstein—Barr virus,EBV)慢性活动性感染(CAEBV)、急性感染(AEBV)以及正常儿童的外周血单个核细胞(PBMC)的EBV—DNA水平,以及EBV感染细胞类型的差异,探讨其与CAEBV临床表型的关系。方法收集2004年3月至2008... 目的研究EB病毒(Epstein—Barr virus,EBV)慢性活动性感染(CAEBV)、急性感染(AEBV)以及正常儿童的外周血单个核细胞(PBMC)的EBV—DNA水平,以及EBV感染细胞类型的差异,探讨其与CAEBV临床表型的关系。方法收集2004年3月至2008年4月在我院住院的CAEBV患儿10例,AEBV患儿13例,以及正常儿童12例的外周血单个核细胞,应用实时荧光定量PCR法检测EBV—DNA水平,并对EBV—DNA阳性的CAEBV和AEBV及正常儿童,用免疫磁珠法分选各种淋巴细胞后进行EBV编码的RNA-1(EBV encoding RNA-1,EBER-1)探针荧光原位杂交(FISH)确定EBV感染细胞的类型。结果CAEBV组EBV—DNA载量为[(6.8×10^7)±(1.1×10^8)]/ml,AEBV组EBV-DNA载量为[(1.3×10^6)±(1.6×10^6)]/ml,两组比较差异有统计学意义,CAEBV组PBMC的EBV—DNA水平明显高于AEBV组(P〈0.01);7例CAEBV患儿做细胞分选及FISH后,发现EBV不仅可以引起B细胞感染,而且还引起NK细胞、CD4^+和CD8^+T细胞不同程度的感染,临床表现为反复或持续的传染性单核细胞增多症(IM)样症状。6例患儿以感染T细胞为主,其中1例以CD8’T细胞感染为主,临床表现除高热,肝脾淋巴结大,伴严重的血液系统一系或三系降低外,还并发了爆发性的致死性T淋巴细胞增殖综合征而死亡。1例以NK细胞感染为主,临床表现还伴有对蚊虫叮咬高度敏感且IgE高达2500U/ml。AEBV组7例患儿均显示感染B淋巴细胞,临床表现为可以痊愈的IM。6例正常儿童均为阴性。结论CAEBV患儿体内存在更多的EBV复制和不同的EBV感染细胞类型,实时荧光定量PCR检测EBV-DNA水平并测定EBV感染的淋巴细胞类型有可能协助CAEBV临床个体化诊治和评估病情进展。 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 免疫磁化分离 实时荧光定量PCR 荧光原位杂交
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基于免疫磁分离的微流控技术在循环肿瘤细胞富集分离中应用的研究进展 被引量:8
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作者 李福来 孙平风 +2 位作者 黄小林 李凡 许恒毅 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期64-67,共4页
循环肿瘤细胞(CTCs)存在于多种恶性肿瘤患者的外周血中,CTCs的准确检测有助于肿瘤的早期发现,并可用于指导肿瘤患者个体化治疗、肿瘤化疗药物的快速评估和肿瘤的复发检测。然而,肿瘤患者外周血中CTCs的含量极低,对其检测需要高效... 循环肿瘤细胞(CTCs)存在于多种恶性肿瘤患者的外周血中,CTCs的准确检测有助于肿瘤的早期发现,并可用于指导肿瘤患者个体化治疗、肿瘤化疗药物的快速评估和肿瘤的复发检测。然而,肿瘤患者外周血中CTCs的含量极低,对其检测需要高效、特异的富集分离方法。新兴的微流控技术能对微量液体进行精确操控,结合免疫磁分离技术将其应用于CTCs的分离检测可节省血液样本,具有操作简单、分选速度快、特异性强以及纯度高等优点。 展开更多
关键词 肿瘤细胞 循环 微流体分析技术 免疫磁化分离
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鼠骨骺干细胞免疫纯化和pTRE-PTHrP(38-94)反应质粒的构建 被引量:6
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作者 张树威 陈安民 +6 位作者 游洪波 廖晖 宋登新 王江 谢柏臻 刘铁 郭风劲 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2008年第10期619-623,共5页
目的免疫纯化新生大鼠骨骺干细胞,克隆甲状旁腺相关蛋白的中间片段PTHrP(38-94)基因并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(38-94)。方法采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的骨骺干细胞,分别以FGFR-3... 目的免疫纯化新生大鼠骨骺干细胞,克隆甲状旁腺相关蛋白的中间片段PTHrP(38-94)基因并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(38-94)。方法采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的骨骺干细胞,分别以FGFR-3抗体和PCNA抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点PTHrP(38-94)基因片段,扩增的DNA片段与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg均双酶切后连接,转化、扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果免疫荧光证实所取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞;经限制性内切酶Bam HⅠ、NotⅠ酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论运用显微取材和免疫纯化技术可以成功分离纯化骨骺干细胞;成功克隆PTHrP(38-94)基因并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(38-94),为进一步明确PTHrP(38-94)片段的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 干细胞 免疫磁化分离 甲状旁腺激素相关蛋白质
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免疫磁珠技术在肿瘤学中的研究进展 被引量:4
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作者 方立萍 王文秀 徐玉清 《肿瘤防治杂志》 CAS 2004年第4期411-413,共3页
免疫磁珠是一种含铁的小微粒与单克隆抗体通过共价键偶联而形成的免疫复合物 ,在磁力作用下发生力学移动 ,具有良好的磁感应性。此技术在检测和分离肿瘤细胞、骨髓净化、磁导向治疗等方面的应用令人瞩目 ,对于恶性肿瘤的早期发现、判断... 免疫磁珠是一种含铁的小微粒与单克隆抗体通过共价键偶联而形成的免疫复合物 ,在磁力作用下发生力学移动 ,具有良好的磁感应性。此技术在检测和分离肿瘤细胞、骨髓净化、磁导向治疗等方面的应用令人瞩目 ,对于恶性肿瘤的早期发现、判断预后、选择治疗方案。 展开更多
关键词 肿瘤 免疫磁化分离 综述文献
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利用新型免疫磁珠富集原理检测肺癌患者外周血循环肿瘤细胞 被引量:5
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作者 嵇金陵 何晓东 +4 位作者 索美芳 张培 黄蓉 孙余婕 沈佐君 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期727-732,共6页
目的建立一种新型免疫磁珠方法,检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者,其中I期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例,健康志愿者20名。将不同数量... 目的建立一种新型免疫磁珠方法,检测肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)。方法实验探索性研究。选择经手术切除组织病理确诊为非小细胞肺癌的42例初治患者,其中I期7例、Ⅱ期9例、Ⅲ期16例、Ⅳ期10例,健康志愿者20名。将不同数量(50、100、200、500、1000个)的肺癌细胞株(A549)混入2ml健康成人血标本中以模拟肿瘤患者的血样,对该血样进行红细胞裂解和离心,沉淀所得细胞与经过免疫磁珠标记的上皮细胞黏附分子(EpCAM)的抗体反应,然后经一套自制的检测装置对细胞进行富集和分离,与磁标记的EpCAM抗体反应后的上皮细胞因为磁力的作用被集中在一张玻片上,最后用经典的HE染色鉴定循环肿瘤细胞并计数。计算肿瘤细胞的回收率验证该方法的敏感性,同时检测20名健康志愿者血标本验证该方法的特异性。用上述方法检测42例肺癌患者的CTCs,将检测到的结果根据患者的临床特征进行分组,以卡方检验分析CTCs的检出率与患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤大小等临床特征的相关性,同时以直线相关法研究掺入细胞数与回收细胞数的相关性。结果掺人肿瘤细胞回收试验的回收率在68%~82%之间,掺入细胞间回归方程为Y=0.6419X+8.8875,回收的细胞与添加细胞间数量有显著的相关性(相关系数尺。=0.9916,P〈0.05)。42例肺癌患者中有18例(42.9%)CTCs阳性,其中,I期CTCs检出率为0,II期CTCs检出率为11.1%,Ⅲ期CTCs检出率为62.5%,IV期CTCs检出率为70%。CTCs检测的阳性率与患者的年龄、性别、肿瘤大小均无明显关系(P〉0.05),而与临床分期(TNM)有密切关系(P〈0.05)。特异性检测结果为20名健康志愿者外周血标本均未检测到CTCs。结论新型免疫磁珠富集技术可以有效分离和鉴定肺癌患者外周血中的循环肿瘤细胞,有� 展开更多
关键词 肺肿瘤 肿瘤循环细胞 免疫磁化分离 抗原 肿瘤 细胞黏附分子
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非小细胞肺癌循环肿瘤细胞的定量检测意义 被引量:4
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作者 刘志东 许绍发 +5 位作者 李云松 李福根 刘树库 韩毅 宋小运 梁子昆 《中华胸心血管外科杂志》 CSCD 北大核心 2009年第3期184-186,共3页
目的探讨定量检测非小细胞肺癌病人肺静脉和外周静脉血循环肿瘤细胞与临床分期、治疗及预后监测的相关性。方法选择25例非小细胞肺癌病人,10例良性肺疾病者(对照组)、健康志愿者10位。经CD326免疫磁珠阳性分选富集循环肿瘤细胞(CTC... 目的探讨定量检测非小细胞肺癌病人肺静脉和外周静脉血循环肿瘤细胞与临床分期、治疗及预后监测的相关性。方法选择25例非小细胞肺癌病人,10例良性肺疾病者(对照组)、健康志愿者10位。经CD326免疫磁珠阳性分选富集循环肿瘤细胞(CTCs)标本后,行CK-FITC、CD45PE荧光抗体标记,应用多参数流式细胞仪对CTCs进行定量检测。结果25例非小细胞肺癌病人术中肺静脉血CTCs定量检测阳性率为64%(16/25例),明显高于外周静脉血CTCs阳性率40%(10/25例)的水平(P〈0.05);Ⅰ期13例中外周血CTCs阳性3例(23.0%),肺静脉血CTCs阳性8例(61.5%)。结论非小细胞肺癌CTCs水平的定量检测是较为敏感的肿瘤进展、治疗反应和预后预测的评价指标;免疫磁珠富集联合流式细胞分析技术检测CTCs的敏感性和特异性较高,具有一定的临床应用前景。 展开更多
关键词 非小细胞肺 肿瘤循环细胞 免疫磁化分离
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肿瘤微环境对树突细胞功能状态的影响 被引量:2
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作者 段学燕 龙金华 +1 位作者 肖静 曾柱 《贵阳医学院学报》 CAS 2004年第5期385-388,共4页
目的 :探讨肿瘤细胞分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对树突细胞 (DCs,dendriticcells)的分化发育的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法 :用免疫磁珠从人外周血分离CD14 + 单核细胞 ,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF... 目的 :探讨肿瘤细胞分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对树突细胞 (DCs,dendriticcells)的分化发育的影响 ,以进一步揭示肿瘤的免疫逃逸机制。方法 :用免疫磁珠从人外周血分离CD14 + 单核细胞 ,加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、白细胞介素 4 (IL 4 )和人白血病细胞Jurkat培养上清液体外培养DCs,以正常培养诱导的DCs作为对照 ,采用傅立叶变换红外光谱 (FTIR)技术分析人白血病细胞培养上清液对DCs分化发育的影响。结果 :正常培养DCs与肿瘤上清液培养的DCs相比 ,在细胞内蛋白质和核酸的相对含量和细胞内消耗葡萄糖重新合成磷脂的量方面差异无显著性 ,但是 ,在细胞的转录状态方面差异有显著性。结论 :肿瘤细胞上清液培养液所营造的微环境细胞转录水平上对DCs的功能状态有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 树突细胞 抗原呈递 肿瘤 免疫磁化分离 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 白细胞介素4 谱学 傅里叶变换红外
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免疫磁珠法及密度梯度离心法分离纯化人外周血中性粒细胞的比较 被引量:3
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作者 庞伟 石蕊 +3 位作者 冯亮 兰亚婷 齐晓伟 王成彬 《军医进修学院学报》 CAS 2010年第11期1090-1092,共3页
目的比较免疫磁珠法和密度梯度离心法分离纯化人外周血中性粒细胞的可靠性。方法用免疫磁珠法和密度梯度离心法分别分离中性粒细胞,使用血球计数仪结合显微镜鉴定细胞纯度、回收率,以台盼蓝检测细胞活力。结果免疫磁珠法与密度梯度离心... 目的比较免疫磁珠法和密度梯度离心法分离纯化人外周血中性粒细胞的可靠性。方法用免疫磁珠法和密度梯度离心法分别分离中性粒细胞,使用血球计数仪结合显微镜鉴定细胞纯度、回收率,以台盼蓝检测细胞活力。结果免疫磁珠法与密度梯度离心法分离中性粒细胞纯度分别为(98.76±0.53)%,(92.34±1.57)%,回收率分别为(90.01±2.24)%和(82.20±2.17)%,两种方法分离后中性粒细胞活力分别为(95.60±2.30)%,(94.20±3.11)%。结论免疫磁珠法分离人中性粒细胞纯度及回收率均好于密度梯度离心法,但分离后细胞活性二者差异不大。 展开更多
关键词 白细胞分离 免疫磁化分离 密度梯度离心法
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人卵巢癌微血管内皮细胞的培养及体外管腔样结构形成的观察 被引量:3
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作者 徐燕 王丹 +1 位作者 谢尧 梁志清 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期201-205,共5页
目的建立人卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascular endothelial cells,ODMECs)免疫磁珠分选体系并观察ODMECs体外二维管腔样结构(tubule-like structure,TLS)的形成。方法利用结合有CD31抗体的MACS MicroBeads... 目的建立人卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascular endothelial cells,ODMECs)免疫磁珠分选体系并观察ODMECs体外二维管腔样结构(tubule-like structure,TLS)的形成。方法利用结合有CD31抗体的MACS MicroBeads免疫磁珠分选系统分离纯化ODMECs。通过形态学、生化和表型特征对所获得的ODMECs进行鉴定;并检测其摄取乙酰化低密度脂蛋白(acetylated-low-density lipoprotein,DIL-acLDL)和结合凝集素Ⅰ(UEA-Ⅰ)的能力,观察其在体外培养体系中二维管腔样结构的形成。结果所获ODMECs流式分析细胞纯度可达99.6%,具有卵石征、接触抑制,表达CD31、CD105、FⅧ-Rag;具有结合UEA-Ⅰ和摄取DIL-acLDL的能力;培养过程中观测到ODMECs可形成二维管腔样结构。结论成功建立了人ODMECs的免疫磁珠分离培养方法,并观察到ODMECs具有体外二维管腔样结构。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 毛细血管 内皮细胞 细胞 培养的 免疫磁化分离
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胃癌患者骨髓微转移细胞的形态及其临床意义 被引量:2
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作者 王贵英 王士杰 +8 位作者 李勇 宋振川 范立侨 王力利 赵群 焦志凯 张志栋 赵雪峰 王东 《实用肿瘤杂志》 CAS 2006年第4期348-351,共4页
目的探讨应用免疫磁珠富集技术研究胃癌骨髓微转移细胞的形态学分类及其临床意义。方法选择20例手术的胃癌患者,提取骨髓有核细胞后,以结合有抗人上皮抗原(hum an ep ithe lia l an tigen,HEA)抗体的M ACS微型免疫磁珠进行标记,以M S+/... 目的探讨应用免疫磁珠富集技术研究胃癌骨髓微转移细胞的形态学分类及其临床意义。方法选择20例手术的胃癌患者,提取骨髓有核细胞后,以结合有抗人上皮抗原(hum an ep ithe lia l an tigen,HEA)抗体的M ACS微型免疫磁珠进行标记,以M S+/RS+型阳性分选柱进行活性肿瘤细胞富集两次。以标记异硫氰酸荧光素(fluoresce in isoth iocyanate,F ITC)的抗细胞角蛋白(cytokeratin,CK)抗体CK-F ITC、二氨基苯茚酮以及溴化乙锭(eth id ium brom ide,EB)染色后,观察阳性细胞形态。结果全组共有9例患者骨髓中检测到344个肿瘤细胞。其中,中等细胞型192个(55.8%),大细胞型51个(14.8%),干细胞样细胞23个(6.7%),M期细胞4个(1.2%),有核细胞碎片42个(12.2%),无核细胞碎片32个(9.3%)。骨髓微转移细胞数与肿瘤TNM分期有关(P=0.038),而与性别(P=0.659)、年龄(P=0.500)、组织学分级(P=0.351)和淋巴结转移情况(P=0.060)无关。结论胃癌骨髓微转移细胞形态多样,预示预后较差。 展开更多
关键词 胃肿瘤/病理学 骨髓肿瘤/继发性 肿瘤转移 增殖细胞核抗原 免疫磁化分离
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血管内皮生长因子诱导的胶质瘤源性微血管内皮细胞体外三维成型特性 被引量:2
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作者 蒋雪峰 白家驷 +3 位作者 卞修武 卢佳友 赵雯 史景泉 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期579-582,共4页
目的比较人脑胶质瘤源性微血管内皮细胞(GDMEC)和内皮细胞样细胞ECV304三维培养血管生成特性,探讨GDMEC在血管生成研究中的意义。方法采用免疫磁珠分选系统获得纯化的人脑GDMEC,以胶原为介质建立内皮细胞三维培养模型,比较观察GDMEC与EC... 目的比较人脑胶质瘤源性微血管内皮细胞(GDMEC)和内皮细胞样细胞ECV304三维培养血管生成特性,探讨GDMEC在血管生成研究中的意义。方法采用免疫磁珠分选系统获得纯化的人脑GDMEC,以胶原为介质建立内皮细胞三维培养模型,比较观察GDMEC与ECV304细胞三维培养小管样结构(TLS)形成及不同浓度血管内皮生长因子(VEGF)对两种细胞TLS形成的诱导作用。结果所获GDMEC细胞纯度达98%,可连续传代培养。GDMEC的TLS形成数显著多于同数量、同时相点ECV304细胞的TLS形成数量。VEGF在体外对GDMEC有显著的促进TLS形成作用,且呈量效和时效关系;VEGF对ECV304细胞形成小管样结构的诱导作用弱。结论GDMEC在体外保持了内皮细胞特征和活跃的血管生成特性,对VEGF的反应性较ECV304好,因而GDMEC更适合体外血管生成研究。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 新生血管化 病理性 内皮 血管 免疫磁化分离 血管内皮生长因子(VEGF) 微血管内皮细胞 人脑胶质瘤 三维培养 ECV304细胞 体外
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磁珠法提取核酸检测丙肝病毒RNA载量及其临床研究 被引量:3
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作者 刘萍 张坚磊 +2 位作者 刘晔华 王欣 穆红 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期482-484,共3页
目的 探讨磁珠法提取核酸检测丙肝病毒RNA载量的方法学评价及其临床应用.方法 采用精密度、检测下限、线性分析和干扰实验对磁珠法提取核酸进行方法学评价,采用磁珠法和柱抽提法对283份标本进行检测,进行相关性分析.结果 磁珠法的高值... 目的 探讨磁珠法提取核酸检测丙肝病毒RNA载量的方法学评价及其临床应用.方法 采用精密度、检测下限、线性分析和干扰实验对磁珠法提取核酸进行方法学评价,采用磁珠法和柱抽提法对283份标本进行检测,进行相关性分析.结果 磁珠法的高值质控血清的批内精密度为6.64±0.11,CV为1.65%,批间精密度为6.68±0.14,CV为2.09%;低值质控血清的批内精密度为4.60±0.12,CV为2.66%,批间精密度为4.56±0.19,CV为4.10%;检测下限为用磁珠法检测20份500IU/L HCV血清标本,20份标本均扩增出曲线,阳性率为100%(20/20).磁珠法线性评估结果呈明显线性,相关系数r=0.999,P<0.05,回归方程y=0.982x+ 0.092.磁珠法和柱抽提法提取核酸检测HCV-RNA载量的比较,磁珠法与柱抽提法的相关系数r=0.990,P<0.05,回归方程y=0.965x +0.247.结论 磁珠法提取核酸检测丙肝病毒RNA载量的方法具有较高的特异性和灵敏度,较强的抗干扰能力,且方法简便易于自动化操作,是理想的实验室核酸提取方法. 展开更多
关键词 肝炎 丙型 聚合酶链反应 免疫磁化分离
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子宫内膜基质干细胞的分离培养研究 被引量:3
14
作者 王利公 杨新园 王伟 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期311-318,共8页
目的:通过体外分离、培养子宫内膜基质干细胞,观察其生物学特性,探索一种简便、高效的分离培养人子宫内膜基质干细胞的方法。方法:取10例因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的内膜组织标本,磁珠分选及克隆形成实验法分选子宫内膜基质干细胞,... 目的:通过体外分离、培养子宫内膜基质干细胞,观察其生物学特性,探索一种简便、高效的分离培养人子宫内膜基质干细胞的方法。方法:取10例因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的内膜组织标本,磁珠分选及克隆形成实验法分选子宫内膜基质干细胞,传代培养。流式细胞仪检测原代细胞表面标记,MTT法观察基质干细胞体外增殖情况;体外向成骨、成脂诱导分化,茜素红和油红O染色鉴定细胞分化能力,RT-PCR测定骨细胞和脂肪细胞特异性基因表达。同时检测基质干细胞表达胚胎时期标志蛋白OCT-4的情况。结果:通过该方法可获得子宫内膜基质干细胞,细胞易于贴壁,生长良好,传代稳定。细胞CD90和CD105表达阳性而CD45和CD34表达阴性。细胞周期的S期和G2-M期细胞比例高,细胞生长曲线呈"S"形。经成骨及成脂诱导后茜素红和油红O染色分别呈阳性反应,成骨及成脂标志性基因表达阳性。此外,免疫细胞化学染色显示OCT-4表达阳性。结论:子宫内膜基质干细胞具有间充质干细胞特性,来源广、易获取,可作为组织工程种子细胞来源。 展开更多
关键词 子宫内膜 细胞学 干细胞 细胞 培养的 免疫磁化分离 流式细胞术 细胞培养技术 方法
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吉西他滨常规化疗对肝癌干细胞样细胞影响的观察 被引量:3
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作者 易善永 南克俊 +1 位作者 陈静 姜丽丽 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2010年第16期1270-1272,共3页
目的:探讨吉西他滨常规化疗对人肝癌细胞株MHCC97H中肝癌干细胞样细胞的影响。方法:用免疫磁珠分选MH-CC97H中肝癌干细胞样细胞,将其接种到20只裸鼠皮下,建立移植瘤模型。将其随机分为治疗组和对照组(n=10)。治疗组:给予吉西他滨100mg/k... 目的:探讨吉西他滨常规化疗对人肝癌细胞株MHCC97H中肝癌干细胞样细胞的影响。方法:用免疫磁珠分选MH-CC97H中肝癌干细胞样细胞,将其接种到20只裸鼠皮下,建立移植瘤模型。将其随机分为治疗组和对照组(n=10)。治疗组:给予吉西他滨100mg/kg腹腔注射化疗(d1、d8、d15);对照组:在相同的时间内给予等量生理盐水。治疗后比较两组移植瘤大小变化;免疫组化检测肿瘤组织中CD133表达;流式细胞仪检测原代培养中CD133+细胞百分数。结果:治疗后,治疗组的移植瘤明显缩小,两组差异有统计学意义(P=0.046,P=0.012);治疗组和对照组免疫组化检测的灰度值分别为115.27±18.14和169.35±26.78,两组差异有统计学意义,P=0.041;治疗组和对照组原代培养中CD133+细胞百分数分别为(36.12±3.85)%和(14.65±1.98)%,两组差异有统计学意义,P=0.009。结论:肝癌干细胞样细胞具有多药耐药性,吉西他滨常规化疗对其没有杀伤作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤/药物疗法 吉西他滨 肝肿瘤干细胞 免疫磁化分离
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自制免疫磁珠在前列腺肿瘤组织干细胞提取中的应用 被引量:2
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作者 龚锐 李胜英 +2 位作者 霍志霞 丁浩 孙二琳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第1期36-41,共6页
背景:有效分离干细胞是前列腺癌发生发展研究的基础,目前的主流方法是免疫磁珠分选。目的:应用自制的免疫磁珠分选前列腺肿瘤组织中的CD133^+/CD44^+细胞,并进一步培养和传代进行免疫学鉴定,以确定免疫磁珠分选效果。方法:应用独创的磁... 背景:有效分离干细胞是前列腺癌发生发展研究的基础,目前的主流方法是免疫磁珠分选。目的:应用自制的免疫磁珠分选前列腺肿瘤组织中的CD133^+/CD44^+细胞,并进一步培养和传代进行免疫学鉴定,以确定免疫磁珠分选效果。方法:应用独创的磁珠制备免疫磁珠,分选肿瘤组织中细胞膜表达CD133和CD44的细胞。观察分选细胞无血清培养成球情况,及传代后其在形态学、增殖能力方面与标准肿瘤细胞株的差异,并用免疫荧光法检测其特异性抗体的表达。结果与结论:制备的免疫磁珠粒径小、分选效果佳。分选的细胞成球效果好,培养传代后的细胞依旧明显表达CD133和CD44抗原。分选的细胞非诱导培养后可见多种形态,生长旺盛。转化生长因子β诱导培养后细胞形态较单一且生长缓慢。两组细胞与标准肿瘤细胞株培养后的增殖情况差异均有显著性意义(P<0.05)。结果表明应用自制免疫磁珠从肿瘤细胞中分选的CD133^+/CD44^+细胞经过初步形态及功能鉴定具有干细胞的特性,可为前列腺癌干细胞的提取及进一步培养研究奠定基础。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 免疫磁化分离 抗原 CD44 组织工程 干细胞 免疫磁珠细胞分选 CD133 CD44
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用于树突状细胞治疗的单个核细胞分离与纯化技术研究现状 被引量:2
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作者 曾嘉 郭永建 陈颖 《福建医药杂志》 CAS 2010年第1期92-93,95,共3页
关键词 树突细胞 单个核细胞 细胞分离 免疫磁化分离
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免疫磁珠法分离preS1结合蛋白 被引量:2
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作者 杨丽 王良宏 +2 位作者 潘卫 李兴 杨国珍 《贵阳医学院学报》 CAS 2013年第1期24-26,共3页
目的:用免疫磁珠分离人肝癌细胞(HepG2)细胞膜上与乙型肝炎病毒(HBV)preS1肽段结合的蛋白,建立快速分离膜受体蛋白的方法。方法:提取HepG2细胞膜蛋白,以生物素标记的preS1肽段为钓饵,与提取的膜蛋白4℃孵育过夜,加入链霉亲和素标记的磁... 目的:用免疫磁珠分离人肝癌细胞(HepG2)细胞膜上与乙型肝炎病毒(HBV)preS1肽段结合的蛋白,建立快速分离膜受体蛋白的方法。方法:提取HepG2细胞膜蛋白,以生物素标记的preS1肽段为钓饵,与提取的膜蛋白4℃孵育过夜,加入链霉亲和素标记的磁珠,洗涤磁珠后收集结合蛋白,通过SDS-PAGE电泳分离结合蛋白。结果:用磁珠的方法所收集到的结合蛋白,通过SDS-PAGE电泳分离出了多条条带,比较明显的45~97 ku有9条,>97 ku处有5条,<20 ku处有2条。结论:通过免疫磁珠分离法可有效的获得HepG2细胞膜上preS1肽段的结合蛋白。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 免疫磁化分离 生物素 亲和素
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人脐血中CD133^+血管内皮祖细胞的分离培养和生物学特性 被引量:2
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作者 谢松涛 陈璧 陶克 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期1287-1289,F0003,共4页
目的:观察免疫磁珠法分离得到的CD133+血管内皮祖细胞的细胞表面标记及生物学特性。方法:实验于2002-11/2003-08在解放军第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。①选取正常顺产或剖腹产人胎盘(解放军第四军医大学西京医院妇产科提供... 目的:观察免疫磁珠法分离得到的CD133+血管内皮祖细胞的细胞表面标记及生物学特性。方法:实验于2002-11/2003-08在解放军第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。①选取正常顺产或剖腹产人胎盘(解放军第四军医大学西京医院妇产科提供,产妇均知情同意)作为CD133+血管内皮祖细胞的标本来源。②人胎盘脐血ACD-B抗凝,稀释后取7mL脐血缓慢加入淋巴细胞分离液3mL,2100r/min离心30min,取棕黄色层低密度单个核细胞,洗涤去血小板。免疫磁珠与FITC-CD133单抗室温孵育30min,洗去多余单抗,将包被FITC-CD133的免疫磁珠加入到单个核细胞中,室温孵育30min,置于磁场中1min,吸弃细胞悬液,加入磁珠-细胞分离液从免疫磁珠上释放出CD133+血管内皮祖细胞。加入EGM-2MV培养基,接种于包被I型胶原的培养瓶中,24h换液除去未贴壁细胞,3d后半量换液,培养3~4周。③观察CD133+血管内皮细胞经免疫磁珠分离后的形态变化;采用流式细胞仪分析CD133+血管内皮祖细胞在脐血单个核细胞的比例及免疫磁珠的分离效率;免疫荧光及酶组织化学检测CD133+血管内皮祖细胞体外培养不同时期的表形变化;透射电镜观察成熟血管内皮细胞W-P小体的形成情况。结果:①CD133+血管内皮祖细胞体外培养形态观察:贴壁小细胞团在4~5d可见伪足伸出,7d后呈克隆状迅速生长,2~3周后密集区细胞呈“鹅卵石”样,培养4周融合后的细胞呈梭形。②CD133+血管内皮祖细胞分离率检测结果:CD133+血管内皮祖细胞在脐血单个核细胞中的比例为0.91%,经免疫磁珠分离后比例为85.52%。③CD133+血管内皮祖细胞体外培养不同时期的免疫表形变化:培养第5天极少数细胞CD133染色阳性,大部分细胞CD34及vWF染色阳性;第10天所有细胞CD133染色均呈阴性,大部分细胞CD34、vWF染色呈阳性。④成熟血管内皮细胞W-P小体的形成情况:透射电镜下培养第10天可见� 展开更多
关键词 造血干细胞 血管 抗原 CD34/遗传学 内皮生长因子 免疫磁化分离 胎血
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人牙周膜间充质干细胞的分离培养及超微结构观察 被引量:2
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作者 张凤秋 孟焕新 +1 位作者 韩劼 丁茜 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期274-277,共4页
目的:分离培养人牙周膜间充质干细胞并观察其超微结构。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,克隆培养观察细胞克隆形成情况,采用STRO-1为标记物以免疫磁珠法分离筛选人牙周膜间充质干细胞,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,透射电镜观察分... 目的:分离培养人牙周膜间充质干细胞并观察其超微结构。方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,克隆培养观察细胞克隆形成情况,采用STRO-1为标记物以免疫磁珠法分离筛选人牙周膜间充质干细胞,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,透射电镜观察分离筛选细胞的超微结构。结果:人牙周膜干细胞具有克隆形成能力,胞浆内核糖体丰富,可见粗面内质网和线粒体,而其他胞浆细胞器较少,具有处于低分化细胞超微结构特点。结论:牙周膜干细胞具有克隆形成能力和一般干细胞的超微结构特点。 展开更多
关键词 牙周膜 间质干细胞 细胞培养技术 免疫磁化分离
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