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恩诺沙星完全抗原的合成及其偶联条件的初步优化 被引量：10
1
作者 隋建新 林洪 +3 位作者 刘春娥 曹立民 江洁 李振兴 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 2006年第1期167-172,共6页
采用碳二亚胺法合成了恩诺沙星的完全抗原,通过紫外光谱、激光解析飞行质谱等手段对完全抗原的合成效果进行了分析。以BALB/C小鼠的抗血清效价为指标,利用正交试验对完全抗原制备过程中的几个影响因素进行了优化。结果表明:载体蛋白具... 采用碳二亚胺法合成了恩诺沙星的完全抗原,通过紫外光谱、激光解析飞行质谱等手段对完全抗原的合成效果进行了分析。以BALB/C小鼠的抗血清效价为指标,利用正交试验对完全抗原制备过程中的几个影响因素进行了优化。结果表明:载体蛋白具有较为明显的影响,其中鸡血清白蛋白(OVA)的效果最好;沙星与蛋白的物质的量比为75∶1,偶联时间为24h。经验证,恩诺沙星完全抗原合成条件的优化筛选取得了预期的效果。 展开更多
关键词 恩诺沙星 完全抗原 偶联条件
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副溶血性弧菌免疫磁珠偶联条件优化及捕获性能评价 被引量：7
2
作者 黄韵仪 胡连花 +3 位作者 孙力军 王雅玲 伍慧琦 刘阳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期7-11,共5页
优化磁珠和副溶血性弧菌血清的偶联条件,并对其捕获性能进行评价。以考马斯亮蓝法测定磁珠偶联血清蛋白量,考察磁珠型号、粒径大小、活化剂的浓度、偶联温度、时间等对偶联效果的影响,并利用平板计数法评价免疫磁珠的捕获性能。选择S型... 优化磁珠和副溶血性弧菌血清的偶联条件,并对其捕获性能进行评价。以考马斯亮蓝法测定磁珠偶联血清蛋白量,考察磁珠型号、粒径大小、活化剂的浓度、偶联温度、时间等对偶联效果的影响,并利用平板计数法评价免疫磁珠的捕获性能。选择S型磁珠,活化剂采用EDC和NHS溶液(浓度均为0.005 g/L)各0.1 mL,25℃、24 h进行偶联,血清蛋白和磁珠结合效率最高;在优化的条件下制备的免疫磁珠能特异性富集副溶血性弧菌,最低检测限为5 cfu/100 mL。利用优化的条件可以明显提高磁珠与血清蛋白的结合效率,制备的免疫磁珠具有较好的特异性,其检测限和准确度都大幅提高,为副溶血性弧菌免疫磁珠试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 免疫磁珠 副溶血性弧菌 血清蛋白 偶联条件 富集
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影响磁珠共价偶联效率的因素分析 被引量：3
3
作者 初丽娜 孟倩 张曼 《临床和实验医学杂志》 2013年第7期490-492,共3页
目的研究不同条件下Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与牛血清白蛋白(BSA)的偶联效率,探讨其影响因素。方法分别取Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA混合,在不同的pH条件、不同的硫酸铵浓度和不同的BSA浓度下37℃振荡孵育18 h... 目的研究不同条件下Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与牛血清白蛋白(BSA)的偶联效率,探讨其影响因素。方法分别取Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA混合,在不同的pH条件、不同的硫酸铵浓度和不同的BSA浓度下37℃振荡孵育18 h,然后置于磁力架上静置2～3 min分离上清液。应用Bradford蛋白定量法对偶联前后的上清液进行蛋白定量分析,计算不同条件下的偶联效率。结果当缓冲液pH值为9.5时偶联效率为1.12μgBSA/mg磁珠,pH值为7.4时偶联效率为0.41μg BSA/mg磁珠;当反应体系中硫酸铵终浓度为1.2 mol/L时偶联效率为9.5μg BSA/mg磁珠,硫酸铵浓度为0.8 mol/L时偶联效率为8μg BSA/mg磁珠;当偶联的BSA终浓度为0.4 mol/L时偶联效率为9.5μg BSA/mg磁珠,BSA浓度为0.6 mol/L时偶联效率为13μg BSA/mg磁珠。结论缓冲液pH值、硫酸铵浓度和BSA的浓度会影响Dynabeads M-280 Tosylactivated磁珠与BSA的偶联效率,该偶联过程在pH9.5、1.2 mol/L硫酸铵浓度和0.6 mol/L BSA的条件下进行较为适合。 展开更多
关键词 磁珠 牛血清白蛋白 偶联条件 偶联效率
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单核细胞增生李斯特菌快速检测技术的建立及应用 被引量：1
4
作者 赵梦迪 张琴 +5 位作者 徐尧 姚浩 王泽港 孟闯 焦新安 殷月兰 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期59-64,共6页
单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可通过食物链感染人类,严重危害人体健康。因此快速检测食物样品中Lm对于李斯特菌病的防控尤为必要。细胞壁表面蛋白ActA是Lm重要的毒力因子,在前期... 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可通过食物链感染人类,严重危害人体健康。因此快速检测食物样品中Lm对于李斯特菌病的防控尤为必要。细胞壁表面蛋白ActA是Lm重要的毒力因子,在前期制备的ActA单克隆抗体的基础上,将其与磁珠进行偶联,并结合李斯特菌显色培养基快速检测Lm。结果表明:抗体最适偶联量为100μg,最佳偶联时间为4 h,细菌最佳富集时间为15 min。在此基础上建立了免疫磁珠快速检测技术,具有特异性强、灵敏度高等优点。综上,该技术可高效检测出食品中的Lm,对预防和控制李斯特菌病的发生具有重要意义。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 免疫磁珠 偶联条件 快速检测
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大分子葡聚糖—牛血清蛋白抗原偶联物的制备与表征
5
作者 方丽莎 谢珍茗 +1 位作者 梁达奉 余林 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期219-221,224,共4页
用还原胺化法制备大分子葡聚糖-牛血清蛋白(BSA)拟糖蛋白抗原,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合考马斯亮蓝和过碘酸-品红两种染色方法验证偶联物的生成。考察不同反应条件(葡聚糖T40的氧化度,偶联pH,氧化葡聚糖和蛋白质的比值,偶联时间)... 用还原胺化法制备大分子葡聚糖-牛血清蛋白(BSA)拟糖蛋白抗原,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合考马斯亮蓝和过碘酸-品红两种染色方法验证偶联物的生成。考察不同反应条件(葡聚糖T40的氧化度,偶联pH,氧化葡聚糖和蛋白质的比值,偶联时间)对偶联反应的影响。确定拟糖蛋白抗原的最佳偶联条件为:葡聚糖T40/氧化剂NaIO4=1/120(物质的量比),偶联溶液pH8.0,葡聚糖T40/BSA=1/1(物质的量比),偶联时间24h。并将此反应条件用于T10和T100拟糖蛋白抗原的合成。 展开更多
关键词 葡聚糖 拟糖蛋白 抗原 偶联条件
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