目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的...目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的快速检测,进行特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行比较。结果:成功建立起沙门菌HDA检测法,最低检测限为460 pg/tube,与普通PCR方法相当。结论:HDA法检测沙门菌具有快速、简便、特异、灵敏等特点,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。展开更多
目的预测卵巢癌抑癌基因HELQ编码蛋白(HELQ蛋白)的结构和功能。方法采用Ex PASy服务器中的工具分析HELQ蛋白的理化特征。分别采用PSORTⅡ和TMHMM预测HELQ蛋白的亚细胞定位和跨膜拓扑结构。采用Signal P 4.0预测HELQ蛋白的信号肽。采用Sc...目的预测卵巢癌抑癌基因HELQ编码蛋白(HELQ蛋白)的结构和功能。方法采用Ex PASy服务器中的工具分析HELQ蛋白的理化特征。分别采用PSORTⅡ和TMHMM预测HELQ蛋白的亚细胞定位和跨膜拓扑结构。采用Signal P 4.0预测HELQ蛋白的信号肽。采用Scan Prosite和SMART分析HELQ蛋白的功能结构域以及结构域分区。采用PSIPRED和I-TASSER预测HELQ蛋白的二级和三级结构以及配体结合位点。采用STRING10.0预测HELQ蛋白与其他蛋白的交互作用。结果 HELQ蛋白主要定位在细胞核(47.8%)和细胞质(39.1%)中,有4个保守结构域DEXDc、HELICc、HHH_5和PRK02362,并包含解旋酶ATP结合区和解旋酶C端结合区两个功能结构域;成功建立了HELQ蛋白的二级和三级结构模型,其中二级结构中α螺旋、无规则卷曲及折叠结构比例分别为54%、31%和6%。三维配体结构分析发现HELQ蛋白包含一个酶活性中心位点His341,催化Ile333、Lys335、Tyr337、Gln340、Pro360、Thr361、Ser362、Gly363、Gly364、Lys365、Thr366、Leu367、Glu464和Ala711等结合位点与配体ATP结合。交联蛋白质分析发现HELQ蛋白可能与RAD51、POLA1、PLON、FANCD2、DHX8等蛋白存在交互作用。结论 HELQ蛋白可能具有ATP依赖性解旋酶的结构和功能,参与DNA损伤的修复过程。展开更多
文摘目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的快速检测,进行特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行比较。结果:成功建立起沙门菌HDA检测法,最低检测限为460 pg/tube,与普通PCR方法相当。结论:HDA法检测沙门菌具有快速、简便、特异、灵敏等特点,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。
