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miR-181a靶向沉默信息调节因子相关酶1在过氧化氢诱导的人小梁网细胞氧化应激中的调节作用 被引量：2
1
作者 田思佳 王骞 +4 位作者 张蕾 屈林 肖燕 朱俊英 王怀洲 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第9期826-830,共5页
目的探讨miR-181a对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人小梁网细胞(HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法HTMCs随机分为空白组(0μmol·L^(-1)H_(2)O_(2))、200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、600... 目的探讨miR-181a对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的人小梁网细胞(HTMCs)氧化应激的调节作用及其机制。方法HTMCs随机分为空白组(0μmol·L^(-1)H_(2)O_(2))、200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、600μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组,分别使用相应浓度H_(2)O_(2)处理HTMCs,24 h后MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-181a mRNA表达,Western blot检测各组细胞中沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)蛋白表达。根据转染物的不同分为miR-181a inhibitor组、miR-181a NC组、miR-181a mimics组、miR-181a inhibitor+si-SIRT1组和miR-181a inhibitor+si-NC组,使用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针检测各组细胞内活性氧(ROS)含量,使用超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)ELISA试剂盒检测各组细胞SOD和MDA活性,使用Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中SIRT1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果与空白组比较,200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、400μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组、600μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)组细胞存活率均降低(均为P<0.05)。细胞miR-181a mRNA的表达随着H_(2)O_(2)浓度的增加而增加,SIRT1蛋白的表达随着H_(2)O_(2)浓度的增加而降低(均为P<0.05)。与miR-181a NC组比较,miR-181a mimics组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均降低,miR-181a inhibitor组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均降低,细胞SOD活性、SIRT1蛋白表达均升高(均为P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实,miR-181a靶向抑制SIRT1蛋白的表达。与miR-181a inhibitor+si-NC组比较,miR-181a inhibitor+si-SIRT1组细胞凋亡率、MDA活性和ROS含量均升高,SOD活性降低(均为P<0.05)。结论miR-181a可能通过靶向SIRT1调节H_(2)O_(2)诱导的HTMCs氧化应激作用。 展开更多
关键词 青光眼 人小梁网细胞 氧化应激 miR-181a 沉默信息调节因子相关酶1
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钙敏感受体在高糖诱导的人眼小梁网细胞损伤中的作用
2
作者 车冰冰 孙梦婷 +4 位作者 王宁宁 岑杰 李国鹏 赵冰冰 魏璨 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期839-844,共6页
目的:观察钙敏感受体(CaSR)在高糖(HG)诱导的人眼小梁网细胞(HTMC)损伤中的作用和机制。方法:将HTMC随机分为:对照(control)组(10%胎牛血清-DMEM)、HG组(10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖)、HG+CaSR激动剂NPS R568组(10%胎牛血清-DMEM+... 目的:观察钙敏感受体(CaSR)在高糖(HG)诱导的人眼小梁网细胞(HTMC)损伤中的作用和机制。方法:将HTMC随机分为:对照(control)组(10%胎牛血清-DMEM)、HG组(10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖)、HG+CaSR激动剂NPS R568组(10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖+10μmol/L NPS R568)和HG+CaSR抑制剂Calhex231组(10%胎牛血清-DMEM+50 mmol/L葡萄糖+3μmol/L Calhex231),培养72 h。CCK-8法测量不同浓度的葡萄糖刺激下HTMC活力;试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测CaSR、SOD2、凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3和Bcl-2)及自噬相关蛋白(ATG7、P62、LC3-I和LC3-Ⅱ)表达;免疫荧光染色观察CaSR细胞定位和表达。结果:葡萄糖浓度为50 mmol/L时,HTMC相对活力由1.00±0.03下降至0.60±0.07(P<0.05);与control组相比,HG使HTMC中CaSR、cleaved caspase-3和P62表达以及MDA含量增加(P<0.05),而SOD活性,SOD2、Bcl-2和ATG7表达,以及LC3-Ⅱ/LC3-I比值下降(P<0.05);NPS R568进一步促进HG诱导的细胞损伤,而Calhex231可减轻上述变化(P<0.05)。结论:CaSR表达参与HG诱导的HTMC损伤,其机制与促进细胞凋亡和氧化应激以及抑制自噬有关。 展开更多
关键词 钙敏感受体 人小梁网细胞 高糖 细胞凋亡 氧化应激 自噬
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SIRT1对氧化应激下人小梁网细胞功能的影响
3
作者 郭俊宏 申晓丽 +4 位作者 洪向前 马大卉 谢洪彬 杨明民 汪建涛 《眼科学报》 CAS 2021年第6期405-412,共8页
目的:通过在人小梁网细胞(human trabecular meshwork cell,HTMC)中过表达沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 1,SIRT1),探讨SIRT1对氧化应激下HTMC功能的影响。方法:将SIRT1过表达慢病毒和GFP阴性对照慢病毒按照最... 目的:通过在人小梁网细胞(human trabecular meshwork cell,HTMC)中过表达沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator 1,SIRT1),探讨SIRT1对氧化应激下HTMC功能的影响。方法:将SIRT1过表达慢病毒和GFP阴性对照慢病毒按照最佳(multiplicity of infection,MOI)分别转染入HTMC,并用实时定量PCR法对SIRT1是否在细胞中过表达进行验证。实验分为以下4组:正常组、H2O2组、H2O2+Lv-SIRT1-OE(过表达)组、H2O2+Lv-GFP组,分别采用Transwell法和CCK8法检测氧化应激下HTMC的迁移能力和活性。两组间比较采用独立样本t检验。结果:在正常组、H2O2组、H2O2+Lv-SIRT1-OE组、H2O2+Lv-GFP组这4组中,Transwell实验结果分别为436±73、254±25、510±51、327±46,H2O2+Lv-SIRT1-OE组分别与H2O2组和H2O2+Lv-GFP组差异均有统计学意义(P<0.01)。CCK8法结果显示,H2O2+Lv-SIRT1-OE组分别与H2O2组和H2O2+Lv-GFP组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。H2O2+Lv-SIRT1-OE组分别与H2O2组和阴性对照组(H2O2+Lv-GFP)相比,Bax表达水平明显下降,Bcl-2表达水平明显提高,差异均有统计学意义(P<0.01)。ROS活性氧测定显示H2O2+Lv-SIRT1-OE组比H2O2组的细胞活性氧水平显著降低(P<0.05)。结论:在HTMC中过表达SIRT1能有效降低氧化应激对HTMC迁移能力和活性的影响,从而对HTMC起到一定的保护作用,为后续研究SIRT1保护氧化应激下HTMC的调控机制打下基础。 展开更多
关键词 沉默信息调节因子2相关酶1 人小梁网细胞 迁移 细胞活性
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嘌呤受体P2X_7在正常人眼和开角型青光眼患者小梁网细胞上的表达对比研究
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作者 祝芸芸 左炜 +2 位作者 蔡晓华 刘寨清 刘琳 《临床眼科杂志》 2017年第3期202-206,共5页
目的探讨嘌呤受体P2X7在体外培养正常人眼小梁网细胞(NTMC)及开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞(PTMC)上的表达差异。方法体外培养、鉴定2种人眼小梁网细胞,利用实时荧光定量PCR和Westernblot方法分别检测2种小梁网细胞上P2X_7受体基因... 目的探讨嘌呤受体P2X7在体外培养正常人眼小梁网细胞(NTMC)及开角型青光眼(POAG)患者小梁网细胞(PTMC)上的表达差异。方法体外培养、鉴定2种人眼小梁网细胞,利用实时荧光定量PCR和Westernblot方法分别检测2种小梁网细胞上P2X_7受体基因和蛋白的表达差异。结果形态学和免疫学方法成功鉴定了体外培养的2种人眼小梁网细胞;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)和Westernblot证实正常人和POAG患者小梁网细胞上均有P2X7受体的基因和蛋白表达,且后者表达较前者增高。结论 POAG患者小梁网细胞上的P2X7受体表达较正常人眼小梁网细胞增高。P2X_7受体在小梁网细胞上的作用值得进一步研究。 展开更多
关键词 P2X7受体 人小梁网细胞 实时荧光定量PCR WESTERNBLOT
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Myocilin Asn 450 Tyr突变促进人原代小梁网细胞中细胞外基质蛋白的表达及意义
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作者 闫雪静 武珅 +1 位作者 刘谦 张敬学 《眼科》 CAS 2019年第5期374-380,共7页
目的研究小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白基因Myocilin N450Y突变(c.A1348T: p.N450Y, Myoc-N450Y)对人原代小梁网细胞(HTMC)细胞外基质(ECM)蛋白相关基因表达的影响及其参与青光眼发生发展的机制。设计实验研究。研究对象人原代小梁网细... 目的研究小梁网糖皮质激素诱导反应蛋白基因Myocilin N450Y突变(c.A1348T: p.N450Y, Myoc-N450Y)对人原代小梁网细胞(HTMC)细胞外基质(ECM)蛋白相关基因表达的影响及其参与青光眼发生发展的机制。设计实验研究。研究对象人原代小梁网细胞。方法实验分为三组,共9个样本,分别为空载体组、野生型Myoc (Myoc-WT)组及Myoc-N450Y组,用慢病毒感染的方法将Myoc-WT基因及Myoc-N450Y突变基因在HTMC中过表达,用蛋白质印迹法及荧光定量PCR方法检测Myoc-WT组和Myoc-N450Y组ECM蛋白Ⅰ型胶原蛋白(COL Ⅰ)、Ⅳ型胶原蛋白(COL Ⅳ)、纤连蛋白(FN)及基质金属蛋白酶(MMP)相关基因基质金属蛋白酶2(Mmp2)、基质金属蛋白酶9(Mmp9)的表达差异;构建野生型Myoc基因(Myoc-WT)及Asn 450 Tyr突变的Myoc基因(Myoc-N450Y)慢病毒载体,包装并确定慢病毒感染HTMC的条件;应用Myoc-WT慢病毒颗粒及Myoc-N450Y慢病毒颗粒感染HTMC,采用蛋白印迹法及荧光定量PCR方法检测Myoc基因的过表达情况及N450Y突变后对Col Ⅰ、Col Ⅳ、Fn、Mmp2、Mmp9表达的影响。主要指标 Col Ⅰ、Col Ⅳ、Fn、Mmp2、Mmp9基因的表达量。结果酶切鉴定结果及测序结果显示成功构建过表达Myoc-WT基因及Myoc-N450Y基因的慢病毒载体,并且慢病毒颗粒感染HTMC的感染复数(MOI)为5。蛋白质印迹及荧光定量PCR结果显示Myoc-WT及Myoc-N450Y组Myoc基因的蛋白水平及mRNA水平均高效过表达,空载体组、Myoc-WT组及Myoc-N450Y组Myoc基因mRNA相对表达量分别为1.00±0.11、28.88±1.28、22.06±0.47(F=1020.02,P<0.001)。荧光定量PCR结果显示,Myoc-N450Y组Col Ⅰ、Col Ⅳ及Fn基因 mRNA相对表达量分别为2.08±0.07、1.76±0.08、2.63±0.06,显著高于Myoc-WT组的0.93±0.04、0.95±0.09、0.89±0.06(P均<0.001)。且与Myoc-WT组相比,Myoc-N450Y组COL Ⅰ及FN蛋白表达水平显著上调。Myoc-N450Y组Mmp2、Mmp9 mRNA相对表达量分别为0.32±0.02和0.33±0.15,分别显著低于Myoc-WT组的1.01± 展开更多
关键词 MYOCILIN 青光眼 人原代小梁网细胞 细胞外基质
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