猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M蛋白共表达的自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答 被引量：17

1

作者 江云波 方六荣 +2 位作者 肖少波 张辉 陈焕春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1011-1017,共7页

目的探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自杀性DNA疫苗的免疫效果。方法将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游,获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。结果Westernblot检测证实O... 目的探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)自杀性DNA疫苗的免疫效果。方法将ORF5和ORF6基因分别插入可以同时表达两个外源基因的表达载体pSCA2的26S启动子下游,获得ORF5和ORF6双基因共表达自杀性DNA疫苗pSFV-56。结果Westernblot检测证实ORF5和ORF6基因获得正确表达,并且所表达的GP5和M蛋白可以形成异源二聚体。将pSFV-56免疫Balb/c小鼠,首免后4周可检测到特异性PRRSV中和抗体,首免后8周的中和抗体最高可达1﹕32,同时还可检测到较高的特异性细胞免疫应答。进一步将pSFV-56免疫断奶仔猪,二免后4周即可产生1:8～1:16的中和抗体,直到二免后6周仍维持这种高水平的中和抗体,而且也可检测到较高的特异性细胞免疫应答。结论上述研究结果表明pSFV-56具有良好的免疫原性和诱发免疫动物产生较高免疫应答的能力。 展开更多

关键词 “自杀性”dna疫苗 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5和M蛋白共表达

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与α疱疹病毒VP22蛋白融合增强“自杀性”DNA疫苗的免疫反应 被引量：4

2

作者 肖少波 方六荣 +3 位作者 姚琳 潘永飞 江云波 陈焕春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期508-512,共5页

α疱疹病毒VP22具有独特的蛋白转导特性,能通过一种不依赖于高尔基体的非经典途径从原始表达细胞转导到邻近的非表达细胞中,而且VP22还能使与之融合的外源蛋白在细胞间转导.因此,VP22是一种极具开发潜力的免疫增强分子.本研究以牛疱疹病... α疱疹病毒VP22具有独特的蛋白转导特性,能通过一种不依赖于高尔基体的非经典途径从原始表达细胞转导到邻近的非表达细胞中,而且VP22还能使与之融合的外源蛋白在细胞间转导.因此,VP22是一种极具开发潜力的免疫增强分子.本研究以牛疱疹病毒1型(BHV-1)的VP22为研究对象,以β-半乳糖苷酶(β-gal)为模式抗原,构建了BHV-1VP22(BVP22)与β-gal融合的“自杀性”DNA疫苗表达质粒pSCAB-gal,转染BHK-21细胞.X-gal染色结果表明,表达的融合蛋白BVP22-gal仍具有蛋白转导能力,而单独表达β-gal的“自杀性”DNA疫苗表达质粒pSCA-gal不具有这种能力.进一步将pSCAB-gal和pSCA-gal分别免疫BALB/c小鼠,结果pSCAB-gal免疫能显著增强β-gal特异性ELISA抗体和细胞毒T细胞(CTL)活性,表明与BVP22融合能显著增强“自杀性”DNA疫苗的体液免疫和细胞免疫反应. 展开更多

关键词 “自杀性”dna疫苗 VP22 蛋白转导

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“自杀性”DNA疫苗研究进展 被引量：3

3

作者 许信刚 张彦明 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期24-28,共5页

核酸疫苗又称基因疫苗、DNA疫苗 ,是从基因治疗研究领域发展起来的一种全新的免疫防制剂。核酸疫苗具有许多优点 ,但是同时也有其不可避免的缺陷 ,这就使人们不得不把注意力集中在对传统的核酸疫苗进行改造以保持其优点 ,避免其缺陷上... 核酸疫苗又称基因疫苗、DNA疫苗 ,是从基因治疗研究领域发展起来的一种全新的免疫防制剂。核酸疫苗具有许多优点 ,但是同时也有其不可避免的缺陷 ,这就使人们不得不把注意力集中在对传统的核酸疫苗进行改造以保持其优点 ,避免其缺陷上。“自杀性”DNA疫苗(suicidalDNAvaccine)就是基于常规DNA疫苗和“自主复制型”RNA疫苗 (self replicatingRNAvaccine)基础上发展起来的一种新型疫苗 ,不仅具有常规DNA疫苗易制备、运输、保存等方面的优点 ,而且还有“自主复制型”RNA疫苗的安全性与有效性 ,这使得其成为目前核酸疫苗研究的热点。文章就“自杀性”DNA疫苗的载体、构建、作用机理。 展开更多

关键词 “自杀性”dna疫苗 核酸疫苗 “自主复制型”RNA疫苗 免疫防制剂

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共表达PRRSVGP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答 被引量：4

4

作者 孙建富 赵和平 +7 位作者 李娜 孙元 夏照和 周艳君 王煜 祁巧芬 鲁承 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1714-1722,共9页

为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载... 为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。 展开更多

关键词 “自杀性”dna疫苗 猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪瘟病毒 泛DR表位 VP22转导蛋白 共表达

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“自杀性”DNA疫苗研究进展 被引量：6

5

作者 向菁 王红宁 +2 位作者 鲜凌瑾 张夏兰 周庆哲 《动物医学进展》 CSCD 2007年第5期83-87,共5页

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点。但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制。“自杀性”DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗... DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点。但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制。“自杀性”DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗。由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点。同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效。文章针对“自杀性”DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍。 展开更多

关键词 “自杀性”dna疫苗 甲病毒 “自主复制型”RNA复制子

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基于西门利克森林病毒复制子的“自杀性”DNA疫苗载体的构建及其体外表达特性 被引量：3

6

作者 方六荣 肖少波 +3 位作者 谢京国 潘永飞 姚林 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期217-221,共5页

对西门利克森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pSFV1进行改造,即在SFV非结构蛋白(nSPs) 上游插入依赖于RNA聚合酶Ⅱ的人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子序列(hCMV IE Pro/Enh),同时在pS- FV1的多克隆位点下游插入SV40 poly(A)终止信号... 对西门利克森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pSFV1进行改造,即在SFV非结构蛋白(nSPs) 上游插入依赖于RNA聚合酶Ⅱ的人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子序列(hCMV IE Pro/Enh),同时在pS- FV1的多克隆位点下游插入SV40 poly(A)终止信号序列,获得可以完全在DNA水平上操作并具有自主复制功能的表达载体pSFV-DNA。为了进一步探讨改造载体的转染效率、表达能力以及是否能诱导细胞凋亡等特性, 将报告基因EGFP插入pSFV-DNA中亚基因组启动子下游,构建的重组表达质粒pSFV-EGFP转染BHK-21 细胞,转染后12 h即可观察到荧光,但转染效率明显低于直接由hCMV IE Pro/Enh驱动的EGFP真核表达质粒pEGFP-C1;提取转染后48 h的细胞基因组DNA,电泳发现pSFV-EGFP转染细胞均呈典型的DNA断裂(ladder),而pEGFP-C1转染细胞未观察到这种现象。上述结果表明:改造的载体不仅可完全在DNA水平上操作,而且能正确表达外源基因和诱导细胞凋亡,为开展各种病原微生物的“自杀性”DNA疫苗研究提供了良好的工具。 展开更多

关键词 西门利克森林病毒复制子 “自杀性”dna疫苗 表达载体 表达特性

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猪瘟病毒E2基因自杀性DNA疫苗的构建及动物免疫试验 被引量：4

7

作者 郭抗抗 温肖会 +4 位作者 汤智慧 侯勃 张彦明 谢林红 王晶钰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期625-629,共5页

从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2。用BamHⅠ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA... 从含有猪瘟病毒(CSFV)Shimen株E2全长基因的重组质粒pMD18-T-E2上扩增得到带有BamHⅠ酶切位点的E2基因片段,构建重组克隆质粒pMD19-T-E2。用BamHⅠ酶切pMD19-T-E2和"自杀性"DNA疫苗表达载体pSCA1,构建"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA1-E2。对目的基因E2的大小、插入位置、方向和读码框经PCR、酶切和序列测定进行鉴定。用纯化的阳性质粒pSCA1-E2转染PK-15细胞,转染后48 h荧光抗体法检测E2蛋白的表达;纯化的pSCA1-E2质粒分别免疫小鼠(10μg/只)和试验猪(600μg/头),二免后分别检测小鼠脾淋巴细胞刺激指数和猪血清抗猪瘟特异性抗体水平。结果表明,构建的重组质粒中E2基因的大小、插入位置、方向和读码框均正确,获得了重组表达质粒pSCA1-E2;转染后48 h可检测到转染的PK-15细胞中E2蛋白的表达。免疫小鼠产生较高水平的淋巴细胞刺激指数,免疫猪可检测到抗CSFV特异性血清抗体;表明构建的pSCA1-E2重组质粒能激发实验动物的免疫反应。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 “自杀性”dna疫苗 动物免疫试验

原文传递

双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗载体的改造及其体外表达特性 被引量：2

8

作者 谢京国 方六荣 +3 位作者 肖少波 姚林 潘永飞 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期583-585,590,共4页

PCR扩增西门利克森林病毒(SFV)亚基因组启动子26S序列及人工合成Linker,将其插入基于SFV复制子的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1的多克隆位点,获得含2个26S启动子并能同时驱动双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA2。为了验证p... PCR扩增西门利克森林病毒(SFV)亚基因组启动子26S序列及人工合成Linker,将其插入基于SFV复制子的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA1的多克隆位点,获得含2个26S启动子并能同时驱动双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗表达载体pSCA2。为了验证pSCA2的表达能力,PCR扩增绿色荧光蛋白基因EGFP和红色荧光蛋白基因DsRed2,分别插入pSCA2的2个26s启动子下游,获得EGFP和DsRed2双基因共表达的“自杀性”DNA疫苗pSCA2-EGFP/RFP。将pSCA2-EGFP/RFP转染BHK-21细胞,转染后24h,可同时观察到被转染细胞发绿色荧光和红色荧光,证实EGFP和DsRed2均获得表达。 展开更多

关键词 西门利克森林病毒复制子 “自杀性”dna疫苗 表达载体 双基因共表达

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斑点叉尾鮰病毒“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达检测 被引量：2

9

作者 熊海林 尹殿卯 +6 位作者 王卫民 王敏 李莉娟 刘玉林 刘学芹 吴兵 黄锋涛 《水生态学杂志》 北大核心 2011年第1期84-88,共5页

根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫... 根据CCVORF6基因序列,设计合适的引物,扩增ORF6基因,分别将其克隆到"自杀性"DNA疫苗载体pS-FV与常规DNA疫苗载体pcDNA3.1(+)中,转化感受态细胞DH5α后提取质粒,构建斑点叉尾鮰(Ictalurus punc-tatus)"自杀性"DNA疫苗ps-ORF6与常规DNA疫苗pcd-ORF6,利用转化后的大肠杆菌菌液为模板进行PCR扩增、提取质粒酶切鉴定以及序列测定等方法证实重组质粒构建正确。将重组质粒转染人胚肾细胞(293T),间接免疫荧光试验表明ORF6均获得表达,但"自杀性"DNA疫苗的表达效果不如常规DNA疫苗,该研究为这2种疫苗进一步的鱼体试验奠定了基础。 展开更多

关键词 斑点叉尾鮰病毒 “自杀性”dna疫苗 构建 表达

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结核杆菌热休克蛋白65“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效应研究 被引量：2

10

作者 李向群 刘君炎 +4 位作者 刘焰 居薇 刘斌波 李真 刘胜武 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期159-162,共4页

目的构建表达结核杆菌热休克蛋白65(HSP65)的“自杀性”DNA疫苗。方法用聚合酶链反应,从我室构建的表达结核杆菌HSP65真核表达质粒中(pCHSP65),扩增出编码HSP65的基因,与“自杀性”DNA载体pSFV重组。经酶切、测序鉴定,间接免疫荧光(IF)... 目的构建表达结核杆菌热休克蛋白65(HSP65)的“自杀性”DNA疫苗。方法用聚合酶链反应,从我室构建的表达结核杆菌HSP65真核表达质粒中(pCHSP65),扩增出编码HSP65的基因,与“自杀性”DNA载体pSFV重组。经酶切、测序鉴定,间接免疫荧光(IF)证实其能表达HSP65后,将此“自杀性”DNA疫苗(pAHSP65)免疫小鼠。用ELISA、MTT法研究其免疫效应,并观察其对结核菌感染小鼠的保护作用。结果酶切、测序鉴定结果证实为结核杆菌HSP65基因,在BHK21细胞中经IF证实有HSP65表达。该疫苗接种能诱导小鼠产生特异性抗体,刺激淋巴细胞增殖,并能抵抗结核杆菌的感染。结论我们成功地构建了表达结核杆菌HSP65的“自杀性”DNA疫苗,该疫苗能诱导特异性免疫应答,并对结核菌感染的小鼠有保护作用。其免疫效应优于常规的HSP65DNA疫苗。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白6.5 “自杀性”dna疫苗

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HPV16 E7“自杀性”DNA疫苗的构建及其体外表达特性研究 被引量：1

11

作者 王红仁 王保宁 +5 位作者 李婉宜 左凤琼 李虹 蒋忠华 施桥发 李明远 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期165-168,共4页

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重... 目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16)E7基因的"自杀性"DNA疫苗,并研究其体外表达能力及诱导细胞凋亡作用。方法以pET32/E7质粒为模板,用PCR方法扩增HPV16 E7基因,构建真核表达重组质粒pSCA/E7,经PCR、酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒转染BHK-21细胞,然后用免疫荧光技术检测HPV16 E7在细胞中的表达,用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)进行染色检测其诱导细胞凋亡作用。结果PCR扩增得到约400 bp的目的基因片段,测序结果与GenBank中的东亚型HPV16 E7基因序列100%同源。免疫荧光技术检测证实,pSCA/E7重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的基因。TUNEL检测证实,pSCA/E7重组质粒能诱导被转染的BHK-21细胞发生凋亡。结论成功构建HPV16 E7基因的重组质粒pSCA/E7,该重组质粒可在BHK-21细胞中表达,并能诱导被转染的细胞发生凋亡。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 “自杀性”dna疫苗 治疗性疫苗 细胞凋亡

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高新技术疫苗研究的现状与发展趋势

12

作者 马荣德 朱瑞良 郭文龙 《家禽科学》 2008年第12期40-42,共3页

随着分子生物学技术的迅猛发展，近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗。主要包括：基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒一抗体复合物疫苗、“自杀性”DNA疫苗、转基因植物疫苗等。冯涛和冯秀丽（2001）认为它们不仅能... 随着分子生物学技术的迅猛发展，近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗。主要包括：基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒一抗体复合物疫苗、“自杀性”DNA疫苗、转基因植物疫苗等。冯涛和冯秀丽（2001）认为它们不仅能改善机体的免疫应答和免疫保护，而且为有效地预防和控制新的传染病提供了新途径，已引起人们的广泛关注。现将各型疫苗的研究状况介绍如下。 展开更多

关键词 基因工程疫苗 高新技术 发展趋势 抗独特型抗体疫苗 “自杀性”dna疫苗 分子生物学技术 转基因植物疫苗 合成肽疫苗

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鹅源新城疫病毒HN基因“自杀性”DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究

13

作者 张彦红 樊惠英 +4 位作者 蔡绍鑫 罗开健 辛朝安 廖明 任涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期842-846,共5页

为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因... 为了探讨鹅源新城疫病毒"自杀性"DNA疫苗的免疫效果,将鹅源新城疫病毒HN基因片段克隆到自杀性DNA疫苗载体pSCA1中,构建了表达HN基因的自杀性DNA疫苗质粒pS-HN。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了HN基因在该细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pc-HN)分别免疫鹅,结果表明,在诱导体液、细胞免疫和攻毒保护方面,pS-HN均优于pc-HN,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多

关键词 鹅源新城疫病毒 HN基因 “自杀性”dna疫苗

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高新技术疫苗研究现状与发展趋势

14

作者 马荣德 朱瑞良 郭文龙 《中国禽业导刊》 2008年第20期14-15,共2页

随着分子生物学技术的迅猛发展,近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗,主要包括:基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒-抗体复合物疫苗、"自杀性"DNA疫苗、转基因植物疫苗等。新型疫苗不仅能改善机体的免疫应... 随着分子生物学技术的迅猛发展,近年来国际上出现了新一代高新技术疫苗,主要包括:基因工程疫苗、合成肽疫苗、抗独特型抗体疫苗、病毒-抗体复合物疫苗、"自杀性"DNA疫苗、转基因植物疫苗等。新型疫苗不仅能改善机体的免疫应答和免疫保护,而且为有效地预防和控制新的传染病提供了新途径,已引起人们的广泛关注。现将各型疫苗的研究状况介绍如下。 展开更多

关键词 基因工程疫苗 高新技术 发展趋势 抗独特型抗体疫苗 “自杀性”dna疫苗 分子生物学技术 转基因植物疫苗 合成肽疫苗

原文传递

小鹅瘟病毒“自杀性”DNA疫苗对小鼠免疫原性分析 被引量：7

15

作者 岳晓琳 殷冬冬 +6 位作者 王瑞 蒋广志 李永东 王桂军 刘红梅 潘玲 王勇 《扬州大学学报（农业与生命科学版）》 CAS 北大核心 2016年第1期6-10,共5页

先将小鹅瘟病毒VP3基因克隆至"自杀性"DNA疫苗载体pSCA1构建pSCA-VP3重组质粒,对其鉴定后转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光检测VP3蛋白在体外的表达。将30只6周龄BALB/c小鼠随机分为3组,每组小鼠分别腿部肌肉注射100μg pSCA-... 先将小鹅瘟病毒VP3基因克隆至"自杀性"DNA疫苗载体pSCA1构建pSCA-VP3重组质粒,对其鉴定后转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光检测VP3蛋白在体外的表达。将30只6周龄BALB/c小鼠随机分为3组,每组小鼠分别腿部肌肉注射100μg pSCA-VP3质粒,pSCA1空载体质粒和100μL PBS。以2周为间隔,共免疫3次。通过间接ELISA检测VP3蛋白特异性抗体水平,淋巴细胞增殖检测细胞免疫水平。结果表明:成功构建了"自杀性"DNA疫苗重组质粒pSCA-VP3;间接免疫荧光表明VP3蛋白在体外能够正常表达,且表达的蛋白具有良好的反应原性;相比于空载体组及阴性对照组,pSCA-VP3组小鼠产生了显著的体液免疫和细胞免疫反应。该研究为GPV的疫苗研制提供新的思路,为进一步临床应用研究提供科学依据。 展开更多

关键词 小鹅瘟病毒 自杀性dna疫苗 小鼠 免疫原性

原文传递

猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究 被引量：2

16

作者 孙世琪 郭慧琛 +6 位作者 尹双辉 冯霞 尚佑军 代兴国 刘在新 刘湘涛 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1016-1020,共5页

利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免... 利用RT-PCR技术,用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因,克隆于DNA复制子载体pSCA1中,获得重组质粒pSCA/1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞,RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示,猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明,自杀性DNA疫苗pSCA/1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。 展开更多

关键词 猪水疱病病毒(SVDV) 甲病毒复制子载体 自杀性dna疫苗

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自杀性DNA疫苗 被引量：1

17

作者 孙世琪 郭慧琛 谢庆阁 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期142-144,共3页

关键词 甲病毒复制于载体 自杀性dna疫苗 基因疫苗

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乙型脑炎病毒E基因自杀性DNA疫苗的构建及其免疫应答 被引量：3

18

作者 刘学芹 李么明 +4 位作者 曹胜波 叶静 孙敏轩 肖少波 陈焕春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期130-134,共5页

为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中... 为探讨自杀性DNA疫苗在乙型脑炎疫苗开发中的可能性,将乙型脑炎病毒(JEV)E基因片段插入到自杀性DNA疫苗载体pSCA1(pS)中,构建了表达E基因的自杀性DNA疫苗质粒pSE。间接免疫荧光试验结果证实,该质粒转染BHK-21细胞后实现了E基因在细胞中的表达。将该疫苗和常规DNA疫苗(pCDE)分别免疫试验小鼠,进行体液免疫和细胞免疫检测。结果表明,在诱导体液免疫方面,pCDE要优于pSE,但pSE却可以诱导更强的细胞免疫反应,这为进一步评价该疫苗的免疫保护效果奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 自杀性dna疫苗 免疫

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塞姆利基森林病毒复制子DNA疫苗研究进展 被引量：2

19

作者 仇铮 相文华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期146-149,共4页

甲病毒（Alphavirus）是披膜病毒科（Togavirusfamily）的成员,是单股、正链的RNA病毒,包括塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus,SFV）、辛德毕斯病毒（Sindbis virus,SIN）和委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equineencephalitis vi... 甲病毒（Alphavirus）是披膜病毒科（Togavirusfamily）的成员,是单股、正链的RNA病毒,包括塞姆利基森林病毒（Semliki forest virus,SFV）、辛德毕斯病毒（Sindbis virus,SIN）和委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equineencephalitis virus,VEE）等30个成员。 展开更多

关键词 SFV复制子 甲病毒复制子 自杀性dna疫苗

原文传递

弓形虫表面抗原SAG1基因自杀性DNA疫苗的构建及免疫原性检测 被引量：1

20

作者 郑丽娜 谭峰 潘长旺 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期885-888,892,共5页

目的构建表达弓形虫表面抗原SAG1的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1并检测其免疫原性。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1基因(GenBank No.HM776940.1),克隆至甲病毒复制子载体pDREP-eGFP中替换原有的eGFP基因,菌液PCR、双酶切及测... 目的构建表达弓形虫表面抗原SAG1的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1并检测其免疫原性。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1基因(GenBank No.HM776940.1),克隆至甲病毒复制子载体pDREP-eGFP中替换原有的eGFP基因,菌液PCR、双酶切及测序鉴定重组质粒。重组的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1经股四头肌注射并联合瞬时电穿孔免疫BALB/c小鼠,同时以原质粒pDREP-eGFP作为对照组,间隔3周后以相同条件再免疫1次,收集小鼠血清,以弓形虫裂解抗原Western blotting检测其诱导产生的特异性抗体。结果从弓形虫基因组中PCR扩增得到1 011bp长度的SAG1基因,成功构建重组质粒pDREP-SAG1。Western blotting结果显示,重组质粒免疫的小鼠血清能特异性地识别虫体抗原中的SAG1抗原。结论成功构建了弓形虫自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1,能诱导小鼠产生特异性的抗体,具有免疫原性。 展开更多

关键词 弓形虫 SAG1 自杀性dna疫苗

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