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产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌Z-1的筛选、鉴定及其酶学特性研究 被引量:2
1
作者 王全 李红亚 +2 位作者 李术娜 王会 朱宝成 《饲料工业》 北大核心 2016年第8期49-54,共6页
试验筛选得到了一株产β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌Z-1。利用七叶苷和柠檬酸高铁铵为底物,通过显色反应,在土壤中初筛得到15株产β-葡萄糖苷酶的菌株,复筛得到5株产酶活性较高的菌株,其中Z-1活性相对最高。对菌株进行生理生化和16S r DN... 试验筛选得到了一株产β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌Z-1。利用七叶苷和柠檬酸高铁铵为底物,通过显色反应,在土壤中初筛得到15株产β-葡萄糖苷酶的菌株,复筛得到5株产酶活性较高的菌株,其中Z-1活性相对最高。对菌株进行生理生化和16S r DNA序列同源性比较分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌。采用DNS法对粗酶液的酶学特性进行了测定。 展开更多
关键词 β-葡萄 芽孢杆菌 筛选 鉴定 学特性
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β-葡糖苷酶与高雪病
2
作者 蒋雨平 刘道宽 赵惠芬 《临床神经科学》 1994年第4期221-222,共2页
用改良的Beutler法测定白细胞中β-葡糖苷酶活性。48例正常人白细胞β-葡糖苷酶活性每小时为10.13±2.76nmol/mg酶蛋白,1例高雪病患者该酶活性每小时为2.7nmol/mg酶蛋白。
关键词 β-葡萄 高发病 白细胞 诊断
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匍枝根霉β-葡糖苷酶的分离纯化及其受产物抑制分析
3
作者 孙全霞 汤斌 李松 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期103-107,共5页
对匍枝根霉β-葡糖苷酶进行了纯化并研究了葡萄糖、甘露糖、山梨醇和甘露醇对该酶的抑制作用,结果发现,66.7 mmol/L的葡萄糖和88.9 mmol/L的甘露糖可完全抑制一定酶活力单位的β-葡糖苷酶活力(0.76IU),而山梨醇和甘露醇对β-葡糖苷酶的... 对匍枝根霉β-葡糖苷酶进行了纯化并研究了葡萄糖、甘露糖、山梨醇和甘露醇对该酶的抑制作用,结果发现,66.7 mmol/L的葡萄糖和88.9 mmol/L的甘露糖可完全抑制一定酶活力单位的β-葡糖苷酶活力(0.76IU),而山梨醇和甘露醇对β-葡糖苷酶的催化活力没有影响。分析结构发现,葡萄糖和山梨糖、甘露糖和甘露醇结构差异仅在醛基位置,通过Molegro Virtual Docker(MVD)软件模拟并分析葡萄糖、山梨醇和纤维二糖与β-葡糖苷酶的对接模型,发现含有醛基的葡萄糖与纤维二糖在酶的结合区存在两处竞争性结合位点(Asp244和Asn242),且两者在该酶活性中心内的全部结合位点上均处于竞争性关系,其中葡萄糖的醛基在与多个活性位点结合过程中起主导作用;而不含醛基的山梨醇与纤维二糖在该酶的催化中心及外围均不存在竞争性关系,由此推测可能是葡萄糖分子中的醛基在β-葡糖苷酶受产物抑制的过程中起到了关键性的作用。 展开更多
关键词 分离纯化 β-葡萄 抑制 醛基
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鼠脑缺血时β—葡萄糖醛酸酶活性测定
4
作者 杨青 萧惠来 《中华神经精神科杂志》 CSCD 1991年第3期152-154,共3页
关键词 脑缺血 β-葡萄 脑水肿
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台湾海峡水域的β-葡萄糖苷酶活性 被引量:9
5
作者 郑天凌 王斐 +3 位作者 徐美珠 田蕴 苏建强 洪华生 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 2001年第2期175-182,共8页
本研究分别在 1997年 8月 10日至 8月 19日 ,1998年 2月 2 0日至 3月 7日 ,对台湾海峡进行现场调查研究 ,在九个断面 2 0个站位取得水文、化学和生物学综合参数 ,研究了该海域 β 葡萄糖苷酶活性 (βGlcA) ,细菌生物量及生产力的时空动... 本研究分别在 1997年 8月 10日至 8月 19日 ,1998年 2月 2 0日至 3月 7日 ,对台湾海峡进行现场调查研究 ,在九个断面 2 0个站位取得水文、化学和生物学综合参数 ,研究了该海域 β 葡萄糖苷酶活性 (βGlcA) ,细菌生物量及生产力的时空动态 .主要结果如下 :①夏季台湾海峡南部各站位 βGlcA的平均值为 1.94nmol/L-1h-1,变化幅度大 (0 .31~ 8.1nmol/L-1h-1) ;冬季海峡北部 βGlcA平均值为 0 .86nmol/L-1h-1,变化幅度 (0 .34~ 1.89nmol/L-1h-1)远小于夏季 .②以碳的转化量表示 ,夏冬两季的 βGlcA分别为 0 .14μgL-1h-1和 0 .0 6 2 μgL-1h-1,分别高于这两个季节的细菌生产力 .③从离岸到近岸 ,细菌胞外酶活性升高 .④该海域胞外酶活性与细菌的二次生产力的相关性不够明显 .⑤βGlcA的剖面分布及周日变化与细菌生产力的相关性不很明显 .⑥表层水游离态的细菌的 βGlcA ,在整个海区的分布特征与该水层的总 βGlcA分布特征相似 .图 8表 1参 展开更多
关键词 异养性细菌 胞外 β-葡萄活性 台湾海峡
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牛瘤胃未培养细菌中一个β-葡萄糖苷酶基因umbgl3A的克隆及鉴定 被引量:18
6
作者 赵广存 段承杰 +5 位作者 庞浩 封毅 许跃强 莫新春 唐纪良 冯家勋 《西南农业学报》 CSCD 2005年第4期472-476,共5页
通过构建牛瘤胃未培养细菌的宏基因组文库,共获得12000个克隆,文库外源DNA总容量为4.2×108bp,筛选得到九个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆,并对其中的一个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆pGXN1009进行亚克隆,将β-葡萄糖苷酶基因定位在4... 通过构建牛瘤胃未培养细菌的宏基因组文库,共获得12000个克隆,文库外源DNA总容量为4.2×108bp,筛选得到九个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆,并对其中的一个表达β-葡萄糖苷酶活性的克隆pGXN1009进行亚克隆,将β-葡萄糖苷酶基因定位在4.3kb的片段上。测序结果表明在4.3kb的片段上有一个全长为1956bp的ORF,编码一个可能的β-葡萄糖苷酶基因um-bgl3A,其编码产物与一个来源于小鼠大肠未培养细菌的β-葡萄糖苷酶(GenBankAcessionNO:AAX16378.1)一致性为63%、相似性为79%;与哈氏噬纤维菌(Cytophagahutchinsonii)的β-葡萄糖苷酶(GenBankAcessionNO:ZP-00308419)的一致性为50%、相似性为67%。利用SMART软件对Umbgl3A结构组件预测表明,Umbgl3A包含一个家族3糖基水解酶(glycosylhydrolase)功能域和一个家族3C糖基水解酶功能域。遗传进化分析表明umbgl3A基因可能是来自牛瘤胃微生物噬纤维菌属未培养的一个种。 展开更多
关键词 牛瘤胃 未培养细菌 宏基因组 β-葡萄
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侵袭性真菌感染患者1,3-β-D葡聚糖检测的临床价值 被引量:13
7
作者 左向华 陈建魁 +8 位作者 于农 金欣 尹秀云 宋世平 黄媛 杜宇 朱晓华 曾利军 王淼 《国际检验医学杂志》 CAS 2010年第3期220-221,223,共3页
目的评价1,3-β-D葡聚糖(BG)检测对侵袭性真菌感染(IFI)早期诊断和疗效监测价值。方法应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中BG的含量。结果以50 pg/mL为阳性界值,BG检测的敏感性为72.5%,特异性... 目的评价1,3-β-D葡聚糖(BG)检测对侵袭性真菌感染(IFI)早期诊断和疗效监测价值。方法应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中BG的含量。结果以50 pg/mL为阳性界值,BG检测的敏感性为72.5%,特异性91.4%,阳性预测值90.6%,阴性预测值74.4%。以20 pg/mL为阳性界值,敏感性为87.5%,特异性88.6%,阳性预测值89.7%,阴性预测值86.1%。连续监测时BG可早于真菌培养方法1~10 d预测真菌感染。在BG阳性患者中,对20例患者进行抗真菌治疗,19例有效,1例无效死亡。抗真菌治疗前BG水平呈缓慢上升趋势,保持在较高水平,抗真菌治疗有效患者的BG含量呈下降趋势,无效死亡患者呈上升趋势。结论血浆BG浓度对血液病和恶性肿瘤患者IFI早期诊断和疗效评价有重要价值。 展开更多
关键词 葡聚糖内-1 3-β-D葡萄 真菌 感染 血液病 肿瘤
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丙烯腈对小鼠睾丸组织标志酶活性影响的研究 被引量:7
8
作者 段志文 李海山 +2 位作者 张玉敏 崔金山 马宝玺 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期17-19,共3页
目的 研究丙烯腈对小鼠睾丸组织某些标志酶活性的影响 ,探讨丙烯腈对雄性小鼠生殖损伤的机制及早期敏感指标。方法 用分光光度法检测睾丸组织匀浆中葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G 6 PD)、乳酸脱氢酶同工酶 (LDHx)、β 葡糖苷酸酶 (β G)... 目的 研究丙烯腈对小鼠睾丸组织某些标志酶活性的影响 ,探讨丙烯腈对雄性小鼠生殖损伤的机制及早期敏感指标。方法 用分光光度法检测睾丸组织匀浆中葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G 6 PD)、乳酸脱氢酶同工酶 (LDHx)、β 葡糖苷酸酶 (β G)及酸性磷酸酶 (ACP)的活性。 结果 G 6 PD、LDHx、β G及ACP各指标与对照组比较未见显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 在本实验染毒时间和染毒剂量范围内 ,丙烯腈对小鼠睾丸组织中酶活性 (G 6 PD、LDHx、β G及ACP)未见影响。 展开更多
关键词 丙烯腈 睾丸组织 葡萄-6-磷酸脱氢 乳酸脱氢同工 β-葡萄 毒理
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基因枪转化籼稻的影响因素 被引量:5
9
作者 许新萍 卫剑文 +1 位作者 胡明 李宝健 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期88-92,共5页
将含有gusA基因的质粒pAct1-D包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织,通过检测gusA基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况,对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究.这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参... 将含有gusA基因的质粒pAct1-D包裹在钨粉上轰击籼稻初生愈伤组织,通过检测gusA基因在籼稻细胞中的瞬间表达情况,对影响基因枪法转化效率的因素进行了研究.这些因素包括微粒加速装置参数、微粒参数、生物参数及其它参数.实验表明,在合适的转化条件下,籼稻品种青风占12、穗优占的最高转化效率分别为439。 展开更多
关键词 籼稻 基因枪法 初生愈伤组织 β-葡萄
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酿酒酵母GPD1中整合表达纤维二糖酶基因用于纤维素酒精发酵的研究 被引量:4
10
作者 张梁 石贵阳 +1 位作者 王正祥 章克昌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第10期164-170,177,共8页
采用基因敲除技术,在工业酿酒酵母染色体DNA上的甘油代谢途径关键酶基因GD P 1中,整合入来源于里氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgⅡl,通过提高G 418浓度筛选得到多拷贝整合子。结果表明,整合子利用纤维二糖的能力得到提高,产甘油能力下降,... 采用基因敲除技术,在工业酿酒酵母染色体DNA上的甘油代谢途径关键酶基因GD P 1中,整合入来源于里氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因bgⅡl,通过提高G 418浓度筛选得到多拷贝整合子。结果表明,整合子利用纤维二糖的能力得到提高,产甘油能力下降,外源基因表达稳定;引入外源基因后,其对酵母增殖能力没有大的影响,仅形态发生变化;在以微晶纤维素为原料,结合纤维素酶发酵时,与亲代工业酿酒酵母相比,发酵液乙醇浓度最高增加69%。 展开更多
关键词 β-葡萄 纤维二糖 纤维素利用 酒精发酵
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农杆菌LBA4404不含内源GUS基因 被引量:3
11
作者 徐增富 李宝健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第3期286-287,共2页
用长度为21bp的一对β-葡糖苷酸酶(GUS)基因的PCR引物,从根癌农杆菌LBA4404细胞总DNA中扩增不出任何片段,但从合pBI121的LBA4404细胞总DNA中可扩增出一条预期大小(1.2kb)的GUS基因... 用长度为21bp的一对β-葡糖苷酸酶(GUS)基因的PCR引物,从根癌农杆菌LBA4404细胞总DNA中扩增不出任何片段,但从合pBI121的LBA4404细胞总DNA中可扩增出一条预期大小(1.2kb)的GUS基因片段,这表明根瘤农杆菌LBA4404不含内源GUS基因. 展开更多
关键词 细菌 根癌农杆菌 β-葡萄 基因
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麝香糖蛋白成分对白细胞介素-8激活的大鼠中性白细胞功能的影响 被引量:2
12
作者 王文杰 白金叶 +1 位作者 程桂芳 朱秀媛 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期50-52,共3页
目的 :观察麝香糖蛋白成分麝香 1对白细胞介素 8(IL 8)激活的大鼠中性白细胞某些功能 ,包括超氧阴离子产生和溶酶体酶释放的影响。方法 :采用大鼠中性白细胞体外温孵系统。用细胞色素C还原法测定超氧阴离子的产生量。以酚酞葡糖醛酸和... 目的 :观察麝香糖蛋白成分麝香 1对白细胞介素 8(IL 8)激活的大鼠中性白细胞某些功能 ,包括超氧阴离子产生和溶酶体酶释放的影响。方法 :采用大鼠中性白细胞体外温孵系统。用细胞色素C还原法测定超氧阴离子的产生量。以酚酞葡糖醛酸和MicrococcusLysodeikticus为基质的酶反应法测定 β 葡糖苷酸酶和溶菌酶的释放量。 结果 :与对照组比较 ,麝香 1在 1~ 10 0 μg·L-1终浓度下 ,可使中性白细胞超氧阴离子生成量增加 91.7%~ 2 91% ,可使β 葡糖苷酸酶释放量降低 2 .2 %~ 5 8.1% ,使溶菌酶释放量降低 3 .9%~ 39.8%。 结论 :麝香 1对IL 8激活的大鼠中性白细胞的功能有明显影响。抑制溶酶体酶释放可能是麝香抗炎作用机制之一。 展开更多
关键词 麝香 中性白细胞 超氧阴离子 β-葡萄 溶菌
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微生态调节剂干预母乳性黄疸临床观察和机制探讨 被引量:33
13
作者 蔡宝珍 黄志华 《新生儿科杂志》 CAS 2002年第4期150-151,164,共3页
观察微生态调节剂(妈咪爱)干预母乳性黄疸疗效,并探讨疗其机制,检测“妈咪爱”治疗前后血清和十二指肠液胆红素值、胆汁和粪便β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)活性。结果显示:“妈咪爱”制剂干预组血清总胆红素值从130.60±20.06μmo... 观察微生态调节剂(妈咪爱)干预母乳性黄疸疗效,并探讨疗其机制,检测“妈咪爱”治疗前后血清和十二指肠液胆红素值、胆汁和粪便β-葡萄糖醛酸苷酶(β-GD)活性。结果显示:“妈咪爱”制剂干预组血清总胆红素值从130.60±20.06μmol/L下降到61.20±16.04μmol/L(P<0.05),十二指肠液β-GD从1859.91±908.60U/100ml下降到858.26±260.90U/100ml,粪便中β-GD从4053±983.0U/100ml下降到2110.9±1541U/100ml(P<0.05);而对照组十二指肠液胆红素值则无明显变化(P>0.05)。可以结论,“妈咪爱”调节剂能降低血清总胆红素值和肠道及胆汁中β-GD活性。 展开更多
关键词 微生态调节剂 母乳性黄疸 临床观察 作用机制 新生儿 β-葡萄糖醛酸
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银杏内酯B对血小板活化因子刺激的大鼠中性粒细胞功能的影响 被引量:20
14
作者 聂珍贵 王文杰 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期98-102,共5页
目的 研究银杏内酯B对血小板活化因子 (PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响。方法 从大鼠外周血分离中性粒细胞 ,用MTT比色法、Boyden小室法及 β 葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒... 目的 研究银杏内酯B对血小板活化因子 (PAF)刺激的大鼠中性粒细胞粘附、趋化及脱颗粒功能的影响。方法 从大鼠外周血分离中性粒细胞 ,用MTT比色法、Boyden小室法及 β 葡萄糖苷酸酶释放法分别检测PAF诱导的粒细胞粘附、趋化及脱颗粒反应。结果  10 μmol·L- 1 银杏内酯B可显著抑制中性粒细胞的粘附反应 ;1~ 10 0 0nmol·L- 1 可剂量依赖性抑制 10nmol·L- 1 PAF诱发的粒细胞趋化反应 ,其IC50 为 4 84nmol·L- 1 ;0 0 1~ 10 μmol·L- 1 可抑制 1μmol·L- 1 PAF诱发的粒细胞释放 β 葡糖苷酸酶 ,其IC50 为 3 5 6μmol·L- 1 。结论 银杏内酯B能够抑制PAF刺激的大鼠中性粒细胞粘附。 展开更多
关键词 银杏内酯B 血小板活化因子 大鼠 中性粒细胞功能 β-葡萄
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需氧菌性阴道炎、细菌性阴道病五项联合检测在阴道微生态评价中的应用价值 被引量:19
15
作者 沈甍 《蚌埠医学院学报》 CAS 2017年第4期502-504,共3页
目的:探讨需氧菌性阴道炎(AV)、细菌性阴道病(BV)五项联合检测在阴道微生态评价中的应用价值。方法:选取2012年12月至2015年1月接受健康体检的女性110例,采用传统方法对受检女性的阴道分泌物进行阴道p H、革兰染色及清洁度检查,并作阴... 目的:探讨需氧菌性阴道炎(AV)、细菌性阴道病(BV)五项联合检测在阴道微生态评价中的应用价值。方法:选取2012年12月至2015年1月接受健康体检的女性110例,采用传统方法对受检女性的阴道分泌物进行阴道p H、革兰染色及清洁度检查,并作阴道菌群分析;同时采用AV、BV五项联合检测进行测定。结果:110例受检者中传统方法检测阴道菌群正常42例(38.18%),阴道菌群异常68例(61.82%);阴道菌群异常的预成酶阳性率(除凝固酶外)均高于阴道菌群正常的预成酶阳性率(P<0.05~P<0.01)。结论:AV、BV五项联合检测方法安全可靠,操作简单,其检测灵敏度高,结果较为准确,可作为临床快速筛查方法,更有效地评价阴道微生态情况。 展开更多
关键词 阴道炎 白细胞酯 唾液酸 过氧化氢 β-葡萄糖醛酸 凝固
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高胆红素血症新生儿肠道菌群特点及与β-葡萄糖醛酸苷酶活性的相关性 被引量:18
16
作者 唐炜 卢红艳 +1 位作者 孙勤 许为民 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期677-683,共7页
目的探讨高胆红素血症新生儿肠道菌群特点及与β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)活性的关系。方法选取2018年1~12月入院治疗的高胆红素血症新生儿50例为高胆红素血症组,选取非高胆红素血症新生儿30例为对照组。通过16S rRNA高... 目的探讨高胆红素血症新生儿肠道菌群特点及与β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,β-GD)活性的关系。方法选取2018年1~12月入院治疗的高胆红素血症新生儿50例为高胆红素血症组,选取非高胆红素血症新生儿30例为对照组。通过16S rRNA高通量测序方法分析两组新生儿肠道菌群的差异。通过酚酞-葡萄糖醛酸底物法测定高胆红素血症新生儿治疗前后肠道内的β-GD活性。结果对治疗前高胆红素血症组和对照组肠道菌群分布属水平进行比较,发现两组间有52种细菌的丰度差异有统计学意义(P<0.05)。对治疗后第3天高胆红素血症组和对照组入组3 d后肠道菌群分布属水平进行比较,发现两组间有42种细菌的丰度差异有统计学意义(P<0.05)。高胆红素血症组新生儿治疗后,埃希氏菌属和葡萄球菌属在肠道内的含量明显低于治疗前(P<0.05),粪便中β-GD活性较治疗前明显降低(P<0.05)。高胆红素血症新生儿治疗前后粪便β-GD活性与葡萄球菌属和埃希氏菌属丰度均呈正相关(rs=0.5948~0.7245,均P<0.01)。结论高胆红素血症新生儿和非高胆红素血症新生儿肠道菌群存在差异。高胆红素血症新生儿粪便中β-GD活性与差异菌葡萄球菌属和埃希氏菌属丰度呈正相关。肠道菌群可能通过调节β-GD活性影响新生儿高胆红素血症的发生,通过对新生儿肠道菌群和β-GD活性进行测定和分析,可能对早期评估新生儿高胆红素血症的发生有一定的临床意义。 展开更多
关键词 高胆红素血症 肠道菌群 16S rRNA高通量测序 β-葡萄糖醛酸 新生儿
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产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达 被引量:12
17
作者 宋占科 王小艳 +1 位作者 陈国强 李春 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第12期3101-3106,共6页
产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU... 产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg·L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U·mg-1。 展开更多
关键词 甘草酸 β-葡萄糖醛酸 克隆 产紫青霉
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通过体外分子进化技术获得耐高温β-葡萄糖苷酸酶的研究 被引量:8
18
作者 熊爱生 姚泉洪 +3 位作者 彭日荷 陈建民 李贤 范惠琴 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1034-1040,共7页
采用高保真聚合酶从质粒pBI12 1中扩增出 1.8kb的专一条带 ,克隆入pBluescriptSK载体 ,测序结果显示与报道一致。该克隆GUS基因被用作对照 ,再以此为模板 ,通过DNA重排技术 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR重新得到大量的突变... 采用高保真聚合酶从质粒pBI12 1中扩增出 1.8kb的专一条带 ,克隆入pBluescriptSK载体 ,测序结果显示与报道一致。该克隆GUS基因被用作对照 ,再以此为模板 ,通过DNA重排技术 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR重新得到大量的突变GUS基因。这些突变的GUS基因构建入原核表达载体pG2 5 1中 ,电击转化大肠杆菌菌株DH5α ,构建GUS基因突变体库 ,经过 3轮的重排、筛选得到 80℃处理 30分钟仍显示较高活性的耐高温GUS基因GUS3 3,基因测序显示 ,GUS3 3与GUS基因之间的同源性为 99.2 % ,核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,11个氨基酸发生了突变 ,80 %的突变集中在蛋白的C端。Tm值GUS3 3为 80℃ ,GUS ck为 5 5℃ ,提高了 2 5℃ ,GUS3 3β -葡萄糖苷酸酶热稳定性有了很大的提高 ,GUS3 3酶的最适温度明显提高。 展开更多
关键词 体外分子进化技术 β-葡萄 基因重排 耐高温 植物
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肝胆管结石病的成因 诊断和分类 被引量:7
19
作者 邹声泉 《中国实用外科杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期67-67,67-68,共3页
关键词 肝胆管结石 病因 胆道细菌感染 β-葡萄糖醛酸 肝细胞代谢 诊断
原文传递
通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶 被引量:5
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作者 熊爱生 姚泉洪 +3 位作者 彭日荷 陈建民 李贤 范惠琴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期162-167,共6页
β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构... β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 展开更多
关键词 β-葡萄 植物 转基因 报告基因 DNA改组技术 活性 体外分子进化
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