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水稻矮缩病毒基因组第八号片段的cDNA克隆序列分析及在大肠杆菌中的表达 被引量:7
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作者 李玮 李毅 +2 位作者 张旭 储瑞银 陈章良 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期56-62,共7页
从水稻矮缩病毒(RDV)中国福建分离物中分离出基因组第八号片段dsRNA,经逆转录合成cDNA,应用聚合酶链式反应技术扩增了编码区cDNA,并克隆在pGEM3Zf(一)载体上。该片段编码病毒外层外壳蛋白。对重组子进行... 从水稻矮缩病毒(RDV)中国福建分离物中分离出基因组第八号片段dsRNA,经逆转录合成cDNA,应用聚合酶链式反应技术扩增了编码区cDNA,并克隆在pGEM3Zf(一)载体上。该片段编码病毒外层外壳蛋白。对重组子进行限制性内切酶分析,亚克隆及全序列测定,结果表明,克隆片段全长135bp含有一个1266bp的阅读框架,编码一个含有421个氨基酸的多肽。与日本流行株相应片段比较,核苷酸和氨基酸水平的同源率分别为94.4%和97.9%。另外,我们所克隆的片段在距起始密码子532一534处较日本株系多了3个核苷酸,导致RDV中国福建分离物外层外壳蛋白比日本株多出一个氨基酸。将该编码区cDNA克隆到原核表达载体pTrcHisA上,经IPTG诱导,用RDV抗体进行蛋白Westem印迹分析表明,该基因在大肠杆菌中得到高效表达。这项工作为以后进一步开展水稻抗矮缩病基因工程,研究RDV与传毒介体昆虫之间的识别关系奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻矮缩病毒 第八号片段 序列分析 CDNA
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儿童横纹肌肉瘤中Myogenin蛋白的检测及其诊断价值 被引量:5
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作者 信明军 施诚仁 李敏 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2004年第2期126-127,130,共3页
目的 :横纹肌肉瘤是儿童期最常见的软组织肉瘤 ,因其组织学常呈现低分化状态 ,故与其它儿童小圆细胞瘤的鉴别诊断十分困难。本实验初步探讨应用Westernblotting方法检测生肌转录因子基因家族成员之一—Myogenin蛋白以作辅助诊断的可行... 目的 :横纹肌肉瘤是儿童期最常见的软组织肉瘤 ,因其组织学常呈现低分化状态 ,故与其它儿童小圆细胞瘤的鉴别诊断十分困难。本实验初步探讨应用Westernblotting方法检测生肌转录因子基因家族成员之一—Myogenin蛋白以作辅助诊断的可行性。方法 :提取 8例横纹肌肉瘤及 2 0例其它儿童实体肿瘤新鲜组织中的蛋白质 ,进行SDS—PAGE电泳 ,然后将蛋白转移至硝酸纤维膜 ,作Westernblotting蛋白质杂交 ,对印迹进行分析。结果 :8例横纹肌肉瘤均有明显的Myogenin蛋白印迹 ,在 1例肾母细胞瘤中呈假阳性 ;用Westernblotting方法可检测到仅 5 μg组织蛋白中Myogenin蛋白的表达。 结论 :用Westernblotting方法检测Myogenin蛋白对于横纹肌肉瘤具有极高的灵敏度和较好的特异性 ,因而有一定诊断应用价值。 展开更多
关键词 儿童 横纹肌肉瘤 Myogenin蛋白 检测 诊断 鉴别诊断
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香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达 被引量:5
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作者 孔铖将 黄左安 +2 位作者 陈炯 史雨红 陆新江 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 (aC9)基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序... 补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 (aC9)基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序列。序列分析表明, aC9与虹鳟C9的氨基酸同源性最高, 达56.8%, 与其它鱼类C9的同源性介于40.9%~53.8%之间。aC9在健康香鱼肝、脾、肠、鳃和肌肉有表达, 其中在肝内的表达量最高。实时荧光定量PCR的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染4 h后, 肝中aC9 mRNA表达量显著上调, 并随着时间的推移在16 h时达到峰值。Western blotting分析的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼血清中的aC9蛋白随着时间的推移呈显著上调。以上结果表明, 香鱼肝组织C9基因表达变化与鳗利斯顿氏菌的侵染密切相关, 展开更多
关键词 补体成分C9 香鱼 鳗利斯顿氏菌 实时荧光定量PCR WESTERN blotting
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Sombati癫痫细胞模型中高迁移率族蛋白1的表达变化 被引量:3
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作者 黄金山 吴原 +6 位作者 秦超 李偲俊 刘夕霞 谭明会 覃维含 陈镇 何寿春 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期817-819,共3页
目的 研究Sombati癫痫细胞模型中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的变化规律. 方法 新生SD乳鼠断头后迅速钝性分离出双侧海马,取海马神经元体外培养至第9天,将神经元分为模型组(无镁细胞外液处理)和对照组(正常细胞外液处理),应用Wester b... 目的 研究Sombati癫痫细胞模型中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的变化规律. 方法 新生SD乳鼠断头后迅速钝性分离出双侧海马,取海马神经元体外培养至第9天,将神经元分为模型组(无镁细胞外液处理)和对照组(正常细胞外液处理),应用Wester blotting技术检测海马神经元在接受相应处理12、24、72 h后HMGB1蛋白的表达变化情况. 结果 Wester blotting显示,在神经元接受相应处理后12、24 h,模型组细胞所含HMGB1量均明显低于对照组,差异有统计学意义(t=2.783,P=0.012;t=2.509,P=0.021); 72 h时模型组HMGB1表达量却明显高于对照组,差异具有统计学意义(t=4.112,P=0.006).模型组HMGB1蛋白表达量于造模后12h、24 h、72 h呈现逐渐增高趋势. 结论 Sombati癫痫细胞模型中HMGB1的表达呈时间依赖性,随时间延长表达增加,可能在癫痫的病理生理中起重要作用. 展开更多
关键词 高迁移率族蛋白1 Sombati癫痫细胞模型 蛋白免疫印迹
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非小细胞肺癌组织中MMP-2和MMP-9的表达和意义 被引量:3
5
作者 石帅 罗于海 文光瑞 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期49-51,共3页
目的探讨非小细胞肺癌组织中MMP-2和MMP-9的表达和意义。方法选取非小细胞肺癌组织140例,肺良性疾病组织40例作对照。用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫组化方法检测其MMP-2和MMP-9的表达。结果肺癌组织中MMP-2阳性率为67.9%,MMP-9表达阳性率... 目的探讨非小细胞肺癌组织中MMP-2和MMP-9的表达和意义。方法选取非小细胞肺癌组织140例,肺良性疾病组织40例作对照。用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫组化方法检测其MMP-2和MMP-9的表达。结果肺癌组织中MMP-2阳性率为67.9%,MMP-9表达阳性率为75.0%,显著高于对照组肺组织16.7%和20.0%(P<0.05);MMP-2及MMP-9蛋白与年龄,性别,不同病理类型的阳性率表达差异无显著性(P>0.05);与是否发生淋巴结转移及肺癌TNM分期差异具有显著性(P<0.05)。结论 MMP-2和MMP-9在非小细胞肺癌中表达阳性率较高,在癌症细胞侵润和转移阶段有促进作用,对恶性肺癌的诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9 免疫组织化学 聚丙烯酰胺凝胶电泳
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人甲胎蛋白AFP在大肠杆菌中表达和鉴定 被引量:2
6
作者 李振东 谷华玮 +3 位作者 王海鹰 陈淑仪 宁正祥 王菊芳 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2013年第10期2415-2419,共5页
本研究通过应用基因工程技术,重组构建编码人全长甲胎蛋白AFP基因的原核表达载体pET22b-AFP,并将其转化到大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达目的蛋白AFP。采用PCR法扩增编码AFP蛋白的cDNA序列片段,并将其克隆到含有His-tag的pET22... 本研究通过应用基因工程技术,重组构建编码人全长甲胎蛋白AFP基因的原核表达载体pET22b-AFP,并将其转化到大肠杆菌宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达目的蛋白AFP。采用PCR法扩增编码AFP蛋白的cDNA序列片段,并将其克隆到含有His-tag的pET22b原核表达载体上;重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;对诱导过程中不同浓度的IPTG和不同的温度进行优化;选定最佳的优化条件进行诱导表达目的蛋白;SDS-PAGE电泳和Western Blot法鉴定表达产物。结果表明,通过PCR扩增技术获得了编码AFP蛋白的基因片段;重组质粒经双酶切和基因测序等方法鉴定后,确认了重组质粒已经构建成功;表达产物通过利用SDS-PAGE和Western Blot法检测到在66 kDa附近出现条带,与预期值相符,表明重组AFP蛋白已成功表达。 展开更多
关键词 人甲胎蛋白 蛋白质印迹法 重组表达
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膜孕激素受体(mPRα)在半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)卵母细胞成熟过程中的表达特征 被引量:1
7
作者 李晓妮 柳学周 +2 位作者 史宝 徐永江 张金勇 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第1期25-33,共9页
通过实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雌性性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法检测促性腺激素(HCG)对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表... 通过实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)雌性性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法检测促性腺激素(HCG)对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响,同时,采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究雌性性成熟半滑舌鳎mPRα mRNA和蛋白在各组织中的表达。对半滑舌鳎性成熟不同时期、不同时相卵母细胞中mPRα mRNA的定量研究结果显示,在成熟时期半滑舌鳎Ⅴ时相卵母细胞的mPRα mRNA表达量最高。HCG对成熟期半滑舌鳎卵母细胞mPRα表达的影响研究结果显示,20 IU/ml HCG比10 IU/ml HCG对成熟时期半滑舌鳎卵母细胞mPRα mRNA和蛋白表达的促进作用更明显,进一步证明mPRα介导孕激素参与了卵母细胞成熟的调控。对mPRα组织表达的定量和定位研究中,Western blotting结果显示,在半滑舌鳎的卵巢、垂体、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有mPRα蛋白表达,且在脑、垂体和卵巢中表达量较高,表明mPRα在不同组织中都发挥着一定的作用,且在内分泌相关组织如脑、垂体和卵巢中的作用更明显。原位杂交和免疫组化结果显示,mPRα mRNA和蛋白表达明显定位在卵母细胞膜上,且在其他组织的外周和管腔结构表达。本研究为进一步研究mPRα在膜上的信号转导机制提供了理论基础和形态学依据。 展开更多
关键词 膜孕激素受体 半滑舌鳎 原位杂交 免疫组化 WESTERN blotting 实时荧光定量PCR
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弓形虫韩国KI-1分离株的生物学特性鉴定 被引量:1
8
作者 林爱芬 申银希 +2 位作者 朴在焕 韩银泽 蔡钟一 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期183-186,共4页
目的研究弓形虫韩国KI-1分离株的生物学特性。方法分别将弓形虫韩国KI-1株与国际标准RH株进行下列实验:透射电镜观察虫体的形态,不同浓度的速殖子接种BALB/c小鼠观察其毒力,蛋白质印迹(Westernblotting)分析弓形虫抗原与抗弓形虫单抗Tg... 目的研究弓形虫韩国KI-1分离株的生物学特性。方法分别将弓形虫韩国KI-1株与国际标准RH株进行下列实验:透射电镜观察虫体的形态,不同浓度的速殖子接种BALB/c小鼠观察其毒力,蛋白质印迹(Westernblotting)分析弓形虫抗原与抗弓形虫单抗Tg563和抗新孢子虫单抗12B4反应,PCR-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)技术分析其基因型,检测SAG1和ROP1基因编码区的序列。结果弓形虫韩国KI-1株的形态、毒力与RH株相似。KI-1和RH抗原仅与抗弓形虫单抗Tg563反应,而不与抗新孢子虫单抗12B4反应。PCR-RFLP技术分析表明,KI-1株属基因型I型弓形虫虫株。KI-1株与RH株相比,SAG1和ROP1基因均各有7个核苷酸及6个氨基酸差异。结论KI-1株为基因型I型弓形虫强毒株,与RH株间存在一定的基因差异。 展开更多
关键词 弓形虫 蛋白质印迹法 PCR 限制性片段长度多态(RFLP) 基因测序
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人抗氧化蛋白-1在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定 被引量:1
9
作者 毛爽 陈少沛 +4 位作者 颜晟 王海鹰 宁正祥 李杉 王菊芳 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2014年第9期55-59,共5页
为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达... 为得到较纯的具有活性的人抗氧化蛋白Peroxiredoxin1(Prx1),本文先用PCR的方法扩增了人Prx1的cDNA序列,然后将其连接到pET28表达载体上,从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1基因的pET28-Prx1原核表达质粒。经双酶切及测序鉴定后将表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,并通过SDS-PAGE和western blot来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA螯合亲和层析的方法纯化重组蛋白,并测定该酶的米氏常数,用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性。最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功,表达产物在SDS-PAGE和western blot图的25 kD左右,与prx1真实的蛋白分子量相符,说明Prx1蛋白成功表达。Prx1纯化后产量达到7.59 mg/g菌体,纯度达到88.50%。纯化后的Prx1在37℃和pH 7.4的条件下催化H2O2反应的米氏常数Km为2.06×10-4 mol/L,质粒保护实验表明Prx1可以保护pUC18质粒免受氧化损伤。因此,Prx1在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。 展开更多
关键词 抗氧化蛋白1 重组表达 亲和层析 蛋白印迹法 氧化损伤 质粒保护实验
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PDSW联合热疗可抑制胃癌NF-κB的表达
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作者 唐辉蓉 崔进 +3 位作者 张家骅 代佑果 李为明 廖陈 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期4012-4017,共6页
为探讨生理性深层海水(PDSW)联合热疗对人胃癌SGC-7901细胞体外和体内的抗癌作用,通过在体外培养人胃癌SGC-7901细胞株,随机分为实验组、对照组和空白组,实验组加PDSW,对照组加生理盐水,空白组不做其他处理,分别在37℃、40℃和43℃热疗... 为探讨生理性深层海水(PDSW)联合热疗对人胃癌SGC-7901细胞体外和体内的抗癌作用,通过在体外培养人胃癌SGC-7901细胞株,随机分为实验组、对照组和空白组,实验组加PDSW,对照组加生理盐水,空白组不做其他处理,分别在37℃、40℃和43℃热疗温度下培养。同时,将SGC-7901细胞注射至裸鼠皮下,建立移植瘤模型,随机分为5组,至肿瘤长至直径为1 cm时,分别进行H_2O+RT、H_2O+40℃、H_2O+43℃、PDSW+40℃、PDSW+43℃处理,然后绘制裸鼠肿瘤生长曲线,观察裸鼠肿瘤组织切片,并用实时荧光定量PCR检测细胞和组织中NF-κB基因表达情况,Western blotting检测NF-κB蛋白的表达情况。研究发现,与其他处理相比,PDSW联合热疗处理后肿瘤生长缓慢,肿瘤细胞的增长明显受抑,细胞和裸鼠皮下移植瘤组织中NF-κB基因和蛋白的表达量较低。说明PDSW联合热疗能抑制胃癌SGC-7901细胞中NF-κB基因和蛋白的表达,从而有效抑制胃癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 PDSW 热疗 SGC-7901 NF-ΚB q RT-PCR WESTERN blotting
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mPRα在性成熟雌性牙鲆(Paralichthysolivaceus)不同组织中的定性定量表达特征
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作者 李晓妮 柳学周 +3 位作者 史宝 徐永江 李晓晓 张金勇 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第1期34-41,共8页
通过荧光实时定量PCR方法(qRT-PCR)检测雌性性成熟牙鲆(Paralichthys olivaceus)第Ⅴ时期不同时相的卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,同时采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究性成熟雌性牙鲆mPRα mRNA和蛋白在各组... 通过荧光实时定量PCR方法(qRT-PCR)检测雌性性成熟牙鲆(Paralichthys olivaceus)第Ⅴ时期不同时相的卵母细胞中膜孕激素受体(mPRα)的表达,同时采用原位杂交、免疫组化和Western blotting方法研究性成熟雌性牙鲆mPRα mRNA和蛋白在各组织中的分布和表达。qRT-PCR结果显示,在牙鲆卵巢成熟时期的第Ⅴ时相卵母细胞,mPRα mRNA的表达量最高,表明mPRα介导孕激素参与了牙鲆卵母细胞成熟的调控。组织定量定位结果显示,在牙鲆的卵巢、脑、头肾、肾、肝脏组织中均有mPRα mRNA和蛋白表达存在,且在脑、卵巢中表达量较高,表明mPRα在牙鲆不同组织中都发挥着一定的作用,且在内分泌相关组织如脑和卵巢中的作用更明显。原位杂交和免疫组化结果显示,mPRα mRNA和蛋白表达明显定位在牙鲆卵母细胞膜上,且分布在其他组织的管腔结构。本研究为进一步探究牙鲆mPRα信号转导机制提供了理论基础和形态学依据。 展开更多
关键词 膜孕激素受体 牙鲆 原位杂交 免疫组化 Western blotting 组织表达
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自发性高血压大鼠主动脉对前列腺素H_2反应的增加先于前列腺素H合酶1表达的变化(英文)
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作者 Tong GE Paul M VANHOUTTE Chantal M BOULANGER 《中国药理学报》 CSCD 1999年第12期1087-1092,共6页
AIM: To determine the expression of PGH synthase-1and the sensitivity of vascular smooth muscle to PGH_2in the aorta from the SHR at an age when noendothelium-dependent contractions to acetylcholine areobserved under ... AIM: To determine the expression of PGH synthase-1and the sensitivity of vascular smooth muscle to PGH_2in the aorta from the SHR at an age when noendothelium-dependent contractions to acetylcholine areobserved under control conditions. METHODS: Allexperiments were performed in parallel on aortas from20-wk-old SHR and Wistar-Kyoto normotensive rats(WKY). Rings, with or without endothelium, weresuspended in conventional organ chambers for therecording of changes in isometric force. Theexpression of PGH Synthase-1 was evaluated by 展开更多
关键词 乙酰胆碱 前列腺素 过氧化物合酶 PCH
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人血浆转甲状腺素蛋白的提纯及其对肝癌细胞生长的抑制作用 被引量:7
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作者 李钧敏 田培坤 +4 位作者 蒋惠秋 万大方 顾健人 林启山 刘国诠 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期97-101,共5页
目的:在人原发性肝癌中,转甲状腺素蛋白(transthyretin,TFR)基因转录严重受阻遏.在原发性肝癌患者的血浆中,TTR含量明显降低.因此,有必要从人血浆中提取TTR,观察TIR对人肝癌细胞生长的抑制作用.方法:先用40%饱和硫酸铵,再用5%酚预沉淀... 目的:在人原发性肝癌中,转甲状腺素蛋白(transthyretin,TFR)基因转录严重受阻遏.在原发性肝癌患者的血浆中,TTR含量明显降低.因此,有必要从人血浆中提取TTR,观察TIR对人肝癌细胞生长的抑制作用.方法:先用40%饱和硫酸铵,再用5%酚预沉淀人血浆,采用DEAE-Cellulose离子交换层析提取TTR,所提蛋白经蛋白质印迹鉴定并于体外观察TTR对肝癌细胞生长的抑制作用.结果:从血浆中提取的TTR纯度为85%,经蛋白质印迹鉴定正确;体外实验初步证实,TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用.结论:TTR对肝癌细胞的生长有明显抑制作用,这一性质为生物工程生产TTR,用于临床治疗,提供了可行性依据,从而在蛋白水平进一步证实TTR基因可能是与人肝癌相关的抑癌基因候选者. 展开更多
关键词 血浆 转甲状腺素蛋白 离子交换层析 肝癌
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不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活剂的影响 被引量:8
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作者 安德明 郑培永 季光 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2009年第5期31-34,共4页
目的观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。方法采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型。造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、... 目的观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响。方法采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型。造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、失笑散组及合方组;各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材。观察各组大鼠一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBil)、肝组织病理、uPA蛋白表达(Westernblot法)。结果与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBil、纤维化程度均显著升高。与模型组比较,3个复方均能降低大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P<0.01),失笑散及合方能降低TBil(P<0.01),合方改善ALP、ALT优于两个单方。3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P<0.01),合方优于两个单方。优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用。与模型组比较,3个复方组uPA蛋白表达显著增加(P<0.01),其中合方组最高,失笑散组次之,再次为二至丸组,三者之间比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论二至丸、失笑散及其合方均可不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成,其机制可能与调控uPA蛋白表达有关。 展开更多
关键词 胆汁淤积性肝纤维化 二至丸 失笑散 尿激酶型纤溶酶原激活剂 WESTERN印迹 大鼠
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HMGB1及MMP-9在子宫内膜癌组织中表达的意义 被引量:7
15
作者 段玉真 周晓慧 +1 位作者 张玉娟 韩冰 《热带医学杂志》 CAS 2016年第11期1371-1374,共4页
目的探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA和蛋白在子宫内膜癌组织中表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR及Western印记法检测正常子宫内膜组织、单纯型增生症子宫内膜组织、非典型增生子宫内膜组织和... 目的探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)m RNA和蛋白在子宫内膜癌组织中表达水平及临床意义。方法应用实时荧光定量RT-PCR及Western印记法检测正常子宫内膜组织、单纯型增生症子宫内膜组织、非典型增生子宫内膜组织和子宫内膜癌Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ期组织中HMGB1、MMP-9 m RNA和蛋白的表达水平。结果与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织HMGB1、MMP-9 m RNA及蛋白的表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组织HMGB1、MMP-9蛋白的表达上调与手术病理分期、淋巴结转移及浸润深度有关(P<0.05),与癌组织的分化程度无关(P>0.05);子宫内膜癌组织中,HMGB1蛋白与MMP-9蛋白的表达呈正相关(r=0.900,P<0.05)。结论 HMGB1、MMP-9在子宫内膜癌的发生、发展及转移的过程中起着重要的作用,其有望成为子宫内膜癌的早期诊断及预后评价的分子标志物。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 HMGB1 MMP-9 RT—PCR WESTERN blot
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Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究 被引量:7
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作者 韩晓杰 段婷婷 +4 位作者 庞雨 徐玉东 王宇 杨永清 尹磊淼 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第21期4047-4050,4037,共5页
目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果。方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1:3000、1:5000、1:10000等抗体稀... 目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果。方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1:3000、1:5000、1:10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响。结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130 V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号。统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1:3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1:5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1:10000时条带图像出现弥散且背景较高。结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测。 展开更多
关键词 蛋白质免疫印迹法 半干转印 湿转 抗原抗体比例
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Livin蛋白在乳腺癌中的表达及与Bcl-2的关系 被引量:4
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作者 齐凤杰 赵树鹏 董新茜 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期613-618,共6页
目的探讨凋亡抑制基因Livin和Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中表达及与临床病理参数的关系。方法应用western blot和免疫组织化学SP法检测90例乳腺癌、30例乳腺良性病变和15例乳腺癌旁组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达情况,分析两种蛋白表达的相... 目的探讨凋亡抑制基因Livin和Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中表达及与临床病理参数的关系。方法应用western blot和免疫组织化学SP法检测90例乳腺癌、30例乳腺良性病变和15例乳腺癌旁组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达情况,分析两种蛋白表达的相关性。结果Livin蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率及蛋白表达量明显高于癌旁组织和乳腺良性病变,差异有显著性(P<0.05)。Livin蛋白在乳腺癌中的阳性表达与肿瘤大小,组织学类型,组织学分级及淋巴结转移无关(P>0.05),但随临床分期的增加而升高(P<0.05);Livin和Bcl-2蛋白在乳腺癌组织中的表达显著相关(P<0.05)。结论Livin蛋白在乳腺癌组织中表达上调,且与病理分期有关,提示Livin蛋白可通过抑制细胞凋亡促进乳腺癌的发生、发展,Livin与Bcl-2蛋白可能在乳腺癌的演进中起着协同作用。 展开更多
关键词 LIVIN Bcl-2乳腺癌 WESTERN blot 免疫组化
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薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因的分离鉴定及表达分析 被引量:5
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作者 王文天 彭少麟 +5 位作者 李冬梅 王冬梅 王瑞龙 田彩娟 赵厚本 户桂敏 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期445-450,共6页
为研究水杨酸羧甲基转移酶基因在植物防御系统中的作用,采用RACE法从薇甘菊(Mikania micrantha)cDNA文库中克隆到薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因SAMT全长cDNA,并进行外源表达以及水杨酸诱导模式分析。结果表明,该基因cDNA全长1299 bp,其... 为研究水杨酸羧甲基转移酶基因在植物防御系统中的作用,采用RACE法从薇甘菊(Mikania micrantha)cDNA文库中克隆到薇甘菊水杨酸羧甲基转移酶基因SAMT全长cDNA,并进行外源表达以及水杨酸诱导模式分析。结果表明,该基因cDNA全长1299 bp,其中编码区长1089 bp,编码362个氨基酸,Blast显示该基因编码的氨基酸序列与仙女扇(Clarkia breweri)的相似性为74%,证实其主要功能是将水杨酸(salicylic acid,SA)甲基化成水杨酸甲酯(methyl salicylate,MeSA),由此将该基因命名为MmSAMT,GenBank登录号为FJ869889。将MmSAMT编码序列克隆至pET-32a(+)载体,转化Rosetta-gami(DE3)中表达,SDS-PAGE显示单体分子量在40 kD左右,与预测结果一致。Western blot显示在20℃、0.05 mmol/L IPTG和180 r min-1下诱导6 h,可获得较多的可溶性蛋白质。对喷施100μmol/L SA薇甘菊叶片中MmSAMT的转录谱进行研究,该基因的诱导受到SA的激活,48 h的表达水平达最高,暗示MmSAMT可能通过催化合成MeSA引发系统获得性抗性,提高抗性防御的警戒等级。 展开更多
关键词 薇甘菊 SAMT RACE 原核表达 WESTERN blot RT-PCR
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巴氯芬抑制CCI神经病理性疼痛模型大鼠DRG神经元上GABA_A受体功能 被引量:6
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作者 丛丽娜 张传林 +5 位作者 陈梦洁 成洪聚 马克涛 朱贺 司军强 李丽 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期866-870,共5页
目的:观察巴氯芬干预前后GABAA受体γ2亚基在坐骨神经压榨性损伤(Chronic ConstrictionInjury,CCI)模型大鼠背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)神经元上的功能和表达变化.方法:制备CCI模型,热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期(... 目的:观察巴氯芬干预前后GABAA受体γ2亚基在坐骨神经压榨性损伤(Chronic ConstrictionInjury,CCI)模型大鼠背根神经节(Dorsal Root Ganglion,DRG)神经元上的功能和表达变化.方法:制备CCI模型,热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期(Thermal Withdrawal Latency,TWL);以灌胃的方式给予CCI模型鼠巴氯芬干预14天,取大鼠L4~L6 DRG神经元进行膜片钳实验,观测巴氯芬干预前后CCI模型鼠DRG神经元GABA介导的内向电流变化;应用Western blot技术检测巴氯芬干预前后CCI模型鼠GABAA受体γ2亚基的表达变化.结果:(1) CCI模型大鼠的TWL比正常组明显缩短,巴氯芬干预组模型大鼠的TWL较CCI模型组明显延长(P<0.05);(2)巴氯芬抑制CCI模型大鼠D RG神经元GABA介导的内向电流(P<0.05); (3) CCI手术侧和手术对侧DRG神经元上GABAA受体γ2亚基的表达量下调(P<0.05),但是磷酸化γ2亚基表达量上调(P<0.05);巴氯芬干预后的GABAA受体γ2亚基表达量较CCI组下调,磷酸化的γ2亚基表达量较CCI组上调.结论:神经病理性痛状态下,GABAA受体γ2亚基发生磷酸化可能是GABA介导的突触前抑制作用减弱的原因之一,而巴氯芬可能通过磷酸化GABAA受体γ2亚基抑制GABAA受体功能. 展开更多
关键词 神经病理性痛 巴氯芬 γ-氨基丁酸 膜片钳
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猪表皮生长因子在大肠杆菌中的表达 被引量:5
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作者 杨桂香 黄伟华 彭险峰 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期90-93,共4页
采用RT-PCR方法从猪肾脏皮质组织中扩增出pEGF基因,将其连接到克隆载体pMD18-T上,经测序鉴定正确后,再克隆到原核表达载体pET-41 a(+)上,构建重组表达质粒pET-EGF.用重组质粒转化E.coliBL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电... 采用RT-PCR方法从猪肾脏皮质组织中扩增出pEGF基因,将其连接到克隆载体pMD18-T上,经测序鉴定正确后,再克隆到原核表达载体pET-41 a(+)上,构建重组表达质粒pET-EGF.用重组质粒转化E.coliBL21(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE电泳和W estern-b lotting对GST-EGF融合蛋白进行分析,结果表明37℃诱导表达的融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的20.2%;30℃诱导表达的可溶性融合蛋白含量较高,占菌体总蛋白的7.7%. 展开更多
关键词 猪表皮生长因子 原核表达 westem-blotting
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