副溶血性弧菌PMA-LAMP方法的建立 被引量：9

1

作者 马骉 吴莹莹 +2 位作者 戴明雁 方结红 张明洲 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2016年第7期205-213,共9页

副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,在海鲜等食物中检出率很高,食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品,极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌,容易出现假阳性结果。本研... 副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)是一种常见的食源性致病菌,在海鲜等食物中检出率很高,食用没有煮熟的带菌食物或者腌制品,极易引起食物中毒。目前用以检测副溶血性弧菌的快速检测方法都不能区别死活菌,容易出现假阳性结果。本研究基于DNA结合染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA),利用荧光染料钙黄绿素(Calcein)的特性,建立了一种实时的可视化环介导等温扩增方法(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),并与q PCR方法进行比较。实时可视化LAMP方法的反应结果,既可以肉眼直接观测,也可以借助荧光分析设备实时监测,并对半定量分析进行初探,为之后向定量分析深入研究打下基础。实验结果表明,实时可视化PMA-LAMP方法的灵敏度可达5.0×102 CFU/m L,模拟食样灵敏度为1.9×102 CFU/m L,与PMA-q PCR方法结果一致。除去前增菌时间,整个检测过程只需2 h,且准确率高,为副溶血性弧菌快速检测的开展提供了有效的技术支持。 展开更多

关键词 副溶血性弧菌 可视化环介导等温扩增方法 叠氮溴化丙锭 实时荧光定量PCR 快速检测

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猪胸膜肺炎放线杆菌可视化LAMP检测方法的建立与应用 被引量：4

2

作者 朱海鹏 郑旭 +4 位作者 王慧 高洁 司舒晗 杜涛峰 穆杨 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期837-845,共9页

为建立检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法,对比猪APP主要流行毒株的ApxⅣA基因序列,选择高度保守区域设计LAMP引物,以钙黄绿素(Calcein)为指示剂,对反应体系和反应条件优化后建立了一种快速检测猪APP的可视... 为建立检测猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)的可视化环介导等温扩增(LAMP)方法,对比猪APP主要流行毒株的ApxⅣA基因序列,选择高度保守区域设计LAMP引物,以钙黄绿素(Calcein)为指示剂,对反应体系和反应条件优化后建立了一种快速检测猪APP的可视化LAMP方法。采用建立的方法在63℃水浴锅中扩增40 min后,85℃作用10 min即可完成检测。用该方法检测大肠杆菌、绿脓杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、猪霍乱沙门菌、猪链球菌、猪肺炎支原体、副猪嗜血杆菌等,均不发生交叉反应。以10倍稀释的APP基因组DNA为模板,评价方法的敏感性,结果最低检出量为1.67×10^(-5)ng/μL,比普通PCR方法的最低检出量1.67×10^(-2)ng/μL高1000倍;在反应体系中加入钙黄绿素,反应结束后阳性反应管颜色从橘黄色变为黄绿色且在紫外光下有绿色荧光。采用建立的方法检测312份临床样品,共检出阳性样品46份,而采用普通PCR方法仅检出阳性样品10份。该方法的建立为快速诊断猪传染性胸膜肺炎提供了技术支持。 展开更多

关键词 猪胸膜肺炎放线杆菌 可视化环介导等温扩增 ApxⅣA基因 钙黄绿素

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大肠埃希菌O157:H7环介导等温扩增可视化检测方法的建立 被引量：10

3

作者 吕恒 张锦海 +4 位作者 陈凤娟 谭维国 顾海涛 王平 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第4期289-292,309,共5页

目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合L... 目的建立肠出血性大肠埃希菌O157︰H7环介导等温扩增(LAMP)可视化快速检测方法。方法针对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157︰H7编码脂多糖rfbE基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,评价LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP法对O157︰H7rfbE基因的最低检出限约为100copy/反应管,检测肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均为阴性。体系的扩增效率较高,可在40min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157︰H7LAMP检测方法具有特异、灵敏,设备要求简单等特点,适用于EHEC O157︰H7的快速检测。 展开更多

关键词 肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157 H7 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 羟基萘酚蓝(HNB)

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肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速可视化检测 被引量：8

4

作者 吕恒 张锦海 +3 位作者 顾海涛 王平 王长军 王玉邦 《东南国防医药》 2013年第4期321-324,共4页

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设... 目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术和羟基萘酚蓝(Hydroxynaphthol blue,HNB)指示剂建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7快速可视化检测方法。方法针对EHEC O157∶H7脂多糖编码基因rfbE保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入染料HNB作为LAMP扩增的指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据HNB的颜色变化进行结果判定,并评价检测方法的特异性和灵敏度。结果本方法最低检出限约为100拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅EHEC O157∶H7反应管HNB颜色由紫罗兰变成天蓝色,而肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠聚集性大肠杆菌(EAEC)、宋内志贺菌、福氏志贺菌均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,40 min内出结果。结论建立的基于颜色判定的EHEC O157∶H7 LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于EHEC O157∶H7现场快速检测。 展开更多

关键词 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 可视化检测 环介导等温扩增 羟基萘酚蓝

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SARS冠状病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立 被引量：8

5

作者 吕恒 张锦海 +4 位作者 陈凤娟 顾海涛 王平 王玉邦 王长军 《实用预防医学》 CAS 2013年第4期395-399,共5页

目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立SARS冠状病毒可视化快速检测方法。方法针对SARS冠状病毒RNA聚合酶编码基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入钙黄绿素作为LAMP扩增反应指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据钙黄绿素的... 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立SARS冠状病毒可视化快速检测方法。方法针对SARS冠状病毒RNA聚合酶编码基因保守区设计LAMP引物及环引物,反应体系加入钙黄绿素作为LAMP扩增反应指示剂,结合LAMP浊度仪优化扩增条件,根据钙黄绿素的颜色变化进行结果判定,评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性。结果本方法最低检出限约为10拷贝/反应管,高于普通PCR;检测特异性高,仅SARS冠状病毒反应管钙黄绿素颜色由褐色变为黄绿色,而甲型H1N1病毒、高致病性H5亚型禽流感病毒、普通流感病毒均不发生变色反应;体系的扩增效率高于普通PCR,35 min内出结果。结论所建立的基于颜色判定的SARS病毒检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于SARS冠状病毒现场快速检测。 展开更多

关键词 SARS病毒 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 钙黄绿素

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新型布尼亚病毒环介导等温扩增可视化检测方法的建立 被引量：5

6

作者 吕恒 钟璟浩 +2 位作者 张锦海 王平 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第3期225-228,共4页

目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反... 目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立新型布尼亚病毒(SFTSV)可视化快速检测方法。方法针对新型布尼亚病毒的S片段基因设计LAMP引物建立LAMP方法。反应体系内加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应扩增指示剂,根据LAMP浊度仪扩增结果优化反应条件,根据HNB颜色变化进行结果判定,评估LAMP方法的特异性和灵敏性。结果建立的LAMP方法最低检出限为10拷贝/反应管;方法的特异性高,仅SFTSV反应管颜色由紫罗兰变为天蓝色,而汉坦病毒、新疆出血热、Q热、马尔堡、埃博拉病毒及阴性对照反应管均未发生变色反应;LAMP反应的最佳温度为63℃,其扩增效率高于常规PCR,试验过程仅需30min。结论建立的可视化SFTSV LAMP检测方法具有特异性强,灵敏性高,实验设备要求简单等优点,可用于SFTSV的快速检测。 展开更多

关键词 新型布尼亚病毒(SFTSV) 可视化检测 环介导等温扩增(LAMP) 羟基萘酚蓝(HNB)

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水产品中哈维氏弧菌等温快速检测方法优化及比较 被引量：3

7

作者 仲瑶 贾惠齐 +5 位作者 苏鹏 刘玉欣 孔昕荟 龚思颖 郑秋月 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第22期143-151,共9页

目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进... 目的 基于核酸等温扩增技术,建立荧光法、可视化环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermal amplification,LAMP)和重组酶聚合酶扩增(recombinasepolymeraseamplification,RPA)快速检测哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的分析方法,并对方法进行优化和比较。方法 选择哈维氏弧菌toxR基因为特异靶标序列,分别设计了2组LAMP引物、3组RPA引物,对方法进行筛选。优化建立了荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA3种等温扩增方法,对3种方法的特异性和灵敏度进行比较,并用模拟污染样本验证检测实际样品的灵敏度。结果 基于快速提取的哈维氏弧菌基因组DNA,本研究所建立的荧光法LAMP、可视化LAMP、普通RPA 3种等温扩增方法均具有良好的特异性,与同属及近属的细菌没有交叉反应。3种方法的灵敏度分别为5.27 fg/μL (1.99 fg/μL~0.93 pg/μL, 95%置信区间)、0.11 ng/μL、1.07 pg/μL;荧光LAMP和普通RPA对模拟污染样本的灵敏度分别为7 CFU/mL和97 CFU/mL。结论 本研究建立优化的3种等温快速检测方法结果准确、操作简单,扩增效率和灵敏度优于文献报道的同类方法,提高了哈维氏弧菌现场快速检测水平。 展开更多

关键词 哈维氏弧菌 荧光法 可视化环介导等温扩增技术 重组酶聚合酶扩增

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山羊支原体山羊肺炎亚种可视化实时荧光LAMP检测方法的建立及应用 被引量：3

8

作者 宋相阳 颜新敏 +5 位作者 付磊 陈胜利 郝华芳 高鹏程 刘永生 储岳峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期671-678,共8页

为建立快速简便、灵敏度高、特异性强的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)核酸快速检测方法,选择Mccp的92.1基因序列为靶序列,设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,并向反应体系中添加可视化染料羟基溴酚蓝(HNB)或荧光染料(Eva green),分... 为建立快速简便、灵敏度高、特异性强的山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp)核酸快速检测方法,选择Mccp的92.1基因序列为靶序列,设计2条外引物、2条内引物和2条环引物,并向反应体系中添加可视化染料羟基溴酚蓝(HNB)或荧光染料(Eva green),分别建立Mccp可视化环介导恒温扩增(V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增(RF-LAMP)检测方法,并对比两种方法的敏感性、特异性、重复性以及两种方法在山羊组织样品中的检测效果。结果显示,两种方法均可检出1.0×10 copies/μL的核酸标准品,灵敏度高;与其他支原体及细菌,如丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、肺炎克雷伯菌等类症病原体,均无交叉反应;V-LAMP、RF-LAMP的变异系数均小于1%;对人工感染的试验样品和临床样品进行检测,两种检测方法结果一致,阳性率为9.09%,并且与实时定量PCR检测结果一致。本试验建立的V-LAMP和RF-LAMP为Mccp流行病学调查和疾病诊断提供了新的临床快速检测方法。 展开更多

关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 可视化环介导恒温扩增 实时荧光环介导恒温扩增 核酸检测

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可视化和实时荧光环介导恒温扩增技术快速检测原料乳中的沙门氏菌 被引量：3

9

作者 周杨 万强 +4 位作者 蔡芷荷 卢勉飞 杨绪伟 吴清平 曲晓莹 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3741-3755,共15页

【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual... 【背景】原料乳质量控制是乳制品生产流程中的关键环节,沙门氏菌是污染原料乳的主要致病菌之一。随着生物检测技术的不断发展,建立用于快速检测原料乳中沙门氏菌的实用型方法具有重要意义。【目的】评价可视化环介导恒温扩增技术(visual loop-mediated isothermal amplification,V-LAMP)和实时荧光环介导恒温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)方法快速检测原料乳中沙门氏菌的实效性。【方法】建立沙门氏菌LAMP反应体系和反应条件,对比V-LAMP和RF-LAMP两种方法的特异性、灵敏度、稳定性及其应用于实际样品检测的效用。【结果】采用V-LAMP和RF-LAMP方法检测沙门氏菌标准菌株,其结果均为阳性,检测非沙门氏菌标准菌株其结果均为阴性;该两种方法的检出限为13 CFU/mL,检测重复率均为100%;经检测10份人工污染样品,该两种方法的检测结果与实际结果高度一致;经检测73份实际样品,相对于标准方法,该两种方法其相对特异性分别为94.12%和92.65%,相对敏感度分别为100%和100%,相对准确率分别为94.52%和93.15%,一致性χ^2值分别为2.25和3.20,与标准方法无明显差异(P>0.05)。【结论】V-LAMP和RF-LAMP方法检测特异性好、灵敏度高、稳定性好,适用于原料乳中沙门氏菌的快速检测。 展开更多

关键词 可视化 实时荧光 环介导恒温扩增技术 原料乳 沙门氏菌 快速检测 效用评价

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A组轮状病毒可视化RT-LAMP方法的建立 被引量：3

10

作者 朱青 覃玥 王业富 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2487-2493,共7页

【目的】建立一种利用颜色判定的快速、简单、灵敏度高的检测方法,即可视化的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,并应用于人A组轮状病毒的基因检测。【方法】针对A组轮状病毒VP6基因的6个保守区域设计4条特异性引物,在64°C恒温条... 【目的】建立一种利用颜色判定的快速、简单、灵敏度高的检测方法,即可视化的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法,并应用于人A组轮状病毒的基因检测。【方法】针对A组轮状病毒VP6基因的6个保守区域设计4条特异性引物,在64°C恒温条件下进行核酸扩增反应1 h,在扩增前加入染料钙黄绿素(Calcein)作为反应指示剂,以钙黄绿素的颜色变化作为结果判定标准。评价该方法的特异性和灵敏度,并同时利用RT-LAMP和RT-PCR两种方法对90份临床腹泻样本中的病毒核酸进行检测。【结果】RT-LAMP方法特异性较高,灵敏度可以达到103 copies/μL RNA分子水平,比RT-PCR高出100倍。对临床标本的检出率与RT-PCR方法相当。【结论】建立的RT-LAMP法灵敏度较高,特异性强,节省时间,结果可视化,具有野外检测和现场快速检测的潜力。 展开更多

关键词 可视化 逆转录环介导等温扩增 A组轮状病毒 检测

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基于可视化和实时荧光环介导等温扩增技术快速鉴定日本红菇

11

作者 赵兰馨 赵晓燕 +4 位作者 易思亮 田恩静 范婷婷 赵志勇 周昌艳 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2023年第10期1440-1447,共8页

目的利用可视化和实时荧光环介导等温扩增(LAMP)技术,建立日本红菇的快速鉴别方法。方法基于日本红菇内转录间隔区的基因序列设计了特异性的LAMP引物,在23种蘑菇物种间进行特异性验证,通过检测10 ng/μL~1 fg/μL系列浓度的基因组DNA,... 目的利用可视化和实时荧光环介导等温扩增(LAMP)技术,建立日本红菇的快速鉴别方法。方法基于日本红菇内转录间隔区的基因序列设计了特异性的LAMP引物,在23种蘑菇物种间进行特异性验证,通过检测10 ng/μL~1 fg/μL系列浓度的基因组DNA,评估方法的灵敏度。结果设计的LAMP引物可特异性鉴别日本红菇,不与其他蘑菇种类发生交叉反应。建立的LAMP方法检测灵敏度为1%混合蘑菇样本,或终浓度为2 pg/μL的日本红菇DNA。结论本方法可用于新鲜/干制蘑菇及烹饪后蘑菇的检测,检测时间<1 h,其中可视化方法无需专业仪器设备,适用于日本红菇的现场快速鉴别。 展开更多

关键词 日本红菇 可视化环介导等温扩增 实时荧光环介导等温扩增 快速鉴定 蘑菇及其制品

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水产品和水体中创伤弧菌现场可视化环介导恒温扩增快检方法的建立及应用 被引量：2

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作者 田卓 杨莉莉 +4 位作者 郑秋月 麻利丹 刘圣聪 尚德静 曹际娟 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第22期8782-8789,共8页

目的基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立水产品和养殖水域中创伤弧菌的现场可视化快速检测方法。方法以创伤弧菌作为研究对象,分别采用煮沸法和离心柱法提取基因组DNA,优化弧菌DNA提取方法;以创... 目的基于环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立水产品和养殖水域中创伤弧菌的现场可视化快速检测方法。方法以创伤弧菌作为研究对象,分别采用煮沸法和离心柱法提取基因组DNA,优化弧菌DNA提取方法;以创伤弧菌gyrB基因作为靶基因,设计筛选最佳的适于LAMP的引物序列,分别通过LAMP荧光扩增曲线(加SYTO-9荧光染料),以及LAMP可视化观察扩增产物的颜色变化(加钙黄绿素),开展特异性、灵敏度和重复性实验分析。结果煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法;优化筛选的引物可以特异地检测创伤弧菌,检测核酸浓度的灵敏度可以达到10fg/μL,并且结果稳定、可靠。采用该方法进行实际样品的检测应用,在558份水体样品和655份水产品样品中,创伤弧菌阳性检出率分别为9.01%和8.60%,阳性检出率明显高于传统的分离培养鉴定结果。结论低技术要求、低设备成本及检测时间短使得可视化LAMP快检方法成为现场可使用的一个理想选择,对于水产养殖业来说也更方便。 展开更多

关键词 创伤弧菌 水产品 水体 可视化 环介导恒温扩增技术

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水产品和水体中灿烂弧菌现场可视化环介导等温扩增快检方法的建立及应用 被引量：2

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作者 田卓 郑秋月 +3 位作者 麻丽丹 郑文杰 尚德静 曹际娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期108-119,共12页

基于环介导等温扩增(LAMP)技术建立水产品和养殖水域中灿烂弧菌现场可视化的快速、简便检测方法。以灿烂弧菌等作为研究对象,以灿烂弧菌的toxR基因作为靶基因,确定煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法,优化筛选的引物可以特异地... 基于环介导等温扩增(LAMP)技术建立水产品和养殖水域中灿烂弧菌现场可视化的快速、简便检测方法。以灿烂弧菌等作为研究对象,以灿烂弧菌的toxR基因作为靶基因,确定煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法,优化筛选的引物可以特异地检测灿烂弧菌,检测核酸浓度的灵敏度可以达到10^(-9) g/L,并且结果稳定、可靠。采用该方法进行实际样品的检测应用,在558份水体样品和655份水产品样品中,灿烂弧菌阳性检出率分别为0.54%和0.46%,与实时荧光PCR方法的检测结果符合率为100%。低技术要求,低设备成本以及短检测时间使得可视化LAMP快检方法成为现场可使用的一个理想选择,这对于水产养殖业来说也更方便。 展开更多

关键词 灿烂弧菌 水产品 水体 可视化 环介导等温扩增

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家蚕核型多角体病毒可视化快速核酸检测方法 被引量：2

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作者 覃玥 杨梦歌 +1 位作者 朱青 王业富 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1007-1012,共6页

家蚕核型多角体病在广西多批次的养蚕生产中非常普遍,严重影响蚕农的经济效益。根据家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列设计4条用于环介导核酸等温扩增(LAMP)特异性引物,以感染Bm NPV的5龄家蚕血淋巴的多... 家蚕核型多角体病在广西多批次的养蚕生产中非常普遍,严重影响蚕农的经济效益。根据家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)广西分离株的多角体蛋白基因(polh)序列设计4条用于环介导核酸等温扩增(LAMP)特异性引物,以感染Bm NPV的5龄家蚕血淋巴的多角体DNA为模板,通过优化LAMP反应体系,确定Mg2+、d NTPs、甜菜碱最适终浓度分别为8 mmol/L、1.4 mmol/L和0.8 mol/L,外引物和内引物浓度为0.2μmol/L和1.6μmol/L,在64℃恒温条件下反应1 h;在反应管中加钙黄绿素,通过肉眼观察颜色变化直接判定结果实现可视化检测。该检测方法的Bm NPV最低模板DNA为25 fg/μL,其敏感度为常规PCR l00倍,兼具简便、快速、灵敏等优点,可用于家蚕核型多角体病的早期诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 家蚕核型多角体病毒 可视化快速检测 环介导核酸等温扩增 早期诊断

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可视化LAMP检测PJI金黄色葡萄球菌的感染

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作者 耿宗洁 张国强 +3 位作者 冀全博 郑清源 王瀚博 王岩 《中华保健医学杂志》 2022年第3期232-235,共4页

目的为建立一种可早期明确假体周围感染(PJI)菌种的快速、可视化检测方法。方法根据金黄色葡萄球菌基因中的保守序列设计特异性引物,以甲酚红为指示剂,评估该方法的灵敏度和特异度,并进行临床样本验证。结果可视化环介导等温扩增(LAMP)... 目的为建立一种可早期明确假体周围感染(PJI)菌种的快速、可视化检测方法。方法根据金黄色葡萄球菌基因中的保守序列设计特异性引物,以甲酚红为指示剂,评估该方法的灵敏度和特异度,并进行临床样本验证。结果可视化环介导等温扩增(LAMP)检测可在60 min(样本处理3~5 min,核酸提取15 min,可视化LAMP检测40 min)内完成对样本的检测,其最低检测限为10 copies/μl,且具有良好的特异性,在对临床关节液样本进行符合率验证时,其阳性符合率和阴性符合率均为100%。结论可视化LAMP检测在PJI感染检测中显示出良好的应用潜力。 展开更多

关键词 可视化 环介导等温扩增 假体周围感染 快速检测

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