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慈菇蛋白酶抑制剂通过花粉管途径对小麦的导入及转基因植株分析 被引量:28
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作者 牟红梅 刘树俊 +3 位作者 周文娟 文玉香 张文俊 魏荣瑄 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第6期634-642,共9页
慈菇蛋白酶抑制剂(ArrowheadProteinaseInhbitor,API)是来源于慈菇(Sagittariatrifolia)储藏器官(根茎)的一种天然抗虫物质,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂类,能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肽释放酶,对某些鳞翅目、双翅目以及鞘... 慈菇蛋白酶抑制剂(ArrowheadProteinaseInhbitor,API)是来源于慈菇(Sagittariatrifolia)储藏器官(根茎)的一种天然抗虫物质,属于丝氨酸蛋白酶抑制剂类,能抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肽释放酶,对某些鳞翅目、双翅目以及鞘翅目等昆虫有毒杀作用。通过花粉管途径,将构建的含抗虫基因API-A、API-B和选择性标记基因NPT-Ⅱ的质粒pBLAH-A(B)导入3个冬小麦品种(JD-1、8866、866554),通过卡那霉素抗性的筛选和聚合酶链反应(PCR)技术分析表明,Kmr绿苗中有3株为PCR阳性株(866554有2株,JD-1有1株),阳性率为0.29%。用API基因的片段为探针,对Kmr绿苗分别进行基因组DNA的Southern杂交分析,在3株PCR阳性株中都检测出了API基因片段的存在,说明了外源目的基因已整合到小麦基因组中。对转化阳性植株899554-3的自交后代进行了PCR分析和Southern杂交分析,部分植株表现为PCR和Southern杂交阳性,这表明整合到基因组中的外源基因能稳定遗传给后代。用ELISA的方法检测与API基因融合的NPT-Ⅱ基因的表达含量,发现在PCR和Southern杂交分析为阳性反应的3植株中都显示出NPT-Ⅱ的高含量,为杀虫基因API在转基因小麦中的整合提供了进一步证据。 展开更多
关键词 慈菇 抗虫基因 小麦遗传转化 花粉管理管法 API
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转外源puroindoline基因小麦的获得与检测 被引量:13
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作者 耿洪伟 张庆祝 +4 位作者 何中虎 夏兰芹 陈新民 王德森 曲延英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1751-1755,共5页
【目的】验证pinA和pinB对小麦籽粒质地的影响。【方法】将含有控制硬度的主效基因pinA和pinB的单子叶植物高效表达载体pUBPa和pUBPb,分别通过花粉管通道法将其转入小麦品种中优9507(pinB-D1b)中。【结果】获得了转基因植株,PCR检测和... 【目的】验证pinA和pinB对小麦籽粒质地的影响。【方法】将含有控制硬度的主效基因pinA和pinB的单子叶植物高效表达载体pUBPa和pUBPb,分别通过花粉管通道法将其转入小麦品种中优9507(pinB-D1b)中。【结果】获得了转基因植株,PCR检测和基因组Southern杂交证实了外源基因在受体小麦基因组中的整合,水洗淀粉表面蛋白的定量分析表明外源基因的导入影响了friabilin表达。与非转基因对照相比,小麦籽粒质地发生变化。【结论】结果表明,PINA和PINB共同作用形成friabilin,从而直接影响小麦籽粒质地的形成。 展开更多
关键词 普通小麦 籽粒硬度 PUROINDOLINE基因 遗传转化 花粉管通道法 共抑制
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五种常用的植物转基因技术 被引量:10
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作者 汪由 吴禹 +2 位作者 王岩 李兆波 王光霞 《杂粮作物》 CAS 2010年第3期186-189,共4页
从原理、基本步骤和优缺点等几个方面对农杆菌介导法、基因枪法、超声波介导法、子房注射法和花粉管通道法等5种常用的植物转基因技术进行了简要介绍。
关键词 农杆菌介导法 基因枪法 超声波介导法 子房注射法 花粉管通道法 原理 基本步骤 优缺点
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利用花粉管通道法将查尔酮合酶基因导入仙客来 被引量:7
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作者 赵万苓 姜世平 +2 位作者 付新生 朱永莉 杨奎姝 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第4期531-536,共6页
查尔酮合酶(chalconesynthase-A,CHSA)是花色素合成途径中的一个关键酶,它在植物中表达的量可能影响花的颜色。本项目从矮牵牛(Petuniahybrida)特定发育阶段的花瓣的cDNA中,克隆到查尔酮合酶基因CHSA,插入到含有花椰菜花叶病毒CaMV35S... 查尔酮合酶(chalconesynthase-A,CHSA)是花色素合成途径中的一个关键酶,它在植物中表达的量可能影响花的颜色。本项目从矮牵牛(Petuniahybrida)特定发育阶段的花瓣的cDNA中,克隆到查尔酮合酶基因CHSA,插入到含有花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子的植物中间表达载体pBI121和pWM101中,首次通过原位生殖系统导入法(具体采用花粉管通道法)转化仙客来,成功地得到4400余粒仙客来转化种子,8株白花植株的个别花瓣出现了黄斑或略显黄色,甚至个别花瓣变成了黄色花瓣;3株白花植株的个别花瓣一半变成了桃红色(二乔),甚至整个花朵完全变成了桃红色。转基因仙客来经PCR检测呈阳性。 展开更多
关键词 花粉管通道法 仙客来 基因导入 查尔酮合酶基因 花椰菜花叶病毒 35S启动子 PCR检测 合成途径 可能影响 cDNA 发育阶段 表达载体 CaMV 生殖系统 4400 桃红色 花瓣 关键酶 花色素 矮牵牛 导入法 转基因 植物 转化 黄色 植株
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大豆遗传转化研究进展 被引量:6
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作者 周延清 王娜 +2 位作者 苑保军 贾敬芬 孟祥春 《武汉植物学研究》 CSCD 2004年第2期163-170,共8页
综述了大豆遗传转化体系及其优缺点,转基因大豆的研究成果、生产状况和生物安全性评价,分析了大豆遗传转化中存在的一些问题及其解决办法,展望了未来大豆遗传转化的发展前景。
关键词 大豆 转化系统 农杆菌 基因枪 生物安全性 花粉管通道
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玉米自交系外源DNA导入后性状变异的初步探讨 被引量:8
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作者 周柱华 张凤云 +3 位作者 徐立华 邱登林 邢燕菊 阴卫军 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期6-9,共4页
采用花粉管通道技术将大刍草的DNA导入玉米自交系黄早四中,连续3年对其后代的部分性状进行了调查分析,对性状的变异和转化进行了探讨。试验结果表明:导入大刍草DNA后,会降低黄早四的出苗率,使出苗时间延长,同时会使植株的株高、穗位高降... 采用花粉管通道技术将大刍草的DNA导入玉米自交系黄早四中,连续3年对其后代的部分性状进行了调查分析,对性状的变异和转化进行了探讨。试验结果表明:导入大刍草DNA后,会降低黄早四的出苗率,使出苗时间延长,同时会使植株的株高、穗位高降低,并对果穗性状产生影响。处理后株系性状的变异范围均大于对照,证明导入大刍草的DNA会使自交系性状的变化范围增大,类型增多,扩大了育种的选择范围,增加了筛选机会。 展开更多
关键词 玉米自交系 大刍草 DNA 性状变异 生物技术 花粉管通道
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转录因子基因ZmDREB3转化玉米的研究 被引量:6
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作者 王源 黄丛林 +3 位作者 张秀海 吴忠义 魏凤菊 王冬梅 《作物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期58-61,共4页
利用玉米转录因子ZmDREB3基因(Gene ID:EU964828.1)构建了Ubiquitin启动子驱动的植物表达载体PGM0229-ZmDREB3-EP-SPS,以EPSPS基因为抗性筛选标记,通过花粉管通道法将农杆菌EHA105介导的植物表达载体转化到玉米自交系吉444、Mo17中,通... 利用玉米转录因子ZmDREB3基因(Gene ID:EU964828.1)构建了Ubiquitin启动子驱动的植物表达载体PGM0229-ZmDREB3-EP-SPS,以EPSPS基因为抗性筛选标记,通过花粉管通道法将农杆菌EHA105介导的植物表达载体转化到玉米自交系吉444、Mo17中,通过喷洒350mg/L草甘膦除草剂筛选,得到7株草甘膦抗性植株,用PCR检测得到2个同时整合EPSPS标记基因和ZmDREB3目的基因的转基因株系,用PCR-Southern进一步验证,结果呈阳性。以上结果证明外源基因已经被整合到玉米基因组中。 展开更多
关键词 玉米 ZmDREB3基因 转化 花粉管通道法
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花器发育调节基因gaga1转化大豆的初步研究 被引量:3
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作者 喻德跃 魏国兰 +1 位作者 孙英 Teemu H Teeri 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期79-82,共4页
通过花粉管通道法用非洲菊基因 gaga1转化N2 899(质核互作雄性不育保持系 )、通州豆、95 - 7等大豆受体。处理的花朵总数为 4 30 0朵 ,共获 30 0 0多粒种子。经卡那霉素田间鉴定 ,获得了 14株抗卡那霉素的幼苗。通过抗性标记基因nptⅡ... 通过花粉管通道法用非洲菊基因 gaga1转化N2 899(质核互作雄性不育保持系 )、通州豆、95 - 7等大豆受体。处理的花朵总数为 4 30 0朵 ,共获 30 0 0多粒种子。经卡那霉素田间鉴定 ,获得了 14株抗卡那霉素的幼苗。通过抗性标记基因nptⅡ和目标基因 gaga1的PCR检测 ,发现有两株N2 899具有阳性信号 ,初步证明非洲菊基因 gaga1已整合到这两株大豆的基因组中。形态分析表明 :与未转化N2 899相比 ,转基因大豆株型矮小 ,始花期提前 ,盛花期花数量较少 ,结荚不多。显微分析发现 ,与对照相比转基因大豆花器官结构没有明显改变。 展开更多
关键词 发育调节基因 遗传转化 花粉管通道 大豆
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一种利用花粉管结合农杆菌介导方法将iaaM基因导入玉米自交系的研究 被引量:3
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作者 翟亦倩 罗昌 +3 位作者 程曦 张秀海 黄丛林 吴忠义 《安徽农业科学》 CAS 2013年第8期3336-3338,共3页
[目的]利用花粉管结合农杆菌介导方法将iaaM基因导入玉米自交系。[方法]利用电击转化法将iaaM基因的表达载体转入农杆菌LBA4404菌株中,通过花粉管通道法将验证正确的菌株直接转化京24玉米自交系,最后通过除草剂筛选及PCR检测得到阳性植... [目的]利用花粉管结合农杆菌介导方法将iaaM基因导入玉米自交系。[方法]利用电击转化法将iaaM基因的表达载体转入农杆菌LBA4404菌株中,通过花粉管通道法将验证正确的菌株直接转化京24玉米自交系,最后通过除草剂筛选及PCR检测得到阳性植株。[结果]试验共得到12株抗性植株,其中10株为阳性植株。[结论]该研究成功建立了一种无需组织培养体系,直接利用花粉管通道进行农杆菌介导的玉米转化方法。 展开更多
关键词 农杆菌转化 花粉管通道法 除草剂抗性 转基因玉米
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hrpZ_(Psg12)基因植物表达载体的构建及花粉管通道法转化玉米的初步研究 被引量:2
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作者 吴庠玉 卢宝慧 +3 位作者 郑玲 彭振英 马贵龙 高洁 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期47-51,共5页
利用hrpZPsg12转化玉米,以期得到对玉米病害具有广谱抗性的新种质材料,为抗病育种提供新的种质资源。以植物表达载体pCAMBIA3301为基础载体,采用PCR法从克隆载体pGM-hrpZPsg12克隆来自丁香假单胞菌大豆致病变种(P.syringae pv.glycinea)... 利用hrpZPsg12转化玉米,以期得到对玉米病害具有广谱抗性的新种质材料,为抗病育种提供新的种质资源。以植物表达载体pCAMBIA3301为基础载体,采用PCR法从克隆载体pGM-hrpZPsg12克隆来自丁香假单胞菌大豆致病变种(P.syringae pv.glycinea)的hrp ZPsg12基因,两端分别引入XhoⅠ酶切位点,构建了1个具有卡那霉素和除草剂草丁膦抗性标记的植物表达载体pCAMBIA3301-hrpZPsg12,并通过热激法转入到大肠杆菌DH5α中。采用花粉管通道法将构建好的植物表达载体的重组质粒导入玉米优良自交系"综31"中。结果表明:对得到的575株转化植株经PCR检测有45株呈阳性,阳性转化率为7.83%。 展开更多
关键词 玉米 hrpZPsg12基因 载体构建 花粉管通道法转化
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花粉管通道和农杆菌介导植酸酶基因phyC对桑树的遗传转化 被引量:2
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作者 李镇刚 赵爱春 +4 位作者 黄平 刘淑娟 李军 鲁成 余茂德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期797-803,共7页
植酸酶可以促进单胃动物利用饲料中的植酸磷。桑叶中的含磷量较高,培育转植酸酶基因的桑树品种有利于桑叶饲料的开发利用。构建含中性植酸酶基因phyC的植物表达载体pCAMBIA-2300-phyC,利用花粉管通道结合农杆菌介导的方法将phyC基因导... 植酸酶可以促进单胃动物利用饲料中的植酸磷。桑叶中的含磷量较高,培育转植酸酶基因的桑树品种有利于桑叶饲料的开发利用。构建含中性植酸酶基因phyC的植物表达载体pCAMBIA-2300-phyC,利用花粉管通道结合农杆菌介导的方法将phyC基因导入红果1号×育2号杂交桑种子,1 301粒杂交桑种子经卡那霉素抗性筛选和大田播种共获得154株桑苗,其中11株经PCR鉴定为阳性的phyC基因转化桑苗。该转基因方法具有操作简便、转化范围较广的特点,获得的转phyC基因桑树植株可作为饲料桑品种选育的素材。 展开更多
关键词 桑树 植酸酶 phyC基因 遗传转化 花粉管通道 农杆菌
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芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化 被引量:2
12
作者 李雪 安胜军 +3 位作者 邵铁梅 柴锡庆 刘培 焦展 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1013-1017,共5页
为建立芝麻油体表达体系这一新型植物生物反应器,采用花粉管通道法,将含有胰岛素基因的双元表达载体PBI121质粒转入冀黑芝1号芝麻。对转化株后代进行卡那霉素筛选、PCR扩增及PCR-Southern杂交检测。结果显示:胰岛素基因已整合到受体芝... 为建立芝麻油体表达体系这一新型植物生物反应器,采用花粉管通道法,将含有胰岛素基因的双元表达载体PBI121质粒转入冀黑芝1号芝麻。对转化株后代进行卡那霉素筛选、PCR扩增及PCR-Southern杂交检测。结果显示:胰岛素基因已整合到受体芝麻的基因组DNA中,并获得了T_5转化株,胰岛素基因可以遗传到第5代转化株。说明芝麻花粉管介导胰岛素基因的遗传转化油体表达体系可行。 展开更多
关键词 芝麻 胰岛素 遗传转化 花粉管通道
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采用花粉管通道法遗传转化月季石榴的研究 被引量:1
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作者 唐丽颖 陈利娜 +3 位作者 敬丹 骆翔 李好先 曹尚银 《江西农业学报》 CAS 2021年第3期17-24,共8页
以月季石榴为试验材料,结合花粉管通道法和农杆菌介导法进行浸染转化,探究了不同浸染介质及不同授粉方式对坐果率、出芽率、阳性率的影响。对授粉后花粉管的萌发进行观察,发现在授粉后24 h进行菌液浸染可能使菌液深入到花粉管,从而提高... 以月季石榴为试验材料,结合花粉管通道法和农杆菌介导法进行浸染转化,探究了不同浸染介质及不同授粉方式对坐果率、出芽率、阳性率的影响。对授粉后花粉管的萌发进行观察,发现在授粉后24 h进行菌液浸染可能使菌液深入到花粉管,从而提高转化效率。对转化后的1819棵实生苗进行GUS染色和初步筛选,获得了82棵待检测植株;使用PCR扩增技术对转基因阳性植株进行鉴定,得到了14棵转PgLCBF1基因的月季石榴植株。对不同处理组合所获得的月季石榴的坐果率、出芽率、阳性率的研究结果表明:当浸染介质为5%蔗糖、授粉方式为授粉后24 h浸染时,月季石榴的遗传转化效果较好。 展开更多
关键词 月季石榴 遗传转化 花粉管通道法 浸染介质 授粉方式 阳性率
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海陆棉遗传重组技术和应用研究进展 被引量:1
14
作者 耿立格 孙娟 +1 位作者 郄彦敏 王新栋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2022年第S01期59-65,共7页
海岛棉纤维品质优良,并具有抗逆性强、抗黄萎病等优点。将海岛棉的优异基因用于陆地棉的遗传改良,实现海陆棉遗传重组,一直是棉花种质资源创新和利用研究的重要课题之一。本研究对海陆棉基因组水平上的常规遗传重组杂交技术、外源海岛棉... 海岛棉纤维品质优良,并具有抗逆性强、抗黄萎病等优点。将海岛棉的优异基因用于陆地棉的遗传改良,实现海陆棉遗传重组,一直是棉花种质资源创新和利用研究的重要课题之一。本研究对海陆棉基因组水平上的常规遗传重组杂交技术、外源海岛棉DNA导入的基因枪法和花粉管通道法、利用染色体水平上的置换系技术的方法、特点和应用进行了综述。回顾了在应对种间遗传障碍时,遗传学家及育种家进行的多种遗传重组技术策略上的尝试。通过育种家们建立的携带有海岛棉染色体基因的陆地棉背景的染色体置换系,可望筛选出能被育种家直接利用的、稳定的、综合性状好的、或具有优异特性的种质材料,以期对今后海陆棉优异种质创制和利用研究起到促进作用,进而加快棉花育种进程。 展开更多
关键词 海陆棉遗传重组 常规杂交技术 基因枪法 花粉管通道法 染色体置换系
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植物遗传转化的替代方法及研究进展 被引量:9
15
作者 李君 李岩 刘德虎 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期31-36,45,共7页
农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率... 农杆菌介导法和基因枪法是两种目前应用最广泛和最可靠的植物遗传转化方法。由于其存在一些不足,因此,需要探索可替代它们的其他植物遗传转化方法以弥补农杆菌介导法和基因枪法的缺点,使其更加适用于特定目标植物的转化事件中,转化效率也随之提高。对这些可替代的遗传转化方法进行概述,并简要介绍各种方法的优缺点及其在农作物转化中的应用情况。 展开更多
关键词 植物遗传转化方法 花粉管通道法 茎尖转化法 叶绿体转化法 碳化硅纤维介导法 超声波辅助的农杆菌转化法 真空渗入法 藻酸钙微珠介导法
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Genetic expression in progeny of transgenic plants obtained by using pollen-tube pathway (or delivery) method and approach to the transformation mechanism 被引量:3
16
作者 Junzhi Zeng Youqiang Wu +3 位作者 Dongjiang Wang Jian Zhang Zhengrong Ma Zhiyong Zhou 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1998年第10期798-803,共6页
The origin and the recent progress of pollen_tube pathway method (PTPM) is described. The results of transforming wheat during 1990 to 1994 are reported briefly. They are: (ⅰ) Transformation frequencies were 3%-6%, e... The origin and the recent progress of pollen_tube pathway method (PTPM) is described. The results of transforming wheat during 1990 to 1994 are reported briefly. They are: (ⅰ) Transformation frequencies were 3%-6%, even reached 13.5%; (ⅱ) the genetic expression of four continuous generations obtained from single individuals of transgenic plants by self_fertilization was investigated. Plants with higher expression of foreign gene were found in every generation (from T1 to T4), but a phenomenon of gene silence, in which the genotype contained foreign gene but did not express, was also observed. In addition, from the angle of fertilization biology the transformation mechanism of PTPM (or PTDM) was analyzed and discussed. It was considered that the essential principle of this method was just like that of protoplast method. 展开更多
关键词 pollen_tube pathway (or delivery) METHOD GENETIC EXPRESSION of TRANSGENIC PROGENY transformation mechanism.
全文增补中
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