中国人组织因子途径抑制物-2基因的真核表达载体的构建 被引量：5

1

作者 毕晓 徐勇 涂植光 《国际检验医学杂志》 CAS 2007年第2期106-107,共2页

目的 构建组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）-pcDNA3．1的表达载体，为进一步研究其表达和蛋白功能奠定基础。方法 设计带有BamHⅠ和XhoⅠ的上、下游引物，从TFPI-2-pcDNA2．1克隆载体中扩增TFPI-2基因片段，PCR产物电泳、胶回收。将回收... 目的 构建组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）-pcDNA3．1的表达载体，为进一步研究其表达和蛋白功能奠定基础。方法 设计带有BamHⅠ和XhoⅠ的上、下游引物，从TFPI-2-pcDNA2．1克隆载体中扩增TFPI-2基因片段，PCR产物电泳、胶回收。将回收产物与BamHⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3．1表达载体连接，用酶切鉴定其长度和方向并正、反测序鉴定。结果 TFPL2成功插入pcDNA3．1表达载体，酶切鉴定其长度和方向均正确，测序结果也证实其正确的载人。结论 通过上述方法能成功构建TFPI-2-pcDNA3．1表达载体，为进-步研究其功能奠定基础。 展开更多

关键词 组织因子抑制物2 基因表达 遗传载体

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活化血小板对内皮细胞TFPI表达影响及机制研究 被引量：4

2

作者 王建辉 郑兰香 +1 位作者 唐雪元 陈勇 《中国医学工程》 2007年第3期242-244,共3页

目的探讨活化血小板对内皮细胞表达TFPI影响及机制研究。方法建立活化血小板与人脐静脉内皮细胞的共孵育体系(细胞比例10∶1),应用RT-PCR检测内皮细胞组织因子抑制物(TFPI)表达的变化。结果活化血小板与内皮细胞共孵育8h后,TFPImRNA的... 目的探讨活化血小板对内皮细胞表达TFPI影响及机制研究。方法建立活化血小板与人脐静脉内皮细胞的共孵育体系(细胞比例10∶1),应用RT-PCR检测内皮细胞组织因子抑制物(TFPI)表达的变化。结果活化血小板与内皮细胞共孵育8h后,TFPImRNA的表达无明显变化。结论活化血小板通过CD40与CD154信号传递途径并不能增强内皮细胞TFPI的表达。 展开更多

关键词 活化血小板 TFPI 表达 内皮细胞

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TFPI-2基因表达变化与声门上喉癌侵袭转移及预后的相关性研究 被引量：4

3

作者 孙亚男 刘鸣 +1 位作者 金德均 肖玉丽 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期40-43,共4页

目的：探讨TFPI-2基因的表达与声门上喉癌侵袭转移及预后的关系。方法：运用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学方法检测TFPI-2在声门上喉癌组织中的表达，分析其与声门上喉癌临床病理特征的关系。结果：TFPI-2在声门上喉癌... 目的：探讨TFPI-2基因的表达与声门上喉癌侵袭转移及预后的关系。方法：运用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组织化学方法检测TFPI-2在声门上喉癌组织中的表达，分析其与声门上喉癌临床病理特征的关系。结果：TFPI-2在声门上喉癌组织中mRNA和蛋白表达的阳性率明显增加（P〈0．05），TFPI-2 mRNA和蛋白表达随声门上喉癌的浸润深度的增加而降低（P〈0．05），在淋巴结转移组低于非淋巴结转移组（P〈0．05），在临床Ⅲ-Ⅳ期的表达低于临床Ⅰ-Ⅱ期（P〈0．05）。TFPI-2蛋白染色强度随声门上喉癌的侵袭程度增加及淋巴结转移而降低（P〈0．05）。TFPI-2蛋白表达阴性组声门上喉癌患者较阳性组者预后差（P〈0．05）。结论：TFPI-2表达下调可能与声门上喉癌的侵袭转移密切相关，可作为评估声门上喉癌淋巴结转移及预后的指标。 展开更多

关键词 喉肿瘤 组织途径抑制因子2 基因表达 肿瘤转移 预后

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重组TFPI缺失突变体TFPI_(1-161)在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定 被引量：1

4

作者 白浩 马端 +4 位作者 宋后燕 莫炜 顾银良 孔德升 郭泓珅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期937-942,共6页

人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模... 人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1 - 1 6 1 仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM 3Zf( ) TFPI为模板 ,用PCR方法获得TFPI1 - 1 6 1 基因 ,构建表达质粒pPIC9K TFPI1 - 1 6 1 并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件 ,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1 - 1 6 1 ,经纯化后最终产量高于酿酒酵母 2 0倍以上。由于糖基化程度不同 ,TFPI1 - 1 6 1 表达为TFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和TFPI1 - 1 6 1 (2 7kD)两种分子形式 ,其等电点分别为 4 8和 4 9。根据等电点差异 ,二者可通过阴离子交换层析得到分离 ,其活性无显著性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后 ,从 4L发酵培养液中可分别获得 1 4gTFPI1 - 1 6 1 (2 4kD)和 1 8gTFPI1 - 1 6 1 (2 7kD) ,其比活性分别达 12 880u mg和 12 4 0 0u mg ,回收率达 5 5 %。经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测 ,重组TFPI1 - 1 6 1 具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用。为获得大量TFPI1 - 1 6 1 提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式 。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制物 TFPI1-161 表达 纯化 PICHIA PASTORIS

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TF、TFPI在胎盘早剥产妇中的表达水平及临床意义

5

作者 康健明 钟颖芙 《包头医学院学报》 CAS 2018年第10期80-81,共2页

目的:探讨组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)在胎盘早剥产妇中的表达水平及临床意义。方法:选择72例胎盘早剥产妇作为观察组,选择73例正常足月产妇作为对照组,均检测TF、TFPI水平... 目的:探讨组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)在胎盘早剥产妇中的表达水平及临床意义。方法:选择72例胎盘早剥产妇作为观察组,选择73例正常足月产妇作为对照组,均检测TF、TFPI水平,比较两组产妇的TF、TFPI表达水平。结果:观察组母血及脐血中TF水平[(89. 23±22. 18) ng/mg、(97. 23±28. 56) ng/mg]均高于对照组[(67. 45±10. 25) ng/mg、(63. 12±7. 13) ng/mg](P <0. 05);观察组母血及脐血中TFPI水平[(18. 25±7. 26) ng/mg、(19. 23±7. 58) ng/mg]均低于对照组[(26. 89±7. 16) ng/mg、(24. 23±7. 01) ng/mg](P <0. 05)。结论:TF、TFPI是体内重要的凝血及抗凝血因子,母血及脐血中TF、TFPI水平可作为胎盘早剥的参考指标。 展开更多

关键词 胎盘早剥 组织因子 组织因子途径抑制物 表达水平

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组织因子途径抑制物-2在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达及甲基化修饰

6

作者 严敏婵 朱敏 +3 位作者 李飞 冯明宣 张莉莉 包卫光 《中国预防医学杂志》 CAS 2016年第1期46-49,共4页

目的探讨组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2）基因在卵巢浆液性囊腺癌与卵巢浆液性囊腺瘤组织中表达差异情况,以及与其启动子区DNA甲基化的关系。方法应用免疫组化技术分析46例卵巢浆液性囊腺癌组织和66例... 目的探讨组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor,TFPI-2）基因在卵巢浆液性囊腺癌与卵巢浆液性囊腺瘤组织中表达差异情况,以及与其启动子区DNA甲基化的关系。方法应用免疫组化技术分析46例卵巢浆液性囊腺癌组织和66例卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2基因蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR法（MS-PCR）检测TFPI-2基因启动子区DNA甲基化水平。结果卵巢浆液性囊腺瘤组织中TFPI-2蛋白表达阳性率为62.12%（41/66）,高于卵巢浆液性囊腺癌组织39.13%（18/46）,两组间差异有统计学意义（χ~2=5.748,P=0.017）;卵巢浆液性囊腺瘤组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中TFPI-2基因甲基化阳性率分别为72.73%、78.26%,两组间差异无统计学意义（χ~2=0.443,P=0.506）,而低分化卵巢浆液性囊腺癌组织TFPI-2基因甲基化比率50.00%显著低于中、高分化组88.24%,两组差异有统计学意义（χ~2=5.540,P=0.019）。结论 TFPI-2蛋白表达与卵巢肿瘤的病理进展呈负相关,其启动子区DNA甲基化水平与卵巢癌细胞分化程度有关。 展开更多

关键词 卵巢浆液性囊性腺癌 组织因子途径抑制物-2 蛋白表达 甲基化

原文传递

组织因子途径抑制因子/绿色荧光蛋白双顺反子真核表达载体构建及其在NIH 3T3细胞中表达

7

作者 宋丽萍 楼莎 +5 位作者 朱敦皖 刘兰霞 张海玲 董霞 董庭婷 冷希岗 《生物医学工程与临床》 CAS 2011年第2期178-182,88,共5页

目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚... 目的构建含人组织因子途径抑制因子(TFPI)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子真核表达载体,并验证其在NIH 3T3细胞中的表达,为血管再狭窄的防治提供一个具有示踪和治疗双重作用的有效载体。方法以含有全长cDNA的pIRES-TFPI为模板,多聚酶链反应(PCR)扩增TFPI全长cDNA,经酶切后插入到pIRES2-AcGFP1-Nuc载体中,构建成双顺反子真核表达载体,重组质粒经酶切图谱分析、PCR扩增及测序鉴定后命名为pIRES2-AcGFP1-Nuc-TFPI。将其转染NIH3T3细胞,采用荧光显微镜观察GFP在细胞中的表达,以RT-PCR检测TFPI在细胞内的表达。结果经酶切图谱分析、PCR扩增及DNA测序证实双顺反子真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内GFP的表达;RT-PCR证实经TFPI基因转染的细胞内TFPI mRNA表达增高。结论成功构建了包括TFPI和GFP的真核双表达载体,并使其在NIH3T3细胞中顺利表达。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制因子 绿色荧光蛋白 双顺反子表达载体 血管再狭窄

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组织因子途径抑制物-2基因原核表达及其重组蛋白生物活性研究

8

作者 宁勇 黄瑞滨 宋善俊 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1146-1150,共5页

目的构建人组织因子途径抑制物2(TFPI2)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达;探索重组TFPI2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞(A2780)迁徙浸润能力的影响。方法1.以TFPI2cDNA为模板,PCR扩增得到645bpDNA片段,克隆入表达载体pET28a... 目的构建人组织因子途径抑制物2(TFPI2)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中有效表达;探索重组TFPI2抑制纤溶酶活性及其对人卵巢癌细胞(A2780)迁徙浸润能力的影响。方法1.以TFPI2cDNA为模板,PCR扩增得到645bpDNA片段,克隆入表达载体pET28a,并转化大肠杆菌BL21株表达。2.限制性内切酶和菌落PCR法鉴定TFPI2基因DNA片段,Westernblot法鉴定TFPI2融合蛋白。3.建立TFPI2抑制纤溶酶的动力学方法并测定重组TFPI2对纤溶酶的抑制作用。4.在体外用Boyden小室,以不同浓度TFPI2作用A2780细胞进行迁徙和浸润实验。结果1.成功构建重组TFPI2的原核表达载体pET28a并在BL21株中表达、纯化,获得大量TFPI2蛋白。2.Westernblot证实表达的融合蛋白为TFPI2。3.重组TFPI2对液相和固相中的纤溶酶具有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。4.在迁徙实验中,将A2780TFPI2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较,经t检验,无统计学意义(P>0.05);在浸润实验中,将A2780TFPI2不同浓度组与A2780对照组细胞穿过人工膜的细胞数进行比较及TFPI2不同浓度组间的细胞数进行比较,经t检验,具有显著差异(P<0.01)。结论1.人TFPI2基因的表达,为TFPI2病理生理的作用和临床研究提供了丰富材料。2.重组TFPI2抑制纤溶酶活性的研究,为探讨TFPI2对人卵巢癌细胞浸润转移能力的影响等提供了实验依据。3.重组TFPI2对人卵巢癌细胞体外自身运动能力无影响,但可显著抑制人卵巢癌细胞的体外浸润能力,为将来卵巢癌用蛋白酶抑制剂治疗提供一可能的靶向依据。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制物-2 卵巢肿瘤 基因表达

原文传递

人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中高拷贝表达

9

作者 程旭 徐伟杰 +5 位作者 宋丽萍 刘兰霞 董霞 张海玲 朱敦皖 冷希岗 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 2011年第3期135-139,共5页

目的构建高拷贝表达重组人组织因子途径抑制因子的毕赤酵母并对蛋白表达条件进行初步优化，为相关研究奠定基础。方法将PCR扩增得到的TFPIcDNA片段与表达质粒pPIC9K连接构建重组质粒rhTFPI—pPIC9K，采用PCR方法及DNA测序对其进行鉴定... 目的构建高拷贝表达重组人组织因子途径抑制因子的毕赤酵母并对蛋白表达条件进行初步优化，为相关研究奠定基础。方法将PCR扩增得到的TFPIcDNA片段与表达质粒pPIC9K连接构建重组质粒rhTFPI—pPIC9K，采用PCR方法及DNA测序对其进行鉴定。将重组质粒转化酵母细胞GSI15，利用G418抗性实验筛选含有高拷贝TFPIcDNA的毕赤酵母菌株，采用WesternBlot和TFPI检测试剂盒分析重组蛋白表达。通过改变诱导温度、诱导时间及甲醇浓度对重组蛋白表达条件进行初步优化。结果PCR扩增rhTFPI-pPIC9K得到预期的扩增条带（1．2kb），经酶切图谱分析及测序确认成功构建表达质粒rhTFPI—pPIC9K。实时定量PCR结果显示，通过G418筛选获得了含高拷贝基因的酵母细胞，WesternBlot结果显示含基因拷贝数与蛋白表达量呈正相关。通过对表达条件的优化，明显提高了TFPI重组蛋白的表达量，重组TFPI表达量高达（9．95±0．78）mg／L，活性达到（3．91±1．37）U／mL。结论成功构建了高效表达TFPI重组蛋白的毕赤酵母细胞株，为TFPI功能研究及在相关疾病防治中的应用提供了坚实的实验基础。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制因子 毕赤酵母 表达

原文传递

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用研究

10

作者 曹哲 王贵军 +1 位作者 唐冠杰 郑晓库 《中国药房》 CAS CSCD 2013年第13期1176-1179,共4页

目的:研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用。方法:取SGC7901对数生长期细胞,分别加入0(未给药)、0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L5-Aza-CdR,每个浓度设3个复孔,分别于给药后24、48、60、72h,采用MTT法检测细... 目的:研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用。方法:取SGC7901对数生长期细胞,分别加入0(未给药)、0.1、0.5、1.0、5.0μmol/L5-Aza-CdR,每个浓度设3个复孔,分别于给药后24、48、60、72h,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用蛋白质印迹法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法分别检测细胞内组织因子途径抑制物2(TFPI-2)蛋白和mRNA的表达情况。结果:与未给药比较,除作用24h外,各浓度5-Aza-CdR作用48、60、72h后SGC7901细胞的增殖活性均明显降低,细胞内TFPI-2蛋白和mRNA表达均明显增加(P<0.05),且与浓度和时间呈正相关。结论:5-Aza-CdR可上调SGC7901细胞中TFPI-2基因的表达,对SGC7901细胞增殖具有抑制作用。 展开更多

关键词 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 胃癌SGC7901细胞 组织因子途径抑制物2 基因表达 抑制作用

原文传递

TFPI-2基因的表达调控及其在疾病中的作用

11

作者 张勤 金红 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第11期1209-1211,共3页

组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)是一种Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂,在动脉粥样硬化、肿瘤浸润转移和血管新生等病理生理过程中发挥重要作用。细胞外信号可通过调节启动子或信号传导通路等多种因素调节TFPI-2基因的表达,其调控机制成为近... 组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)是一种Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂,在动脉粥样硬化、肿瘤浸润转移和血管新生等病理生理过程中发挥重要作用。细胞外信号可通过调节启动子或信号传导通路等多种因素调节TFPI-2基因的表达,其调控机制成为近几年的研究热点之一。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制物-2 组织因子途径抑制物-2基因 基因表达调控 动脉粥样硬化 肿瘤

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pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体的构建和鉴定 被引量：1

12

作者 王健 王晓东 +1 位作者 唐冠杰 赵佳 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2014年第3期300-304,共5页

目的构建pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体,为研究TFPI-2基因的功能做准备。方法从胎盘组织中提取总RNA,逆转录合成cDNA,再以PCR法进行扩增。将扩增的TFPI-2基因片段克隆到pEGFP-N3真核表达载体上,经XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后,行1%琼脂糖凝胶电... 目的构建pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体,为研究TFPI-2基因的功能做准备。方法从胎盘组织中提取总RNA,逆转录合成cDNA,再以PCR法进行扩增。将扩增的TFPI-2基因片段克隆到pEGFP-N3真核表达载体上,经XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后,行1%琼脂糖凝胶电泳鉴定,同时测定其DNA序列。将pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体以脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法转染Top10感受态细胞(转染组),同时设空白对照组(仅转染pEGFP-N3质粒)和未转染组(不予转染)。采用Western blot法检测3组细胞中TFPI-2蛋白的表达情况。结果总RNA经分光光度法验证,其纯度符合PCR法扩增的要求。构建的pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体经XhoⅠ和KpnⅠ双酶切后,行1%琼脂糖凝胶电泳,结果显示,分别在708 bp处和4 700 bp处有特异扩增条带,大小与理论值一致。DNA序列测定结果证实,pEFFP-N3-TFPI-2真核表达载体的序列完全正确。Western blot法结果显示,TFPI-2蛋白的表达量转染组为0.657 3±0.032 5,空白对照组为0.301 7±0.028 7,未转染组为0.314 3±0.026 6,转染组TFPI-2蛋白的表达量高于空白对照组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论本实验成功构建了pEGFP-N3-TFPI-2真核表达载体,为TFPI-2基因功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 组织因子途径抑制物-2 pEGFP-N3真核载体 双酶切反应 序列分析 WESTERN BLOT法

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