期刊文献+
共找到136篇文章
< 1 2 7 >
每页显示 20 50 100
鼻咽癌细胞株SUNE-1异质性研究 被引量:21
1
作者 宋立兵 汪慧民 +2 位作者 曾木圣 李满枝 简少文 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第5期324-327,共4页
目的:对鼻咽癌细胞株SUNE1异质性进行研究;方法:应用软琼脂集落形成实验、动物实验及RNA指纹图谱差异显示对SUNE14亚株58F,94E,610B,139B进行体外转化能力、成瘤性、转移能力及基因表达... 目的:对鼻咽癌细胞株SUNE1异质性进行研究;方法:应用软琼脂集落形成实验、动物实验及RNA指纹图谱差异显示对SUNE14亚株58F,94E,610B,139B进行体外转化能力、成瘤性、转移能力及基因表达差异进行研究。结果:①4亚株体外转化能力、成瘤性和转移能力存在差异;②筛选出高成瘤、高转移潜能的亚株58F、94E,只成瘤不转移的610B,不成瘤的139B;③4亚株的基因表达存在异质性,并筛选出3条迁泳率不一致的差异片段。结论:SUNE14亚株为起源于同一母系的不同的单克隆细胞亚株;为筛选和克隆NPC发生发展相关基因的研究提供实验材料,亦为NPC的基因治疗、免疫治疗及化学治疗的研究提供实验依据。 展开更多
关键词 肿瘤异质性 细胞亚株 鼻咽肿瘤 SUNE-1
下载PDF
杜仲含药血清对成骨细胞的影响 被引量:16
2
作者 曹旭 向文英 +3 位作者 陆苑 陈鹏程 孙佳 王爱民 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期3016-3019,共4页
目的:研究不同浓度杜仲含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞增殖、分化的影响。方法:大鼠灌胃给予杜仲后制备含药血清,取MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞,分别加入空白血清(空白对照组)和含2%、5%、10%的杜仲含药血清(给... 目的:研究不同浓度杜仲含药血清对体外培养小鼠MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞增殖、分化的影响。方法:大鼠灌胃给予杜仲后制备含药血清,取MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞,分别加入空白血清(空白对照组)和含2%、5%、10%的杜仲含药血清(给药组)的培养基培养,用MTT法检测MC3T3-E1 Subclone 14成骨细胞增殖情况,ELISA法检测细胞中的碱性磷酸酶(ALP)、骨钙蛋白(OTC)、破骨细胞抑制因子与核因子κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)系统活性。结果:与空白对照组同浓度比较,杜仲含药血清各浓度明显促进细胞增殖并上调ALP、OTC、OPG/RANKL的比值(P<0.05,P<0.01)。结论:杜仲能促进体外培养的MC3T3-E1Subclone 14成骨细胞增殖与分化。 展开更多
关键词 杜仲 含药血清 MC3T3-E1 subclone 14细胞 增殖 分化 碱性磷酸酶 骨钙蛋白 OPG/RANKL
原文传递
提高PCR产物及其克隆效率的几点方法与经验 被引量:6
3
作者 王志斌 郭三堆 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第4期30-32,共3页
本文介绍了提高PCR产物及其克隆效率的方法与经验:如,引物的设计、目的片段的回收、连接体系、利用引物上所设计的酶切位点克隆、通过平末端克隆,以及加快实验进程的技巧、出现问题如何设计查找原因等。
关键词 PCR产物 克隆效率 平末端连接 亚克隆
下载PDF
一个含有玉米器官专一性启动子的表达质粒的构建 被引量:3
4
作者 杨之帆 罗忠训 +1 位作者 夏胜 周炜 《湖北大学学报(自然科学版)》 CAS 1998年第3期284-287,共4页
报道了玉米醇溶蛋白基因启动子的亚克隆以及利用该启动子和GUS基因来构建表达质粒pHZP—GUS.经过部分降解和亚克隆,得到玉米醇溶蛋白基因启动子,将该启动子与含GUS基因编码序列和NOS终止子的BamHⅠ片段连接,构... 报道了玉米醇溶蛋白基因启动子的亚克隆以及利用该启动子和GUS基因来构建表达质粒pHZP—GUS.经过部分降解和亚克隆,得到玉米醇溶蛋白基因启动子,将该启动子与含GUS基因编码序列和NOS终止子的BamHⅠ片段连接,构成融合基因.将该融合基因克隆到含有HPT筛选标记基因的质粒pGL2中,得到表达质粒pHZP—GUS. 展开更多
关键词 表达质粒 转基因植物 玉米 启动子 器官专一性
下载PDF
PCR-SSCP检测非霍奇金淋巴瘤患者骨髓克隆性T细胞受体基因重排及其临床意义 被引量:7
5
作者 徐兵 田红 周淑芸 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第4期397-400,共4页
背景与目的:进一步了解非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)患者骨髓标本克隆T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)基因重排情况及临床意义。方法:应用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)联合单链构象多态性(single-strandconfor... 背景与目的:进一步了解非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinslymphoma,NHL)患者骨髓标本克隆T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)基因重排情况及临床意义。方法:应用聚合酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)联合单链构象多态性(single-strandconformationpolymorphism,SSCP)分析43例NHL患者骨髓标本TCRVγI-Jγ基因重排情况。结果:43例NHL患者有26例(60.5%)存在克隆性TCRVγI-Jγ基因重排。16例骨髓形态学检查未发现淋巴瘤细胞浸润者中有3例(18.8%)发现克隆性TCRVγI-Jγ基因重排,此3例患者分别于4~9个月后行骨髓形态检查时发现淋巴瘤细胞浸润;27例骨髓形态学检查有淋巴瘤细胞浸润者有23例(85.2%)存在克隆性TCRVγI-Jγ基因重排阳性。26例PCR扩增阳性病例经SSCP分析发现7例(26.9%)存在寡/亚克隆重排。7例存在寡/亚克隆重排患者经3~11个月有5例(71.4%)发展为白血病,存在寡/亚克隆重排NHL患者1年内转化为白血病的发生率显著高于无寡/亚克隆重排患者(10.5%)(P<0.005)。结论:应用PCR检测NHL患者骨髓标本克隆性TCRVγI-Jγ基因重排可较骨髓形态学检查更早发现NHL患者骨髓浸润微小病灶。具有寡/亚克隆NHL患者更易发展为白血病,还可发展为急性非淋巴细胞白血病。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 T细胞受体基因重排 寡克隆 亚克隆 聚合酶链反应 单链构象多态性
下载PDF
苜蓿中华根瘤菌与耐盐有关的DNA片段的克隆 被引量:5
6
作者 陈雪松 张海瑜 +3 位作者 高为民 朱坤 阚凤玲 杨苏声 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期489-494,共6页
以耐盐的苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶EcoRⅠ的部分酶解,利用电洗脱方法回收15 ~25kb 大小的DNA 片段。以碱法制备载体质粒pLA... 以耐盐的苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042B为材料,制备其总DNA,经过限制性内切酶EcoRⅠ的部分酶解,利用电洗脱方法回收15 ~25kb 大小的DNA 片段。以碱法制备载体质粒pLAFRⅠ,用EcoRⅠ将其切成线状,然后用T4DNA 连接酶将回收片段与线状载体连接,利用包装蛋白进行包装后,感染大肠杆菌( Escherichia coli)S171,构建了042B的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂处理出发菌株,在05mol/LNaCl 的条件下,从2000 个菌落中筛选得到12 株042B的盐敏感突变株,以其中稳定的盐敏突变株GZ17 为受体菌,利用两亲本杂交将含有042B的DNA 片段的pLAFRⅠ重组质粒转移到GZ17 中,在含有四环素和05mol/LNaCl 的基本培养基上筛选出能够耐盐的阳性克隆,获得了与耐盐有关的7kb 长的DNA片段。对该片段进行亚克隆,最终获得了4kb 展开更多
关键词 苜蓿中华根瘤菌 耐盐 基因文库 亚克隆
下载PDF
重组产毒多杀性巴氏杆菌毒素PMT的N-端和C-端蛋白的生物学活性及免疫原性 被引量:7
7
作者 汤细彪 吴斌 +4 位作者 赵战勤 邓永 何华 何启盖 陈焕春 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期213-219,共7页
将5个toxA基因片段N1518、C2345、N3172、N3388和C2115分别克隆到合适的原核表达载体pET-28a(b,c)系统,其中pET28a-N1518和pET28b-C2115在大肠杆菌成功表达,获得大小分别为57kDa和78kDa的融合蛋白rPMT-N和rPMT-C,Western blot检测证实... 将5个toxA基因片段N1518、C2345、N3172、N3388和C2115分别克隆到合适的原核表达载体pET-28a(b,c)系统,其中pET28a-N1518和pET28b-C2115在大肠杆菌成功表达,获得大小分别为57kDa和78kDa的融合蛋白rPMT-N和rPMT-C,Western blot检测证实两种表达产物均具有反应原性。分别以200μg rPMT-N和rPMT-C对小白鼠进行体内生物学活性试验,结果两种表达蛋白均不能致死小白鼠;体外细胞毒性试验证实896ng/mL的rPMT-N能使Vero细胞发生病变,而rPMT-C对Vero细胞无明显毒性作用。将rPMT-N和rPMT-C制成亚单位疫苗,同时设天然PMT及无菌PBS对照组,间隔2周分2次皮下免疫小白鼠。二免后2周用8.2×10~5 CFU的HN-13株T^+Pm进行腹腔攻毒,结果rPMT-N组保护率为90.0%(9/10),rPMT-C组保护率为50.0%(5/10),天然PMT组保护率为80.0%(8/10)。综上试验表明,rPMT-N具有良好的生物学活性和免疫原性,可作为PAR疫苗添加成分,显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 PMT 亚克隆 生物学活性 免疫原性
下载PDF
自我调控延缓叶片衰老基因的亚克隆 被引量:4
8
作者 曹孟良 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 2000年第1期73-78,共6页
利用亚克隆技术和反筛选策略 ,将含有延缓叶片衰老基因的双元载体上的卡那霉素抗性植物筛选标记更换为适合于水稻遗传转化的潮霉素抗性标记 。
关键词 载体 亚克隆 延缓衰老 叶片 衰老基因
下载PDF
MC3T3-E1Subclone14体外诱导成骨模型的建立及Ano5基因表达的研究 被引量:5
9
作者 金玲玲 胡颖 +1 位作者 郭庆东 朱圣韬 《北京口腔医学》 CAS 2015年第2期73-79,共7页
目的建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨模型,探讨Ano5基因表达与成骨细胞形成的关系,了解其对成骨分化的影响。方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞贴壁培养,加入条件培养基,分别培养至0d、3d、7d、14d、21d。倒置显微镜下观察细胞形态,... 目的建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨模型,探讨Ano5基因表达与成骨细胞形成的关系,了解其对成骨分化的影响。方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞贴壁培养,加入条件培养基,分别培养至0d、3d、7d、14d、21d。倒置显微镜下观察细胞形态,通过碱性磷酸酶活力测定和茜素红染色,鉴定成骨细胞。利用REAL TIME-PCR检测Ocn、Colα1、Opg/Rankl、Osterix和Runx2等成骨相关因子的基因表达水平,同时检测Ano5基因在成骨细胞形成过程中的表达趋势。结果体外诱导MC3T3-E1 Subclone 14倒置光学显微镜下观察细胞形态呈梭形。成骨细胞碱性磷酸酶活力逐渐增高。成骨诱导培养至14d和21d,茜素红染色可见细胞表面出现矿化结节。成骨相关因子基因表达均逐渐增高,至21d达到高峰。Ano5基因从诱导分化的第3d开始表达,随后表达量逐渐增高,至14d达到高峰,21d表达量下降。结论在MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导分化为成骨细胞过程中,Ano5基因表达量逐渐升高,至14d达到高峰,21d开始表达量具有下降趋势。 展开更多
关键词 MC3T3-E1 subclone 14 Ano5 成骨细胞 骨矿化
下载PDF
MC3T3-E1Subclone14体外诱导成骨细胞模型的建立 被引量:4
10
作者 郑磊 徐贵英 +3 位作者 徐岚 徐炜 姜智 吴士良 《中国血液流变学杂志》 CAS 2012年第1期16-18,27,F0002,共5页
目的 建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨细胞模型,为进一步了解成骨细胞形成机制打下实验基础.方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞培养至贴壁,加入条件培养基:L-抗坏血酸(50μg/mL)、β-甘油磷酸钠(10mmol/mL)、地塞米松(10-8mol... 目的 建立MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨细胞模型,为进一步了解成骨细胞形成机制打下实验基础.方法 MC3T3-E1 Subclone 14细胞培养至贴壁,加入条件培养基:L-抗坏血酸(50μg/mL)、β-甘油磷酸钠(10mmol/mL)、地塞米松(10-8mol/mL),培养至21d.倒置显微镜观察细胞形态;碱性磷酸酶(ALP)、Von Kossa染色鉴定成骨细胞和骨细胞;RT-PCR、Western-blot检测成骨细胞相关基因骨钙素、骨唾液酸蛋白、骨桥蛋白等相关生物学指标mRNA和蛋白表达水平,以鉴定成骨细胞体外形成.结果 1.体外诱导MC3T3-E1 Subclone 14至7d,倒置显微镜观察细胞成梭形;2.10d ALP染色结果显示:成骨细胞呈红色;3.14d Von Kossa染色结果显示:细胞表面有矿化结节形成;4.相关基因骨钙素,骨桥蛋白,骨唾液酸蛋白的mRNA和蛋白水平在14d均发生变化.结论 成功建立了MC3T3-E1 Subclone 14体外诱导成骨细胞形成模型. 展开更多
关键词 MC3T3-E1 subclone 14 成骨细胞 骨矿化
下载PDF
茶树培养细胞花色苷累积型与非累积型株系间的差异性研究 被引量:6
11
作者 成浩 李素芳 孙锦荷 《茶叶科学》 CAS CSCD 2000年第2期124-128,共5页
从细胞生长、色素和儿茶素等次生产物组成与含量、苯丙氨酸解氨酶活性以及产物合成动态分析等几方面 ,研究比较了积累色素与不积累色素的两类茶树培养细胞系之间的差异。发现积累色素的细胞系中 ,儿茶素与原花色素的形成能力也得到了大... 从细胞生长、色素和儿茶素等次生产物组成与含量、苯丙氨酸解氨酶活性以及产物合成动态分析等几方面 ,研究比较了积累色素与不积累色素的两类茶树培养细胞系之间的差异。发现积累色素的细胞系中 ,儿茶素与原花色素的形成能力也得到了大幅度提高 ,且与苯丙氨酸解氨酶活性无关。这一结果表明 ,茶树高产细胞系筛选中 ,可采用细胞色泽为指标 ,使筛选工作得以简化。 展开更多
关键词 茶树 细胞培养 细胞系 花色苷 儿茶素
下载PDF
猪圆环病毒2型Cap蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备
12
作者 孙荣航 容芳 +2 位作者 陈桂娥 刘郁夫 陈瑞爱 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第14期61-67,73,126,共9页
为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋... 为了制备猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV-2)Cap蛋白单克隆抗体,试验将Cap基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)上并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,将获得的重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)用IPTG进行诱导后表达重组蛋白,利用His标签对表达的重组蛋白进行纯化;将纯化后的重组蛋白于皮下免疫Balb/c小鼠,免疫结束后测定免疫小鼠血清效价,当小鼠血清抗体效价达到1∶100000时进行细胞融合;采用有限稀释法进行亚克隆,筛选能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性杂交瘤细胞株,鉴定杂交瘤细胞株抗体亚类,并选择1株抗体效价最高的细胞株再次注射到小鼠腹腔中(5×10^(5)个/只),取腹水采用亲和层析法对单克隆抗体进行纯化;采用间接ELISA方法测定单克隆抗体效价并检测其特异性,分别采用Western-blot和间接免疫荧光试验检测单克隆抗体的反应性。结果表明:PCR扩增得到大小为708 bp的Cap基因,经双酶切与测序验证后,成功构建重组表达质粒pET28a-Cap;重组表达菌pET28a-Cap/BL21(DE3)经诱导后表达的重组蛋白可与His标签抗体发生特异性反应,纯化后的重组蛋白在预期位置(31.7 ku)出现清晰的单一条带;共筛选出8株能够稳定分泌抗体且抗体效价高的阳性单克隆细胞株(1E5、2A9、3C6、4B3、5F7、6D11、7A2、8G1株),抗体亚类鉴定均为IgG1亚类。其中7A2株抗体效价最高,用于单克隆抗体的制备;间接ELISA方法证实7A2株单克隆抗体仅与PCV-2 Cap蛋白发生反应,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)不发生反应;Western-blot和间接免疫荧光试验均证实PCV-2 Cap蛋白可被7A2株单克隆抗体特异性识别。说明本试验成功 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV-2) 单克隆抗体 CAP蛋白 细胞融合 亚克隆
原文传递
嗜热菌Aquifex pyrophilus中mbh2基因簇的鉴定和部分基因的克隆及测序 被引量:3
13
作者 吕健 G Rakhely +2 位作者 K L Kovacs 肖昌松 周培瑾 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期674-679,共6页
基于嗜热菌Aquifexaeolicus的mbhS2基因 ,设计合成特异性引物 ,以Aquifexpyrophilus的染色体DNA为模板 ,应用PCR技术扩增出目的片段。序列测定结果显示 ,其推导出的氨基酸序列与A .aeolicus的相应序列具有 85 %的同源性。以此PCR片段为... 基于嗜热菌Aquifexaeolicus的mbhS2基因 ,设计合成特异性引物 ,以Aquifexpyrophilus的染色体DNA为模板 ,应用PCR技术扩增出目的片段。序列测定结果显示 ,其推导出的氨基酸序列与A .aeolicus的相应序列具有 85 %的同源性。以此PCR片段为探针 ,从A .pyrophilus的NcoⅠ部分基因组文库 (4~ 6kb)中筛选出含 5kb大小插入片段的阳性克隆 ,进而对其进行了亚克隆及测序。结果表明 ,该插入子包含A .pyrophilusmbh2基因簇的小亚基基因mbhS2、orf1基因和部分orf2基因。所推导出的氨基酸序列与A .aeolicus的MbhS2和Orf96 3相比较的同源性分别为 81 %和 6 0 %。 展开更多
关键词 mbh2基因族 基因组文库 亚克隆 测序 鉴定 嗜热菌
下载PDF
牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定 被引量:4
14
作者 宋志强 李媛 +5 位作者 孙文静 刘洋 邹晓辉 陈维 周玉梅 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期184-187,共4页
牛支原体(M.bovis)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前M.bovis粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,M.bovis表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通... 牛支原体(M.bovis)可以引起犊牛肺炎、关节炎、乳腺炎、角膜结膜炎等疾病,是一种牛的重要呼吸道病原体,目前M.bovis粘附宿主细胞的机制还不明确。研究表明,M.bovis表面存在的多种蛋白与致病菌在宿主体内的侵袭力与传播能力有关。我们通过分离表达多个M.bovis基因,最终获得了一个表达纤溶酶原结合蛋白的新基因,并命名为P18。该基因表达大小约为67ku的重组蛋白。通过western blot鉴定,重组表达的P18蛋白可以被M.bovis抗体识别。进一步的试验表明,P18蛋白还具有纤溶酶原结合活性,从而推测该基因表达的蛋白可能是M.bovis的一个粘附相关因子。 展开更多
关键词 牛支原体 亚克隆 表达 粘附相关因子
下载PDF
卫氏并殖吸虫基因片段的亚克隆及其表达的研究 被引量:3
15
作者 凌家俭 侯敏 +2 位作者 刘剑南 章子豪 张耀娟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期357-359,共3页
目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-P... 目的:获得诊断肺吸虫病的特异性重组抗原,以了解其作为免疫诊断抗原的价值。方法:将免疫筛选获得的卫氏并殖吸虫基因克隆双酶切,所得cDNA片段亚克隆入表达载体pRESETB,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,以聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹法(Westernblotting)对表达产物进行鉴定。结果:成功地将文库中2个大小不同的卫氏并殖吸虫基因片段连接到载体中。其中Pw-2重组子特异性表达产物是分子质量约为32ku的蛋白带,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异性识别。结论:成功构建了编码卫氏并殖吸虫特异性抗原的重组克隆Pw-2。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 重组抗原 亚克隆 CDNA文库
下载PDF
美洲鲽抗冻蛋白基因的亚克隆及构建转基因鱼的表达载体 被引量:2
16
作者 赵晓祥 李晶 +3 位作者 李荣萍 张淑梅 张云湖 杨志兴 《生物技术》 CAS CSCD 1995年第4期34-36,41,共4页
用限制性内切酶PStⅠ部分消解含有美洲鲽抗冻蛋白基因的pCT5质粒,分离得到324bp的片段,将此片段亚克隆到pUC19质粒中,筛选到pUC-AF重组子。从pUC-AF重组子中,用BamHⅠ和HirdⅢ切下324hp... 用限制性内切酶PStⅠ部分消解含有美洲鲽抗冻蛋白基因的pCT5质粒,分离得到324bp的片段,将此片段亚克隆到pUC19质粒中,筛选到pUC-AF重组子。从pUC-AF重组子中,用BamHⅠ和HirdⅢ切下324hp的抗冻蛋白基因,再重组到含有SV40病毒启动子的PKSV-10的载体中,构建成转基因鱼的表达载体,此表达载体可用于鱼的基因转移的研究。 展开更多
关键词 亚克隆 抗冻蛋白基因 表达载体 美洲鲽 转基因鱼
下载PDF
拖丝蛋白全基因亚克隆文库的构建和部分序列的测定 被引量:1
17
作者 张前军 祖旭宇 +1 位作者 梁宋平 李敏 《南华大学学报(医学版)》 2004年第2期151-154,共4页
目的 为获得蜘蛛拖丝蛋白全基因。方法 以斑点杂交、Southern印迹结果证实了的蜘蛛拖丝蛋白全基因的克隆 ,构建其亚克隆文库 ,采用鸟枪法测序的策略 ,选取以HinfI为酶切工具 ,对Scos-DS1的DNA做大量酶切 ,以pUC1 9为载体 ,取插入片段... 目的 为获得蜘蛛拖丝蛋白全基因。方法 以斑点杂交、Southern印迹结果证实了的蜘蛛拖丝蛋白全基因的克隆 ,构建其亚克隆文库 ,采用鸟枪法测序的策略 ,选取以HinfI为酶切工具 ,对Scos-DS1的DNA做大量酶切 ,以pUC1 9为载体 ,取插入片段大小为 5 0 0bp左右的阳性重组子 1 0 0个构建拖丝蛋白基因的亚克隆文库。结果 成功地构建了蛛丝蛋白基因Scos -DS1由HinfI酶切片段连接而成的亚克隆文库 ,得到了其部分序列。 展开更多
关键词 亚克隆 拖丝蛋白 蜘蛛
下载PDF
家族性肌萎缩侧索硬化症研究中pGBKT7-mSOD1cDNA酵母双杂交表达载体的构建 被引量:3
18
作者 陈桂生 李露撕 +6 位作者 史树贵 陈康宁 胡俊 吴军 罗高兴 袁顺宗 彭旭 《宁夏医学院学报》 2007年第3期225-227,F0002,共4页
目的构建能在酵母菌AH109中表达的mSOD1cDNA的穿梭表达质粒pGBKT7-mSOD1cDNA,研究突变SOD1编码蛋白的蛋白质-蛋白质相互作用。方法通过PCR法以真核表达载pEGFP-mSOD1cDNA为模板,扩增获得了120bp的mSOD1基因的末端及DNA结合域的片段,经过... 目的构建能在酵母菌AH109中表达的mSOD1cDNA的穿梭表达质粒pGBKT7-mSOD1cDNA,研究突变SOD1编码蛋白的蛋白质-蛋白质相互作用。方法通过PCR法以真核表达载pEGFP-mSOD1cDNA为模板,扩增获得了120bp的mSOD1基因的末端及DNA结合域的片段,经过SalⅠ、EcoRⅠ双酶切后,基因重组的方法定向亚克隆于酵母双杂交载体pGBKT7中,构建形成pGBKT7-mSOD1真核表达载体。结果经转化,提取质粒双酶切,核苷酸测序,BALST比对鉴定表明构建成功。结论成功构建穿梭质粒pGBKT7-mSOD1cDNA,为深入研究突变的SOD1基因编码蛋白的蛋白质-蛋白质相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交 载体 亚克隆 mSOD1cDNA pGBKT7
下载PDF
甘蔗腋芽苗亚无性系性状 被引量:2
19
作者 杨生超 杨清辉 +1 位作者 李富生 何顺长 《甘蔗(福建)》 2002年第2期15-18,共4页
在试验的基础上 ,比较了甘蔗腋芽苗亚无性系 2代、3代与原种在大田性状上的差异。结果表明 :腋芽苗亚无性系在生长势、株高、出苗率、分蘖率、成茎率等性状上优于原种 ;亚无性系茎径和前期糖分低于原种 ,并在腋芽苗无性世代中逐渐得到恢... 在试验的基础上 ,比较了甘蔗腋芽苗亚无性系 2代、3代与原种在大田性状上的差异。结果表明 :腋芽苗亚无性系在生长势、株高、出苗率、分蘖率、成茎率等性状上优于原种 ;亚无性系茎径和前期糖分低于原种 ,并在腋芽苗无性世代中逐渐得到恢复 ,在 3代左右完全达到原种水平。 展开更多
关键词 性状 甘蔗 组织培养 腋芽苗 亚无性系 变异
下载PDF
MICROARRAY ANALYSIS OF DIFFERENT GENE EXPRESSION OF HUMAN CERVICAL CANCER SUBCLONE CELL LINES
20
作者 陈葳 李旭 王翔 《Journal of Pharmaceutical Analysis》 SCIE CAS 2006年第1期49-52,共4页
Objective To examine the differentially expressed invasion-related genes in two anchorage-independent uterine cervical carcinoma cell lines derived from the same patient using a cDNA array. Methods Two human uterine c... Objective To examine the differentially expressed invasion-related genes in two anchorage-independent uterine cervical carcinoma cell lines derived from the same patient using a cDNA array. Methods Two human uterine cervical carcinoma subclonal cell lines CS03 and CS07 derived from a single donor line CS1213 were established by limited dilution procedure. The two cDNA samples retro-transcribed from total RNA derived from CS03 and CS07 cells were screened by a cDNA microarray carrying 234 human cell-cycle related genes and 1011 human signal transduction and membrane receptor-associated genes, scanned with a ScanArray 3000 laser scanner. Results The cDNA microarray analysis showed that 12 genes in CS03 were up-regulated compared to CS07, and 24 genes in CS07 were up-regulated. The function of a number of differentially expressed genes was consistently associated with cell-cycle, cell proliferation, migration, apoptosis, signal transduction and tumor metastasis, including p34 cdc2 , TSC22, plasminogen activator inhibitor I (PAI-1)and desmosome associated protein(Pinin). Conclusion Multiple genes are differentially expressed in uterine cervical carcinoma cell lines even came from the same patient. It is suggested that these genes are involved in the different phenotypic characteristics and development of cervical carcinoma. 展开更多
关键词 cervical carcinoma subclone cDNA microarray
下载PDF
上一页 1 2 7 下一页 到第
使用帮助 返回顶部