不同分泌信号对豹蛙酶在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响 被引量：1

1

作者 何庆 赵洪亮 +3 位作者 薛冲 姚学勤 孙博 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2009年第5期622-625,共4页

目的:研究不同分泌信号对豹蛙酶(ONC)在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响。方法:根据已知天然ONC的氨基酸序列,结合酵母偏爱密码子,设计并合成了ONC基因序列,通过融合PCR获得了不同分泌信号与ONC的融合基因,将其克隆至表达载体pPIC9k中,... 目的:研究不同分泌信号对豹蛙酶(ONC)在巴斯德毕赤酵母中分泌效率的影响。方法:根据已知天然ONC的氨基酸序列,结合酵母偏爱密码子,设计并合成了ONC基因序列,通过融合PCR获得了不同分泌信号与ONC的融合基因,将其克隆至表达载体pPIC9k中,然后将线性化的重组表达载体电击转化GS115毕赤酵母感受态细胞,通过SDS-PAGE检测目的蛋白表达量。结果:糖基化ONC表观相对分子质量为(14～16)×103,且其糖基化不均匀,非糖基化蛋白肽链的相对分子质量约为12×103;采用不含EAEA结构的α交配因子作为分泌信号时ONC没有表达,利用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号时均能够显著提高其表达量。结论:采用含EAEA结构的α交配因子和α交配因子的pre肽作为分泌信号均能够显著提高ONC在巴斯德毕赤酵母中的表达量。 展开更多

关键词 豹蛙酶 巴斯德毕赤酵母 α交配因子 分泌信号 糖基化

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创伤弧菌内膜脂蛋白MFP4的克隆、表达及细胞定位研究

2

作者 张梦琳 马宏姝 +3 位作者 祝清松 李珂 王文琪 陈师勇 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期45-53,共9页

创伤弧菌是一种海洋环境中的重要病原菌。细菌脂蛋白是一类细菌重要的具有不同生理功能的膜蛋白,以大肠杆菌为代表的经典革兰氏阴性菌脂蛋白分泌规律遵循“+2规则”。为探究海洋环境中革兰氏阴性菌的细菌脂蛋白分泌机制是否有别于其他... 创伤弧菌是一种海洋环境中的重要病原菌。细菌脂蛋白是一类细菌重要的具有不同生理功能的膜蛋白,以大肠杆菌为代表的经典革兰氏阴性菌脂蛋白分泌规律遵循“+2规则”。为探究海洋环境中革兰氏阴性菌的细菌脂蛋白分泌机制是否有别于其他环境中的革兰氏阴性菌,本研究克隆并表达了创伤弧菌的MFP4脂蛋白,该脂蛋白N端成熟肽段第二位(+2位)氨基酸为甘氨酸,根据“+2规则”理论上应定位于细胞外膜。实验利用细菌外膜小体分离鉴定法,在表达MFP4重组脂蛋白的创伤弧菌中对其进行细胞定位后发现,MFP4生物合成后定位于细胞内膜。实验进一步构建了MFP4蛋白N端序列与红色荧光蛋白RFP的融合脂蛋白基因MFP4 tether-RFP并在创伤弧菌中表达,细胞定位结果发现该重组融合脂蛋白仍然定位于细胞内膜,说明MFP4成熟脂蛋白的N端携带内膜细胞定位的信息。实验同时构建并表达了外膜脂蛋白LptE的N端序列与RFP的融合重组脂蛋白LptE tether-RFP,该蛋白具有与MFP4相同的N端+2位氨基酸(Gly+2),与MFP4 tether-RFP融合脂蛋白仅有(+3—+10位)8个氨基酸序列的差异。实验发现该融合脂蛋白定位于创伤弧菌细胞外膜,而它Gly+2→Asp的突变型蛋白则定位于细胞内膜,说明创伤弧菌脂蛋白+2位的Gly不是内膜滞留信号。研究数据表明,海洋环境中创伤弧菌脂蛋白MFP4的分泌及定位有其独特的规律,其细胞内膜定位信息由成熟脂蛋白N端+2位氨基酸以后的短肽序列决定。 展开更多

关键词 创伤弧菌 脂蛋白 分泌信号 细胞定位

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革兰阴性菌分泌系统及其分泌产物研究进展 被引量：9

3

作者 余乐正 柳凤娟 +3 位作者 鄢南南 程旭 李益洲 郭延芝 《动物医学进展》 北大核心 2017年第8期80-84,共5页

蛋白质分泌在细菌生命活动中发挥着重要作用。通过各种各样的分泌系统,革兰阴性菌可分泌出大量蛋白质,以协调细菌与周围环境及其他细菌间的相互作用。由于细菌毒力的发挥离不开这些蛋白质,故它们在疾病发病机理及抗菌药物开发等研究中... 蛋白质分泌在细菌生命活动中发挥着重要作用。通过各种各样的分泌系统,革兰阴性菌可分泌出大量蛋白质,以协调细菌与周围环境及其他细菌间的相互作用。由于细菌毒力的发挥离不开这些蛋白质,故它们在疾病发病机理及抗菌药物开发等研究中扮演着重要角色。论文围绕不同类型的革兰阴性菌分泌系统及其分泌产物的结构、功能等进行综述,旨在为革兰阴性菌致病机理研究和相关病害防控提供参考。 展开更多

关键词 革兰阴性菌 分泌系统 分泌蛋白 分泌信号

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大肠杆菌的蛋白分泌机制 被引量：1

4

作者 袁宇 甘人宝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第4期295-300,共6页

大肠杆菌的分泌蛋白定位于内膜、外膜、周质空间和胞外环境，它们在Ｎ端或Ｃ端带有一定的结构包含着分泌信号，这两类分泌蛋白在各自特定的一组蛋白因子的协助下跨越内膜，再通过目前尚不清楚的方式实现其最终定位，Ｎ端带有信号肽的分... 大肠杆菌的分泌蛋白定位于内膜、外膜、周质空间和胞外环境，它们在Ｎ端或Ｃ端带有一定的结构包含着分泌信号，这两类分泌蛋白在各自特定的一组蛋白因子的协助下跨越内膜，再通过目前尚不清楚的方式实现其最终定位，Ｎ端带有信号肽的分子在跨越内膜时得到Ｓｅｃ家族蛋白因子协助，信号肽在跨膜过程中可能被切除，该过程由ＡＴＰ和电化学势提供能量．Ｃ端带分泌信号的分子主要受到Ｈｌｙ家族分子协助，一次穿过内膜和外膜而不经过周质空间． 展开更多

关键词 大肠杆菌 蛋白 分泌机制

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细菌三型分泌系统效应蛋白转运的研究进展 被引量：2

5

作者 孙思 牛建军 王岱 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1452-1460,共9页

三型分泌系统(Type 3 secretion system,T3SS)作为存在于革兰氏阴性菌中的分泌系统之一,对革兰氏阴性菌的致病有重要作用。T3SS的致病作用体现在T3SS能直接将效应蛋白转运至宿主细胞,进而通过效应蛋白调控细胞的一系列通路,促进细菌定... 三型分泌系统(Type 3 secretion system,T3SS)作为存在于革兰氏阴性菌中的分泌系统之一,对革兰氏阴性菌的致病有重要作用。T3SS的致病作用体现在T3SS能直接将效应蛋白转运至宿主细胞,进而通过效应蛋白调控细胞的一系列通路,促进细菌定殖于细胞。而效应蛋白的转运受到两方面因素的调控,一方面是效应蛋白本身的信号序列,另一方面是T3SS相关蛋白的辅助。本文围绕近年来T3SS的构成、效应蛋白转运机制方面的最新进展进行概要综述。 展开更多

关键词 三型分泌系统 效应蛋白 转运 分泌信号

原文传递

葡糖淀粉酶基因的分子生物学研究

6

作者 李献玉 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期289-291,共3页

从酶活、底物、产物、应用及空间结构等方面论述了葡糖淀粉酶的一般生物学特性及应用,分析了其不同来源的基因同源度。着重从分子生物学角度阐述了葡糖淀粉酶基因在多种表达系统中的分泌表达情况,并对其基因在曲霉及酵母中的高效表达及... 从酶活、底物、产物、应用及空间结构等方面论述了葡糖淀粉酶的一般生物学特性及应用,分析了其不同来源的基因同源度。着重从分子生物学角度阐述了葡糖淀粉酶基因在多种表达系统中的分泌表达情况,并对其基因在曲霉及酵母中的高效表达及分泌引导功能进行了初步阐述和探讨。 展开更多

关键词 葡糖淀粉酶 表达 分泌信号

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职业棒球比赛中投接手暗号加密理论的探究

7

作者 王伟 《当代体育科技》 2022年第16期163-166,共4页

在棒球比赛中,球队内部使用的“秘密手语”,也就是通常所说的暗号,一直容易被对手窃取。通过破解暗号,来了解对手在比赛中的真正意图,从而预测对手的策略,可以使球队在比赛中获得先机。如果一个球队怀疑其暗号已经被对手破译,他们可能... 在棒球比赛中,球队内部使用的“秘密手语”,也就是通常所说的暗号,一直容易被对手窃取。通过破解暗号,来了解对手在比赛中的真正意图,从而预测对手的策略,可以使球队在比赛中获得先机。如果一个球队怀疑其暗号已经被对手破译,他们可能会频繁地更换暗号,这不仅给球员及教练带来了巨大的压力,还可能会出现错误理解暗号的情况,导致配合失误。该文尝试提出一个暗号加密理论,即投手和接手使用一个变化值作为变量参数,该值是通过从比赛的临场状况或记分板中导出数据,并进行简单运算而得出。 展开更多

关键词 美职棒 投接手 暗号 加密

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重组人血清白蛋白在Pichia pastoris中分泌表达影响因素的研究 被引量：15

8

作者 杨晟 黄鹤 +4 位作者 章如安 钱美琴 余有浩 钱雪明 袁中一 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期675-678,共4页

为获得高产稳产重组人血清白蛋白的Pichiapastoris细胞株用于高密度发酵 ,构建了多种分泌表达载体 ,在Pichiapastoris中作表达 ,研究表达载体构建等因素对表达量的影响。发现采用酿酒酵母α性成熟因子前导肽比人血清白蛋白天然前导肽作... 为获得高产稳产重组人血清白蛋白的Pichiapastoris细胞株用于高密度发酵 ,构建了多种分泌表达载体 ,在Pichiapastoris中作表达 ,研究表达载体构建等因素对表达量的影响。发现采用酿酒酵母α性成熟因子前导肽比人血清白蛋白天然前导肽作为分泌信号肽的表达量要高 10 %左右。而载体整合方式、整合拷贝数、5’非翻译区的改造和甲醇利用表型等对表达量无规律性影响。筛选到的高表达株经高密度发酵 ,细胞湿重达 46 0 g/L ,发酵液上清的人血清白蛋白含量为 1 0 g/L。 展开更多

关键词 重组人血清白蛋白 高密度发酵 分泌表达

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马铃薯青枯菌Po82菌株质粒基因组分泌蛋白信号肽的分析 被引量：5

9

作者 杨俊誉 张志超 +3 位作者 韩永花 李婕 张彧 黄琼 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期1121-1127,共7页

应用计算机技术和生物信息学的方法,采用Signal P4.0、Lipo P1.0、Target P1.0.1、TMHMM2.0蛋白质分析软件对植物病原细菌Ralstonia solanacearum Po82质粒基因组的1680个ORFs编码的分泌蛋白信号肽氨基酸序列进行预测分析。结果表明,质... 应用计算机技术和生物信息学的方法,采用Signal P4.0、Lipo P1.0、Target P1.0.1、TMHMM2.0蛋白质分析软件对植物病原细菌Ralstonia solanacearum Po82质粒基因组的1680个ORFs编码的分泌蛋白信号肽氨基酸序列进行预测分析。结果表明,质粒基因组的1680个ORFs中有102个ORFs所编码的蛋白质具有N-端信号肽序列,包括85个Ⅰ型信号肽,1个Ⅱ型信号肽,15个Prepilin-like信号肽和1个细菌素和信息素信号肽,所有的分泌蛋白中具有RR-motif信号肽结构的有14个,且均为Ⅰ型信号肽。在102个具有可切割信号肽的分泌蛋白中,有50.98%的蛋白质为胞外分泌型(S型),33.33%为线粒体分泌型(M型),6.87%为叶绿体分泌型(C型),8.82%为其他类型的分泌蛋白。信号肽切割位点的氨基酸组成中非极性氨基酸为53.27%,极性氨基酸为18.79%,带负电荷的酸性氨基酸为19.12%,带正电荷的碱性氨基酸为8.82%。比较R.solanacearum GMI1000和R.solanacearum Po82质粒基因组信号肽类型的区别,发现这2种菌在信号肽类型上存在很大差异。文章通过对R.solanacearum Po82质粒基因组信号肽分泌蛋白的研究,揭示了该病原菌与寄主互作的致病机制在长期进化中的独特地位。 展开更多

关键词 生物信息学 青枯病 分泌信号肽 质粒基因组

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利用CRISPR/Cas9系统定向编辑甘蓝型油菜BnaLCR78基因 被引量：4

10

作者 王金彪 何星辉 +4 位作者 高谢旺 覃诗琪 邓淞月 刘春林 阮颖 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期6673-6679,共7页

分泌信号肽是生物体内的一类重要功能分子。通过生物信息学分析,揭示甘蓝型油菜BnaLCR78基因编码一个由78个氨基酸组成、N端包含分泌信号肽且C端富含半胱氨酸的蛋白,属于富含半胱氨酸的分泌信号肽。为进一步研究该基因的功能,借助农杆... 分泌信号肽是生物体内的一类重要功能分子。通过生物信息学分析,揭示甘蓝型油菜BnaLCR78基因编码一个由78个氨基酸组成、N端包含分泌信号肽且C端富含半胱氨酸的蛋白,属于富含半胱氨酸的分泌信号肽。为进一步研究该基因的功能,借助农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传转化方法,利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜BnaLCR78基因进行编辑,实现定向敲除。本实验共计使用1 200个外植体,经除草剂草铵膦的抗性筛选及对213株抗性苗基因组DNA的PCR检测,获得了26株转基因油菜,转化率约为2.17%,但在T0代并未获得发生了目标基因被编辑的植株。幸运地是从T0自交获得的T1植株中获得基因被编辑了的植株。通过扩增T1代27株转基因油菜靶位点并测序,发现有1株在靶位点2有一个T碱基的插入,其基因型为+1/WT的杂合突变体,说明在T1植株中,基因的编辑效率达到了3.7%。这对后续研究甘蓝型油菜BnaLCR78基因功能的研究提供了帮助。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 分泌信号肽 BnaLCR78基因 生物信息学 基因编辑

原文传递

瓜类果斑病菌(Acidovorax citrulli)基因组信号肽预测分析 被引量：2

11

作者 王铁霖 严婉荣 +2 位作者 闫莎莎 杨玉文 赵廷昌 《中国瓜菜》 CAS 2012年第1期1-6,共6页

利用Signal 3.0、LipoP和TargetP对瓜类果斑病菌Acidovor axavenae subsp.citrulli AAC00-1菌株基因组中4709个ORFs进行分析,对该病菌基因组中信号肽的数量、长度和氨基酸组成进行了预测,并对其进行分类。结果确定其中476个ORFs所编码... 利用Signal 3.0、LipoP和TargetP对瓜类果斑病菌Acidovor axavenae subsp.citrulli AAC00-1菌株基因组中4709个ORFs进行分析,对该病菌基因组中信号肽的数量、长度和氨基酸组成进行了预测,并对其进行分类。结果确定其中476个ORFs所编码的N-端有信号肽序列,占全部ORFs的10.10%。信号肽长度为14～48个氨基酸,以20～35个氨基酸居多,26个氨基酸的信号肽最多。组成信号肽的氨基酸中,非极性氨基酸占47.80%,极性氨基酸占23.04%,带负电荷的酸性氨基酸占15.87%,带正电荷的碱性氨基酸占8.73%。预测的476条信号肽中,有384条分泌型信号肽(SPI),40条脂蛋白型信号肽(SPII),51条TMHI型信号肽和1条CYT型信号肽。在分泌型信号肽中,有96个信号肽具有RR-motif的保守区段。 展开更多

关键词 Acidovorav chrulli 信号肽 分析

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植物病原细菌(Ralstonia solanacearum)染色体基因组分泌信号肽计算机分析 被引量：1

12

作者 周晓罡 丁玉梅 +2 位作者 张绍松 孙茂林 李建平 《西南农业学报》 CSCD 2008年第2期340-345,共6页

应用SignalP 3.0、TMHMM 2.0、THUMBUP、big-PI、TargetP1.01、Lipop 1.0、TatP 1.0等7种软件对植物病原细菌Ralstonia solanacearum GMI1000染色体基因组3448个氨基酸序列进行预测分析。结果表明,该物种染色体基因组分泌信号肽ORFs有17... 应用SignalP 3.0、TMHMM 2.0、THUMBUP、big-PI、TargetP1.01、Lipop 1.0、TatP 1.0等7种软件对植物病原细菌Ralstonia solanacearum GMI1000染色体基因组3448个氨基酸序列进行预测分析。结果表明,该物种染色体基因组分泌信号肽ORFs有178个,占其基因组编码ORFs的5.2%,其中有150个ORFs属于Ⅰ型分泌信号肽,28个ORFs属于Ⅱ型分泌信号肽。在178个ORFs中具RR-motif信号肽结构的有13个,其中11个属于Ⅰ型信号肽,2个属于Ⅱ型信号肽。通过软件预测未发现Comc型信号肽与细菌素-信息素型信号肽结构。在染色体分泌信号肽ORFs中,有116个具可预测功能,其余62个为功能未知的推定蛋白。已知功能主要集中于细胞代谢、细胞调控及转运、细胞膜结构等领域,这些功能是该物种在长期进化过程中与环境中各种因子发生互作,相互适应的结果。 展开更多

关键词 Ralstonia SOLANACEARUM GMI1000 染色体基因组 分泌信号肽

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高效表达淀粉酶的工业酿酒酵母菌株的构建

13

作者 刘增然 李树立 +1 位作者 张光一 刘世贵 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期27-32,共6页

将PCR扩增的扣囊腹膜孢酵母菌淀粉酶基因 ,与磷酸甘油酸激酶基因 1启动子和α 分泌序列一起插入含 2 μm的酵母穿梭质粒YEp3 5 2 ,构建酵母菌重组表达质粒并命名为pLA8α。用醋酸锂转化法转化工业酿酒酵母Sc 1 6,转化子培养上清液的淀... 将PCR扩增的扣囊腹膜孢酵母菌淀粉酶基因 ,与磷酸甘油酸激酶基因 1启动子和α 分泌序列一起插入含 2 μm的酵母穿梭质粒YEp3 5 2 ,构建酵母菌重组表达质粒并命名为pLA8α。用醋酸锂转化法转化工业酿酒酵母Sc 1 6,转化子培养上清液的淀粉酶活性为 6 8U/mL ,46%的淀粉被降解 ,SDS PAGE检测到约 5 5ku的蛋白条带。转化子在非选择条件下的遗传稳定性为82 %。 展开更多

关键词 淀粉酶 酶基因 腹膜 培养上清液 穿梭质粒 分泌 菌株 转化子 高效表达 酿酒酵母

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细菌蛋白分泌途径的研究进展 被引量：10

14

作者 訾祯祯 杨志伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期44-50,54,共8页

蛋白质分泌对于细菌的生长和繁殖具有至关重要的作用。在革兰氏阴性菌中,蛋白质分泌包括两步和一步分泌途径,主要涉及Sec、SRP和Tat途径。近年来发现I-VI型途径也参与胞内蛋白质转运。主要介绍革兰氏阴性菌蛋白分泌的机制及生理意义。... 蛋白质分泌对于细菌的生长和繁殖具有至关重要的作用。在革兰氏阴性菌中,蛋白质分泌包括两步和一步分泌途径,主要涉及Sec、SRP和Tat途径。近年来发现I-VI型途径也参与胞内蛋白质转运。主要介绍革兰氏阴性菌蛋白分泌的机制及生理意义。对于细菌蛋白分泌机制的深入研究将为细菌蛋白质分泌工程和病原微生物的防治带来有益启示。 展开更多

关键词 细菌 蛋白分泌途径 信号序列

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大肠埃希氏杆菌UTI89分泌蛋白组的预测分析 被引量：1

15

作者 王黎 吉爱国 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期100-105,共6页

目的:从大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中筛选出全部潜在的分泌蛋白并进行初步研究。方法:使用SignalP3.0、TatP1.0、SecretomeP2.0等蛋白分析软件对5211个ORF进行预测;对筛选出的信号肽及分泌蛋白的基本特征进行统计学分析;使用Blast2 Sequ... 目的:从大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中筛选出全部潜在的分泌蛋白并进行初步研究。方法:使用SignalP3.0、TatP1.0、SecretomeP2.0等蛋白分析软件对5211个ORF进行预测;对筛选出的信号肽及分泌蛋白的基本特征进行统计学分析;使用Blast2 Sequences进行同源性分析。结果:共筛选出432个sec途径分泌蛋白,19个Tat途径分泌蛋白,386个非经典分泌蛋白;信号肽、分泌蛋白平均长度分别为25.5aa、282.8aa;信号肽中出现频率最高的3种氨基酸依次为L、A、S;仅有两个信号肽的氨基酸序列完全相同,相应的分泌蛋白高度同源。结论:大肠埃希氏杆菌UTI89基因组中有837个ORF可能编码分泌蛋白;分泌蛋白集中在500aa以下;组成信号肽的氨基酸相对保守,多数为疏水氨基酸;信号肽变异性较大,含相同信号肽的蛋白可能由同源基因编码。 展开更多

关键词 大肠埃希氏杆菌UTI89 分泌蛋白 信号肽 计算机预测

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隐藏嗜酸菌Acidiphilium cryptum JF-5分泌蛋白质组的分析 被引量：1

16

作者 焦春香 张奉波 +1 位作者 夏金兰 张成桂 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第28期17168-17171,17175,共5页

[目的]对隐藏嗜酸菌(Acidiphilium cryptumJF-5)全基因组的3063个氨基酸序列进行预测,分析其分泌蛋白质组的构成。[方法]利用信号肽预测软件SignalPv3.0、跨膜螺旋结构预测软件TMHMMv2.0、RR-motif信号肽预测软件TatPv1.0、脂蛋白质信... [目的]对隐藏嗜酸菌(Acidiphilium cryptumJF-5)全基因组的3063个氨基酸序列进行预测,分析其分泌蛋白质组的构成。[方法]利用信号肽预测软件SignalPv3.0、跨膜螺旋结构预测软件TMHMMv2.0、RR-motif信号肽预测软件TatPv1.0、脂蛋白质信号肽预测软件LipoPv1.0、非经典分泌蛋白质预测软件SecretomeP和亚细胞定位软件Psortbv2.0.4对Acidiphilium cryptumJF-5全基因组的3063个氨基酸序列进行预测分析。[结果]在隐藏嗜酸菌Acidiphilium cryptumJF-5中有444个蛋白质为分泌蛋白质,其中分泌型信号肽148个,RR-motif亚组型信号肽27个,脂蛋白质信号肽22个,无Prepiplin-like信号肽,非经典分泌蛋白质247个;另外,对分泌型信号肽的长度分布、氨基酸使用频率和酶切位点的氨基酸使用频率作出了统计分析。[结论]研究结果为进一步研究嗜酸菌Acidiphilium cryptumJF-5的基因功能提供了丰富的信息基础。 展开更多

关键词 隐藏嗜酸菌Acidiphilium cryptumJF-5 分泌蛋白质组 信号肽

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