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阿胶中马和驴成分的实时荧光PCR检测 被引量：28
1
作者 吴亚君 王斌 +3 位作者 刘鸣畅 韩建勋 李新实 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期85-88,共4页
建立阿胶中马和驴成分高特异、高灵敏的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。选择马和驴线粒体基因tRNA-Thr及D-loop区为靶序列,设计合成特异引物,通过普通PCR和实时荧光PCR检测,结果表明,这两对引物能够... 建立阿胶中马和驴成分高特异、高灵敏的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。选择马和驴线粒体基因tRNA-Thr及D-loop区为靶序列,设计合成特异引物,通过普通PCR和实时荧光PCR检测,结果表明,这两对引物能够准确检测阿胶或动物胶中马和驴成分。 展开更多
关键词 阿胶 马 驴 实时荧光pcr
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大豆转基因检测中DNA提取方法的比较研究 被引量：19
2
作者 刘欣 祝长青 +4 位作者 王毅谦 沈赟 黄明 蒋原 周光宏 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第4期199-203,共5页
为筛选出用于大豆DNA提取的适宜方法,分别使用Bayer法、DuPont法、Monsanto法、Qiagen和Tiangen试剂盒法提取大豆子粒DNA,并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法与实时荧光聚合酶链式反应分析DNA质量。结果显示:Bayer法提取的DNA含有... 为筛选出用于大豆DNA提取的适宜方法,分别使用Bayer法、DuPont法、Monsanto法、Qiagen和Tiangen试剂盒法提取大豆子粒DNA,并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法与实时荧光聚合酶链式反应分析DNA质量。结果显示:Bayer法提取的DNA含有较多杂质,抑制实时荧光聚合酶链式反应;Monsanto法提取的DNA纯度差且得率低,不符合检测要求;DuPont法、Qiagen与Tiangen试剂盒法能提取到纯度好、得率高、完整性好的DNA,符合实时荧光聚合酶链式反应的检测要求,但是Qiagen试剂盒法成本过高。因此,DuPont法与Tiangen试剂盒法适用于大豆转基因检测中的DNA提取。 展开更多
关键词 大豆 DNA提取 转基因生物 琼脂糖凝胶电泳 实时荧光聚合酶链式反应
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慢性乙型肝炎患者唾液中HBV DNA水平与牙周状况的关系 被引量：12
3
作者 刘荣森 李雅彬 王海滨 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期12-15,共4页
目的观察肝炎患者中不同口腔卫生指标对唾液HBV DNA状况的影响,探讨牙周健康状况在乙型肝炎传播流行中的意义。方法采用Trizol方法裂解唾液中DNA,氯仿-异丙醇方法进行分离和提取,用荧光定量聚合酶反应PCR法检测60例慢性乙型肝炎患者唾... 目的观察肝炎患者中不同口腔卫生指标对唾液HBV DNA状况的影响,探讨牙周健康状况在乙型肝炎传播流行中的意义。方法采用Trizol方法裂解唾液中DNA,氯仿-异丙醇方法进行分离和提取,用荧光定量聚合酶反应PCR法检测60例慢性乙型肝炎患者唾液中的HBV DNA含量,并探讨其与菌斑指数(PI)、牙龈指数(GI)、探针深度(PD)之间的关系。结果60例慢性HBV感染者中唾液HBV DNA阳性34例,平均HBV DNA含量为4.16±0.57(拷贝数/ml的对数);PI、GI、PD指数对唾液HBV DNA的阳性率和含量无影响。结论牙周状况与唾液中的HBV DNA检出率和含量无明显关联,唾液中HBV DNA的来源可能存在血液来源以外的其他途径。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 HBV DNA 唾液 荧光定量聚合酶链反应 牙周
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实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系 被引量：7
4
作者 曹际娟 徐君怡 +3 位作者 曹冬梅 张丕桥 栾凤侠 刘洋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第8期156-159,共4页
目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他... 目的:建立实时荧光聚合酶链式反应检测转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系的鉴定方法。方法:以转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2为研究对象,在转基因小麦外源片段与小麦染色体重组的边界序列分别设计引物和探针,以其他多种转基因产品和非转基因小麦为对照进行特异性实验,以B73-6-1样品模拟制备10个含量梯度的添加样品进行灵敏度实验。结果:本研究设计的引物和探针具有很好的品系鉴定特异性,检测灵敏度可达到0.01%(m/m)。结论:该方法特异性好、灵敏度高,可快速、准确地鉴定转基因小麦B73-6-1、B72-8-11b和B102-1-2品系。 展开更多
关键词 转基因小麦 B73-6-1 B72-8-11b B102-1-2 品系鉴定 实时荧光聚合酶链式反应
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KLF6通过上调TGF-β1诱导静脉内皮细胞endoglin,P-selectin表达,引发血小板粘附、聚集,促进TDVT形成的实验研究 被引量：6
5
作者 李文 胡继红 +4 位作者 李兴国 李宏昆 周如丹 赵学凌 王兵 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第16期1365-1368,共4页
[目的]研究创伤性深静脉血栓形成早期,大鼠静脉内皮细胞KLF6、TGF-β1表达上调,诱导Endog-lin、P-selectin表达,引发血小板粘附、活化、聚集,促进血栓形成的作用。[方法]将50只SD大鼠随机分为A组(对照组)、B组(血栓形成前组,创伤后2.5 h... [目的]研究创伤性深静脉血栓形成早期,大鼠静脉内皮细胞KLF6、TGF-β1表达上调,诱导Endog-lin、P-selectin表达,引发血小板粘附、活化、聚集,促进血栓形成的作用。[方法]将50只SD大鼠随机分为A组(对照组)、B组(血栓形成前组,创伤后2.5 h)、C组(血栓形成组,创伤后25 h)、D组(血栓不形成组,创伤后25 h),采用股静脉钳夹联合下肢石膏制动构建大鼠TDVT模型。不同时间点解剖股静脉观测血栓的发生率及严重程度。分离血管内皮,先采用Genechip Rat Genome 230 2.0基因芯片检测静脉内皮细胞中的基因表达变化,然后采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)验证股静脉内皮中KLF6、Endoglin、TGF-β1、P-selectin表达;再对上述基因进行Pathway等生物信息学分析。[结果]C组大鼠(血栓形成)17例,D组大鼠(血栓未形成)13例,解剖发现C组内皮损伤较D组严重。基因芯片分析及real-time PCR结果均提示:创伤后2.5 h,KLF6,TGF-β1、Endoglin、P-selectin表达上调(Ratio值>2),B组高于A组,血栓形成时KLF6、TGF-β1、Endoglin、P-selectin表达显著上调(Ratio值>4),C组高于B、D组。Pathway分析提示:KLF6为TGF-β1和Endoglin的上游调控基因,TGF-β1为P-se-lectin的调控基因,P-selectin触发血小板粘附、活化、聚集及血栓形成。[结论]KLF6可通过上调TGF-β1诱导静脉内皮细胞endoglin、P-selectin表达,引发血小板粘附、聚集,促进大鼠深静脉血栓形成。 展开更多
关键词 KLF6 ENDOGLIN TGF-Β1 P-SELECTIN TDVT 基因芯片杂交技术 实时荧光定量聚合酶链式反应
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microRNA检测方法的研究进展 被引量：4
6
作者 李娟 王翔 张有光 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1234-1240,共7页
MicroRNAs(miRNAs)是一组小的非编码单链RNA,它们在生物进化过程中起到很重要的作用。准确并且灵敏地检测出miRNA的表达量,能够帮助揭开它们在生物功能中的神秘面纱。但是对于miRNA检测却一直比较困难,由于成熟的miRNA非常短,并且它们... MicroRNAs(miRNAs)是一组小的非编码单链RNA,它们在生物进化过程中起到很重要的作用。准确并且灵敏地检测出miRNA的表达量,能够帮助揭开它们在生物功能中的神秘面纱。但是对于miRNA检测却一直比较困难,由于成熟的miRNA非常短,并且它们在细胞中的表达量不高,这些特点给传统的检测带来很大的挑战。文章综述了近年来有关miRNA检测方法的研究进展,并对miRNA检测领域国内外研究现状及前景进行了评述。 展开更多
关键词 微小RNA RNA印记技术 微阵列芯片 实时荧光pcr
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4种检测方法对巧克力中亚利桑那沙门氏菌的检测结果比较 被引量：3
7
作者 张红莉 李勇 +4 位作者 许均华 郑文 徐文泱 欧露真 代洪梅 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第9期172-176,共5页
比较4种不同检验方法对亚利桑那沙门氏菌检测的优缺点,采用实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、VITEK 2全自动微生物鉴定系统、API 20E肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统和国标方法对巧克力中亚利桑那沙门氏菌... 比较4种不同检验方法对亚利桑那沙门氏菌检测的优缺点,采用实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、VITEK 2全自动微生物鉴定系统、API 20E肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统和国标方法对巧克力中亚利桑那沙门氏菌进行检验。结果表明,在检验结果准确性上VITEK 2全自动微生物鉴定系统对双相亚利桑那亚种沙门氏菌鉴定准确率高达98%,而其他3种方法都不能直接鉴定出准确的菌种类型;在操作步骤和时耗上PCR最佳,其次是VITEK 2全自动微生物鉴定系统。VITEK 2全自动微生物鉴定系统操作简便,检验周期短,且更精准,因此更适合对巧克力中亚利桑那沙门氏菌的检测。 展开更多
关键词 实时荧光聚合酶链式反应 VITEK2全自动微生物鉴定系统 API20E肠杆菌和其它革兰氏阴性杆菌鉴定系统 亚利桑那沙门氏菌
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基于单拷贝核基因的荧光定量PCR技术检测驴奶的含量 被引量：2
8
作者 王之莹 李婷婷 +2 位作者 于文杰 乔璐 陈爱亮 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第21期261-265,共5页
本研究建立了一种基于内参基因的标准化实时聚合酶链式反应(real-time PCR)方法,能够定量检测混合掺假的灭菌乳中驴奶的含量。使用单拷贝核基因代替多拷贝线粒体基因,基于Ct值(驴特异性引物/内参引物)与驴奶含量的线性关系,对含量为5%~1... 本研究建立了一种基于内参基因的标准化实时聚合酶链式反应(real-time PCR)方法,能够定量检测混合掺假的灭菌乳中驴奶的含量。使用单拷贝核基因代替多拷贝线粒体基因,基于Ct值(驴特异性引物/内参引物)与驴奶含量的线性关系,对含量为5%~100%的驴奶建立了标准曲线。该方法具有良好的线性相关(R^2=0.9650)和较高的准确度,对含有20%、50%和80%驴奶的模拟掺假样品进行定量分析,平均回收率为109.16%,平均CV值为4.68%。因此,该方法可以快速、准确地对驴奶进行定量,从而确定驴奶是否掺假以及掺假比例。 展开更多
关键词 实时聚合酶链式反应(pcr) 定量检测 驴奶掺假 单拷贝核基因
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荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β_1和β_2肾上腺素能受体基因mRNA表达 被引量：1
9
作者 吴坛光 陈国忠 《临床军医杂志》 CAS 2008年第3期442-445,共4页
目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体（AR）基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ-Ⅱ级老年患者30例，分离外周静脉血淋巴细胞，采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达，并与半定量PCR检... 目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体（AR）基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ-Ⅱ级老年患者30例，分离外周静脉血淋巴细胞，采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达，并与半定量PCR检测结果进行比较。结果30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-ARmRNA表达，不同性别组同-基因表达量无显著差异（P〉0.05）；荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1—AR mRNA（P〈0．001），而半定量PCR随着循环次数增加，β1和β2-ARmRNA表达差异减小。结论所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达，有较高的灵敏性及特异性；半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断。 展开更多
关键词 荧光实时定量pcr β肾上腺素能受体mRNA 淋巴细胞 老年人
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糖尿病大鼠肺组织β_2肾上腺素能受体mRNA表达水平的研究
10
作者 翟聪颖 李廷天 +3 位作者 李哲 贾平东 王岩 杨艳平 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2010年第2期105-107,共3页
目的观察糖尿病大鼠肺组织β2肾上腺素能受体mRNA表达的变化。方法28只大鼠随机分为正常组和糖尿病组(腹腔注射链脲佐菌素建模)。采用实时荧光定量PCR检测肺组织β2肾上腺素能受体mRNA的表达,并进行比较。结果与正常大鼠比较,糖尿病组... 目的观察糖尿病大鼠肺组织β2肾上腺素能受体mRNA表达的变化。方法28只大鼠随机分为正常组和糖尿病组(腹腔注射链脲佐菌素建模)。采用实时荧光定量PCR检测肺组织β2肾上腺素能受体mRNA的表达,并进行比较。结果与正常大鼠比较,糖尿病组大鼠肺组织的β2受体mRNA的表达下调(P<0.01)。结论糖尿病大鼠肺组织β2受体mRNA的表达下降,可能是糖尿病肺功能受损的发病基础。 展开更多
关键词 荧光实时定量pcr糖尿病 Β2肾上腺素能受体
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利用实时荧光定量PCR法检测食品中鹌鹑源性成分 被引量：10
11
作者 罗建兴 海小 +3 位作者 刘国强 郭梁 徐伟良 李春冬 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第3期177-183,共7页
为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检... 为建立基于TaqMan实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在食品中的鹌鹑源性成分的定量检测方法,根据现行检验检疫标准(SN/T 2727-2010)合成引物及探针。首先对13种不同动物鲜肉组织的DNA进行鹌鹑源性成分特异性检测,然后对鹌鹑源性DNA模板原液进行梯度稀释,检测方法灵敏度,最后在加工制品中检测方法的适用性。研究结果表明:建立的方法特异性强,除鹌鹑肉外,牛、羊、猪、马、驴、狗、兔子、鸡、鸭、鸽子、火鸡、鱼12种动物鲜肉组织均无特异性扩增;方法的灵敏度较高,鹌鹑组分DNA的检出限可达10 fg/mL,灵敏度可达0.001%;方法的适用性较广,可以用于加工制品中鹌鹑源性成分的检测。 展开更多
关键词 TaqMan实时荧光pcr 食品 鹌鹑源性成分 特异性 灵敏度
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食品接触材料中3种致病菌的多重荧光PCR检测 被引量：3
12
作者 柯振华 张雅薇 +4 位作者 陈筱婷 林碧莲 孟鹏 高宇 戴明 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第23期134-141,共8页
建立并优化食品接触材料中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和副溶血性弧菌3种致病菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并模拟阳性样品进行检测。结果显示,该方法特异性良好,... 建立并优化食品接触材料中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和副溶血性弧菌3种致病菌的多重实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并模拟阳性样品进行检测。结果显示,该方法特异性良好,检测灵敏度均能达到10~3 CFU/mL,为食品接触材料的微生物检测提供技术保障。 展开更多
关键词 多重实时荧光聚合酶链式反应(pcr) 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 副溶血性弧菌 食品接触材料
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饲料微生物添加剂中地衣芽孢杆菌实时荧光PCR检测 被引量：2
13
作者 宋帆 傅德江 +3 位作者 黄姝玲 邱希斌 许任伟 林钊 《福建分析测试》 CAS 2020年第1期54-58,共5页
建立饲料添加剂中地衣芽孢杆菌实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并经实际样品检测。结果显示,该方法特异性良好,检测灵敏度均能达到103 CFU/mL,可用于饲料添加剂中地衣芽孢... 建立饲料添加剂中地衣芽孢杆菌实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法,评价此方法的特异性和灵敏度,并经实际样品检测。结果显示,该方法特异性良好,检测灵敏度均能达到103 CFU/mL,可用于饲料添加剂中地衣芽孢杆菌的快速检测。 展开更多
关键词 多重实时荧光聚合酶链式反应(pcr) 地衣芽孢杆菌 饲料添加剂
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鼻咽癌血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷的关系 被引量：9
14
作者 叶新芊 李金高 +1 位作者 龚晓昌 袁霞 《实用癌症杂志》 2007年第2期147-149,160,共4页
目的 探讨鼻咽癌血浆EB病毒（EBV）DNA水平与肿瘤负荷的关系。方法 收集经病理检查证实、无远处转移的初治鼻咽癌患者共98例,治疗前行鼻咽及全颈CT,应用PACS中的多边形测量工具,逐层勾画鼻咽原发灶肿瘤及颈部转移淋巴结,采用面积求和法... 目的 探讨鼻咽癌血浆EB病毒（EBV）DNA水平与肿瘤负荷的关系。方法 收集经病理检查证实、无远处转移的初治鼻咽癌患者共98例,治疗前行鼻咽及全颈CT,应用PACS中的多边形测量工具,逐层勾画鼻咽原发灶肿瘤及颈部转移淋巴结,采用面积求和法计算鼻咽原发灶肿瘤体积（TV）及颈部转移淋巴结体积（NV）,以TV和NV之和表示总肿瘤负荷（TNV）。应用荧光定量PCR技术检测其治疗前血浆EBV DNA水平。结果 全组TV、NV及TNV中位数（四分位数间距）分别为15.9cm^3（9.1～29.2cm^3）、17.1cm^3（0.7～64.1cm^3）、44.1cm^3（20.4～87.4cm^3）。全组血浆EBV DNA检出率为73.5%（72/98）,血浆EBVDNA水平中位数（四分位数间距）为3.6×104 copies/ml（2.0×103～3.6×105 copies/ml）。按TV分组：≤20cm^3、〉20cm^3者各58、40例,2组血浆EBV DNA水平中位数（四分位数间距）分别为9.5×103 copies/ml（0～1.6×105 copies/ml）、1.6×105 copies/ml（2.2×104～4.6×105 copies/ml）,有非常显著性差异（P=0.001）;按NV分组：≤20cm^3、〉20cm^3者各52、46例,2组血浆EBV DNA水平中位数（四分位数间距）分别为2.2×104 copies/ml（0～1.8×105 copies/ml）、1.0×105 copies/ml（6.2×103～5.4×105 copies/ml）,有显著性差异（P=0.033）;按TNV分组：≤40cm^3、〉40cm^3者各43、55例,2组血浆EBVDNA检出率分别为60.5%（26/43）、83.6%（46/55）,有显著性差异（P=0.010）;2组血浆EBVDNA水平中位数（四分位数间距）分别为1.7×104 copies/ml（0～1.3×105 copies/ml）、1.1×105 copies/ml（6.6×103～4.7×105 copies/ml）,有显著性差异（P=0.014）;血浆EBV DNA水平与TV、NV、TNV呈正相关关系。结论 鼻咽癌患者治疗前血浆EBV DNA水平可在一定程度上反映其体内肿瘤负荷。 展开更多
关键词 鼻咽癌 EB病毒DNA 荧光定量pcr 肿瘤负荷
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全氟辛烷磺酸(PFOS)对斑马鱼卵黄蛋白原mRNA水平的影响 被引量：10
15
作者 程艳 崔媛 +4 位作者 党志超 谢文平 李海山 殷缓缓 陈会明 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1865-1870,共6页
为了研究环境低剂量全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对水生生物的内分泌干扰效应和可能的作用机制,测定了PFOS对斑马鱼(Brachydanio rerio)肝脏中卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)mRNA水平的影响.将斑马鱼暴露于4个PFOS的环... 为了研究环境低剂量全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)对水生生物的内分泌干扰效应和可能的作用机制,测定了PFOS对斑马鱼(Brachydanio rerio)肝脏中卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)mRNA水平的影响.将斑马鱼暴露于4个PFOS的环境低剂量浓度组(0.1、1、10、100μg.L-1)中进行21d毒性试验,收集肝脏样品,提取RNA,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测VTG1和VTG3的mRNA水平.结果表明:①PFOS暴露引起雄性斑马鱼肝脏VTG1和VTG3 mRNA水平升高,VTG1 mRNA水平升高与剂量呈正相关,在100μg.L-1暴露浓度处与对照组呈现显著性差异;VTG3的mRNA水平变化与剂量呈倒U型曲线,呈现典型的毒物刺激荷尔蒙效应,在10和100μg.L-1暴露浓度处与对照组呈现显著性差异;②PFOS暴露引起雌性斑马鱼肝脏中VTG1 mRNA水平升高,在10μg.L-1暴露浓度处与对照组呈现显著性差异,但在高浓度(10和100μg.L-1)处试验结果误差较大;VTG3 mRNA水平只在10μg.L-1暴露浓度处升高,但相比于对照组均没有显著性差异.试验结果表明PFOS暴露对斑马鱼的内分泌干扰作用明显,其毒性作用机制可能是类雌激素效应,而肝脏中VTG1和VTG3mRNA水平可能作为PFOS内分泌干扰效应评价的敏感生物标志物,但VTG1和VTG3 mRNA水平的响应曲线呈现基因亚型和性别差异. 展开更多
关键词 全氟辛烷磺酸(PFOS) 斑马鱼(Brachydanio rerio) 卵黄蛋白原(VTG) MRNA水平 荧光定量pcr(qRT-pcr)
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食品中热损伤沙门氏菌选择性增菌及实时荧光聚合酶链式反应检测 被引量：10
16
作者 索标 滕要辉 +1 位作者 史贤明 艾志录 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第10期223-227,共5页
为了能够高效检测食品中的亚致死损伤沙门氏菌,首先采用热激胁迫的方法得到亚致死损伤沙门氏菌细胞,进而基于选择性增菌培养液SEL建立一种实时荧光聚合酶链式反应检测技术。结果表明:在SEL中经过20h增菌培养后,无论是否经过修复培养,1～... 为了能够高效检测食品中的亚致死损伤沙门氏菌,首先采用热激胁迫的方法得到亚致死损伤沙门氏菌细胞,进而基于选择性增菌培养液SEL建立一种实时荧光聚合酶链式反应检测技术。结果表明:在SEL中经过20h增菌培养后,无论是否经过修复培养,1～2CFU/5mL SEL的亚致死损伤细胞都能得到完全修复并增菌至109CFU/mL水平;依此建立的实时荧光聚合酶链式反应检测技术的纯菌扩增效率为95.41%,检测限为4CFU/反应体系,在人工污染碎食品样品中的检测限为3CFU/10g碎牛肉,而且与传统培养检测方法的结果相吻合。本方法在24h内即可完成食品中热损伤沙门氏菌的修复、选择性增菌以及实时荧光聚合酶链式反应检测,可应用于食品中沙门氏菌污染状况调查及高效检测。 展开更多
关键词 热损伤 沙门氏菌 选择性增菌 实时荧光聚合酶链式反应 检测
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食品中芥末过敏原成分LAMP检测方法的建立 被引量：9
17
作者 程晋霞 周熙诚 +2 位作者 马丹 刘莉 曾静 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第20期148-152,共5页
目的:建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法比对。方法:针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,... 目的:建立食品过敏原芥末成分环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法比对。方法:针对白芥的主要过敏原基因Sin A1,设计LAMP引物并建立反应体系,在特异性和灵敏度方面与RT-PCR检测方法比对。结果:建立的LAMP检测方法,经特异性验证,与所测试的13种植物,无交叉反应。通过添加实验,方法的检测灵敏度为0.5%,与RT-PCR方法检测灵敏度相当。检测了25份实际样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。结论:建立的食品过敏原芥末成分LAMP检测方法简单经济,检测结果可靠,可有效缩短检测时间,适用于芥末过敏原成分的检测,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 芥末 过敏原 环介导等温扩增 实时荧光-聚合酶链式反应
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荧光染料EMA在实时荧光PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用 被引量：7
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作者 祝儒刚 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第20期206-210,共5页
将荧光染料——叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time poly-merase chain reaction,RT-PCR)技术相结合,对其在RT-PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用进行研究。纯培养条件下... 将荧光染料——叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与实时荧光-聚合酶链式反应(real-time poly-merase chain reaction,RT-PCR)技术相结合,对其在RT-PCR定量检测海产品中致病性副溶血弧菌活细胞中的应用进行研究。纯培养条件下,在2.2×102～2.2×107CFU范围内细胞数的常用对数值与Ct值之间呈严格的负相关性,并且不添加EMA时的检测灵敏度(22CFU)略大于添加EMA(2.2×102CFU)时的检测灵敏度;人工污染牡蛎样品,利用RT-PCR和EMA RT-PCR以及平板计数法分别进行副溶血弧菌定量检测,结果表明EMA RT-PCR更接近于平板计数的结果,单纯RT-PCR定量的结果偏大;在采集的45份海产品样品中,不经富集培养,利用EMA RT-PCR方法仅有一份牡蛎样品呈阳性,牡蛎样品污染程度为114CFU/g。该方法能够快速、灵敏、准确地进行海产品中致病性副溶血弧菌活细胞的定量检测,具有很好的应用价值。 展开更多
关键词 叠氮溴乙锭(EMA) 实时荧光聚合酶链式反应(RT-pcr) 海产品 活细胞 副溶血弧菌检测
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实时荧光PCR法鉴定食品中双歧杆菌 被引量：7
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作者 肖其胜 杨捷琳 +2 位作者 杨惠琴 丁卓平 何宇平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第20期177-182,共6页
根据双歧杆菌属16S rRNA基因的保守区序设计特异性引物和探针,建立一种鉴定食品中双歧杆菌属的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法.对方法的特异性、灵敏度、重复性和体系抗干扰能力进行验证,最后采用该... 根据双歧杆菌属16S rRNA基因的保守区序设计特异性引物和探针,建立一种鉴定食品中双歧杆菌属的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法.对方法的特异性、灵敏度、重复性和体系抗干扰能力进行验证,最后采用该方法对市售25 份标示含双歧杆菌样品进行检测.结果表明：该检测方法可特异性检测双歧杆菌属细菌,对近缘的乳杆菌属、链球菌属及食品中常见菌群包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等均无扩增.双歧杆菌DNA检测绝对灵敏度可达到2 pg,相对灵敏度可达到104 CFU/mL.重复性测试表明相对标准偏差小于1%.同时进行了杂菌干扰检测实验,在培养物水平和纯基因组DNA水平上将青春双歧杆菌ATCC15703与大肠杆菌ATCC25922混合进行检测,检出Ct值较纯菌检测时无显著影响,表明建立的荧光PCR方法抗干扰能力良好.对25 份市售实际样品进行测试,有5 份标识含有“双歧杆菌”的样品未检测出双歧杆菌成分.本研究所建立的实时荧光PCR法能准确、快速检测食品中双歧杆菌属细菌. 展开更多
关键词 实时荧光聚合酶链式反应 双歧杆菌 16S核糖体RNA 鉴定
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复合调味粉中罂粟成分的实时荧光PCR检测方法 被引量：6
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作者 刘洋 张辉 +3 位作者 陆志芸 张清平 赵敏 曹程明 《中国调味品》 CAS 北大核心 2011年第7期93-96,120,共5页
研究建立了复合调味粉中罂粟成分检测的实时荧光PCR方法,检出限0.1%,灵敏度10pg,与高效液相色谱法比较,检出限更低,特异性更好。该方法可作为对复合调味粉中非法添加罂粟成分鉴定的检测方法,也可为其他罂粟相关方法研究提供借鉴和参考。
关键词 复合调味粉 罂粟 实时荧光pcr 高效液相色谱
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