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实时荧光定量PCR的发展和数据分析 被引量:86
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作者 纪冬 辛绍杰 《生物技术通讯》 CAS 2009年第4期598-600,共3页
实时荧光定量PCR技术是基因时代一项用于检测mRNA的常用技术,是临床检测和基础研究中不可缺少的重要研究方法,包括绝对定量PCR和相对定量PCR。该技术的特点是可以减少PCR后操作,在比较不同浓度的mRNA方面具有非常宽的动力学范围。我们... 实时荧光定量PCR技术是基因时代一项用于检测mRNA的常用技术,是临床检测和基础研究中不可缺少的重要研究方法,包括绝对定量PCR和相对定量PCR。该技术的特点是可以减少PCR后操作,在比较不同浓度的mRNA方面具有非常宽的动力学范围。我们就目前实时荧光定量PCR的发展及数据的分析进行综述。 展开更多
关键词 实时荧光pcr 定量分析 方法学
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荧光定量PCR数据处理方法的探讨 被引量:79
2
作者 唐永凯 贾永义 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期89-91,共3页
realtime RT-PCR通过直接检测指数扩增期的PCR产物来确定基因的初始模板量,是定量基因表达最灵敏的方法,其准确性取决于扩增效率以及数据的处理方法。目前最常用的两种分析荧光定量PCR实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量方... realtime RT-PCR通过直接检测指数扩增期的PCR产物来确定基因的初始模板量,是定量基因表达最灵敏的方法,其准确性取决于扩增效率以及数据的处理方法。目前最常用的两种分析荧光定量PCR实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量方法是通过标准曲线计算起始模板的拷贝数;相对定量方法则是比较处理过的样品和未处理过的样品目的基因之间的表达差异。而相对定量又有双标准曲线法,2-△△Ct法以及动力学法。该文介绍了这些方法的推导、假设及其应用。 展开更多
关键词 荧光定量pcr 绝对定量 相对定量
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环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)在丙型肝炎病毒基因检测中的应用 被引量:55
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作者 李启明 马学军 +4 位作者 周蕊 彭夫望 高寒春 匡治州 侯云德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期334-338,共5页
该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物,并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应,整个检测反应只需1~2h。利... 该文介绍了一种便捷、灵敏而又特异的环介导逆转录等温扩增基因检测技术,该技术分别使用特异对应于靶序列中8个基因区段的3对特殊引物,并在反转录酶和Bst-DNA聚合酶的作用下对靶序列进行等温核酸扩增反应,整个检测反应只需1~2h。利用这种技术成功检测了丙型肝炎病毒基因,对60份经Real-timePCR或RT—-PCR验证阳性的血清样品检测,阳性符合率为98%。同时,对扩增终产物进一步进行酶切分析,并与HIV、HBV和不同亚型流感病毒RNA进行交叉反应和特异性测试,均与预期结果吻合。将Real-timePCR定量后的RNA系列稀释后对检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示,该技术的检测灵敏度在理论上可达到10个拷贝的RNA分子。以上结果证明,RT-LAMP扩增技术是一种检测程序简单、灵敏度和特异性较高的基因检测手段,在丙型肝炎病毒的快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 环介导逆转录等温扩增 实时监控聚合酶链反应
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长期施肥对黑土农田土壤微生物群落的影响 被引量:64
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作者 魏巍 许艳丽 +2 位作者 朱琳 韩晓增 Li S 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期372-380,共9页
基于中国科学院海伦农业生态试验站长期定位试验区,应用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了无施肥(NF)、单施N、P化肥(NP)以及化肥配施有机猪粪肥(NPM)等3种长期施肥措施对黑土区玉米田土壤微生物群落密... 基于中国科学院海伦农业生态试验站长期定位试验区,应用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术研究了无施肥(NF)、单施N、P化肥(NP)以及化肥配施有机猪粪肥(NPM)等3种长期施肥措施对黑土区玉米田土壤微生物群落密度和结构的影响。Real-time PCR方法定量NF、NP及NPM措施土壤细菌群落基因组DNA质量分别为381、1 351和1 773 ng g-1干土,真菌群落基因组DNA质量分别113.3、127.3和20.6 ng g-1干土,真菌与细菌的比率分别为0.31、0.09和0.01,NPM措施显著低于另两种施肥方式(p<0.05)。DGGE方法研究表明,NP和NPM措施不能改善土壤细菌和真菌群落的多样性、均匀性及优势菌优势程度;但主成分分析结果显示NP和NPM措施均可改变土壤细菌和真菌群落的构成,且真菌群落的变化更为显著;聚类分析结果显示NP和NPM措施下细菌群落结构较相近,其相似系数为0.89,真菌群落中NP措施与NF措施相近,相似系数为0.63,高于NP与NPM措施的相似系数0.51。上述结果表明有机猪粪肥的长期施用可以显著降低黑土农田土壤真菌与细菌的比率,且明显地改变土壤细菌和真菌群落的结构。 展开更多
关键词 长期施肥 土壤微生物群落 real-time pcr DGGE
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不同施肥模式对绿洲农田土壤微生物群落丰度与酶活性的影响 被引量:63
5
作者 李晨华 贾仲君 +2 位作者 唐立松 吴宇澄 李彦 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期567-574,共8页
以中国科学院阜康荒漠生态系统国家野外观测研究站的长期定位试验为平台,利用荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术,对不同施肥模式下的土壤微生物群落丰度进行了测定,并分析了土壤酶活性。结果表明:与无肥处理(CK)相比,20年长期单施化肥... 以中国科学院阜康荒漠生态系统国家野外观测研究站的长期定位试验为平台,利用荧光实时定量PCR(Real-time PCR)技术,对不同施肥模式下的土壤微生物群落丰度进行了测定,并分析了土壤酶活性。结果表明:与无肥处理(CK)相比,20年长期单施化肥(CF)或者化肥配施秸秆(CF/OM)处理均显著增加了土壤氨氧化古菌(AOA)与氨氧化细菌(AOB)的丰度。其中,土壤AOB最低增加了16倍,而AOA最多增加了3倍,表明AOB可能在原位土壤氨氧化过程中发挥了更为重要的作用。尽管CF/OM处理的作物产量与CF处理无显著差异,但该施肥模式在维持作物产量的同时,其土壤微生物主要类群(真核微生物、细菌、古菌)数量最大,土壤有机碳含量最高,大多土壤酶活性高于其他处理,表明化肥配施有机肥有利于保持土壤微生物多样性,对于提高土壤质量具有重要作用。 展开更多
关键词 长期施肥 灰漠土 微生物丰度 酶活性 荧光实时定量pcr
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北京地区腹泻病患者致泻性大肠埃希菌感染类型及其流行特征 被引量:63
6
作者 曲梅 张新 +6 位作者 钱海坤 吕冰 黄瑛 严寒秋 梁志超 贾蕾 王全意 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1123-1126,共4页
目的:了解北京地区腹泻人群中致泻性大肠埃希菌(DEC)毒力基因的分布及流行特征。方法对2012-2013年监测医院的腹泻患者粪便样本进行分离培养,再采用实时荧光PCR检测毒力基因。结果6370份粪便标本有253份阳性,共分离到DEC 262株,... 目的:了解北京地区腹泻人群中致泻性大肠埃希菌(DEC)毒力基因的分布及流行特征。方法对2012-2013年监测医院的腹泻患者粪便样本进行分离培养,再采用实时荧光PCR检测毒力基因。结果6370份粪便标本有253份阳性,共分离到DEC 262株,阳性检出率为4.0%(253/6370),9份标本发现两种不同型别的DEC混合感染。肠致病性大肠埃希菌(EPEC)为42.8%,其中非典型EPEC占42.0%,典型EPEC占0.8%;肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)为38.9%,其中耐热肠毒素基因st阳性占24.8%,不耐热型肠毒素基因lt阳性占9.9%,st和lt均阳性占4.2%;肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)为15.3%;肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)为2.7%;检出1株产志贺毒素大肠埃希菌(STEC),血清型为O26∶K60。ETEC感染具有明显的年龄分布特征;各型DEC全年均有检出,且呈季节性变化。结论北京地区腹泻病患者DEC感染类型以EPEC和ETEC为主,且EPEC分离株多为非典型,并存在混合感染,不同型别DEC感染具有年龄和季节性分布特征。 展开更多
关键词 致泻性大肠埃希菌 毒力基因 实时荧光pcr
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盐酸米诺环素软膏治疗急性智齿冠周炎的临床效果和微生物学评价 被引量:52
7
作者 张贤华 杜岩 +1 位作者 沈辉 欧龙 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期74-77,共4页
目的:观察盐酸米诺环素软膏治疗急性冠周炎的临床效果和冠周袋内细菌的变化。方法:选择第三磨牙急性冠周炎患者70例,分为2组(n=35)。盲袋内冲洗后试验组盲袋内导入盐酸米诺环素软膏;对照组导入碘甘油。观察临床疗效,同时进行冠周袋内细... 目的:观察盐酸米诺环素软膏治疗急性冠周炎的临床效果和冠周袋内细菌的变化。方法:选择第三磨牙急性冠周炎患者70例,分为2组(n=35)。盲袋内冲洗后试验组盲袋内导入盐酸米诺环素软膏;对照组导入碘甘油。观察临床疗效,同时进行冠周袋内细菌革兰氏染色,观察细菌浓度和螺旋体、G+菌、G-菌所占比例的变化,对盲袋内细菌总量进行实时荧光定量PCR法检测治疗前后的变化。结果:试验组和对照组临床有效率分别为94.29%和74.29%(P<0.05)。治疗后2组细菌浓度、螺旋体比例、G-的比例均显著下降(P<0.01),试验组均少于对照组(P<0.01)。2组G+菌的比例(%)治疗后上升(P<0.01),试验组高于对照组(P<0.01)。治疗后2组细菌总量(经对数转换)均下降(P<0.01),试验组少于对照组(P<0.01)。结论:盐酸米诺环素软膏可有效控制冠周组织炎症,缓解局部疼痛、肿胀等症状,同时降低冠周袋内微生物的浓度以及G-菌和螺旋体的构成比,说明盐酸米诺环素软膏可以有效控制冠周感染。 展开更多
关键词 冠周炎 盐酸米诺环素软膏 实时荧光定量pcr
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食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立 被引量:40
8
作者 金大智 谢明杰 曹际娟 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第1期73-76,共4页
运用实时荧光PCR(Real timePCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法,设计的引物和探针的序列特异性强,省去凝胶电泳的繁琐,降低了污染的可能性.在对26种病原菌进行检测过程中,运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较,结果... 运用实时荧光PCR(Real timePCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法,设计的引物和探针的序列特异性强,省去凝胶电泳的繁琐,降低了污染的可能性.在对26种病原菌进行检测过程中,运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较,结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌,更快速、敏感、特异性更高. 展开更多
关键词 食品鉴定 单核细胞增生性李斯特氏菌 实时荧光pcr检测方法 经典培养法 病原菌 食物中毒
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冠心病患者肠道菌群分布及其与尿酸代谢的关系分析 被引量:50
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作者 王玲 李群 《现代消化及介入诊疗》 2012年第6期327-330,共4页
目的探讨冠心病患者的肠道菌群变化及肠道菌群对尿酸的分解活性之间的相关性。方法选取2008年1月至2011年6月冠心病患者粪便标本及血清标本60例及正常对照标本35例,运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应测定肠道菌群数量以进行菌群分析... 目的探讨冠心病患者的肠道菌群变化及肠道菌群对尿酸的分解活性之间的相关性。方法选取2008年1月至2011年6月冠心病患者粪便标本及血清标本60例及正常对照标本35例,运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应测定肠道菌群数量以进行菌群分析,运用酶比色法检测粪便尿酸含量,磷钨酸法检测血尿酸水平。结果患者组粪便中肠道细菌总负荷明显增加,其中,双歧杆菌及乳酸杆菌明显减少(P<0.05);大肠杆菌、幽门螺杆菌、链球菌均明显增加,以链球菌更为明显(P<0.05)。患者组肠道菌群对尿酸的分解活性及血尿酸水平均明显升高,肠道菌群对尿酸的分解活性与粪便标本中细菌总负荷及大肠杆菌含量呈正相关,以与大肠杆菌含量的相关性明显,并与血尿酸水平呈正相关(P<0.05)。结论冠心病患者存在肠道菌群紊乱,并与肠道细菌对尿酸的代谢活性相关,提示肠道菌群的变化与冠心病的发生及发展机理有一定关系,肠道菌群失衡可能是促进冠心病发生的原因之一,肠道菌群对尿酸的代谢能力可能参与这一致病过程。 展开更多
关键词 冠心病 肠道菌群 实时荧光定量pcr 尿酸代谢
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实时荧光定量PCR技术研究进展及应用 被引量:39
10
作者 张贺 李波 +1 位作者 周虚 谭建华 《动物医学进展》 CSCD 2006年第z1期5-12,共8页
实时荧光定量PCR(Real-time fluo-rescent quantitative polymerase chain reac-tion,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点。文... 实时荧光定量PCR(Real-time fluo-rescent quantitative polymerase chain reac-tion,Real-time PCR)技术是20世纪90年代中期发展起来的一种新型核酸定量技术。它利用荧光实时检测PCR反应,具有灵敏度高、特异性强、节约时间等优点。文章就常用的4种方法,即DNA结合染色、水解探针、分子信标和杂交探针的原理和特点进行介绍,同时综述了荧光定量PCR技术在实践中的应用。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 应用
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长期施肥对红壤性水稻土细菌群落结构和数量的影响 被引量:48
11
作者 袁红朝 秦红灵 +3 位作者 刘守龙 童成立 魏文学 吴金水 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第22期4610-4617,共8页
【目的】通过对土壤细菌数量和多样性的研究,揭示长期不同施肥制度对土壤微生物生态的影响规律,为中国稻田土壤科学施肥、维护健康土壤微生物生态系统及农业可持续发展等方面提供重要理论和实践依据。【方法】采用末端限制性片段长度多... 【目的】通过对土壤细菌数量和多样性的研究,揭示长期不同施肥制度对土壤微生物生态的影响规律,为中国稻田土壤科学施肥、维护健康土壤微生物生态系统及农业可持续发展等方面提供重要理论和实践依据。【方法】采用末端限制性片段长度多态性分析(T-RFLP)和实时定量(real-time)PCR方法,研究湖南省望城县施用化肥(NPK)和秸秆还田(NPKS)对水稻土细菌群落结构及其多样性和数量的影响。【结果】T-RFLP分析结果表明红壤性水稻土细菌的优势类群为变形菌(150 bp;相对丰度33%—37%)和放线菌(67 bp;相对丰度20%—25%),施肥对土壤细菌群落结构及其多样性产生了显著影响。典范对应分析(CCA)表明不同处理间细菌群落结构差异显著,而土壤pH和有机碳是影响土壤细菌群落结构的主要因子。多样性指数分析(香农指数和均匀度指数)显示秸秆还田处理的土壤细菌多样性最高,施肥处理(氮磷钾配施和秸秆还田)的土壤细菌多样性均高于不施肥处理。通过实时PCR技术定量了3种施肥处理的土壤细菌数量(4.34×1010—10.94×1010个拷贝16S rDNA每克土),与不施肥相比,施肥后土壤细菌数量增加了50%—100%。【结论】长期施肥对红壤性水稻土细菌群落结构及其多样性和数量均产生了深刻的影响,长期化肥和秸秆还田,土壤质量和土壤肥力提高,土壤细菌种群多样性和数量显著增加。 展开更多
关键词 稻田 施肥 细菌群落结构 多样性 T-RFLP real-timepcr
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实时荧光定量PCR标准品的制备及应用 被引量:37
12
作者 罗勇军 刘昕 《重庆医学》 CAS CSCD 2005年第3期414-415,共2页
目的 探讨并建立快速而准确用于实时荧光定量PCR标准品的方法。方法 通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳,胶回收,T A克隆,测序后,大量提取质粒,送公司定量。结果 获得了预期希望的质粒。结论 该方法能大量制备质粒... 目的 探讨并建立快速而准确用于实时荧光定量PCR标准品的方法。方法 通过培养细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA后做PCR,电泳,胶回收,T A克隆,测序后,大量提取质粒,送公司定量。结果 获得了预期希望的质粒。结论 该方法能大量制备质粒标准品,在实验中取得较满意的效果。 展开更多
关键词 实时荧光定量pcr 标准品 TAQMAN探针
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水稻白叶枯病菌和水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR快速检测鉴定 被引量:33
13
作者 廖晓兰 朱水芳 +2 位作者 赵文军 罗宽 漆艳香 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期626-634,共9页
成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行... 成功建立了水稻白叶枯菌与水稻细菌性条斑病菌快速检测鉴定的实时荧光PCR方法。根据含铁细胞接受子基因设计两菌的通用引物PSRGF PSRGR(扩增一个 1 5 2bpDNA片段 )和特异性探针 (Baiprobe和Tiaoprobe) ,并对 1 3种细菌和 1种植原体进行实时荧光PCR。结果表明 ,两个特异性探针能分别特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其它参考菌不产生荧光信号。检测的绝对灵敏度是 3 0 .6fg μL质粒DNA和 1 0 3CFU mL的菌悬浮液 ,相当于 1个细菌细胞的基因 ,比常规PCR电泳检测高约 1 0 0倍 ,相对灵敏度为 1 0 5CFU mL。整个检测过程只需 2h ,完全闭管 ,降低了污染的机会 ,无需PCR后处理。用这两个特异性探针分别对自然感染白叶枯菌和条斑菌的叶片DNA提取液和种子浸泡液进行实时荧光PCR ,结果均可特异性检测到目标菌的存在并完全可将两种病原细菌区分开来 ,且只需 0 3g叶片和 1 展开更多
关键词 水稻白叶枯病菌 水稻细菌性条斑病菌 实时荧光pcr 检测
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生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和短短芽孢杆菌数量的影响 被引量:44
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作者 陈巧玲 胡江 +5 位作者 汪汉成 王茂胜 刘艳霞 石俊雄 杨兴明 沈其荣 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期75-79,共5页
采用荧光定量PCR方法,研究了生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和拮抗菌动态变化的影响。结果表明:施用生物有机肥显著降低了抗病品种‘K326’和感病品种‘南江三号’烟草青枯病的发病率,促进了烟草生长,生物量增加14%以上;只接种病... 采用荧光定量PCR方法,研究了生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和拮抗菌动态变化的影响。结果表明:施用生物有机肥显著降低了抗病品种‘K326’和感病品种‘南江三号’烟草青枯病的发病率,促进了烟草生长,生物量增加14%以上;只接种病原菌处理(RS)土壤中青枯病原菌的fliC基因拷贝数显著高于先接种病原菌再施用生物有机肥处理(RS+BIO)和先施用生物有机肥后接种病原菌处理(BIO+RS),且这种效应与生育期和品种无关;旺盛生长期前,施用生物有机肥处理土壤中短短芽孢杆菌16S rDNA基因拷贝数也显著高于RS处理。上述结果表明,施用生物有机肥防治烟草青枯病主要是通过抑制土壤青枯菌的增长和促进植物生长来实现的。 展开更多
关键词 生物有机肥 烟草青枯病 生物防治 荧光定量pcr 短短芽孢杆菌
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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量:40
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作者 胡晓红 彭惠民 +2 位作者 刘昕 黄正根 袁科 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-158,共4页
目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 展开更多
关键词 DNA提取 pcr 实时荧光定量pcr
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绵羊肌肉LPL基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响 被引量:37
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作者 乔永 黄治国 +5 位作者 李齐发 刘振山 代蓉 谢庄 郝称莉 刘红林 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期2323-2330,共8页
【目的】研究绵羊肌肉中脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因mRNA的发育性变化规律及其对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只(120日龄只有新疆细毛羊),屠宰后取背最长肌检测... 【目的】研究绵羊肌肉中脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)基因mRNA的发育性变化规律及其对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只(120日龄只有新疆细毛羊),屠宰后取背最长肌检测肌内脂肪含量,用荧光实时定量PCR法检测肌肉LPL基因mRNA表达水平,分析在不同时期的变化及其与肌内脂肪含量的关系。【结果】随着日龄的增加,雄性哈萨克羊的IMF(IntramuscularFat)含量持续上升,各生长时期差异显著(P<0.05),而新疆细毛羊的IMF含量在各生长时期无显著差异(P>0.05),雄性哈萨克羊的IMF含量30~90d期间极显著高于新疆细毛羊(P<0.01);雄性哈萨克羊肌肉LPL基因的表达量在2日龄时最高,60日龄时降到最低,然后逐渐上升,2日龄时LPL表达量极显著高于其它日龄(P<0.01)。新疆细毛羊的表达量在2日龄时较低,30日龄时升到最高,随后下降,到90日龄时降到最低,然后又逐渐上升;30日龄表达量与2、90、120日龄差异极显著(P<0.01),与60日龄差异显著(P<0.05);60日龄表达量与2、90、120日龄差异显著(P<0.05);哈萨克羊LPL基因2~60日龄的表达量与IMF含量呈负相关,相关系数为-0.625(P<0.05);新疆细毛羊IMF含量与LPL基因表达量无显著相关性。【结论】新疆细毛羊和哈萨克羊背最长肌肌内脂肪沉积的发育性变化不同,在生长发育早期,哈萨克羊随日龄的增加其IMF上升,新疆细毛羊在各时期保持一个稳定的水平;LPL基因在哈萨克羊生长早期对其肌内脂肪的沉积可能有负调控作用,而对新疆细毛羊无明显作用。 展开更多
关键词 绵羊 肌内脂肪 脂蛋白脂酶 荧光实时定量pcr
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实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平 被引量:37
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作者 李扬秋 杨力建 +5 位作者 陈少华 陈嘉愉 刘薇薇 王震 张玉平 吴秀丽 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2001年第6期397-400,共4页
目的 了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量 ,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能 .方法 利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和 3例成人... 目的 了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除DNA环 (sjTRECs)的含量 ,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能 .方法 利用实时定量PCR和TaqMan方法检测 11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和 3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平 .结果 正常人中sjTRECs含量分别为 :8.83±4.81/ 10 0 0个外周血单个核细胞 ;2 7.31± 3.2 3/ 10 0 0个成人胸腺细胞和 170 .2 9± 5 9.5 2 / 10 0 0个儿童胸腺细胞 .结论 sjTRECs水平与年龄有关 ,正常人外周血中每 10 0 0个单个核细胞中约含 4. 展开更多
关键词 sjTRECs 幼稚T细胞 胸腺细胞 实时定量pcr
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温州市2009年-2014年流感监测结果分析 被引量:39
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作者 陈栋 孙宝昌 +3 位作者 虞成超 吴可可 潘琼娇 魏晶娇 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第4期565-567,共3页
目的对2009年-2014年温州市流感监测结果的病原学型别及流行病学特征进行分析,为流感的防控提供依据。方法采用实时荧光定量PCR对流感监测哨点医院采集的流感样病例(ILI)鼻咽拭子标本进行核酸检测,并对结果进行统计和分析。结果 2009... 目的对2009年-2014年温州市流感监测结果的病原学型别及流行病学特征进行分析,为流感的防控提供依据。方法采用实时荧光定量PCR对流感监测哨点医院采集的流感样病例(ILI)鼻咽拭子标本进行核酸检测,并对结果进行统计和分析。结果 2009年-2014年哨点医院共监测门急诊病例7 885 356例,其中ILI 291 151例,占3.69%。6年共检测样本4 726份,阳性684份,阳性率为14.47%,检出的流感型别中以乙型最多,新型H1N1次之;5个年龄组中,6岁-15岁组阳性率最高(27.10%)。结论本市6年流感病毒流行以冬季、春季高发,夏季伴有小高峰,主要以乙型、新型H1N1型、H3型3个亚型交替流行为主;流感监测和预防控制取得一定成果;重点需加强学龄前儿童和中小学生的流感防治工作。 展开更多
关键词 流感监测 流感病毒 实时荧光定量pcr
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婴幼儿病毒性腹泻985例粪便标本分析研究 被引量:37
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作者 刘志华 龚四堂 +3 位作者 钟家禹 王长兵 朱冰 何婉儿 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第8期618-621,共4页
目的探讨婴幼儿病毒性腹泻的流行现状与流行特点。方法采集2008-08-01—2009-07-31广州市儿童医院就诊的急性腹泻患儿粪便标本并记录其病情信息,运用实时荧光定量PCR法对采集的985例患儿粪便标本进行轮状病毒(HRV)、肠道腺病毒(EADV)、... 目的探讨婴幼儿病毒性腹泻的流行现状与流行特点。方法采集2008-08-01—2009-07-31广州市儿童医院就诊的急性腹泻患儿粪便标本并记录其病情信息,运用实时荧光定量PCR法对采集的985例患儿粪便标本进行轮状病毒(HRV)、肠道腺病毒(EADV)、诺如病毒(NORV),扎如病毒(SPAV)、星状病毒(ASTV)检测。结果腹泻病毒的年检出率为45.9%,混合感染率为22.8%,未发现GI组NORV株,单月中11月检出率最高76.3%,HRV、NORV、EADV、ASTV、SPAV的年检出率分别是28.0%、13.7%、8.8%、4.9%、1.0%,95%的阳性标本来自2岁以下婴幼儿,水样便、呕吐、发热的发生率为88.9%、75.2%与68.4%。结论病毒性腹泻是本地季节性婴幼儿急性腹泻常见原因,10~12月是发病高峰,2岁以下婴幼儿是主要的流行人群,HRV是最重要的病原体,水样便、发热、呕吐是婴幼儿病毒性腹泻的三联症。混合感染较常见但其症状较单一感染可能并未加重。 展开更多
关键词 病毒性腹泻 轮状病毒 混合感染 实时荧光定量pcr
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茶树新梢不同叶片中β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因表达的实时定量PCR分析 被引量:30
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作者 赵丽萍 陈亮 +1 位作者 王新超 姚明哲 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期11-16,共6页
在建立茶树基因表达绝对定量实时PCR检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>... 在建立茶树基因表达绝对定量实时PCR检测方法后,检测了龙井43新梢不同部位叶片中的β-葡萄糖苷酶和β-樱草糖苷酶基因的表达情况,结果表明β-葡萄糖苷酶在一芽五叶新梢的第四叶中表达活性最高,为2.86E+08拷贝/μl,第四叶>第三叶>第五叶>第二叶>一芽一叶;而β-樱草糖苷酶基因在一芽一叶中最高,为4.31E+06拷贝/μl,一芽一叶>第二叶>第三叶>第四叶>第五叶。与茶叶香气密切相关两个基因在茶树不同部位的叶片中表达量和表达类型存在明显差异。本实验建立的实时荧光定量PCR可有效地用于茶树基因表达的定量分析。 展开更多
关键词 茶树 Β-葡萄糖苷酶 β-樱草糖苷酶 实时定量pcr
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