目的建立卡西酮、甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮的LC-MS/MS定性定量分析方法。方法采用Agilent6460三重串联四极杆液质联用仪(LC/QQQ),样品用甲醇直接提取,采用Agilent Zorbax○R Eclipse Plus C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm),流动相为...目的建立卡西酮、甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮的LC-MS/MS定性定量分析方法。方法采用Agilent6460三重串联四极杆液质联用仪(LC/QQQ),样品用甲醇直接提取,采用Agilent Zorbax○R Eclipse Plus C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸和乙腈,梯度洗脱,流速为0.3mL/min,进样体积为3μL。质谱应用ESI源、正离子模式、多反应监测(MRM)方式检测卡西酮、甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮。结果卡西酮的线性范围为1ng/mL^25000ng/mL,甲卡西酮的线性范围为0.1ng/mL^10000ng/mL,4-甲基甲卡西酮的线性范围为1ng/mL^10000ng/mL。结论该方法简单、准确,灵敏度高,可以满足案件鉴定工作的需要。展开更多
选用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)基因组中序列特异性很高的p16基因为目标基因,通过设计引物、PCR扩增、目的片段与载体连接转化获得含p16基因的重组质粒进行测序,进而以经测序鉴定的p16基因的PCR纯化产物作为实时荧光定量PCR标准品模板...选用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)基因组中序列特异性很高的p16基因为目标基因,通过设计引物、PCR扩增、目的片段与载体连接转化获得含p16基因的重组质粒进行测序,进而以经测序鉴定的p16基因的PCR纯化产物作为实时荧光定量PCR标准品模板,稀释后建立SYBR Green I荧光定量标准曲线,统计分析显示标准品浓度的对数值与Ct值之间存在良好的线性关系(R2=0.9981)。该方法的检测灵敏度为102,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间变异系数均小于3%。同时分别对含有其他茶树害虫病毒和不同浓度的茶尺蠖病毒产品的样品进行检测,能明确样品中是否含有EoNPV及含量。根据已建立的方法对感染病毒后不同时间段的茶尺蠖幼虫进行检测,每克幼虫样本内p16基因拷贝数的增殖倍数对数值与感染时间呈正相关(R2=0.9935),可以获得茶尺蠖幼虫感染病毒后不同时间的增殖动态。上述结果表明,该方法能定性定量鉴定茶尺蠖核型多角体病毒,可用于茶尺蠖核型多角体病毒类生物农药的检测和感染过程检测。展开更多
文摘目的建立卡西酮、甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮的LC-MS/MS定性定量分析方法。方法采用Agilent6460三重串联四极杆液质联用仪(LC/QQQ),样品用甲醇直接提取,采用Agilent Zorbax○R Eclipse Plus C18色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸和乙腈,梯度洗脱,流速为0.3mL/min,进样体积为3μL。质谱应用ESI源、正离子模式、多反应监测(MRM)方式检测卡西酮、甲卡西酮、4-甲基甲卡西酮。结果卡西酮的线性范围为1ng/mL^25000ng/mL,甲卡西酮的线性范围为0.1ng/mL^10000ng/mL,4-甲基甲卡西酮的线性范围为1ng/mL^10000ng/mL。结论该方法简单、准确,灵敏度高,可以满足案件鉴定工作的需要。
文摘选用茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)基因组中序列特异性很高的p16基因为目标基因,通过设计引物、PCR扩增、目的片段与载体连接转化获得含p16基因的重组质粒进行测序,进而以经测序鉴定的p16基因的PCR纯化产物作为实时荧光定量PCR标准品模板,稀释后建立SYBR Green I荧光定量标准曲线,统计分析显示标准品浓度的对数值与Ct值之间存在良好的线性关系(R2=0.9981)。该方法的检测灵敏度为102,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间变异系数均小于3%。同时分别对含有其他茶树害虫病毒和不同浓度的茶尺蠖病毒产品的样品进行检测,能明确样品中是否含有EoNPV及含量。根据已建立的方法对感染病毒后不同时间段的茶尺蠖幼虫进行检测,每克幼虫样本内p16基因拷贝数的增殖倍数对数值与感染时间呈正相关(R2=0.9935),可以获得茶尺蠖幼虫感染病毒后不同时间的增殖动态。上述结果表明,该方法能定性定量鉴定茶尺蠖核型多角体病毒,可用于茶尺蠖核型多角体病毒类生物农药的检测和感染过程检测。
