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Protective Effects of Quercetin on Cadmium-induced Cytotoxicity in Primary Cultures of Rat Proximal Tubular Cells 被引量:8
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作者 WANG Lin LIN Shu Qian +2 位作者 HE Yuan Long LIU Gang WANG Zhen Yong 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 2013年第4期258-267,共10页
Objective To investigate the protective effects of quercetin on cadmium-induced cytotoxicity in primary cultures of rat proximal tubular (rPT) cells. Methods Primary cultures of rPT cells undergoing exponential grow... Objective To investigate the protective effects of quercetin on cadmium-induced cytotoxicity in primary cultures of rat proximal tubular (rPT) cells. Methods Primary cultures of rPT cells undergoing exponential growth were incubated with 1.0 ug/mL quercetin and/or cadmium (2.5, 5.0 umol/L), in a serum-free medium at 37℃ at different time intervals. Commercial kits were used and flow cytometric analyses were performed on rPT cell cultures to assay apoptosis and oxidative stress. Results Exposure of rPT cells to cadmium acetate (2.5, 5.0 umol/L) induced a decrease in cell viability, caused an increase in apoptotic rate and apoptotic morphological changes. Simultaneously, elevation of intracellular reactive oxygen species, malondialdehyde and calcium levels, depletion of mitochondrial membrane potential and intracellular glutathione, and inhibition of Na+, K+ -ATPase, Ca2+ -ATPase, glutathione peroxidase (GSH-Px), catalase (CAT), and superoxide dismutase (SOD) activities were revealed during the cadmium exposure of rPT cells. However, simultaneous supplementation with 1 ug/mL quercetin protected rPT cells against cadmium-induced cytotoxicity through inhibiting apoptosis, attenuating lipid peroxidation, renewing mitochondrial function and elevating the intracellular antioxidants (non-enzymatic and enzymic) levels. Conclusion The present study has suggested that quercetin, as a widely distributed dietary antioxidant, contributes potentially to prevent cadmium-induced cytotoxicity in rPT cells. 展开更多
关键词 CADMIUM QUERCETIN Oxidative stress APOPTOSIS proximal tubular cells Primary cell culture
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NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响 被引量:6
2
作者 罗昌霞 张建鄂 +3 位作者 张庆红 李涛 陈志强 费沛 《郧阳医学院学报》 2004年第6期332-335,共4页
目的研究NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响。方法去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20mg/ml分别加入到体外培养的肾小管上皮细胞和加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内,EMSA、RT-PCR检测不同时限NF-... 目的研究NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响。方法去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20mg/ml分别加入到体外培养的肾小管上皮细胞和加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内,EMSA、RT-PCR检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达情况。结果去脂的小牛血清白蛋白可刺激肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加,骨桥蛋白mRNA表达上调,而提前加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下降。结论尿白蛋白诱导小管上皮细胞损伤的机制与诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA增加有关,而且骨桥蛋白转录由NF-κB调控。 展开更多
关键词 白蛋白类 肾小管上皮细胞 NF-KB 骨桥蛋白
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重组人骨桥蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞向间质细胞转化的研究 被引量:2
3
作者 邓仲磊 徐东亮 +3 位作者 谭若芸 鲁佩 张炜 顾民 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期500-503,共4页
目的观察骨桥蛋白(oPN)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)向间质细胞转化(EMT)的影响。方法依据加入的重组人骨桥蛋白(rhOPN)的浓度,将HK-2细胞分成6组,rh0PN的浓度依次为:0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/L,刺激... 目的观察骨桥蛋白(oPN)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)向间质细胞转化(EMT)的影响。方法依据加入的重组人骨桥蛋白(rhOPN)的浓度,将HK-2细胞分成6组,rh0PN的浓度依次为:0.00、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/L,刺激时间为48h。采用共聚焦显微镜观察细胞形态学变化;实时定量聚合酶链反应(PCR)、Westernblot检测E-钙黏素(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)的表达;应用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡。结果在形态学上,rhOPN能够刺激HK-2细胞向间质细胞转变,通过实时定量PCR、Westernblot分析发现上皮细胞的表面标记E—cad随着刺激浓度的增加而逐渐降低,间质细胞的标记物α-SMA、FN的表达逐渐升高,实时定量PCR检测E.cad依次为:1947.0±301.0、1114.0±187.4、668.7±180.4、436.7±121.8、242.7±105.2、223.5±73.4;d.SNA依次为:0.01465±0.00338、0.03428±0.01200、0.06034±0.00565、0.09205±0.01068、0.11360±0.01892、0.18630±0.02175;FN依次为:0.000818±0.000103、0.001341±0.000203、0.001708±0.000128、0.002170±0.000161、0.003369±0.000314、0.004961±0.000364。Westernblot检测E.cad依次为:1.719±0.159、1.370±0.016、1.238±0.031、0.916±0.056、0.520±0.065、0.456±0.073;d-SMA依次为:0.623±0.127、0.640±0.031、0.865±0.045、1.015±0.107、1.290±0.103、1.381±0.040;FN依次为:0.475±0.044、0.499±0.062、0.904±0.066、0.981±0.052、1.272±0.093、1.614±0.056,各组之间差异有统计学意义(均P〈0.05),且随着OPN刺激浓度的增加,细胞的抗凋亡能力也逐渐增强。结论OPN能够刺激HK-2细胞向间质细胞转化,且呈现出明显的剂量依赖性。 展开更多
关键词 骨桥蛋白 肾小管 上皮细胞 间质细胞 脱噬作用
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中毒性急性肾衰早期肾近曲小管上皮细胞细胞骨架的改变 被引量:1
4
作者 罗正茂 张训 侯凡凡 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期228-231,共4页
目的 :了解中毒性急性肾衰 (ARF)早期肾近曲小管上皮细胞 (PTC)细胞骨架微丝和微管的改变 ,并探讨其改变的机制。方法 :采用皮下注射氯化汞建立中毒性ARF模型 ,用免疫组化和电镜法观察中毒 6h和 12hPTC细胞骨架微丝和微管的改变 ,并用... 目的 :了解中毒性急性肾衰 (ARF)早期肾近曲小管上皮细胞 (PTC)细胞骨架微丝和微管的改变 ,并探讨其改变的机制。方法 :采用皮下注射氯化汞建立中毒性ARF模型 ,用免疫组化和电镜法观察中毒 6h和 12hPTC细胞骨架微丝和微管的改变 ,并用高效液相色谱法测试细胞内ATP水平。结果 :免疫组化显示微丝随着中毒时间的延长 ,PTC刷状缘损伤逐渐加重 ,胞浆内有片状肌动蛋白分布 ;电镜示中毒 6h微绒毛变成球形小体 ,中毒 12h微绒毛部分缺失 ;免疫组化微管示中毒 6hPTC严重受损 ,着色变浅、不规则 ,中毒 12h着色部分恢复 ;细胞内ATP水平随着中毒时间延长而逐渐下降。结论 :中毒性ARF时 ,PTC细胞骨架微丝和微管发生变化 ,微丝的改变可能与细胞内ATP水平相关。 展开更多
关键词 急性肾功能衰竭 肾近曲小管上皮细胞 细胞骨架
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稳转GFP-RAB7的肾小管上皮细胞在缺氧状态下RAB7的表达及位置变化 被引量:1
5
作者 余文敏 张晓毅 +2 位作者 王智 陈平圣 窦骏 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2015年第5期710-714,共5页
目的:了解缺氧状态下RAB7蛋白在稳转GFP-RAB7表达载体的肾小管上皮细胞中的表达及位置变化,验证其对细胞自噬与内吞现象的指示作用。方法:构建GFP-RAB7表达融合蛋白慢病毒载体转染肾小管上皮细胞(HK-2),缺氧处理后,采用RT-qPCR、蛋白质... 目的:了解缺氧状态下RAB7蛋白在稳转GFP-RAB7表达载体的肾小管上皮细胞中的表达及位置变化,验证其对细胞自噬与内吞现象的指示作用。方法:构建GFP-RAB7表达融合蛋白慢病毒载体转染肾小管上皮细胞(HK-2),缺氧处理后,采用RT-qPCR、蛋白质印迹技术和激光共聚焦技术检测外源基因RAB7在细胞内的表达及位置的变化。结果:成功将GFP-RAB7基因的表达载体转染到HK-2细胞中,并获得稳定表达GFP-RAB7蛋白的HK-2细胞;在缺氧状态下,RAB7 mRNA的表达轻微降低,蛋白水平没有变化;激光共聚焦显微镜发现GFP-RAB7蛋白发生聚集,显示自噬与内吞的形成。结论:成功建立稳定转染的表达GFPRAB7的HK-2细胞系,GFP-RAB7融合蛋白可指示自噬与内吞现象,为研究缺氧状况下肾小管上皮细胞自噬与内吞提供了有效工具。 展开更多
关键词 缺氧 GFP-RAB7蛋白 肾小管上皮细胞 自噬 内吞
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血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的实验研究 被引量:1
6
作者 张建鄂 罗昌霞 +1 位作者 张庆红 李涛 《郧阳医学院学报》 2006年第5期271-273,共3页
目的:研究血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的机制。方法:血管紧张素Ⅱ(10-7μmol/l)加入肾小管上皮细胞为对照组;体外培养的肾小管上皮细胞作为空白对照;不同浓度缬沙坦(10-6μmol/l、10-7μmol/l、10-8μmol/l、10-9μmol/l)先与... 目的:研究血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤的机制。方法:血管紧张素Ⅱ(10-7μmol/l)加入肾小管上皮细胞为对照组;体外培养的肾小管上皮细胞作为空白对照;不同浓度缬沙坦(10-6μmol/l、10-7μmol/l、10-8μmol/l、10-9μmol/l)先与肾小管上皮细胞共同培养半小时后再加入血管紧张素Ⅱ(10-7μmol/l)为干预组;EMSA、RT-PCR分别检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达。结果:血管紧张素Ⅱ可诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加,骨桥蛋白mRNA表达上调;而不同浓度缬沙坦干预组检测结果显示NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下调。结论:血管紧张素Ⅱ诱导肾小管上皮细胞损伤与导致肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加、骨桥蛋白mRNA转录上调有关。这一过程可能依赖血管紧张素ⅡⅠ型受体。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 肾小管上皮细胞 核转录因子-ΚB 骨桥蛋白
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人近端肾小管上皮细胞的原代培养 被引量:8
7
作者 严玉澄 钱家麒 +1 位作者 戴慧莉 许雁萍 《上海第二医科大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期388-391,共4页
目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块,应用无血清培养液进行原代培养,融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白... 目的应用组织块培养法建立人近端肾小管上皮细胞的原代培养方法。方法取肾皮质组织块,应用无血清培养液进行原代培养,融合后用胰蛋白酶-EDTA消化传代。取第三代细胞检测细胞角蛋白、波形蛋白、碱性磷酸酶、结蛋白、Ⅷ因子、α-肌动蛋白的表达,应用扫描电镜和透射电镜观察细胞的超微结构。结果融合的上皮单层细胞呈铺路石样表现,伴圆顶(dome)形成。细胞角蛋白、波形蛋白和碱性磷酸酶染色阳性,α-肌动蛋白、Ⅷ因子相关抗原、纤维连接蛋白和结蛋白染色阴性。细胞存在极性,细胞尖端存在短的微绒毛,细胞之间连接紧密。结论应用组织块培养法结合无血清培养液可以成功建立原代人近端肾小管上皮细胞系。 展开更多
关键词 细胞培养 近端肾小管上皮细胞 无血清培养液 细胞角蛋白 波形蛋白 碱性磷酸酶
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靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响 被引量:10
8
作者 郝军 石宏 +2 位作者 赵松 任韫卓 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期371-377,共7页
目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选... 目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。 展开更多
关键词 固醇调节元件结合蛋白-1 人肾小管上皮细胞 RNA干扰 短发夹状干扰RNA 脂滴形成 脂肪酸合成酶
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PI3-K的激活在TGF-β_1诱导肾小管上皮细胞间质转分化过程中的作用 被引量:8
9
作者 张勇 张璟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期553-555,共3页
目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肾小管上皮细胞(HKCs)间质转分化(EMT)过程中的作用及意义。方法将HKCs细胞株分为正常对照组(C)、不同浓度TGF-β1组、TGF-β1+PI3K抑制剂Wort-mannin组。选... 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的激活在转化生长因子β1(TGF-β1)体外诱导人肾小管上皮细胞(HKCs)间质转分化(EMT)过程中的作用及意义。方法将HKCs细胞株分为正常对照组(C)、不同浓度TGF-β1组、TGF-β1+PI3K抑制剂Wort-mannin组。选取不同时相,采用免疫印迹法(Westernblot)测定总Akt(t-Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和E钙黏素(E-cadherin)蛋白水平的表达变化;Akt磷酸化水平用磷酸化Akt与总Akt水平的比值表示。结果正常体外培养的HKCs经10ng/mlTGFβ1刺激1h后p-Akt水平显著升高;αSMA蛋白表达水平在10ng/mlTGFβ1诱导48h后表达显著升高,而Ecadherin蛋白表达水平在TGFβ1诱导48h后表达显著下降。同时加用Wortmannin10nmol/L组,p-Akt、αSMA表达明显抑制,E-cadherin表达显著升高。结论PI3K在TGFβ1诱导的EMT过程中被激活,并且参与TGFβ1诱导的EMT过程,特异性阻断PI3K的激活可有效抑制TGFβ1介导的HKCs的EMT过程。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 转分化 转化生长因子Β1 磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白激酶B/Akt
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镉对人肾近曲小管上皮细胞毒性的实验研究 被引量:7
10
作者 马静 易建华 +1 位作者 李鑫 吴文婧 《公共卫生与预防医学》 2010年第4期15-17,共3页
目的探讨氯化镉对人肾近曲小管上皮细胞的毒性效应。方法将细胞分成对照组与实验组,计数细胞死亡率,绘制细胞生长曲线,检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量。结果随着氯化镉浓度的增高,细胞死亡率、培养液内LDH活力、MDA含量... 目的探讨氯化镉对人肾近曲小管上皮细胞的毒性效应。方法将细胞分成对照组与实验组,计数细胞死亡率,绘制细胞生长曲线,检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量。结果随着氯化镉浓度的增高,细胞死亡率、培养液内LDH活力、MDA含量均升高,组间比较差异有统计学意义(P〈0.05),与染毒剂量作相关分析,相关系数分别为0.858、0.878、0.931,有明显的相关性(P〈0.01)。结论镉对体外培养人肾近曲小管上皮细胞有明显的毒性效应。 展开更多
关键词 人肾近曲小管上皮细胞 毒性效应
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TGFβ_1对人肾小管上皮细胞表达糖原合成酶激酶-3β的影响 被引量:8
11
作者 郑颖 张璟 +3 位作者 卓文磊 敖绪军 韩敬 张勇 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第5期414-416,共3页
目的研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响。方法将体外... 目的研究转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞株(human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKCs)表达糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响。方法将体外培养的的HKCs随机分为4组:正常对照组(C组):无血清培养基(free serum medium,FSM)培养;Ta组、Tb组和Tc组:用含不同浓度TGFβ1(Ta组:5ng/ml,Tb组:10ng/ml,Tc组:20ng/ml)的FSM培养。12h后,分别用RT-PCR、Western blot检测HKCs GSK-3β的mRNA、总蛋白表达量以及蛋白磷酸化水平。结果(1)GSK-3β mRNA和总蛋白在各组间表达量差异无统计学意义(P>0.05),和C组相比各T组GSK-3β蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01);(2)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平更高(P<0.01);(3)Tb组与Tc组相比,GSK-3β磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论TGFβ1虽不影响HKCs的GSK-3β mR-NA和总蛋白表达量,但能提高GSK-3β蛋白磷酸化水平,后者可能参与TGFβ1诱导的HKCs转分化过程。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 转化生长因子Β1 糖原合成酶激酶3Β
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一氧化氮参与铁负荷肾小管细胞毒作用的机制及其防治 被引量:5
12
作者 裘莲群 吴兆龙 许迅辉 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期177-181,共5页
目的探讨一氧化氮(NO)参与铁负荷肾小管细胞毒作用的可能机制,评价氧自由基清除剂在铁肾小管细胞毒中的防治作用及其与NO的关系。方法在建立原代鼠肾近端小管上皮细胞培养体系的基础上,以孵育液中NO2-产量(Griess反... 目的探讨一氧化氮(NO)参与铁负荷肾小管细胞毒作用的可能机制,评价氧自由基清除剂在铁肾小管细胞毒中的防治作用及其与NO的关系。方法在建立原代鼠肾近端小管上皮细胞培养体系的基础上,以孵育液中NO2-产量(Griess反应)和小管细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率改变为线索,比较不同剂量铁剂、各氧自由基清除剂、L-精氨酸(L-Arg)和CO合成酶抑制剂,左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)分别作用 12 h后在非脂多糖(LPS)组和 LPS组(10 ug/ml)中对小管细胞毒作用及与NO代谢的影响;同时用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同剂量铁剂与LPS的联用下诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达改变。结果NTA-Fe可以剂量依赖的方式同步增加LDH释放(P<0.001)及孵育液中N02-的产量(P<0.001);但在LPS组中细胞毒作用的增加(P <0.001)并不伴随N02-的明显改变(P>0.05)。LPS诱导的iNOS转录上调可为NTA-Fe增强,但仅限于500umol/L(P<0.01)。在LPS组中,加入L-精氨酸及不同剂量L-NAME可分别加重和缓解铁的细胞毒作用;然而。 展开更多
关键词 细胞毒作用 一氧化氮 氧自由基 肾近端小管细胞
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尿本周蛋白促进肾小管上皮细胞凋亡的体外研究 被引量:6
13
作者 周振海 李小银 +3 位作者 李娟 罗绍凯 李幼姬 洪文德 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期274-278,共5页
多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周蛋白(BJP)对肾近端小管上皮细胞(PTC)具有直接毒性,本研究通过体外观察BJP对PTC的凋亡作用以探讨BJP对PTC的部分毒性机制。将自MM患者尿中提取并经免疫固定法琼脂糖凝胶电泳进行鉴定的4例κ和λ型BJP以不同... 多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周蛋白(BJP)对肾近端小管上皮细胞(PTC)具有直接毒性,本研究通过体外观察BJP对PTC的凋亡作用以探讨BJP对PTC的部分毒性机制。将自MM患者尿中提取并经免疫固定法琼脂糖凝胶电泳进行鉴定的4例κ和λ型BJP以不同浓度与大鼠NRK52E株PTC共同培养12~48h,用原位末端标记法、流式细胞仪及透射电镜检测凋亡。结果显示:①BJPκ组与BJPλ组BJP为10mg/ml与20mg/ml时诱导PTC凋亡的比例明显高于对照组及5mg/ml,两组诱导PTC凋亡的比例随着培养时间的延长而显著增加且明显高于空白对照组;②BJPκ组与BJPλ组之间诱导PTC凋亡的比例无明显差异。结果表明,κ与λ型BJP均可诱导PTC凋亡,且随着BJP浓度及培养时间增加而增强。 展开更多
关键词 尿本周蛋白 肾近端小管上皮细胞 细胞培养 凋亡
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高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4表达及其信号通路的影响 被引量:6
14
作者 李曼丽 甘华 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期857-859,共3页
目的:通过研究高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达及其信号通路的影响,初步探讨TLR4与高糖促进肾脏细胞分泌炎症因子的关系。方法:小鼠近曲肾小管上皮细胞(MCT细胞)在高糖环境下培养后,用Western Blot分析T... 目的:通过研究高糖对肾小管上皮细胞Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)表达及其信号通路的影响,初步探讨TLR4与高糖促进肾脏细胞分泌炎症因子的关系。方法:小鼠近曲肾小管上皮细胞(MCT细胞)在高糖环境下培养后,用Western Blot分析TLR4蛋白的表达,Western Blot和免疫沉淀法分析TLR4与髓样细胞分化因子88(Myeloid differentiation factor 88,MyD88)的相互作用,以了解TLR4信号通路是否被激活。结果:高糖可使MCT细胞TLR4蛋白的表达上调,高糖环境下MyD88依赖的TLR4信号通路被激活。结论:TLR4与高糖促进肾脏细胞分泌炎症因子有关,TLR4参与糖尿病肾病的发病。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 高葡萄糖 肾小管上皮细胞
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多毛孢菌菌粉含药血清对LLCPK细胞损伤的保护作用研究 被引量:5
15
作者 杨汝春 毛俐婵 +3 位作者 程晚霞 王军 朱晓玲 王永钧 《中医药学刊》 2004年第12期2256-2257,2260,共3页
肾小管上皮细胞是肾脏固有细胞之一,在结构上与肾间质紧密相连,既是肾脏损伤的受害者,也是直接参与者。肾小管间质疾病是肾脏病学研究的重点,肾间质损伤程度直接关系到肾脏疾病的预后,有关它对肾病进程的影响已引起了广泛重视。目的:研... 肾小管上皮细胞是肾脏固有细胞之一,在结构上与肾间质紧密相连,既是肾脏损伤的受害者,也是直接参与者。肾小管间质疾病是肾脏病学研究的重点,肾间质损伤程度直接关系到肾脏疾病的预后,有关它对肾病进程的影响已引起了广泛重视。目的:研究多毛孢菌菌粉不同提取物含药血清对庆大霉素所致的肾小管上皮细胞的损伤、凋亡的影响。方法:培养猪肾小管上皮细胞株LLCPK,用庆大霉素刺激,同时加多毛孢菌的不同提取物含药血清干预。用MTT法测定存活细胞数;生化显色检测NAG酶活性;流式细胞法测定细胞凋亡。结果:实验结果显示,与正常组细胞相比,庆大霉素可显著降低细胞MTT实验的OD值、细胞上清液中NAG酶活性,并显著增强细胞表面Annexin V的表达;菌粉水提物或醇提物含药血清均能够显著增强细胞的OD值,降低细胞上清液中NAG水平,抑制庆大霉素诱导的细胞表面Annexin V的表达。结论:实验结果表明,多毛孢菌菌粉含药血清可以拮抗庆大霉素的肾小管细胞毒性,促进损伤细胞的修复,抑制细胞凋亡:除了传统水提物外,醇提物也对庆大霉素引起的肾小管上皮细胞损伤有显著的保护作用。 展开更多
关键词 多毛抱菌 庆大霉素 肾小管上皮细胞 细胞凋亡
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多毛孢菌菌粉含药血清对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子基因表达的影响 被引量:5
16
作者 程晓霞 杨汝春 +3 位作者 毛俐婵 王军 鲁盈 王永钧 《中国中西医结合肾病杂志》 2005年第1期10-12,共3页
目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反... 目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)测定纤维生长因子mRNA的表达。结果 :研究发现多毛孢菌水提物及醇提物均可显著增高LLCPK细胞OD值 ;庆大霉素刺激的肾小管上皮细胞纤维生长因子mRNA的表达显著增高 ,而经多毛孢菌菌粉水提物和醇提物干预后 ,纤维生长因子mRNA的表达显著下降。结论 :多毛孢菌菌粉可以促进LLCPK细胞增殖和拮抗庆大霉素对细胞的损伤 。 展开更多
关键词 多毛孢菌 肾小管上皮细胞细胞增殖 纤维生长因子 肾小球肾炎
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庆大霉素对人肾小管上皮细胞系(HK-2)热休克蛋白(HSP)70表达的影响 被引量:4
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作者 王志鹏 梅其炳 +2 位作者 刘琳娜 冉玉华 张蓉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期497-500,共4页
目的观察了庆大霉素在体外对肾小管上皮细胞内HSP70表达的影响。方法将庆大霉素(100mg·L-1)作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),用MTT法检测庆大霉素对HK-2细胞增殖活力的影响,应用免疫细胞化学和Westernblot法观察了HSP70蛋白表达的... 目的观察了庆大霉素在体外对肾小管上皮细胞内HSP70表达的影响。方法将庆大霉素(100mg·L-1)作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),用MTT法检测庆大霉素对HK-2细胞增殖活力的影响,应用免疫细胞化学和Westernblot法观察了HSP70蛋白表达的改变,采用RT-PCR法检测HSP70mRNA表达的变化。结果庆大霉素在作用HK-2细胞24、48、72h后,MTT吸光度值为0·166±0·02、0·181±0·009、0·237±0·016,均低于对照组0·187±0·011、0·32±0·016、0·515±0·035(P<0·01);HSP70蛋白阳性表达率(%)分别为69±17、86±21、89±25,均高于对照组6±3、4±3、7±2(P<0·01);还可增加HSP70蛋白和mRNA表达(P<0·01)。结论庆大霉素在降低人肾小管上皮细胞系细胞增殖活力的同时,增加HSP70的表达。 展开更多
关键词 庆大霉素 肾小管上皮细胞 热休克蛋白70
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糖化白蛋白诱导人近端肾小管上皮细胞产生损伤与炎性反应的表达 被引量:5
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作者 段楠 刘怡 +1 位作者 李海霞 焦莉莉 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2017年第2期289-294,共6页
目的探讨在糖化白蛋白(glycated albumin,GA)刺激下,人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及炎性反应... 目的探讨在糖化白蛋白(glycated albumin,GA)刺激下,人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)中肾损伤分子-1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及炎性反应相关细胞因子的表达情况。方法分别采用不同浓度的GA与白蛋白(albumin,Alb)刺激HK-2细胞12 h、24 h及48 h,通过real-time PCR和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunesorbent assay,ELISA)分别检测NGAL、KIM-1的mRNA表达与蛋白释放水平,并运用流式液相多重蛋白定量技术检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)和可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular cell adhesion molecule-1,sICAM-1)等细胞因子的浓度。结果与对照组与Alb组比较,GA刺激HK-2细胞12 h、24 h和48 h均能显著上调KIM-1和NGAL的mRNA表达(P<0.05)以及KIM-1和NGAL蛋白的释放(P<0.05);GA组sICAM-1、VEGF与IL-8水平在各时间点均高于Alb组和对照组(P<0.05)。结论 GA能上调KIM-1和NGAL mRNA的表达与蛋白的释放,并促进炎性细胞因子的分泌从而对肾小管造成损伤,提示GA可反映糖尿病肾脏受累情况。 展开更多
关键词 糖化白蛋白 近端肾小管上皮细胞 肾损伤分子-1 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白 细胞因子
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虫草素对脂多糖诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用 被引量:5
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作者 杨永丽 项辉 肖志英 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期203-206,共4页
目的探讨虫草素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以1×10^(5)/mL接种于细胞培养板,并将传至第3代的细胞分为正常对照组(Ctrl组)、LPS组(1 mg/L的LPS刺激细胞)、10μmo... 目的探讨虫草素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以1×10^(5)/mL接种于细胞培养板,并将传至第3代的细胞分为正常对照组(Ctrl组)、LPS组(1 mg/L的LPS刺激细胞)、10μmol/L和20μmol/L虫草素干预组(LPS+C 10组、LPS+C 20组)。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测炎症相关因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达。结果与Ctrl组比较,LPS可明显抑制NRK-52E细胞活性,增加细胞内ROS含量,上调ICAM-1、VCAM-1、IL-1β以及NF-κB的蛋白表达。与LPS组比较,经10μmol/L或20μmol/L虫草素处理后,NRK-52E细胞活性明显升高(以Ctrl组为1:0.717±0.017、0.916±0.036比0.554±0.046),细胞内ROS水平明显降低(以Ctrl组为1:1.527±0.165、1.098±0.168比2.543±0.127),同时ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB的蛋白表达均明显下调〔以Ctrl组为1:ICAM-1/GAPDH为2.364±0.097、1.561±0.074比3.101±0.121,VCAM-1/GAPDH为2.866±0.135、1.920±0.098比4.170±0.119,IL-1β/GAPDH为2.358±0.107、1.563±0.179比3.301±0.210,磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)/GAPDH为2.559±0.166、1.596±0.148比3.183±0.098〕,差异均有统计学意义(均P<0.05);且与LPS+C 10组比较,LPS+C 20组细胞活性更为显著(0.916±0.036比0.717±0.017,P<0.01),ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB蛋白表达下调更加明显(ICAM-1/GAPDH:1.561±0.074比2.364±0.097,VCAM-1/GAPDH:1.920±0.098比2.866±0.135,IL-1β/GAPDH:1.563±0.179比2.358±0.107,NF-κB p-p65/GAPDH:1.596±0.148比2.559±0.166,均P<0.05)。结论虫草素可显著增加LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的细胞活性,降低细胞内ROS水平,抑制细胞炎症,其抑制炎症作用可能与NF-κB通路相关。 展开更多
关键词 虫草素 脂多糖 肾小管上皮细胞 核转录因子-ΚB
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羟苯磺酸钙对顺铂诱导的HK-2细胞凋亡的抑制作用及其机制 被引量:5
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作者 任春霞 朱李飞 余自成 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1830-1835,共6页
研究羟苯磺酸钙(calcium dobesilate,CaD)对顺铂(cisplatin,CP)致人肾近端小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。利用顺铂诱导建立HK-2凋亡模型,采用CCK-8法检测CaD对HK-2增殖的影响;用流式细胞术检测细胞凋亡;用活性氧... 研究羟苯磺酸钙(calcium dobesilate,CaD)对顺铂(cisplatin,CP)致人肾近端小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响并探讨其可能的作用机制。利用顺铂诱导建立HK-2凋亡模型,采用CCK-8法检测CaD对HK-2增殖的影响;用流式细胞术检测细胞凋亡;用活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测观察氧化应激水平;用JC-1法测线粒体膜电位;利用Western blot法检测顺铂诱导HK-2的p53、caspase-3、bcl-2和bax蛋白表达水平;用ELISA法检测肾损伤因子1(kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL)的表达。研究显示,CaD能够降低顺铂引起的氧化应激水平,抑制细胞凋亡。顺铂可上调p53、caspase-3、bax、KIM-1及NGAL的蛋白表达,降低bcl-2的表达。使用CaD可明显减少KIM-1、NGAL、p53、caspase-3和bax蛋白水平,促使bcl-2表达水平升高。此研究结果表明,CaD可通过抑制HK-2凋亡减轻顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤,其作用机制可能与调控bax/bcl-2/caspase-3凋亡信号通路有关。 展开更多
关键词 羟苯磺酸钙 顺铂 人肾近端小管上皮细胞 细胞凋亡 氧化应激
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