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我国首次分离到基因Ⅰ型乙型脑炎病毒 被引量:79
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作者 王环宇 付士红 +6 位作者 李晓宇 宋宏 闵继光 邓娟 杨益良 Ichiro Kurane 梁国栋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期843-849,共7页
目的 对新分离乙型脑炎病毒鉴定 ,了解病毒E基因区段的氨基酸序列特征及基因分型。方法  2 0 0 1年在上海市采集蚊虫标本 ,用组织培养的方法分离到 7株病毒。进行病毒一般生物学鉴定 ,对病毒PrM和E基因区段约 2 0 0 0nt进行了扩增、... 目的 对新分离乙型脑炎病毒鉴定 ,了解病毒E基因区段的氨基酸序列特征及基因分型。方法  2 0 0 1年在上海市采集蚊虫标本 ,用组织培养的方法分离到 7株病毒。进行病毒一般生物学鉴定 ,对病毒PrM和E基因区段约 2 0 0 0nt进行了扩增、克隆、测序。应用ClustalX软件做碱基配对和比较分析 ,种系发生采用PHYLIP软件包分析。结果  7株病毒可以引起BHK 2 1细胞规律病变 ,病变时间为 6 0h。乳鼠脑内接种病毒后 72h死亡。所有新分离病毒与标准乙型脑炎病毒抗体阳性反应。用病毒PrM区段 (4 5 6~ 6 95位核苷酸 )进行的基因分型分析 ,新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒。以减毒活疫苗株SA14 14 2为标准 ,对 7株病毒的E基因区段进行分析 ,7株病毒之间核苷酸同源性在 97.7%以上 ,氨基酸同源性在 99.2 %以上 ;7株病毒与疫苗株SA14 14 2核苷酸差异在 12 .2 %左右 ,氨基酸差异在 2 .8%~ 3.2 %之间 ,共有 14个共同的氨基酸位点差异。结论  2 0 0 1年在上海采集的蚊虫中新分离的 7株病毒属于基因Ⅰ型乙型脑炎病毒 。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E基因 首次 SA14-14-2 分离 蚊虫 基因分型 种系发生 氨基酸序列 碱基配对
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表达乙脑病毒PrM基因重组伪狂犬病病毒的构建 被引量:8
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作者 李自力 陈焕春 +4 位作者 徐高原 方六荣 肖少波 王祥 何启盖 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期53-58,共6页
本研究以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基因组RNA为模板,采用RT-PCR一步法扩增了PrM基因的全长cDNA(558 bp),用BamHI和EcoRI双酶切PrM基因的扩增产物,回收目的基因后将其克隆至经同样酶切的伪狂犬病病毒通用转移载体pPgG-uni中,获得了转... 本研究以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株基因组RNA为模板,采用RT-PCR一步法扩增了PrM基因的全长cDNA(558 bp),用BamHI和EcoRI双酶切PrM基因的扩增产物,回收目的基因后将其克隆至经同样酶切的伪狂犬病病毒通用转移载体pPgG-uni中,获得了转移载体pPgG-PrM,并对其外源片段进行了测序。序列分析结果表明:与已报道的乙型脑炎病毒SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸序列比较,PrM基因的同源性为100%。以伪狂犬病病毒Ea株TK-/gG-/LacZ+突变株为载体构建了一株表达乙型脑炎病毒PrM基因的重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/PrM+,为进一步开展猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 prm基因 重组伪狂犬病病毒
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登革病毒(NGC株)C与prM全长基因的扩增与克隆 被引量:6
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作者 葛春喜 陈观今 黄炯烈 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第1期5-7,共3页
目的 从登革病毒 (NGC株 )中快速分离基因组RNA ,RT -PCR扩增及克隆C和 prM全长基因 ,从而为研究蚊虫细胞对登革病毒的细胞内免疫研究奠定基础。方法 以Trizol试剂从C6 / 36细胞培养上清中提取基因组RNA ,RT -PCR扩增全长C和 prM基因 ... 目的 从登革病毒 (NGC株 )中快速分离基因组RNA ,RT -PCR扩增及克隆C和 prM全长基因 ,从而为研究蚊虫细胞对登革病毒的细胞内免疫研究奠定基础。方法 以Trizol试剂从C6 / 36细胞培养上清中提取基因组RNA ,RT -PCR扩增全长C和 prM基因 ,T -A重组入pGEM -T载体 ,重组质粒的双酶切、PCR与测序鉴定。 结果与结论 应用Trizol试剂从蚊细胞培养液上清中快速分离到高纯度和完整登革病毒RNA基因组 ,成功扩增与克隆出全长登革病毒C和 展开更多
关键词 登革病毒 NGC株 prm基因 C基因 RT-PCR
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建国后首次登革热暴发分离的2株登革4型病毒prM和E基因序列测定及其系统发生分析 被引量:5
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作者 刘志文 俞永新 +2 位作者 贾丽丽 董关木 王志伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期678-682,686,共6页
目的对建国后1978年广东佛山首次暴发登革热流行时从患者急性期血液中分离到的两株登革4型病毒(78-42、78-56)进行其分子特征研究并了解其可能来源。方法用Vero细胞培养1978年分离自广东佛山登革热病人的78-42、78-56两病毒株,RNA抽提后... 目的对建国后1978年广东佛山首次暴发登革热流行时从患者急性期血液中分离到的两株登革4型病毒(78-42、78-56)进行其分子特征研究并了解其可能来源。方法用Vero细胞培养1978年分离自广东佛山登革热病人的78-42、78-56两病毒株,RNA抽提后RT-PCR法扩增prM、E区基因,克隆至pGEM-TEasy载体后测序;利用DNASTAR软件预测其氨基酸序列并与其他国内外登革4型病毒株序列比较;运用CLUSTALX1.83和MEGA3.1软件绘制系统发生树。结果78-42、78-56两株高度同源,prM、E基因序列和氨基酸序列与其他登革4型病毒同源性很高并证实为登革4型毒株,与印度尼西亚和马来西亚分离株同属基因IIA亚型,核苷酸同源性与印尼ID1973株最高。结论78-42、78-56两新分离病毒株为建国后首次分离到的登革4型毒株,其来源最可能来自印度尼西亚。 展开更多
关键词 登革4型病毒 prm基因 E基因 序列分析 系统发生树
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重庆三峡库区2012年乙脑病毒分离株基因序列分析 被引量:5
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作者 叶盛 文海燕 +3 位作者 喻臻 冯燕 陈爽 凌华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期622-627,共6页
目的通过分析2012年重庆三峡库区蚊虫中分离乙脑病毒株PrM及E基因序列,揭示毒株的遗传特性。方法对新分离乙脑病毒的PrM及E基因进行PCR扩增,将扩增产物测序。用分子生物学软件进行核苷酸及氨基酸序列分析,并绘制系统进化树。结果新... 目的通过分析2012年重庆三峡库区蚊虫中分离乙脑病毒株PrM及E基因序列,揭示毒株的遗传特性。方法对新分离乙脑病毒的PrM及E基因进行PCR扩增,将扩增产物测序。用分子生物学软件进行核苷酸及氨基酸序列分析,并绘制系统进化树。结果新分离的8株乙脑病毒株均为基因I型,与我国其他省市的既往分离株进化关系较近;分离株与减毒活疫苗株SA14—14—2相比较,PrM区核苷酸同源性在85.1%~86.7%之间,氨基酸同源性在95.1%~96.3%之间;E基因区核苷酸同源性在87.6%~87.8%之间,氨基酸同源性在96.9%~97.1%之间。所有新分离株与疫苗株在E基因存在14个氨基酸差异位点。结论2012年8株重庆乙脑分离株为基因I型,在E基因区域与疫苗株相比有部分差异。 展开更多
关键词 乙脑病毒 序列分析 E基因 prm基因
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PRM1,一个新的候选结肠癌相关CT抗原基因的识别及其在结肠癌组织中的表达分析 被引量:5
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作者 滕小梅 韩泽广 黄健 《现代检验医学杂志》 CAS 2008年第3期1-4,共4页
目的筛选新的肿瘤/睾丸抗原相关基因,为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。方法利用文献报道的大规模平行信号测序技术获得的人类33种正常组织的基因表达谱,经生物信息学分析筛选出睾丸富集表达基因。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,... 目的筛选新的肿瘤/睾丸抗原相关基因,为肿瘤的诊断和治疗提供理论依据。方法利用文献报道的大规模平行信号测序技术获得的人类33种正常组织的基因表达谱,经生物信息学分析筛选出睾丸富集表达基因。利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在15种人类正常组织中对候选基因进行验证,最后利用荧光定量PCR技术对睾丸特异基因在结肠癌组织和癌旁组织中的表达差异进行分析。结果在15种人类正常组织中,PRM2,PRM1,TNP1,AKAP4,TCP11为睾丸特异性表达,在其它组织中均无表达。其中PRM1基因在50%(6/12)的结肠癌组织中有明显的上调(>2倍)。其它基因在结肠癌中表达与癌旁组织比较无统计学差异。结论PRM1可能是一个新的CT基因,结果显示PRM1基因可能会在结肠癌的分子诊断或者免疫治疗中起到重要作用。 展开更多
关键词 肿瘤睾丸抗原 结肠癌 prm1 逆转录聚合酶链反应
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珠江上游地区蚊虫乙型脑炎病毒核酸检测及PrM和E基因序列分析 被引量:3
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作者 吕顺燕 王静林 +5 位作者 李楠 胡骑 何于雯 赵德宏 陈红宇 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期336-343,共8页
试验旨在了解珠江上游地区乙型脑炎病毒(JEV)主要传播媒介蚊虫的种类、分布及携带JEV基因型和分子特征。2013年7月在珠江上游地区师宗县采集蚊虫和库蠓标本,并对蚊虫进行分类鉴定;同时采用黄病毒属引物对采集到的蚊虫和库蠓标本进行检测... 试验旨在了解珠江上游地区乙型脑炎病毒(JEV)主要传播媒介蚊虫的种类、分布及携带JEV基因型和分子特征。2013年7月在珠江上游地区师宗县采集蚊虫和库蠓标本,并对蚊虫进行分类鉴定;同时采用黄病毒属引物对采集到的蚊虫和库蠓标本进行检测,阳性标本用JEV PrM和E基因特异引物进行扩增、测序,然后采用生物信息学软件进行序列分析。在4个采集点共采集蚊虫3 705只,分别属于库蚊、按蚊、伊蚊和阿蚊4个属的7种蚊虫,牛圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,羊圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,猪圈以三带喙库蚊、中华按蚊和骚扰阿蚊为优势蚊种。采用JEV PrM和E基因特异引物对采集到蚊虫和库蠓标本分162批进行扩增、测序,采用生物信息学软件进行序列分析。结果显示,4株蚊虫携带的病毒均为基因Ⅰ型JEV,与疫苗株SA14-14-2E蛋白存在15个氨基酸差异位点,在8个影响病毒毒力的重要位点上未发生突变。以上结果提示珠江上游地区存在多种蚊虫种类,三带喙库蚊和中华按蚊是该地区的优势蚊种,三带喙库蚊是当地JEV的主要传播媒介,在当地的媒介中存在基因Ⅰ型JEV流行,而流行株的毒力并未降低。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 蚊虫分类 库蠓 prm基因 E基因
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登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究 被引量:3
8
作者 葛春喜 黄炯烈 +2 位作者 陈观今 吴瑜 于洪枫 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期613-617,共5页
目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后... 目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM ,将prM基因以 3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh spEGFP ,以 3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6 36细胞 ,测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果 构建了包含prM基因的 3种昆虫表达载体 ,Westernblot和荧光显微镜观察证明在C6 36细胞中成功表达了prM EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6 36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论  3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象 ,说明无论是否表达prM蛋白 ,只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象 ;prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫 ;其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。 展开更多
关键词 登革病毒 白纹伊蚊 细胞内免疫 prm基因
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登革2型病毒PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒作用的研究 被引量:3
9
作者 于曼 秦鄂德 +2 位作者 赵卫 胡志君 苑锡同 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期334-339,T001,共7页
将扩增的登革 2型病毒株PrM基因导入pSFV载体的SP6启动子下游 ,筛选出含该基因正、反向插入的重组质粒DNA。用SpeI酶分别将重组的和辅助的质粒DNA线性化 ,并将其体外转录成 5′末端含帽子结构的RNA。再将这两种RNA共转染BHK细胞。然后... 将扩增的登革 2型病毒株PrM基因导入pSFV载体的SP6启动子下游 ,筛选出含该基因正、反向插入的重组质粒DNA。用SpeI酶分别将重组的和辅助的质粒DNA线性化 ,并将其体外转录成 5′末端含帽子结构的RNA。再将这两种RNA共转染BHK细胞。然后将转染的宿主细胞用登革 2型病毒株攻击 ,并分别观察含正、反义PrM基因的重组甲病毒RNA介导的抗病毒效果。通过碱基序列测定 ,筛选出含PrM基因正、反向插入的pSFV PrM重组质粒。并获得了经重组RNA与辅助RNA共转染细胞而产生的重组病毒颗粒。含有反义PrM基因的重组病毒RNA ,在宿主细胞中具有抗登革 2型病毒复制的作用 ,而且强于含正义PrM基因的重组病毒RNA。 展开更多
关键词 登革2型病毒 prm基因 甲病毒载体 抗病毒作用
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我国登革2型病毒prM基因与甲病毒载体重组RNA的构建 被引量:3
10
作者 于曼 秦鄂德 +2 位作者 欧武 段鸿元 杨佩英 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期473-476,共4页
目的 将我国登革 2型病毒的prM(D2 prM)基因导入甲病毒载体 (pSfV) ,研究该基因及其编码蛋白介导的抗病毒作用。方法 首先将扩增的病毒prM基因导入pSfV的Sp6启动子下游并进行核苷酸序列测定。用SpeⅠ酶将pSfⅤ prM重组DNA线形化 ,... 目的 将我国登革 2型病毒的prM(D2 prM)基因导入甲病毒载体 (pSfV) ,研究该基因及其编码蛋白介导的抗病毒作用。方法 首先将扩增的病毒prM基因导入pSfV的Sp6启动子下游并进行核苷酸序列测定。用SpeⅠ酶将pSfⅤ prM重组DNA线形化 ,再将其体外转录成 5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK 2 1/ 13细胞。采用X Gal原位染色和免疫荧光法对转染细胞的表达产物进行分析。结果 通过碱基序列测定证明病毒的prM基因已插入到甲病毒载体中 ,而且其重组DNA的转录物经RNaseA消化证实为RNA。重组RNA的细胞转染率达 90 %以上。prM蛋白表达细胞约占 80 %。结论 由pSfV prMRNA转染哺乳动物细胞所产生的蛋白可与登革 2型病毒多克隆抗体起特异反应 ,证明体外转录的重组RNA含有登革 2型病毒特异序列。 展开更多
关键词 登革2型病毒 prm基因 甲病毒载体 重组RNA
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Construction of the Plasmid Reference Molecule for Detection of Transgenic Soybean MON89788 被引量:4
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作者 李飞武 邵改革 +7 位作者 邢珍娟 李葱葱 夏蔚 张明 Fei-wu Gai-ge Zhen-juan Cong-cong 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第5期55-58,86,共5页
[Objective] The aim was to construct a plasmid reference molecule (PRM) for detection of transgenic soybean MON89788. [Method] the lectin gene sequence,3'-junction and 5'-junction sequence between host plant D... [Objective] The aim was to construct a plasmid reference molecule (PRM) for detection of transgenic soybean MON89788. [Method] the lectin gene sequence,3'-junction and 5'-junction sequence between host plant DNA integrated DNA of MON89788 soybean were amplified independently,and the three fragments were cloned into the cloning vector pMD18-T in order through molecular manipulation method to construct pMD-LM3M5,the applicability of the constructed novel PRM was tested. [Result] Sequencing confirmation result showed that the PRM was 3 700 bp in length,containing 1 029 bp of recombined DNA fragment. The limits of qualitative detection of the PRM were 10 copies. [Conclusion] The PRM constructed in this study was suitable for the identification of MON89788 event. 展开更多
关键词 genetically modified organisms Plasmid reference molecule MON89788 soybean Event-specific detection
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乙型脑炎病毒SA14-14-2株prM基因的克隆与测序 被引量:1
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作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期87-89,共3页
以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明... 以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明我国疫苗株SA14-14-2的prM基因核苷酸序列与GenBank收录的完全一致。prM基因的获得为进一步研究该基因的免疫原性以及乙型脑炎病毒基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎 乙型脑炎病毒 SAl4-14-2株 prm基因 基因克隆 序列分析 反转录-聚合酶链反应
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登革病毒转基因载体pB[PUBnls-EGFP-prM]的构建及其在C6/36细胞中整合作用的检测
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作者 葛春喜 黄炯烈 +2 位作者 陈观今 吴瑜 于洪枫 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期549-552,共4页
为利用转基因技术来探索新的蚊媒疾病防治方法 ,将登革病毒前膜蛋白基因prM重组入以转座子piggyBac因子为基础的载体 ,构建了昆虫转基因载体pB[PUBnls_EGFP_prM],在辅助质粒的作用下共同转染白纹伊蚊AedesalbopictusC6 36细胞。PCR和So... 为利用转基因技术来探索新的蚊媒疾病防治方法 ,将登革病毒前膜蛋白基因prM重组入以转座子piggyBac因子为基础的载体 ,构建了昆虫转基因载体pB[PUBnls_EGFP_prM],在辅助质粒的作用下共同转染白纹伊蚊AedesalbopictusC6 36细胞。PCR和Southernblot证明构建的转基因载体可以将EGFP_prM基因整合入蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥功能 。 展开更多
关键词 白纹伊蚊C6/36细胞 prm基因 piggyBac因子 转座子
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乙型脑炎病毒PrM蛋白原核表达及单克隆抗体制备 被引量:1
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作者 谢良伊 曹友德 +3 位作者 谭黎明 袁浩 谭超超 蔡亮 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第33期6-10,共5页
目的表达和纯化乙型脑炎病毒Pr M基因的融合蛋白,制备Pr M融合蛋白的鼠源性单克隆抗体(p Ab)。方法根据Gen Bank数据库中乙型脑炎病毒Pr M氨基酸序列获得其对应的基因序列,对Pr M全长基因(80 aa)进行体外合成,将其克隆至p ET-21原核表... 目的表达和纯化乙型脑炎病毒Pr M基因的融合蛋白,制备Pr M融合蛋白的鼠源性单克隆抗体(p Ab)。方法根据Gen Bank数据库中乙型脑炎病毒Pr M氨基酸序列获得其对应的基因序列,对Pr M全长基因(80 aa)进行体外合成,将其克隆至p ET-21原核表达载体,构建重组表达质粒p ET21-Pr M;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,获取单克隆抗体并利用Protein A Sepharose柱进行纯化,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了p ET-21-Pr M原核表达载体,0.5 mmol/L PTG 30℃培养6 h,原核蛋白Pr M蛋白以包涵体形式在大肠杆菌得到高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的Pr M蛋白,蛋白浓度为600 mg/L,制备的抗Pr M单抗效价高达1:1.6×106,Western blot鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度乙型脑炎病毒Pr M蛋白,并制备特异性单克隆抗体,将为进一步研究乙型脑炎病毒的生物学功能提供实验基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 prm 原核表达 单克隆抗体
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登革工型病毒E蛋白在293T细胞中的分泌表达 被引量:1
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作者 苗芳 李川 +8 位作者 张硕 王晓芳 李建东 张全福 刘琴芝 韦艳 杭小同 梁米芳 李德新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期415-417,共3页
目的分泌表达登革I型病毒prM/E基因,为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础。方法用RT-PCR法获得登革I型病毒广州分离株全长prM/E基因,在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20%为乙脑病毒E基因相应的... 目的分泌表达登革I型病毒prM/E基因,为研究该蛋白的免疫学功能和特性奠定基础。方法用RT-PCR法获得登革I型病毒广州分离株全长prM/E基因,在prM基因前添加乙型脑炎病毒的信号肽或同时替换E基因羧基末端的20%为乙脑病毒E基因相应的部分,分别将其克隆入真核表达载体pcDNA5/FRT中,获得三种重组质粒D1prME-pc5,D1JsprME.pc5,D1JsprM80E20JE-pc5。用脂质体法分别将重组质粒DNA转入293T细胞,通过免疫荧光、Western印迹检测外源基因在真核细胞中的分泌表达。结果用免疫荧光法检测到分别转染了三种重组质粒的293T细胞的胞质中均有登革I型病毒蛋白的表达。Western印迹检测转染了D1prME-pc5重组质粒的293T细胞上清中没有特异蛋白条带,转染了经基因改造的重组质粒D1JsprME-pc5和D1JsprM80E20JE-pc5的细胞上清中均存在登革I型病毒的特异蛋白条带。结论转染了三种重组质粒的293T细胞均可表达登革I型病毒prM/E蛋白,只有在prM基因前添加了信号肽的重组质粒转染后蛋白才获得分泌表达。 展开更多
关键词 登革热病毒 基因 prm/E 表达的序列标记
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登革病毒prM基因真核表达载体的构建及在白纹伊蚊细胞C6/36中的表达 被引量:1
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作者 葛春喜 黄炯烈 +2 位作者 陈观今 吴瑜 王玲 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期45-47,共3页
目的 构建登革病毒prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达。方法 将prM基因亚克隆入真核表达载体 pEGFP -N3,转化大肠杆菌JM 10 9,筛选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定 ,将获得的重组质粒以脂质体法转化白纹伊蚊C6 / 36细胞并... 目的 构建登革病毒prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达。方法 将prM基因亚克隆入真核表达载体 pEGFP -N3,转化大肠杆菌JM 10 9,筛选阳性克隆进行PCR及酶切鉴定 ,将获得的重组质粒以脂质体法转化白纹伊蚊C6 / 36细胞并使其表达 ,利用RT -PCR法检测目的基因的转录 ,Western -blot检测融合蛋白的表达。结果 成功构建了 pEGFP -prM重组质粒 ,RT -PCR证明 prM基因在蚊细胞内的转录 ,Western -blot检测到 prM -GFP融合蛋白的表达。结论 成功构建登革了病毒 prM基因重组表达质粒并在白纹伊蚊细胞C6 / 36中表达 。 展开更多
关键词 登革病毒 prm基因 RT-PCR WESTERN BLOT 真核表达 白纹 伊蚊
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基于登革2型病毒PrM基因的新型脱氧核酶对病毒RNA降解作用的初步观察
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作者 尉雁 姜涛 +7 位作者 李晓峰 赵慧 刘忠钰 邓永强 刘然 陈水平 于曼 秦鄂德 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2007年第1期16-19,23,共5页
目的:针对登革2型病毒(DEN2)PrM基因设计新型脱氧核酶并观察其抗病毒作用。方法:根据脱氧核酶(DR z)裂解RNA靶位的特异性,选择DEN2 PrM基因中符合5′…R↓Y…3(′R=A/G,Y=U/C)特征且其二级结构中以未配对与配对碱基的磷酸二酯键为靶位,... 目的:针对登革2型病毒(DEN2)PrM基因设计新型脱氧核酶并观察其抗病毒作用。方法:根据脱氧核酶(DR z)裂解RNA靶位的特异性,选择DEN2 PrM基因中符合5′…R↓Y…3(′R=A/G,Y=U/C)特征且其二级结构中以未配对与配对碱基的磷酸二酯键为靶位,设计合成DEN2特异性脱氧核酶,筛选具有裂解PrM RNA活性的DR z。观察DR z与靶序列浓度比、Mg2+浓度及反应时间对DR z裂解效率的影响。结果与结论:体外裂解实验显示,在所设计合成的8个脱氧核酶中,DR z614对登革病毒的PrM RNA靶序列具有裂解活性,降解效率高达82%。本研究为进一步探讨新型抗登革病毒策略奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 脱氧核酶 prm基因
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登革2型病毒PrM基因对不同型登革病毒复制的特异抑制作用
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作者 秦鄂德 于曼 +5 位作者 赵月峨 陈水平 胡志君 范宝昌 段鸿元 杨佩英 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第1期24-27,共4页
目的 :将我国登革 2型病毒PrM(D2 _PrM)基因导入甲病毒载体系统 ,探讨含正、反义PrM基因的重组病毒对不同血清型登革病毒复制的特异抑制作用。方法 :采用体外转录和电穿孔的方法 ,首先分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅... 目的 :将我国登革 2型病毒PrM(D2 _PrM)基因导入甲病毒载体系统 ,探讨含正、反义PrM基因的重组病毒对不同血清型登革病毒复制的特异抑制作用。方法 :采用体外转录和电穿孔的方法 ,首先分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RNA ,然后将这两种RNA共转染BHK细胞 ,进而包装成重组病毒颗粒。再将经激活的重组病毒感染宿主细胞 ,分别用不同型登革病毒攻击 ,然后通过免疫荧光法 ,观察对不同型登革病毒复制的抑制作用。结果 :含登革 2型正、反义PrM基因的重组甲病毒 ,不仅可完全抑制该型病毒在宿主细胞中的复制 ,而且对其他 3个型病毒的复制也具有不同程度的抑制作用。含反义PrM基因的重组病毒对 4个型登革病毒复制的抑制作用最强。结论 :登革 2型病毒的正、反义PrM基因在宿主细胞中通过重组甲病毒 ,可介导对登革 1~ 展开更多
关键词 甲病毒载体 抗病毒作用 登革2型病毒 prm基因 不同型登革病毒复制 特异抑制作用
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登革2型病毒43株prM基因片段在痘苗中的克隆与表达
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作者 孙蕾 杨佩英 +3 位作者 秦鄂德 于曼 徐品芳 阎国珍 《生物技术通讯》 CAS 1998年第1期6-9,共4页
利用RT-PCR技术获得登革2型病毒中国分离株(D_2-43)的prM基因片段。扩增产物经酚:氯仿抽提纯化之后,直接插入pT_7BlueT载体中,经DNA序列分析证明了所扩增片段序列的正确性。构建了痘苗病毒载体PJSA1175/prM,外源基因受痘苗病毒启动子P_(... 利用RT-PCR技术获得登革2型病毒中国分离株(D_2-43)的prM基因片段。扩增产物经酚:氯仿抽提纯化之后,直接插入pT_7BlueT载体中,经DNA序列分析证明了所扩增片段序列的正确性。构建了痘苗病毒载体PJSA1175/prM,外源基因受痘苗病毒启动子P_(7.5K)的调控。脂质转染(Lipofection)法获得D_2-43株prM蛋白的重组病毒。荧光检测显示,重组痘苗病毒表达的prM蛋白分布于细胞表面。间接ELISA测定其滴度为1:4。 展开更多
关键词 登革2型病毒43株 膜蛋白前体(prm) RT-PCR 共转染 基因表达
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登革2型PrM基因的重组病毒对不同型别登革病毒复制的阻断作用
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作者 于曼 秦鄂德 +6 位作者 陈水平 赵月峨 范宝昌 段鸿元 姜涛 杨佩英 胡志君 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期568-572,共5页
观察登革 2型PrM基因的pSFV重组甲病毒抗该型病毒的作用 ,进一步探讨登革 2型PrM基因的这种重组病毒对其它 3个血清型登革病毒复制的阻断作用 .采用体外转录和电穿孔 ,分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RN... 观察登革 2型PrM基因的pSFV重组甲病毒抗该型病毒的作用 ,进一步探讨登革 2型PrM基因的这种重组病毒对其它 3个血清型登革病毒复制的阻断作用 .采用体外转录和电穿孔 ,分别将构建的含正、反义PrM基因的重组质粒DNA和辅助载体DNA转录成RNA ,然后将这两种RNA共转染BHK细胞 ,进而包装成重组病毒颗粒 .再将激活的重组病毒感染细胞 ,分别用不同型病毒进行攻击 .然后通过免疫荧光法 ,观察对登革病毒复制的阻断作用 .结果表明 ,含登革 2型PrM基因的重组病毒不仅可阻断登革 2型病毒的复制 ,同样具有抑制其他 3个型病毒复制的能力 ,且抗登革 1、4型病毒的复制作用强于抗登革 3型病毒的作用 .用 10 3 TCID50 剂量的登革病毒攻击 ,含反义PrM基因的重组病毒可完全阻断登革 1、3、4型病毒的复制 .但含正义PrM基因的重组病毒对登革 3型病毒的复制不能完全阻断 . 展开更多
关键词 登革2号 prm基因 重组病毒 登革病毒 病毒复制 阻断作用
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