猪生长激素研究进展 被引量：9

1

作者 欧阳菁 龙綮新 +1 位作者 杨林 王珣章 《生物技术通讯》 CAS 2001年第2期140-143,160,共5页

猪生长激素是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种单一肽链的蛋白质激素。本文就猪生长激素基因的结构特点、多肽性研究、基因表达及猪生长激素的结构特点、生理功能。

关键词 猪 生长激素 基因结构 多态性

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猪垂体中猪生长激素基因的克隆和部分序列分析 被引量：11

2

作者 杨青 朱宝利 +1 位作者 周顺伍 齐顺章 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第4期318-323,共6页

从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作载体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southorn印迹,表明它含有全长猪生长激素基因;将S... 从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作载体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southorn印迹,表明它含有全长猪生长激素基因;将Sma Ⅰ酶解后Southorn印迹为阳性的两个片段进行了亚克隆,对其中含有猪生长激素基因Sma Ⅰ位点上游序列的片段进行了部分序列分析,并和已发表的相应序列进行了比较。 展开更多

关键词 猪垂体 序列分析 生长激素基因

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猪生长激素基因表达质粒的构建及其转基因动物研究 被引量：6

3

作者 陈清轩 曹颉 +2 位作者 宋德秀 陈永福 魏庆信 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期540-545,共6页

将猪生长激素基因（ＰＧＨ）克隆到质粒ｐＵＣ１９上，经酶切分析，确定其酶切图谱．把ＰＧＨ转录起始位点以前的序列切掉，换上羊ＭＴ－１ａ基因的启动子，构建成可以调控的表达载体ｐＳＭＴＰＧＨ，用于转基因动物的研究．采用微注射... 将猪生长激素基因（ＰＧＨ）克隆到质粒ｐＵＣ１９上，经酶切分析，确定其酶切图谱．把ＰＧＨ转录起始位点以前的序列切掉，换上羊ＭＴ－１ａ基因的启动子，构建成可以调控的表达载体ｐＳＭＴＰＧＨ，用于转基因动物的研究．采用微注射法将线状ｐＳＭＴＰＧＨ导入猪、鼠和金鱼的受精卵中，得到了相应的转基因动物．对这些动物鉴定分析表明，外源基因整合率因动物不同而异，但该基因在这３种动物中的整合率均在９％以上，其生长速度都高于对照组． 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 表达载体 转基因动物 质粒

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猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达 被引量：8

4

作者 欧阳菁 龙綮新 +1 位作者 杨林 王珣章 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期482-485,共4页

将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒A... 将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒AcMNPV pGP6 7 pGH OCC-。感染重组病毒的Hi5细胞的表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,细胞可溶蛋白和培养液上清中均有一条分子量约为 2 2kDa的猪生长激素特异性反应带 ,且培养液上清中的目的蛋白分子量比天然pGH略大一些。薄层扫描仪扫描估测可知 ,重组pGH分别占细胞可溶蛋白的 8 98%和培养液上清总蛋白的 3 6 1%。将表达 96h的培养液上清浓缩液进行N 糖基化分析 ,结果显示重组 pGH无N 糖基化加工修饰。 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 昆虫细胞 杆状病毒表达载体系统 基因表达 N-糖基化分析

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猪生长激素基因ApaⅠ酶切位点多态性分析 被引量：7

5

作者 邢晋祎 帅素容 +1 位作者 李学伟 乔绍权 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第5期44-46,共3页

利用 PCR- RFL P技术 ,分析了大约克猪和长白猪 GH基因的 Apa 酶切位点多态性。结果表明 ,在p GH基因序列中共检测到 5种基因型和 4种等位基因 ;基因型频率和等位基因频率在 2个猪种间分布差异不显著。

关键词 猪 生长激素 基因 APA I酶 切位点 多态性分析

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香猪生长激素基因不同基因型对生长性能的影响 被引量：6

6

作者 俞沛初 郭传甲 +2 位作者 华修国 朱淑文 顾金辉 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2006年第4期326-329,共4页

利用PCR-RFLPs技术,检测香猪生长激素基因ApaI酶切位点多态性,并分析不同基因型对个体初生重、2月龄体重、4月龄体重、平均日增重、4月龄体长和4月龄胸围等生长性能的影响。结果表明,香猪生长激素基因ApaI酶切后产生3种基因型和2种等位... 利用PCR-RFLPs技术,检测香猪生长激素基因ApaI酶切位点多态性,并分析不同基因型对个体初生重、2月龄体重、4月龄体重、平均日增重、4月龄体长和4月龄胸围等生长性能的影响。结果表明,香猪生长激素基因ApaI酶切后产生3种基因型和2种等位基因,AB基因型和AA基因型香猪的4月龄体重、0￣4月龄平均日增重均极显著地低于BB基因型香猪(P<0.01),4月龄体长也显著低于BB基因型香猪(P<0.05),提示AB和AA基因型可能是香猪矮小性的有利基因型。 展开更多

关键词 香猪 生长激素基因 多态性 生长性能

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猪生长激素cDNA在芽孢杆菌中的表达 被引量：5

7

作者 李文清 王红革 +1 位作者 罗进贤 岑英华 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第4期434-440,共7页

利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质... 利用随机克隆的枯草杆菌启动子-信号序列构建茅孢杆菌分泌载体pUS186。用限制酶将切除了信号序列的猪生长激素cDNA从质粒pLY3-PGH 604切下,亚克隆至pUS186,并在该cDNA的下游接上地衣杆菌α-淀粉酶基因的转录终止子,构建猪生长激素表达质粒pSGH 1864,将此质粒转化蛋白酶双缺陷的枯草杆菌DB104及短小茅孢杆菌289。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检出在发酵上清液中多出一条22kD的蛋白带,抗猪生长激素血清免疫印迹法证明这一蛋白带具有免疫活性,表明猪生长激素cDNA已在枯草杆菌及短小茅抱杆菌中表达。 展开更多

关键词 猪 生长激素 基因表达 枯草杆菌

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用重组痘苗病毒表达pGHcDNA的研究 被引量：5

8

作者 路丹红 朱宝利 +1 位作者 周顺伍 齐顺章 《生物化学杂志》 CSCD 1995年第5期504-509,共6页

构建了含有ｐＧＨｃＤＮＡ的重组痘苗病毒，用ＥＬＩＳＡ证明该重组病毒在被感染的ｈ１４３细胞中，可表达出猪生长激素并将之分泌到培养基中，表达量约为１．０５μｇ／１０￣６细胞（２４ｈ）。用定位免疫化学法进一步证明该病毒可感... 构建了含有ｐＧＨｃＤＮＡ的重组痘苗病毒，用ＥＬＩＳＡ证明该重组病毒在被感染的ｈ１４３细胞中，可表达出猪生长激素并将之分泌到培养基中，表达量约为１．０５μｇ／１０￣６细胞（２４ｈ）。用定位免疫化学法进一步证明该病毒可感染小鼠并在小鼠体内表达ｐＧＨｃＤＮＡ。同时还构建了含双拷贝ｐＧＨｃＤＮＡ的重组痘苗病毒，并证明其ｐＧＨ表达量比单拷贝重组病毒有明显提高，约为１．５０μｇ／１０￣６细胞（２４ｈ）。 展开更多

关键词 猪生长激素 生长激素 痘苗病毒 基因表达 CDNA

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外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究 被引量：3

9

作者 张志红 刘桂生 +1 位作者 张玉廉 陈清轩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期227-229,共3页

外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究张志红刘桂生张玉廉陈清轩（中国科学院发育生物学研究所北京１０００８０）自１９８２年Ｐａｌｍｉｔｅｒ［１］等人给小鼠受精卵雄原核注射大鼠生长激素基因培养成功“超级”鼠以来，由... 外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究张志红刘桂生张玉廉陈清轩（中国科学院发育生物学研究所北京１０００８０）自１９８２年Ｐａｌｍｉｔｅｒ［１］等人给小鼠受精卵雄原核注射大鼠生长激素基因培养成功“超级”鼠以来，由于人们认识到转基因技术导致动植物品... 展开更多

关键词 猪生长激素 生长激素 基因整合 基因表达 金鱼

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表达猪生长激素基因的重组腺病毒的构建及对猪生长的促进效果观察 被引量：2

10

作者 曹汉威 张春红 +2 位作者 黄忠 阮良基 林洁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期592-596,共5页

利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素(pGH)基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用。用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒(Ad-pGH)。将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH。... 利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素(pGH)基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用。用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒(Ad-pGH)。将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH。用1 mL此重组腺病毒(1010TCID50)一次性肌肉注射60日龄的杂交长白猪。结果表明,试验组的猪平均增重比对照组的猪增加37%(注射后第4周)和19%(注射后第6周);饲料报酬提高28%(注射后第4周)和18%(注射后第6周)。试验结果证明,由重组腺病毒表达的pGH具有生物学活性,在猪体内起到明显的促进生长的作用。重组腺病毒介导的pGH基因在猪体内的表达可维持约4周。 展开更多

关键词 猪生长激素 重组腺病毒 猪体试验

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猪GH基因全序列PCR-RFLPs研究 被引量：3

11

作者 帅素容 李学伟 邢晋祎 《四川农业大学学报》 CSCD 2003年第4期334-337,共4页

实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富... 实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富的HhaⅠ酶切位点多态性,约克夏猪中有10种带型,长白猪中检出了8种带型,其中B带型频率最高,长白猪中为41 67%,约克夏猪中占31 11%,二者差异极显著(P<0 01)。其他各带型频率分布在两品种间差异不显著。 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 PCR-RFLPS GH基因 大约克猪 长白猪

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猪生长激素cDNA基因的改建 被引量：2

12

作者 曹广力 朱江 +1 位作者 贡成良 季平 《苏州大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第2期89-94,共6页

为了将猪生长激素cDNA基因在表达后能一步纯化获得表达产物 ,对来自于质粒的猪生长激素cDNA基因通过PCR技术进行了改建 ,进一步的序列分析表明 ,与GenBank登录的序列不同

关键词 猪生称激素 CDNA基因 分子克隆 序列分析

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猪生长激素基因与白介素-6基因在小鼠体内的表达效应分析

13

作者 谭俊杰 杨涛 +3 位作者 徐敏 刘润叶 刘世贵 龙章富 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期447-450,共4页

比较研究了阳离子脂质体包裹VpGH、VpGH联合VpIL-6以及脂质体(对照)腹腔注射昆明小鼠的增长效应与免疫应答.结果表明,VpGH注射小鼠、VpGH联合VpIL-6注射小鼠在体重增长幅度和血清GH水平上均较对照组显著增高,在注射后第4周效果最明显;V... 比较研究了阳离子脂质体包裹VpGH、VpGH联合VpIL-6以及脂质体(对照)腹腔注射昆明小鼠的增长效应与免疫应答.结果表明,VpGH注射小鼠、VpGH联合VpIL-6注射小鼠在体重增长幅度和血清GH水平上均较对照组显著增高,在注射后第4周效果最明显;VpGH联合VpIL-6注射小鼠较仅注射VpGH小鼠在增重幅度和血清GH水平显著增高的趋势明显.但在白细胞数量、红细胞数量上较对照组除第1,2两周外,其余时间段无显著差异.在IgG表达上各组均无显著差异. 展开更多

关键词 猪 GH IL-6 基因表达 小鼠

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猪垂体总cDNA的合成和编码猪生长激素成熟肽DNA序列的PCR扩增

14

作者 王建荣 杨颐 +3 位作者 龚晓磊 张平 顾朝旭 赵洪兴 《上海农业学报》 CSCD 1994年第2期17-21,共5页

以猪垂体ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（１２～１８）为反转录引物，在ＡＭＶ－ＲＴ的催化下，先合成ｃＤＮＡ第一链，再以ＲＮａｓｅＨ降解的ｍＲＮＡ小分子为引物、ｓｓ－ｃＤＮＡ为模板，在Ｅ．ｃｏｌｔＤＮＡＰｏｌ．Ｉ的催... 以猪垂体ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（１２～１８）为反转录引物，在ＡＭＶ－ＲＴ的催化下，先合成ｃＤＮＡ第一链，再以ＲＮａｓｅＨ降解的ｍＲＮＡ小分子为引物、ｓｓ－ｃＤＮＡ为模板，在Ｅ．ｃｏｌｔＤＮＡＰｏｌ．Ｉ的催化下合成ｃＤＮＡ第二链，并用Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡｌｉｇａｓｅ连接缺口和Ｔ４ＤＮＡＰｏｌ补齐末端，以获得长度完整的ｄｓ－ＣＤＮＡ分子。根据已知的ｐＧＨ基因序列，设计并合成了一对特异引物分子，以总ｃＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，分子杂交证明，获得的扩增片段即为侧翼带有重组位点和附加密码的编码ｐＧＨ成熟肽的ＤＮＡ序列。 展开更多

关键词 反转录 DNA 猪 生长激素基因

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转基因猪体内外源基因的整合鉴定 被引量：1

15

作者 刘桂生 陈清轩 +2 位作者 王菁 魏庆信 陈永福 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第3期279-280,共2页

外源猪生长激素基因被导入湖北白猪．为避免羊、猪之间在金属硫蛋白启动上的同源性而造成ＰＣＲ检测结果的假阳性，分别将ＰＣＲ合成反应的两个引物设计在羊金属硫蛋白基因启动子一侧和猪生长激素一侧，使ＰＣＲ合成反应的结果特异地反... 外源猪生长激素基因被导入湖北白猪．为避免羊、猪之间在金属硫蛋白启动上的同源性而造成ＰＣＲ检测结果的假阳性，分别将ＰＣＲ合成反应的两个引物设计在羊金属硫蛋白基因启动子一侧和猪生长激素一侧，使ＰＣＲ合成反应的结果特异地反映外源基因的整合性，准确地鉴定出转基因猪．ＤＮＡ印迹分析结果表明，４３头待检仔猪中有６头呈外源基因整合阳性． 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 转基因猪 整合 鉴定

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不同品种猪生长激素基因的PCR-RFLP分析

16

作者 王荣梅 苏荣胜 张细权 《韶关学院学报》 2009年第9期85-88,共4页

采用PCR-RFLPs技术,对临高猪、玉山黑猪、蓝塘猪及国外猪种的生长激素基因-119～+486区域共605 bp片段的扩增产物用Apa I限制性内切酶检测酶切位点的多态性.结果显示:Apa I酶切时,四个品种的猪都出现了3种基因型(AA、BB和AB),等位基因B... 采用PCR-RFLPs技术,对临高猪、玉山黑猪、蓝塘猪及国外猪种的生长激素基因-119～+486区域共605 bp片段的扩增产物用Apa I限制性内切酶检测酶切位点的多态性.结果显示:Apa I酶切时,四个品种的猪都出现了3种基因型(AA、BB和AB),等位基因B的频率以蓝塘猪最高,等位基因A的频率以玉山黑猪最高,四个猪种间基因型频率、等位基因频率的差异不显著(P>0.05). 展开更多

关键词 猪生长激素 基因 ApaI PCR-RFLP

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pGH基因全序列ApaⅠ酶切位点多态性与生产性能的相关分析 被引量：5

17

作者 刘海峰 帅素容 +1 位作者 邢晋 侯万儒 《四川师范学院学报（自然科学版）》 2003年第3期330-334,共5页

本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位... 本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位点中,AC基因型个体在165日龄体重和70-165日龄日增重上显著高于AA基因型个体(P<0.1);但长白猪ApaⅠ多态位点不同基因型在这两个生产性状上的差异不显著. 展开更多

关键词 猪生长激素基因 pGH基因全序列 ApaⅠ酶切位点多态性 生产性能 PCR-RFLP技术 品种选育

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SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达 被引量：2

18

作者 胡义洁 吴明明 +1 位作者 朱艳菲 孙金海 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2014年第13期16-21,共6页

为确定猪生长激素基因(pGH)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况,利用SYBR GreenⅠReal-time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pGH基因与IGF-1基因的... 为确定猪生长激素基因(pGH)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况,利用SYBR GreenⅠReal-time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pGH基因与IGF-1基因的mRNA表达水平,根据荧光定量结果绘制熔解曲线和扩增曲线图谱,分析图谱并用F=(1+E)-ΔΔCt公式计算其相对表达量。结果表明:F0代转双基因猪pGH基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.2倍,IGF-1基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.53倍,说明这2种外源基因均成功导入,并能在猪体内表达。本实验建立了能够稳定测评家猪生长激素与胰岛素样生长因子-1基因表达水平的方法,为进一步分析pGH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响及转基因的实际应用提供了分子生物学方面的资料。 展开更多

关键词 转双基因 猪生长激素基因 胰岛素样生长因子-1基因 实时荧光定量PCR

原文传递

注射pGRF基因质粒对猪血液生理生化指标和肉品质的影响 被引量：2

19

作者 张金霞 周占琴 +4 位作者 唐湘方 张宏福 刘雨田 卫星辉 丁国庆 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期45-49,共5页

通过检测注射pGRF基因质粒(pig growth hormone-releasing factor gene plasmid)后生长猪血液生化指标与肌肉品质指标,探讨该制剂对生长猪的健康水平、肉品质和安全性的影响。将8头二元杂交、60日龄左右的阉后公猪随机分为两组,一组注射... 通过检测注射pGRF基因质粒(pig growth hormone-releasing factor gene plasmid)后生长猪血液生化指标与肌肉品质指标,探讨该制剂对生长猪的健康水平、肉品质和安全性的影响。将8头二元杂交、60日龄左右的阉后公猪随机分为两组,一组注射pGRF基因质粒,一组注射等量生理盐水,进行了60 d对比试验,于处理后第7、14、28、56天早晨空腹采血制备血清,测定生化指标。结果表明:注射pGRF基因质粒后第14天,除血清尿素氮提高39.88%外,血糖、尿素氮、肌酐、甘油三酯、胆固醇浓度变化均不显著。由此可见,注射pGRF基因质粒后,除血清尿素氮升高外,生长猪的其他生化指标都没有明显变化。于处理后第60天,每组随机选3头屠宰,称量器官质量,并采样测定肉品质。与对照组相比,试验组猪肉剪切力下降7.28%(P>0.05),滴水损失降低20.86%(P>0.05),而熟肉率提高4.38%(P>0.05);但肌间脂肪比对照组提高68.83%(P<0.05);肉色a*值降低14.30%(P>0.05),b*、L*值有所提高,但差异均未达到显著水平;pGRF基因质粒对胴体pH影响不明显,器官与胴体的比值差异均未达显著水平(P>0.05),其中从平均值看心脏质量比例略有增加,脾、肾比例有所下降。从本试验结果看,注射pGRF基因质粒对各项猪肉品质指标无不良影响,还可改善肌肉嫩度,降低滴水损失和提高肌间脂肪含量。 展开更多

关键词 PGRF基因质粒 猪 生化指标 肉品质

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猪生长激素启动子的克隆及功能分析 被引量：1

20

作者 阮楠 张明军 +2 位作者 鞠辉明 白立景 赵为民 《安徽农业科学》 CAS 2012年第6期3356-3358,共3页

[目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧... [目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧光素酶表达载体pGL3-basic上。通过重组质粒瞬时转染大鼠垂体瘤细胞(GH3)、猪髋动脉血管内皮细胞(PIEC)和猪肾细胞(PK15)和转染后细胞荧光素酶活性的测定,检测这些5’末端缺失质粒在垂体及非垂体细胞中的相对转录活性。[结果]成功扩增了猪GH基因5’上游启动区1 882 bp的片段,并构建了9个pGL3-mGH promoter报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测系统证实插入报告基因载体中的启动子具有非常强的细胞特异性。[结论]猪生长激素特异性在垂体细胞中表达,其最小启动子位于-110 bp以内,启动子区-218～-110 bp和-429～-218 bp间存在正向调控元件。 展开更多

关键词 猪生长激素启动子 基因表达 调控

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